第二章提取、分离与鉴定的方法与技术9
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– 氧化铝薄层板在150～160℃活化4小时，即可得到Ⅲ～ Ⅳ活性的薄层板，在200 ℃活化4小时即可得到Ⅱ级活 性的薄层板。
2020/9/23
• (3)点样：
– ①样品溶液配制：将样品溶液配制成1%～2%的乙醇( 或丙酮、氯仿)溶液，尽量避免用水，因为水溶液斑点 易扩散，且不易挥发除去。
– ②确定起始线的位置：在距离薄板一端2cm处用铅笔轻 轻划一直线作为起始线。
• CMC-Na表示黏合剂羧甲基纤维素钠，特点：
– 含CMC-Na的薄层板机械性能强，可用铅笔写字，但不耐 腐蚀。
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• (2)薄层板的活化 • 将涂铺完成后的薄层板置水平台上室温凉干后：
– 硅胶板于100～110℃活化30～60分钟，置干燥器中备用 。也有的不用活化，铺好阴干后即可使用。
• (8)提示 – 根据被分离成分的溶解性、酸碱性等性质，选择 合适的吸附剂和展开剂是吸附色谱法分离的关键 ；薄层板的制备要求厚薄均匀（0.25～0.5mm),无 气泡；点样时注意不要损坏薄层板的表面；在 TLC法中能使各组分Rf值达到0.2～0.3的溶剂系统 ，可选作柱色谱的分离条件。
用和适用范围 。
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• (二)薄层色谱法
– 薄层色谱法（thin layer chromatography，TLC ）是一种快速、简便、灵敏的分离检识方法。即 将吸附剂均匀地铺在玻璃板上，把欲分析的样品 点加到薄层上，然后用合适的溶剂展开而达到分 离、鉴定和定量目的的方法。该方法不仅对分离 鉴定天然产物成分起到了独特的作用，在分析化 学、药物化学、染料、农药等领域，均得到广泛 的应用。
第二章 天然药物化学成分提取分离和 鉴定的方法与技术
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第二章 天然药物化学成分提取分离和鉴定的方法与技术
第一节 提取方法与技术 第二节 分离精制和鉴定的方法与技术
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第二章 天然药物化学成分提取分离和鉴定的方法与技术
第二节 分离精制和鉴定的方法与技术 一、系统溶剂分离法 二、两相溶剂萃取法 三、沉淀法 四、结晶与重结晶法 五、透析法 六、分馏法 七、色谱法
• ②饱和10～15min
• ③展开方式：近水平展开、上行法、下行法，单向展开、双 向展开、单向二次展开等。
– 单向展开：将点好样品的薄板放入盛有展开剂的色谱槽或色谱缸中, 展开剂的用量要适中，以浸没薄层板下端0.5cm为宜。将饱和完毕后 的薄层板下端浸入展开剂中进行展开。待展开至规定距离(一般为10 ～12cm)，取出薄板划出溶剂前沿线。
• 5 操作技术*** • (1)制板(铺板)
– 方法：有干法辅板(软板)和湿法辅板(硬板)。 – (1)硅胶G板：除另有规定外，取一份硅胶G，加3份纯化
水，在研体中研磨均匀成糊状，除去表面的气泡，迅速 倾于玻璃板上，振荡均匀，置水平台上室温凉干后，活 化，备用。 – (2)硅胶G-CMC-Na板：除另有规定外，取1份硅胶G，加 3份0.1～0.5%的CMC-Na的水溶液，在研钵中研磨均匀 使成糊状，除去表面的气泡，迅速倾于玻璃上，振荡均 匀，置水平台上室温晾干后，活化，备用。
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– (3)氧化铝CMC-Na板：除另有规定外，取1份氧化铝，加 3份0.5%～1% CMC-Na水溶液，在研钵中研磨均匀，除 去表面的气泡，迅速铺于玻璃板上，振荡均匀，置水平 台上室温晾干后，活化，备用。
• G表示黏合剂煅石膏，含G的薄层板特点：
– 耐腐蚀性试剂，但不耐磨，易脱落。
– 双向展开：操作与上行单向展开相同，在单向展开完毕后，将展开 剂倒出，再换入新的展开剂，按与原展开方向成90°的方向进行第 二次展开。
– 单向二次展开：取一块较长的薄板划出起始线和中线，将样品点在 起始线上按上行单向展开的方法使展开剂行至中线，取出薄板，待 溶剂挥干，在第二种展开剂中按原方向进行第二次展开，展至溶剂 前沿，这样可使挥发油中各成分得到良好的分离。一般常用于挥发 油中混合成分的分离。
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• (6)特点 – 具有价廉、设备简单、操作容易、展开迅速、所 得斑点扩散小、分离过程受温度影响较小、可使 用腐蚀性试剂、试样负荷量大、分辨率高等优点 。
• (7)适用范围 – ①分离鉴定、定量分析、微量制备等；②配合柱 色谱作跟踪分离，了解分离效果，指导溶剂系统 的选择。
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• (5)显色 – 如果斑点有色，可在日光下直接观察；若有荧 光可在紫外灯下观察荧光；如果斑点本身无色 又无荧光，可喷洒适宜的显色剂，待斑点显色 后，计算Rf值。
•
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• (6)Rf值计算
– 显色后，各成分斑点在薄板上的位置可用Rf值表示。
•
Rf =
原点至斑点中心的距离 原点至溶剂前沿的距离
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• 1 基本原理
– 吸附和分配 两种薄层色谱法。
• 2 常用的吸附剂与支持剂
– 同柱色谱法。因硅胶和氧化铝吸附性能好，较为常用。
• 3 展开剂的选择
– 根据被分离成分的溶解性、酸碱性及溶剂的极性进行选 择。
• 4 显色方法
– 常用紫外光照射、喷雾显色和碘蒸气显色三种方法。
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– ③点样：少量多次原则。用平口毛细管将样品溶液吸入 管内，点在薄板的起始线上，可在一个原点上反复点2 ～3次，以增加其点样量，每点一次须待溶剂挥干后再 点第二次，斑点直径不要大于3mm，若在同一板上点 几个样品，每个斑点间距应保持1.5～2cm 。
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• (4)展开
• ①展开剂配制
•
A成分的
Rf =
a c
B成分的 Rf =
b c
• 由于同一种成分在相同的色谱条件下（吸附剂、展开剂、
温度等）的Rf值相同，故利用Rf可进行Biblioteka Baidu性鉴别。例如欲 知某提取液中是否含有A成分，可将对照品A成分与提取
液在同一块薄板上点样、进行展开，显色后，若提取液中
某斑点的Rf与对照品A的Rf相同，则说明提取液中含A成 分。
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第二章 天然药物化学成分提取分离和鉴定的方法与技术
七、色谱法 柱色谱法 薄层色谱法 纸色谱法 高效液相色谱法 气相色谱法
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学习目标： 1.掌握薄层色谱法、纸色谱法的概念；分离
原理和操作技术。 2.2. 熟悉比移值的计算方法。 3.3.了解高效液相色谱法和气相色谱法的应
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• (3)点样：
– ①样品溶液配制：将样品溶液配制成1%～2%的乙醇( 或丙酮、氯仿)溶液，尽量避免用水，因为水溶液斑点 易扩散，且不易挥发除去。
– ②确定起始线的位置：在距离薄板一端2cm处用铅笔轻 轻划一直线作为起始线。
• CMC-Na表示黏合剂羧甲基纤维素钠，特点：
– 含CMC-Na的薄层板机械性能强，可用铅笔写字，但不耐 腐蚀。
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• (2)薄层板的活化 • 将涂铺完成后的薄层板置水平台上室温凉干后：
– 硅胶板于100～110℃活化30～60分钟，置干燥器中备用 。也有的不用活化，铺好阴干后即可使用。
• (8)提示 – 根据被分离成分的溶解性、酸碱性等性质，选择 合适的吸附剂和展开剂是吸附色谱法分离的关键 ；薄层板的制备要求厚薄均匀（0.25～0.5mm),无 气泡；点样时注意不要损坏薄层板的表面；在 TLC法中能使各组分Rf值达到0.2～0.3的溶剂系统 ，可选作柱色谱的分离条件。
用和适用范围 。
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• (二)薄层色谱法
– 薄层色谱法（thin layer chromatography，TLC ）是一种快速、简便、灵敏的分离检识方法。即 将吸附剂均匀地铺在玻璃板上，把欲分析的样品 点加到薄层上，然后用合适的溶剂展开而达到分 离、鉴定和定量目的的方法。该方法不仅对分离 鉴定天然产物成分起到了独特的作用，在分析化 学、药物化学、染料、农药等领域，均得到广泛 的应用。
第二章 天然药物化学成分提取分离和 鉴定的方法与技术
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第二章 天然药物化学成分提取分离和鉴定的方法与技术
第一节 提取方法与技术 第二节 分离精制和鉴定的方法与技术
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第二章 天然药物化学成分提取分离和鉴定的方法与技术
第二节 分离精制和鉴定的方法与技术 一、系统溶剂分离法 二、两相溶剂萃取法 三、沉淀法 四、结晶与重结晶法 五、透析法 六、分馏法 七、色谱法
• ②饱和10～15min
• ③展开方式：近水平展开、上行法、下行法，单向展开、双 向展开、单向二次展开等。
– 单向展开：将点好样品的薄板放入盛有展开剂的色谱槽或色谱缸中, 展开剂的用量要适中，以浸没薄层板下端0.5cm为宜。将饱和完毕后 的薄层板下端浸入展开剂中进行展开。待展开至规定距离(一般为10 ～12cm)，取出薄板划出溶剂前沿线。
• 5 操作技术*** • (1)制板(铺板)
– 方法：有干法辅板(软板)和湿法辅板(硬板)。 – (1)硅胶G板：除另有规定外，取一份硅胶G，加3份纯化
水，在研体中研磨均匀成糊状，除去表面的气泡，迅速 倾于玻璃板上，振荡均匀，置水平台上室温凉干后，活 化，备用。 – (2)硅胶G-CMC-Na板：除另有规定外，取1份硅胶G，加 3份0.1～0.5%的CMC-Na的水溶液，在研钵中研磨均匀 使成糊状，除去表面的气泡，迅速倾于玻璃上，振荡均 匀，置水平台上室温晾干后，活化，备用。
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– (3)氧化铝CMC-Na板：除另有规定外，取1份氧化铝，加 3份0.5%～1% CMC-Na水溶液，在研钵中研磨均匀，除 去表面的气泡，迅速铺于玻璃板上，振荡均匀，置水平 台上室温晾干后，活化，备用。
• G表示黏合剂煅石膏，含G的薄层板特点：
– 耐腐蚀性试剂，但不耐磨，易脱落。
– 双向展开：操作与上行单向展开相同，在单向展开完毕后，将展开 剂倒出，再换入新的展开剂，按与原展开方向成90°的方向进行第 二次展开。
– 单向二次展开：取一块较长的薄板划出起始线和中线，将样品点在 起始线上按上行单向展开的方法使展开剂行至中线，取出薄板，待 溶剂挥干，在第二种展开剂中按原方向进行第二次展开，展至溶剂 前沿，这样可使挥发油中各成分得到良好的分离。一般常用于挥发 油中混合成分的分离。
2020/9/23
• (6)特点 – 具有价廉、设备简单、操作容易、展开迅速、所 得斑点扩散小、分离过程受温度影响较小、可使 用腐蚀性试剂、试样负荷量大、分辨率高等优点 。
• (7)适用范围 – ①分离鉴定、定量分析、微量制备等；②配合柱 色谱作跟踪分离，了解分离效果，指导溶剂系统 的选择。
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• (5)显色 – 如果斑点有色，可在日光下直接观察；若有荧 光可在紫外灯下观察荧光；如果斑点本身无色 又无荧光，可喷洒适宜的显色剂，待斑点显色 后，计算Rf值。
•
2020/9/23
• (6)Rf值计算
– 显色后，各成分斑点在薄板上的位置可用Rf值表示。
•
Rf =
原点至斑点中心的距离 原点至溶剂前沿的距离
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• 1 基本原理
– 吸附和分配 两种薄层色谱法。
• 2 常用的吸附剂与支持剂
– 同柱色谱法。因硅胶和氧化铝吸附性能好，较为常用。
• 3 展开剂的选择
– 根据被分离成分的溶解性、酸碱性及溶剂的极性进行选 择。
• 4 显色方法
– 常用紫外光照射、喷雾显色和碘蒸气显色三种方法。
2020/9/23
– ③点样：少量多次原则。用平口毛细管将样品溶液吸入 管内，点在薄板的起始线上，可在一个原点上反复点2 ～3次，以增加其点样量，每点一次须待溶剂挥干后再 点第二次，斑点直径不要大于3mm，若在同一板上点 几个样品，每个斑点间距应保持1.5～2cm 。
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• (4)展开
• ①展开剂配制
•
A成分的
Rf =
a c
B成分的 Rf =
b c
• 由于同一种成分在相同的色谱条件下（吸附剂、展开剂、
温度等）的Rf值相同，故利用Rf可进行Biblioteka Baidu性鉴别。例如欲 知某提取液中是否含有A成分，可将对照品A成分与提取
液在同一块薄板上点样、进行展开，显色后，若提取液中
某斑点的Rf与对照品A的Rf相同，则说明提取液中含A成 分。
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第二章 天然药物化学成分提取分离和鉴定的方法与技术
七、色谱法 柱色谱法 薄层色谱法 纸色谱法 高效液相色谱法 气相色谱法
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学习目标： 1.掌握薄层色谱法、纸色谱法的概念；分离
原理和操作技术。 2.2. 熟悉比移值的计算方法。 3.3.了解高效液相色谱法和气相色谱法的应