临床微生物学与检验

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第二节 细菌的形态学检查
6.芽胞染色： 绿色部分 为芽胞
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第二节 细菌的形态学检查
7.墨汁染色: 一般用于新型隐球菌
检查
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
一、培养基的种类和选择 培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择
二、分离及培养 细菌的分离、细菌培养方法
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
1．基础培养基 含有基础生长所需的基本
营养成分，最常用的是肉浸 液，俗称肉汤（broth），主 要成分含牛肉浸液和蛋白胨。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
2．营养培养基（nutrient medium） 最常用的是血琼脂平板、巧克力血
下细菌的动力及运动状况 2.常用的方法有压滴法和悬滴法
有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显 的方向性位移
无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无 位置的改变
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第二节 细菌的形态学检查
3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作 出初步鉴定 如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似 流星状运动的细菌，制动试验阳性，可初步 推断为“疑似O1群霍乱弧菌”。
(一)培养基的组成成分 1．营养物质
蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、 无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子 2．凝固物质 琼脂、明胶、卵白 3．抑制剂和指示剂
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（二）培养基种类 1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（diferential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium）
平板等
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
3．鉴别培养基（diferential medium） 糖发酵管、克氏双糖铁 琼脂（KIA）、伊红-镁 蓝琼脂和动力-吲哚-尿素 （MIU）培养基等。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
4．选择培 （selective medium） SS琼脂使致病的沙门菌、 志贺菌容易分离到
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（三）培养基的选择 从血液、骨髓中
分离病原菌用血液增 菌培养基
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
二、分离及培养 （一）细菌的分离
1．平板划线分离法 2．斜面接种法 3．液体接种法
4．穿刺接种法 5．倾注平板法 6．涂布接种法
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第一节 标本的采集和处理原则
二、标本的处理 1. 对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌
和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检 2. 其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室 3. 若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存 4. 一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应
超过24h
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第二节 细菌的形态学检查
1.包括不染色标本检查法和染色标本检查法 2.镜检可以了解有无细菌及大致的菌量 3.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的
初步识别和分类 4.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊
断和治疗疾病有一定的参考意义
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Fra Baidu bibliotek二节 细菌的形态学检查
一、不染色标本 1.细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态
（二）常用的染色方法 1．革兰染色（gram stain）
革兰阳性球菌
革兰阴性杆菌
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第二节 细菌的形态学检查
2．抗酸染色 （acid-fast stain） 可将细菌分为两大类： 即-抗酸性细菌 -非抗酸性细菌
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第二节 细菌的形态学检查
3．荧光染色 （1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察
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第二节 细菌的形态学检查
二、染色标本 （一）常用染料 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等 2．酸性染料：有伊红、刚果红等 3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有
瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青） 等；荧光染料有荧光标记的抗体
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第二节 细菌的形态学检查
结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。 （2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白
喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。
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第二节 细菌的形态学检查
4.鞭毛染色 可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数
量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中 很重要。 5.异染颗粒染色
用于白喉棒状杆菌染色。
三、生化反应和鉴定 碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
一、培养基的种类和选择 培养基（culture medium）
是由人工方法配制而成的， 专供微生物生长繁殖使用 的混合营养物制品。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
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５.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全 防护
６.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装 好，防止送检过程中倒翻或碰破流出
７.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须 按规定包装，由专人运送
８.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送， 有时可直接用抽取标本的注射器运送
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
5．特殊培养基 （special medium） 疱肉培养基、 巯基乙醇酸纳培养基
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（三）培养基的选择 根据标本来源和可能存在的
病原菌，确定选用各种分离培养 基。伊红美蓝/麦康凯用于筛选 革兰阴性杆菌。
本章内容
第一节 标本的采集和处理原则 第二节 细菌的形态学检查 第三节 细菌的分离培养和鉴定 第四节 细菌的非培养检测方法
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第一节 标本的采集和处理原则
一、标本采集的一般原则 1．早期采集 2．无菌采集 3．根据目的菌的特性用不同的方法采集 4．采集适量标本 5．安全采集
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（二）细菌培养方法 1．需氧培养法 2．二氧化碳培养法 3．厌氧培养法