叶酸受体介导的负载紫杉醇纳米药物输送系统的体外生物活性的研究

１ ． ２ ． １ 细胞培养
将冻存 的 ＫＢ细胞 和 Ａ５ ４ ９细胞 复 苏后 ，
方法简单易行 ， 因此构 建 以叶酸受 体介导 的纳 米药 物输送 系 统成为主动靶 向治疗 肿瘤 的研究 热点 之一＿ ４ ］ 。近 年来开 展
了大量的关于 以叶酸受体介导 的纳米药物输送 系统的研究 工 作， 并且 取得了很 多好 的进展＿ ６ ］ 。 目前 ， 我们已经开展 了 以生物大 分子肝 素 为载 体叶酸 受
式细胞仪检测表明肝素一 叶酸一 紫杉醇纳米药物也表 现出与紫杉醇相似 的抑制作 用 ， 即Ｇ ２ ／ Ｍ 期均有 所增长 。结论 ： 体外生物 活性检 测表 明叶酸受体介导的负载紫杉醇的纳米药物输送系统有较好的靶向性， 其应用前景值得期待 。 关键词 ： 叶酸受体 ； 紫杉醇； 纳米药物输送 系统 ； 体外生物活性
ｄ ０ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ．１ ０ ０ ４ － ４ ３ ３ ７ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ３ ． ０ ０ ９
研究发现叶酸受体在许多肿瘤 中如卵巢癌 ， 乳腺 癌 ， 宫 颈 癌， 结肠癌 ， 鼻咽癌等 细胞表 面高 度表达 ， 通 过 叶酸受 体介 导
软件进行单 向方差分析或 ｔ 检验 。
１ ． ２ 方 法
现药物系统选择性 攻击 肿瘤细 胞 ， 进而发 挥针 对肿瘤 细胞 的 靶向治疗 作用 ， 从 而避 免 正常 细胞 的损伤 ＿ １ ］ 。同时 叶酸 的
相对分子量较小 ， 无免 疫原性 ， 稳 定性好 ， 与药 物或 载体连 接
紫杉醇纳米粒进入叶酸受体阳性 表达 Ｋ Ｂ细胞和叶酸受体 阴性表达 Ａ ５ ４ ９ 细胞的情况 ， 考察 纳米粒对靶细胞摄取情况 ； 以原药紫杉醇 为对照组 ， 应用 ＭＴ Ｔ法检测纳米粒子对叶酸受体 阳性表达 Ｋ Ｂ细胞 的抗 癌抑制活 性； 应用流式 细胞仪对 纳米粒子抗 癌机制进行 分
析 。结果 ： 细胞摄取实验表明 ， 肝 素一 叶酸一 紫杉醇纳米药物是通过叶酸受体介导的内吞作用实现对靶细胞的特异性 ； 与紫杉醇对 比， 纳 米粒子的针对叶酸受体阳性细胞 的抑制效果更好 ， 半数抑制浓度 （ Ｉ Ｃ ｓ ｏ ） 为０ ． ０ ６ ｇ ／ ｍＬ， ＭＴＴ实验结果 与细胞摄取 实验结果一 致； 流
分别加入完全培养液 （ ＲＰ ＭＩ １ ６ ４ ０＋ １ ０ 小 牛血清 ＋ ０ ． １
青／ 链霉 素） ， 放入 ３ ７ ￣ Ｃ、 ５ Ｃ Ｏ ２ 培养箱 中培养 。细胞培养 至指数生长期 ， 待用 。 １ ． ２ ． ２ 细胞摄取实验 将生 长状态 良好 的 Ｋ Ｂ细胞 和 Ａ５ ４ ９ 细胞 ， 应用 ０ ． ２ ５ 胰 蛋 白酶 消化后 ， 放人 腔式细胞 培养载玻
将 指 数 生 长期 的细 胞 用
０ ． ２ ５ 胰蛋 白酶消化后 ， 加入 １ Ｏ ｍＬ完全培 养液调整 细胞浓 度， 取９ ６ 孔细胞培养板 ， 每孔 加入 细胞悬 液 １ ０ ０ Ｌ ， 平板 置于 ３ ７ ￣ Ｃ、 ５ Ｃ Ｏ ２ 培养箱 中培养 ２ ４ ｈ 。配制纳米药物与对照 品紫
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｍａ ｔ ｈ ｅ ｍａ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
Ｖ０ １ ． ２ ６
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＮｏ ．３
２ ０ １ ３
文章编号 ： １ ０ ０ ４ — ４ ３ ３ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ３ — ０ ２ ７ ８ — ０ ４
中图分类号 ： Ｑ８ １ ９
体介导 的紫杉醇纳米药物输送 系统 的制备 ， 基于此 ， 我们 进一
片培养 ， ２ ４ ｈ 后， 加 入一 定量 带有 Ｏｒ ｅ ｇ ｏ ｎ Ｇ ｒ ｅ ｅ ｎ ４ ８ ８标 记 的肝 素一 叶酸一 紫杉 醇水溶液 ， 作用 ２ ｈ后 ， Ｐ Ｂ Ｓ洗两遍 后 ， 应 用多 聚
甲醛 固定液 固定 ， Ｈｏ ｅ ｃ ｈ ｓ ｔ ３ ３ ３ ４ ２染核后 ， 上 激光共 聚焦 观察 ， 纳米粒子进人细 胞的情 况 ， 以及 纳米粒 子靶 向叶酸受 体 的情
的内吞作用 ， 能够将带有 叶酸的复合物送入 靶细胞胞 浆 内， 实
Ｄｉ ｃ ｋ ｉ ｎ ｓ ｏ ｎ ， 美 国） 配备 ４ ８ ８ ｎ ｎ ｌ 氩 离子 激发 光 ， 酶 标仪 （ Ｔｈ ｅ ｒ ＿
ｅａ ｒ ｌ ， 美 国） 。
实验数据以均数 ±标 准差 （ 士ｓ ） ， 采用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ０ ． ０统计
Ｐ Ｂ Ｓ 清洗后 ， 在孔板中加入 １ ０ ０ Ｌ含有药 物的完全 培养液 ， 置 于放入 ３ ７ ￣ Ｃ、 ５ ｃ ｏ ｚ 培养箱 中培养 ４ ８ ｈ 后， 每 孔加 人 ２ Ｏ Ｌ ＭＴ Ｔ （ ２ ． ５ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ） ， 置于放 入 ３ ７ Ｃ、 ５ Ｃ Ｏ ｚ 培养箱 中培养 ４
文献标识码 ：Ａ
・基础 医学研 究 ・
叶酸受体介导的负载紫杉醇纳米药物输送 系统 的体外生物活性的研究△
王 莺
（ 南 方 医科 大 学基础 医学 院肿 瘤研 究所
摘
广州 ５ １ ０ ５ １ ５ ）
要： 目的： 叶酸受体介导 的负载紫杉醇纳米药物输送 系统 的的体外生物活性研 究 。方法 ： 应用激 光共聚焦观察肝素一 叶酸一
况。
步探索该体系 的体 外生 物活性 ， 考察药 物输送 系统 的 叶酸受
体 内吞作用对靶 细胞 的特异 性 ， 及其 细胞毒性 以及 相关 的抗
癌机理 的研究等 工作 ， 为 我们开 展该体 系 的体 内生 物活性 提
供 重 要 的研 究 基 础 。 １ 材 料 与 方 法
１ ． ２ ． ３ 纳米药 物 抗癌 抑 制 实 验
１ ． １ 材料与仪器
肝素一 叶酸一 紫杉醇 纳米 药物 系统 （ 自制 ） ； Ｈｏ ｅ ｅ ｈ ｓ ｔ ３ ３ ３ ４ ２ ， ３ 一 （ ４ ， ５ 一 二 甲基噻唑一 ２ ） 一 ２ ， ５ 一 二苯基 四氮 唑溴盐 （ ＭＴ Ｔ） ， 碘化
杉醇相同药物浓度。将 ９ ６ 孔细胞板中的培养液吸出， 同时用