荷叶中总黄酮类化合物提取工艺的研究
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提取液总黄酮含量套用上标准曲线方程即可。
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4. 结果与分析
4.1 超声波法和水热法对荷叶中黄酮类化合物的提取效果的比较
方法 总黄酮含量（％）
表1 不同提取方法对黄酮提取率的影响
超声法
水热法
4.84％
4.69％
实验表明：采用超声法，提取率略高于水热法。但是，荷叶处理量要远多于水热法，能耗小 于水热法。
密封，置于烘箱中，在一定温度下恒温加热一定时间，取釜后待自然冷却至室温，过滤，高 速离心 18min（溶液量较多时可先用旋转蒸发仪浓缩滤液再离心），再用微孔滤膜过滤，减 压蒸馏。浓缩后转入 100mL 容量瓶中，用乙醇水溶液定容，用制作标准曲线同样的方法， 测定其黄酮类化合物的含量。
3.2 总黄酮含量的测定
Study on the extraction of flavonoid from the lotus leaf
Xu Zhao
Wuhan University of Technology，Applied Chemistry Department，Wuhan（430070）
Abstract To study the optimal conditions of flavones extraction from lotus leaf by ultrasonic and ethyl alcohol/water system. The content of flavones in lotus leaf was determined by spectrophotography. Results The optimal process conditions were percent of ethanol volume 50 % , ratio of solid to liquid 1∶20(g/mL), three extraction times, and extraction period as 25 min. the extraction content of flavonoids is 4.86％. Keywords：lotus leaf，flavonoids，ultrasonic extraction，ethyl alcohol/water system
4.2 超声处理正交方案
（1）采用超声法提取荷叶中黄酮，考察了超声时间，料液比，溶剂浓度，提取级数等因 素对黄酮提取率的影响，并采用 L9(34)正交试验对结果进行优化获得了提取荷叶黄酮的最佳 提取工艺条件：料液比 1﹕20，超声时间 25 分钟，乙醇浓度 50％，提取级数为 3，在此条 件下的提取率为 4.86％。
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0.220
0.223
提取级数
1 2 3 3 1 2 2 3 1 4.123 4.397 4.473 0.35
提取率 （%）
3.85 4.42 4.51 4.55 4.14 4.47 4.30 4.36 4.38
5. 结论
1 超声波能够提高浸提黄酮含量。 2 单因素料液比对提取黄酮含量的影响为：随着料液比的增大，提取物黄酮含量提高。当乙 醇浓度达到 50％时荷叶黄酮提取率最高，之后随着浓度的增加，提取率反而降低。这可能 是因为部分黄酮是水溶性的，如果水分含量太少，黄酮不能充分溶解。 3 超声波进三水平行三水平四因素的正交试验结果表明，以桑叶为原料提取黄酮的最佳提取 工艺条件是：料液比 1﹕20，超声时间 25 分钟，乙醇浓度 50％，提取级数为 3，在此条件
[2] Du L J, Sun H, Li M, Jin W, Xu L Z, Xu L Z, et al. Studies on the Active Components in the Leaf of Nelumbo nucifera and Black Soybean and Their Mixture with Blood Lipid Regulating Effect[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs(中草药)， 2000，31（7）：526－528
[3] Liang X C, et al. Effect of Jiangzhi Zhongyao Pian(降脂中药片)on Serum Lipid and Antioxidation of Hperlipemic Patients[J].Chinese Journal of Intergrated Traditional and Western Medicine(中国中西医结合 杂志)， 1994，14（3）：139－141
http://www.paper.edu.cn
荷叶中总黄酮类化合物提取工艺的研究
徐曌
武汉理工大学理学院应用化学系，武汉（430070）
E-mail：xuzhao1126@yahoo.com.cn
摘 要：本文研究了超声波法，水热法从荷叶中提取总黄酮的工艺。通过正教实验研究了最
佳提取条件，结果表明：荷叶中总黄酮类物质的最佳提取工艺条件是：乙醇浓度 50％，料
吸光度A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
0 0
y = 0.0257x - 0.0057 R2 = 0.9992
5
10
15
20
25
浓度/（μg/ml）
图 1 芦丁标准曲线
3.2.2 总黄酮含量的测定方法
取上述定容之提取液各 0.5mL 于 25mL 比色管中，用 50％乙醇－水补充至 10mL， 加入 3mL 0.1mol/L AlCl3，再加入 50％乙醇－水到 25mL，摇匀，静置 20min 后，测其吸光 度。
3.2.1 工作曲线回归方程的建立 标准曲线的制作
准确称取烘干恒重的芦丁标准品0.0121g，用50%的乙醇溶解并定容至100mL，摇匀得质 量浓度为0.121mg/mL的芦丁标准液。分别取上述芦丁标准液0.0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0， 3.5，4.0 mL于25mL比色管中，加入50%乙醇稀释至10mL，滴加0.1mol/L AlCl3溶液 3.0mL， 摇匀，用50%乙醇稀释至刻度，显色20min，试剂空白为参比液，于415nm 处测其吸光度， 以吸光度A为纵坐标，芦丁标准液浓度C为横坐标，绘制标准曲线（图1）。
2. 实验材料及仪器
2.1 试验材料
卢丁对照品购于国药集团化学试剂有限公司， 乙醇（95％）， 无水氯化铝（分析纯）。 荷叶采自湖北莲藕基地新一号，干燥后粉碎置于冰箱中备用。
2.2 试验仪器
722 型可见分光光度计，
RE52S 旋转蒸发器（上海蓉生生化仪器厂），
KQ2200B 超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜
威海自控反应釜有限公司
SHZ-D ( III)循环水式真空泵
巩义市英峪予华仪器厂
CL-12 型离心机
新专农灌机械厂
3. 试验方法
3.1 荷叶中总黄酮类物质的提取方法
3.1.1 超声法提取工艺 准确称取荷叶干粉2g，于250mL锥形瓶中，按一定的料液比加入乙醇水溶液，超声提取
液比 1﹕20，提取 3 次，超声提取时间 25min。在最佳参数组合下，荷叶黄酮提取率为 4.86 ％
关键词：荷叶；黄酮类化合物；超声提取，水热提取
中图分类号：TQ194.1
文献标示码：B
1. 前言
荷叶是睡莲植物中国莲（nelumbo nucifera）的叶片，在食用及药用两方面均有广泛的 应用 [1]。近年来对荷叶的研究发现，荷叶中富含黄酮类化合物。药理活性研究表明，荷叶 黄酮具有多种生物活性，如调脂作用、抗氧化、抗衰老、清除自由基和抑制脂肪肝作用等[2， 3]。荷叶黄酮以其巨大的资源优势，良好的药理活性和极低的毒性，将成为一种非常有应用 前途的药物[4-6 ]。但长期以来，这一资源未得到很好的开发和利用。本文研究了水热法；超 声波法提取黄酮类物质的最佳提取工艺。为荷叶有效成分的提取提供理论基础。
[4] Ding L S,Meng Z M.Chemistry of Chinese Traditional Medicine[M].Nan jing:Southeast University Publishing Company[M],2005.
[5] A, sticher D, Meier.B.，Identification and detemation of the flavonoids from Ginkgo biloba by high perfomrance liquid chromatogcaphy,[J]. Chromatogr,1992,605﹕41-18.
[6] Piergiorgio Pietta et.al.，Identification of flaonoids from Ginkgo biloba And Equisetum arvense L. By high perfomance liquid chromatography detection of chromatography, 1991. 553: 223-231.nobilis L. with diode-array L1V
编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1/3 K2/3 K3/3 R
料液比
1 1 1 2 2 2 3 3 3 4.260 4.387 4.347 0.127
表2 正交实验
因素
超声时间（min） 乙醇浓度
1
1
2
2
3
3
1
2
2
3
3
1
1
3
2
1
3
2
4.233 4.307
4.227 4.450
4.453
4.317
一定时间，抽滤。滤渣以同样条件提取、抽滤，并将几次的提取液合并、离心，用旋转蒸发
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器减压浓缩，回收乙醇。浓缩后转入100mL容量瓶中，用乙醇水溶液定容，用制作标准曲线 同样的方法，测定其黄酮类化合物的含量。
3.1.2 水热法提取工艺 称取 0.5g 荷叶干粉于 50mL 聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，加入一定量的溶剂，
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下的提取率为 4.86％
ຫໍສະໝຸດ Baidu
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参考文献
[1] Jiang X J.The application generality of lotus leaf[J].China Journal of Chinese Material Medica (中国中药杂 志)，1997 ,6 (22) :374 - 378.
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4. 结果与分析
4.1 超声波法和水热法对荷叶中黄酮类化合物的提取效果的比较
方法 总黄酮含量（％）
表1 不同提取方法对黄酮提取率的影响
超声法
水热法
4.84％
4.69％
实验表明：采用超声法，提取率略高于水热法。但是，荷叶处理量要远多于水热法，能耗小 于水热法。
密封，置于烘箱中，在一定温度下恒温加热一定时间，取釜后待自然冷却至室温，过滤，高 速离心 18min（溶液量较多时可先用旋转蒸发仪浓缩滤液再离心），再用微孔滤膜过滤，减 压蒸馏。浓缩后转入 100mL 容量瓶中，用乙醇水溶液定容，用制作标准曲线同样的方法， 测定其黄酮类化合物的含量。
3.2 总黄酮含量的测定
Study on the extraction of flavonoid from the lotus leaf
Xu Zhao
Wuhan University of Technology，Applied Chemistry Department，Wuhan（430070）
Abstract To study the optimal conditions of flavones extraction from lotus leaf by ultrasonic and ethyl alcohol/water system. The content of flavones in lotus leaf was determined by spectrophotography. Results The optimal process conditions were percent of ethanol volume 50 % , ratio of solid to liquid 1∶20(g/mL), three extraction times, and extraction period as 25 min. the extraction content of flavonoids is 4.86％. Keywords：lotus leaf，flavonoids，ultrasonic extraction，ethyl alcohol/water system
4.2 超声处理正交方案
（1）采用超声法提取荷叶中黄酮，考察了超声时间，料液比，溶剂浓度，提取级数等因 素对黄酮提取率的影响，并采用 L9(34)正交试验对结果进行优化获得了提取荷叶黄酮的最佳 提取工艺条件：料液比 1﹕20，超声时间 25 分钟，乙醇浓度 50％，提取级数为 3，在此条 件下的提取率为 4.86％。
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提取级数
1 2 3 3 1 2 2 3 1 4.123 4.397 4.473 0.35
提取率 （%）
3.85 4.42 4.51 4.55 4.14 4.47 4.30 4.36 4.38
5. 结论
1 超声波能够提高浸提黄酮含量。 2 单因素料液比对提取黄酮含量的影响为：随着料液比的增大，提取物黄酮含量提高。当乙 醇浓度达到 50％时荷叶黄酮提取率最高，之后随着浓度的增加，提取率反而降低。这可能 是因为部分黄酮是水溶性的，如果水分含量太少，黄酮不能充分溶解。 3 超声波进三水平行三水平四因素的正交试验结果表明，以桑叶为原料提取黄酮的最佳提取 工艺条件是：料液比 1﹕20，超声时间 25 分钟，乙醇浓度 50％，提取级数为 3，在此条件
[2] Du L J, Sun H, Li M, Jin W, Xu L Z, Xu L Z, et al. Studies on the Active Components in the Leaf of Nelumbo nucifera and Black Soybean and Their Mixture with Blood Lipid Regulating Effect[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs(中草药)， 2000，31（7）：526－528
[3] Liang X C, et al. Effect of Jiangzhi Zhongyao Pian(降脂中药片)on Serum Lipid and Antioxidation of Hperlipemic Patients[J].Chinese Journal of Intergrated Traditional and Western Medicine(中国中西医结合 杂志)， 1994，14（3）：139－141
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荷叶中总黄酮类化合物提取工艺的研究
徐曌
武汉理工大学理学院应用化学系，武汉（430070）
E-mail：xuzhao1126@yahoo.com.cn
摘 要：本文研究了超声波法，水热法从荷叶中提取总黄酮的工艺。通过正教实验研究了最
佳提取条件，结果表明：荷叶中总黄酮类物质的最佳提取工艺条件是：乙醇浓度 50％，料
吸光度A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
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y = 0.0257x - 0.0057 R2 = 0.9992
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浓度/（μg/ml）
图 1 芦丁标准曲线
3.2.2 总黄酮含量的测定方法
取上述定容之提取液各 0.5mL 于 25mL 比色管中，用 50％乙醇－水补充至 10mL， 加入 3mL 0.1mol/L AlCl3，再加入 50％乙醇－水到 25mL，摇匀，静置 20min 后，测其吸光 度。
3.2.1 工作曲线回归方程的建立 标准曲线的制作
准确称取烘干恒重的芦丁标准品0.0121g，用50%的乙醇溶解并定容至100mL，摇匀得质 量浓度为0.121mg/mL的芦丁标准液。分别取上述芦丁标准液0.0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0， 3.5，4.0 mL于25mL比色管中，加入50%乙醇稀释至10mL，滴加0.1mol/L AlCl3溶液 3.0mL， 摇匀，用50%乙醇稀释至刻度，显色20min，试剂空白为参比液，于415nm 处测其吸光度， 以吸光度A为纵坐标，芦丁标准液浓度C为横坐标，绘制标准曲线（图1）。
2. 实验材料及仪器
2.1 试验材料
卢丁对照品购于国药集团化学试剂有限公司， 乙醇（95％）， 无水氯化铝（分析纯）。 荷叶采自湖北莲藕基地新一号，干燥后粉碎置于冰箱中备用。
2.2 试验仪器
722 型可见分光光度计，
RE52S 旋转蒸发器（上海蓉生生化仪器厂），
KQ2200B 超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜
威海自控反应釜有限公司
SHZ-D ( III)循环水式真空泵
巩义市英峪予华仪器厂
CL-12 型离心机
新专农灌机械厂
3. 试验方法
3.1 荷叶中总黄酮类物质的提取方法
3.1.1 超声法提取工艺 准确称取荷叶干粉2g，于250mL锥形瓶中，按一定的料液比加入乙醇水溶液，超声提取
液比 1﹕20，提取 3 次，超声提取时间 25min。在最佳参数组合下，荷叶黄酮提取率为 4.86 ％
关键词：荷叶；黄酮类化合物；超声提取，水热提取
中图分类号：TQ194.1
文献标示码：B
1. 前言
荷叶是睡莲植物中国莲（nelumbo nucifera）的叶片，在食用及药用两方面均有广泛的 应用 [1]。近年来对荷叶的研究发现，荷叶中富含黄酮类化合物。药理活性研究表明，荷叶 黄酮具有多种生物活性，如调脂作用、抗氧化、抗衰老、清除自由基和抑制脂肪肝作用等[2， 3]。荷叶黄酮以其巨大的资源优势，良好的药理活性和极低的毒性，将成为一种非常有应用 前途的药物[4-6 ]。但长期以来，这一资源未得到很好的开发和利用。本文研究了水热法；超 声波法提取黄酮类物质的最佳提取工艺。为荷叶有效成分的提取提供理论基础。
[4] Ding L S,Meng Z M.Chemistry of Chinese Traditional Medicine[M].Nan jing:Southeast University Publishing Company[M],2005.
[5] A, sticher D, Meier.B.，Identification and detemation of the flavonoids from Ginkgo biloba by high perfomrance liquid chromatogcaphy,[J]. Chromatogr,1992,605﹕41-18.
[6] Piergiorgio Pietta et.al.，Identification of flaonoids from Ginkgo biloba And Equisetum arvense L. By high perfomance liquid chromatography detection of chromatography, 1991. 553: 223-231.nobilis L. with diode-array L1V
编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1/3 K2/3 K3/3 R
料液比
1 1 1 2 2 2 3 3 3 4.260 4.387 4.347 0.127
表2 正交实验
因素
超声时间（min） 乙醇浓度
1
1
2
2
3
3
1
2
2
3
3
1
1
3
2
1
3
2
4.233 4.307
4.227 4.450
4.453
4.317
一定时间，抽滤。滤渣以同样条件提取、抽滤，并将几次的提取液合并、离心，用旋转蒸发
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器减压浓缩，回收乙醇。浓缩后转入100mL容量瓶中，用乙醇水溶液定容，用制作标准曲线 同样的方法，测定其黄酮类化合物的含量。
3.1.2 水热法提取工艺 称取 0.5g 荷叶干粉于 50mL 聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，加入一定量的溶剂，
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下的提取率为 4.86％
ຫໍສະໝຸດ Baidu
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参考文献
[1] Jiang X J.The application generality of lotus leaf[J].China Journal of Chinese Material Medica (中国中药杂 志)，1997 ,6 (22) :374 - 378.