高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量(精)

高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量

缪宁梅1

,马婕

2

(1.江苏省药品检验所,江苏南京210008;2.中国药科大学,江苏南京210009

摘要:目的建立高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液含量的方法。方法采用氨基键合硅胶色谱柱(4.6mm 250mm,5 m;以乙腈 0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液(50 50为流动相,流速为1.0mL/min;检测波长为200nm 。结果门冬氨酸与鸟氨酸都在125~2500 g/mL 浓度范围内有良好的线性关系(r =0.9999,两者的平均回收率分别为99.92%与100.25%,R SD 分别为0.34%与0.70%。结论此法简便、快速、准确,适用于门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量测定。

关键词:门冬氨酸;鸟氨酸;含量测定;高效液相色谱法

中图分类号:R977.4;R927.2 文献标识码:A 文章编号:1005 1678(200701 0052 02

Assay of ornitbinaspaetant injection by HPLC

MIAO Ning mei 1,MA Jie 2

(1.Jiangsu Institute f o r Drug Control,Nanjing 210008,China;2.China Pharmaceutical University ,Nan jing 210009,China

Abstract:Purpose To establish an HPLC method for the assay of ornitbinaspaetant injection.Methods The assay was performed on a Kromasil NH 2column (4.6mm

250mm,5 m.The mobile phase was composed of acetonitrile 0.05mol/L KH 2PO 4(50 50.The flow rate was 1.0mL/min.The detection wavelength was 200nm.Results Both aspartate and ornithine showed good linear (r =0.9999in the range of 125 2500 g/mL.The

average recovery was 99.92%and 100.25%respecttively.Conclusion The method might be simple,rapid and accurate.It is suitable for the assay of ornitbinaspaetant injection.

Key words:aspartate;ornithine;assay;HPLC

收稿日期:2006 04 12;修回日期:2006 05 29

作者简介:缪宁梅(1973 ,女,江苏南京人,主管药师,主要从事药品检验工作。

门冬氨酸鸟氨酸注射液是我国首个用于临床的具有护肝、解毒、能量三效合一的新药,其主要治疗成分是门冬氨酸和鸟氨酸,临床用于急、慢性肝病的治疗,包括肝硬化、脂肪肝及肝炎所引起的血氨升高,对肝性脑病尤其有效[1]。本文参照有关文献[2 3]采用高效液相色谱(HPLC法,直接测定门冬氨酸鸟氨酸注射液中门冬氨酸与鸟氨酸的含量,方法简便、快速、灵敏度高、重现性好。

1 材料

门冬氨酸对照品,中国药品生物制品检定所,批号:140691 200401;盐酸鸟氨酸对照品,Merck 公司,批号:K29829706141;门冬氨酸鸟氨酸注射液,规格:10mL 5g,南京某制药有限公司,批号:050801、

050802、050803。

HP1100HPLC 仪(包括二元输液泵、自动进样

器、柱温箱、DAD 检测器,美国惠普公司。2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 检测波长的确定取门冬氨酸与盐酸鸟氨酸对照品适量,加50%磷酸溶液1滴,加50%乙腈溶液溶解并稀释分别制成每1mL 中约含门冬氨酸1mg 和鸟氨酸

1mg 的溶液,DAD 检测器全波长范围内进行扫描,门冬氨酸与鸟氨酸均在

200~210nm 波长范围内有吸收,属末端吸收。同时用200,204,210nm 进行检测,基线噪音基本相同,但200nm 的响应值最大,故选择200nm 作为测定波长。

2.1.2 色谱柱和流动相的选择经反复试验,用氨基键合硅胶色谱柱(4.6mm

250mm,5 m;以乙腈 0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液(50 50为流动相;流速为1.0mL/min 。理论塔板数按鸟氨酸峰计算应不

52

中国生化药物杂志Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2007年第28卷第1期

低于5000。在此色谱条件下,供试品及对照品的HPLC 色谱图见图1。鸟氨酸与门冬氨酸及氯离子峰的分离度均大于9.0

。

1.辅料;

2.氯离子;

3.鸟氨酸;

4.门冬氨酸1.Stuff; 2.Chl oride ion;3.As partate; 4.Orni thine

图1 供试品与对照品的HPLC 色谱图

Fig 1 HPLC chromatogram of sample and reference substance

2.2 线性关系

精密称取门冬氨酸与盐酸鸟氨酸对照品适量,加50%磷酸溶液1滴,加50%乙腈溶液溶解并稀释制成每1mL 含门冬氨酸与鸟氨酸均为12.5mg 的溶液。精密量取0.1,0.3,0.5,0.7,0.8,1.0,2.0mL,分别置10mL 量瓶中,加50%乙腈溶液稀释至刻度,摇匀,精密量取20 L,分别注入HPLC 仪,记录色谱图,以峰面积(A 对浓度(C 作线性回归,得直线方程为:门冬氨酸A =3668.3C +58.823,r =0.9999;鸟氨酸A =1162.3C +3.100,r

=0.9999。结果表明,在125~2500 g/mL 范围内,A 与C 均呈良好的线性关系。

2.3 回收率试验

精密量取门冬氨酸鸟氨酸注射液适量,加50%乙腈溶液稀释制成每1mL 约含门冬氨酸与鸟氨酸均为25mg 的贮备溶液。分别精密称取相当于门冬氨酸与鸟氨酸对照品各20,25,30mg,分置3个50mL 量瓶中,加50%磷酸溶液1滴,用50%乙腈溶液适量使溶解,精密量取贮备溶液1mL,分置上述3个50mL 量瓶中,用50%乙腈溶液稀释至刻度,摇匀,即得相对标示量浓度为80%,100%,120%的加样回收溶液。另精密称取门冬氨酸与盐酸鸟氨酸对照品适量,加50%磷酸溶液1滴,加50%乙腈溶液溶解并稀释制成每1mL 约含门冬氨酸与鸟氨酸均为1mg 的溶液,作为对照品溶液。按2.1项色谱条件测定,结果门冬氨酸的平均回收率为99.92%,RSD 为0.34%(n =9;鸟氨酸的平均回收率为100.25%,RSD 为0.70%(n =9,方法的回收率良好,其他成分及辅料对测定无干扰。