8、昆虫病毒

沉淀物添加助剂
质检包装
计数
滤液离心沉淀
过滤
2、从野外采集大量活虫接种繁殖，在 自然条件和室内饲养接种。在林间用塑料薄 膜围栏饲养马尾松毛虫，每围投放50006000头3-5龄幼虫，接种浓度为2.0×106 PIB/ml,接毒3次，感染后18-20天收集死虫， 平均每虫复制量为1.6-3.8亿多角体；在林 间套笼5-6龄马尾松毛虫品均每虫产4.24亿 多角体。
病快，发病率高，短期内可收到防治效果。此 外，毒力与病毒的新鲜度有关。从宿主体内新 形成的病毒，致病力最强。 （二）环境因素 田间温度对昆虫病毒的毒力影
响不大，主要影响昆虫的易感性。紫外线对病
毒的致病力影响较大。
（三）施用时期与次数 幼虫在不同发育阶段对病
毒的感受性不同。虫龄愈小感受性愈高。同一龄
同。
舞毒蛾 ＮＰＶ
病毒粒子
病毒粒子
春 尺 蠖
NPV
病毒粒子
美国白蛾NPV
北京检疫性害虫，到天津生 产，北京房山飞机防治
多角体和病毒粒子(电镜照片)
（二）NPV的病理特征
1、病理特征 NPV感染幼虫后，初期外部病征不明显，后期行动迟 缓，食欲减少，体色变化（鳞翅目幼虫体色淡而少毛，油 光或现淡黄斑；膜翅目叶蜂感病早期第三节至第五节由鲜 绿色变成淡黄色），4天后开始死亡，5-7天为死亡高峰。 幼虫死后，组织液化，表皮轻触即破，流出脓状体液，无 臭。一般虫子濒死前，表现很不安宁，常爬到养虫器具的 顶部或植物的顶部倒悬而死。
第四章 昆虫病毒
最早关于昆虫病毒的记载是中国。在1149年 的《农书》中，记载家蚕的“高节”、“脚肿”
病，《蚕经》中描述病蚕“游走而不安箔”，最 后放“白水”而死, 就是现在所称的核型多角体 病毒病。沈公练（1862）在《广蚕桑说辑补》 “达眠起后二三日，有蚕身独短，其节高耸，不 食而常在叶上往来，脚下有白水者，宜即去之， 勿使他蚕沾染”。
第三节 昆虫病毒的感染与传播方式
一、病毒的感染方式
昆虫病毒感染方式有三种 (1)通过害虫取食进入中肠感染，这是最主要的方式。多 角体进入中肠后，在碱性条件下病毒粒子被释放出来， 病毒粒子将其遗传物质注入昆虫细胞，使昆虫细胞受到 病毒遗传信息的控制而复制病毒，最终导致害虫细胞破 坏和害虫死亡； (2) 经虫体的创伤感染（主要是游离病毒粒子的作用）；
死亡； NPV对昆虫的侵染部位依不同的寄主而别。棉铃 虫NPV主要侵染幼虫的血细胞、脂肪细胞、气管、马氏管、 神经节和表皮细胞的细胞核，有些昆虫的中肠细胞、丝腺 体、肌肉及生殖系统细胞也被感染。 NPV感染细胞后， 表现为细胞核膨大，染色质凝聚成块。
二、颗粒体病毒（Granulosis virus, GV）
杀虫剂登记注册商品。我国目前有20多种病毒杀 虫剂进入生产试验，但登记注册并形成商品产品 很少。
一、核多角体病毒（Nuclear Polyhedrosis Virus, NPV）是昆虫病毒中发现最早，研究最
详的一类病毒。从不同昆虫中发现近300种NPV， 其主要特点是病毒侵入昆虫体后主要在细胞核内 寄生，并在细胞内形成蛋白质晶体构成的多面体 型的包涵体（inclusion body, IB）, 称核型多角体 （NPB），由此命名为核多角体病毒。
• 优点
– – – – – 专一性强，对其他生物昆虫安全 可以垂直传递和感病虫体的向上传播，利于病害持续流行 使用上不受温度等条件限制 保质期长 不产生抗性
• 缺点
– 杀虫谱窄 – 潜育期长，杀虫速度慢 – 只能在活体昆虫或细胞中繁殖
生物导弹防治技术 基本原理: “生物导弹”治虫是以昆虫病
毒流行病学为理论基础，以卵寄生蜂为媒 介传递病毒，使初孵幼虫罹病，在靶标害 虫中形成病毒二次感染，诱导病毒病流行 达到控制害虫的目的。如使赤眼蜂携带松毛
虫CPV，使松毛虫卵表感染CPV，幼虫孵化后取 食卵壳而感染。
可携带真菌杀虫剂的媒介昆虫（幼虫和蛹期寄生和捕食性天敌）
赤眼蜂携带病毒杀虫剂（卵期寄生天敌）
卵寄生蜂传毒杀虫示意图
使用范围
展着剂（中性洗衣粉、SDS）
粘着剂（淀粉、甲基纤维素） 诱饵剂（根据害虫种类而定，如棉铃虫用棉油、棉叶粉等）
填充剂（硫酸钙、白陶土、粉煤灰、高岭土）
乳化剂（656H、656L、吐温-20）
第五节 影响病毒防治效果的因素
(一) 病毒的毒力 不少害虫能被两种以上病毒感
染 ，这就应选择毒力最强的病毒。毒力强则发
• 不论多角体或颗粒体都是蛋白质结晶，对多种蛋白酶稳定，但易溶 于碱性溶液而放出病毒粒子。
SARS病毒形态
HIV 与感冒病毒形态
第二节 昆虫的重要病毒
据不完全统计，国外已从1100多种昆虫中发 现了1690多种病原病毒，我国也已从190个虫种中
分离到234株昆虫病毒，美国已有20多种昆虫病毒
舞毒蛾NPV的生产
人工饲料饲养美国白蛾
春尺蠖NPV的生产
病毒工厂化生产工艺
室内传代虫
林间自然虫源 －蛹、成虫、卵 沉淀物添加助剂 人工饲料饲养 4龄幼虫接毒 过滤 死虫回收 组织破碎
计数
滤液离心沉淀
质检包装
辅助剂
为了提高病毒制剂的质量和防效，常常在制剂中加入各种辅助剂， 通常包括 增效剂（西维因、硫酸铜、硫酸锌，杀虫效果增加100多倍） 保护剂（活性碳、黄连素、荧光素钠）
舞 毒 蛾 死 多 亡 角 状 体
被LdNPV感染的舞毒蛾组织液化
LdNPV
被NPV病毒感染致死的美国白蛾幼虫
先吐丝缠住尾部，倒挂树枝。 春尺蠖一年发生一代 ，需要解决滞育问 题，才能连续饲养生产病毒 。
感NPV春尺蠖死亡症状(录像10min)
2、侵入途径和侵染部位
NPV传染途径主要为食入感染，极少可从皮肤及气门 感染。致病的因素是病毒粒子而不是多角体。NPV食入后， 多角体进入中肠后，碱性条件下病毒粒子被释放出来，将 其遗传物质注入昆虫细胞，使得昆虫细胞受到病毒遗传信 息的控制而复制病毒，最终导致害虫细胞的破坏和害虫的
2、侵染组织：CPV侵染寄主中肠柱状上皮细胞，并在细胞质 中形成多角体。病毒入侵可分为三个阶段：（1）病毒突起 吸附于细胞表面；（2）突起埋入细胞表层；（3）纤维状 髓核被释放入细胞质内，在细胞表面剩下空的病毒粒子。
被CPV病毒感染致死的文山松毛虫幼虫
被CPV病毒感染的思茅松毛虫幼虫
被CPV病毒感染致死的马尾松毛虫幼虫
有管状突起其核酸是RNA，不同昆虫CPV的RNA
含量不同。
松毛虫CPV
病毒粒子
感病中肠
应用面积广，感染率高，但杀虫慢
（二）CPV的病理特征
1、外部病征：发病初期病征不明显，随后昆虫生长缓慢，体 型缩小，且大小不成比例（头大尾尖），毛长，有时半有 体色变化（松毛虫由黄绿色变为黄色或白色，皱），虫尸 体内组织不液化解体，体壁不易破裂。虫种不同，感染的 龄期不同，病征有差异。一般经7-20天死亡。
我国松毛虫CPV的生产
松毛虫CPV的加工
松毛虫CPV在我国的使用面积超 过2万ha，广东应用马尾松毛虫 CPV防治面积达2600ha，杀虫率 在70％以上，持效5-6年。云南利 用松毛虫CPV防治文山松毛和云 南松毛虫930ha，当代防效70.491.5％。
3、在室内饲养大量害虫接种病毒。采用自然饲料或人工 饲料饲养昆虫生产NPV、CPV、GV。人工饲料用于病毒生 产，可以不受饲料植物生长季节的限制，为病毒生产的 工厂化、机械化、自动化创造条件；可以相对节省植物 栽培和昆虫饲养的劳动力；同时人工饲料还可以灭菌消 毒，避免其他微生物对病毒产品的污染。
期中刚蜕皮的幼虫最易感染。喷洒同样浓度的 NPV悬液，能够引起1龄天幕毛虫发病死亡92%， 而3龄幼虫只有14%，4龄幼虫完全不发病。 （四）潜育期 如果潜育期过长，即使害虫最终死
亡率达100%，但发病过迟，幼虫死亡前仍能大
量损害作物，往往达不到防治目的。
（五）害虫习性 病毒主要通过口侵染，所以病毒 对那些群集食叶害虫易于收效，如叶蜂幼虫、粉 纹夜蛾、菜粉蝶、舞毒蛾等。不论液剂或粉剂， 能喷上叶背很重要。植物内部为害或土壤害虫， 就需要采取特殊办法，如释放感染成虫。 综上所述，昆虫病毒要在田间害虫种群内引 起大流行，其中最重要的是病毒的毒力与剂量， 害虫本身的发育阶段和健康状况，以及害虫当时 所处的生态条件这三个方面的复杂关系。
原虫
真菌菌丝 核仁
线虫头部
植原体
细菌
植物病毒
一、昆虫病毒的一般构造
病毒是非细胞的最小有机体，是最原始的生命形态，其主
要成分是核酸和蛋白质。一个病毒叫做病毒粒子(virion),由两 部分组成，内层是核酸构成的髓核(core nucleod)；外层是衣壳
(capsid)，成分是蛋白质。有些病毒粒子外面有一层膜包被， 称为囊膜(envelope)。囊膜主要由蛋白质和脂肪组成,与宿主专 一性和侵入等功能有关
病毒制剂的生产
病毒为专性寄生病原，不能在人工培养
基上生产，只能在寄主昆虫活体或活细胞系 中增殖。
（二）在昆虫活体中增殖病毒（因地制宜）
1、野外喷洒收集法 选择有力时机利用林间高
虫口区喷洒病毒，让病毒在害虫自然种群中繁殖，
造成流行病，结合害虫防治，采集病死虫。
病毒林间生产工艺 林间自然虫源 －幼虫 喷洒病毒 病死虫回收 组织破碎
（二）GV的病理特征
1、外部病征 感染GV的幼虫病征与NPV颇为相似，
首先表现食欲减退，行动迟缓，腹部肿胀，最后停止 摄食，刚死幼虫头部下垂，口腔向外吐出粘稠液。皮 肤颜色（特别是腹面）从固有色泽逐渐变成灰白色或 乳黄色，但因虫种而异。如菜粉蝶得病后腹面呈乳白 色；苹果小蠹蛾幼虫腹面变得比健虫更加发紫；鹿眼 蛱蝶变成异常的褐色。病势进一步发展，血液一般混 浊呈乳白色。病死虫体多为倒挂或呈“۸”型挂在树枝 上。很快变黑。
（一）核多角体病毒的形态
NPV属于杆状病毒科(Baculoviridae)，为双链
环状DNA病毒，病毒粒子杆状, 多个无规则地包 埋在多角体的包涵体中。包涵体的直径是2-3µm， 包涵体的形状有三角形、四角形、五角形、六角 形、圆形和不规则形，形状因昆虫种类不同而异，
甚至同一病毒株因寄生的组织不同多角体形状不
杨扇舟蛾颗粒体病 毒和幼虫死亡症状
病毒体和粒子
北京因为有GV而不严重， 中原地区严重
三、质型多角体病毒 （Cytopkasmic Polyhedrosis Virus, CPV） 我国发现的CPV的寄主多为鳞翅目昆虫，如马
尾松毛虫、赤松毛虫、油松毛虫等，其他目如脉翅
目、双翅目、膜翅目有少量发现. （一）形态特征 CPV多角体因不同寄而性状不同，四角体－八 角体，病毒粒子呈正20面体，直径约60nm，表面
(3) 经卵感染（卵表传染、经生殖细胞传染）。
三、昆虫病毒的传播
（1）垂直传播：经昆虫卵表将病毒传给下一代昆
虫；卵内遗传物质传播。
（2）水平传播：病死虫尸、感病寄主昆虫的爬行
（向上，解决顶部喷药难的问题）中的虫粪、唾液
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
污染树叶等昆虫的食料，使其它昆虫染病；成虫的
迁飞，雨水、风、寄生性昆虫、食虫鸟等可帮助病 毒扩散。其中成虫迁飞可将病毒远距离扩散传播。 （3）人为措施传播和扩散
（一）形态及组成
GV也属于杆状病毒科，病毒粒子外有囊膜。包涵 体呈颗粒体，卵形或椭圆形，很小，300-511nm ×119-
350nm。病毒粒子杆状，稍弯曲，大小因寄主种类不同 而异。GV的核酸是DNA，呈双螺旋结构、共价闭环 DNA、开环DNA和双链线性DNA。GV只侵染鳞翅目昆 虫，目前共发现130株。
四、环境条件对病毒病的诱发
（1）温度可诱发昆虫病毒病，低温（0-8 ℃）处理是有效的
病毒诱发条件。使用不受温度的限制。
（2）辐射：日光直射可增加病毒病的发生。 （3）化学药物诱发病毒病，如1%福尔马林、3%漂白粉等 可诱发病毒病的发生。
• Google videa 棉铃虫昆虫病毒生物杀虫剂
第四节
• 有的昆虫病毒粒子能在宿主细胞中形成蛋白质晶体构成的包含体 （ inclusion body, IB ）。
• 多角形的包含体叫多角体(polyhedron），如核型多角体病毒和质 型多角体病毒。多角体里面包含着很多病毒粒子. • 另一种包含体叫颗粒体（granules），病毒在宿主细胞中形成一 种椭圆形或梭形（也有立方形）的颗粒状包含体，里面只含一个 （间或两个）病毒粒子，这一点与多角体不同。