微生物检验的质量控制..

制备好的培养基应及时使用，使用不完 的，如无特殊需求，可室温或2-8℃冷藏保存。 如用塑料袋密封，保存期可延长，发生变 质等被污染迹象或干裂现象的则不能再使用。

表1 培养基在2-8℃冷藏条件下保存的有效期
培养基种类 保存条件 不装塑料袋 塑料袋密封 有效期 2周 8周
平板培养基
试管（棉塞）培养基 试管（螺旋盖）培养基

6 样品的接收和预处理

冻藏的样品应尽快放在冷藏的温度下解冻， 亦可放在适宜温度(37℃)下短时间(15min)使其 解冻，但温度必须较低，以防止病原菌死亡。
冻结样品化冻时，必须小心放置于细菌生长 温度之下以免使细菌数量增加。从容器中取出样 品、称取样品应注意无菌操作。

7 检验质量

除按国家标准方法对所需检验项目进行 检测外，在实际工作中还应注意以下几个方面， 否则会影响检验结果的准确性：
还必须检查： 培养基颜色 光洁度
有否过多气泡
均匀度 溶血与否 是否污染
厚度
3.1 培养基

培养基的配制应严格按照标准规定的方法进 行操作，并做好配制记录。
为保证培养基质量，在配制时应注意： 制备培养基必须在玻璃容器、搪瓷缸中进行， 如用铜、铁等金属器皿，可能会对微生物生长有毒 害作用。 配制培养基时应按检验项目规定的配方添加， 不得随意增减或更改培养基成分。
3.1 培养基

使用专用的角匙取药品，避免交叉污染。 使用蒸馏水或去离子水配制，不得使用自来 水，因其中含有氯等抗菌物质。 不同类型的微生物对pH值的要求不同，配制 培养基时应测定pH值，如测定结果与所要求的pH 值不符，则用lmol/L NaOH或lmol/L HCl溶液进 行调节。

3.1 培养基
5 采样
（3）每件样品封口后，贴上标签，做好记录(如 样品名称、采样地点、时间、数量、储藏情况、 采集或送检单位及姓名、采样现场温度、湿度及 卫生状况等)。采集后的样品，一般可保存在28℃的环境中，如果样品是冷冻食品，应保持在 冷冻状态，并及时送检。
（4）采样数量不能少于全部检验需要量的3倍， 以供检验、复检、备查。
2 仪器、设备
大型微生物检验室的主要仪器及设备包括：
无菌室、微生物自动鉴定仪、微生物快速初筛 仪、显微镜、菌落计数器、高压灭菌器、干热灭 菌器、离心机、蒸馏设备、培养箱、厌氧箱、水 浴箱、冰箱、超净工作台、酶标仪、洗板机、 PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等。
2 仪器、设备

要求所有的仪器和设备均应按照生产厂家提 供的方法和有关规定正确使用。


5 采样
（1）采样工具和容器宜选用耐消毒灭菌的材料，如 玻璃、陶瓷、搪瓷、铝、不锈钢等，使用之前应进 行认真清洗、干燥和相应的灭菌处理。采样工具和 容器不能用消毒剂消毒，样品中也不得加入防腐剂， 以免影响检验结果的正确性。 （2）在严格无菌操作的条件下，按国家规定的样品 采集标准均匀而准确地取样，并及时封口，使样品 具有准确性和代表性。
1 检验人员
（3）检验人员应执行上岗前培训制度，上岗前 培训合格方能上岗操作，还要主动参加学习、培 训、讲座，学习新技术，掌握微生物学检验方法、 标准及相关法律法规；
（4）参与编写测试程序及仪器操作程序，学习 质量保证体系知识和计量学基本知识；
1 检验人员
（5）参加各类水平测试和盲样测试，提高检测 水平和分析问题、解决问题的能力； （6）微生物学检验室负责人应定期对检验人员 进行专业知识和操作熟练程度的考核，提高检验 人员的素质。
需要强制性定期检定的仪器和设备，经符合 资历的计量部门校准合格后方可使用。 对于常用的贵重仪器和设备，在使用前应加 以检查，使用后要登记，要做到定期维护，以保 证仪器处于良好的工作状态。


2.1 高压灭菌器
（1）操作人员应了解蒸气灭菌的原理并遵守操 作规则。 （2）放入的灭菌物品不宜放得过挤。 （3）使用时，放入生物指示条或化学指示条。 （4）生物指标为嗜热脂肪芽胞杆菌的耐受性 （121℃，15min）。 （5）灭菌后，再培养观察有无细菌生长。 （6）也可采用水银留点温度计进行校准。
微生物检验的质量控制
广东省微生物研究所 广东省微生物分析检测中心 2012年11月
前言

在实际工作中存在许多复杂因素影响微生物 学检验，可能给检验结果带来偏差甚至错误，因 此必须对影响检验结果的诸多因素采取控制手段 保证检验结果的正确性，不断完善微生物检验的 质量控制。
主要内容
1 检验人员 2 仪器、设备 3 检验培养基、试剂 4 检验环境 5 采样 6 样品的接收和预处理 7 检验质量 8 校验的执行 9 参考菌株及其保存 10 实验室内外部质量控制 11 检验报告及结果质量控制


4 检验环境
微生物学检验均在检验室进行，既不能让微 生物散布出去，又必须使样品不再受污染，更不 能允许病原菌感染检验人员，为此，检验室的环 境要求和卫生管理制度非常重要。 实验室总体布局和各部位的安排应减少潜在 的对样本的污染和对人员的危害。

4 检验环境
微生物学检验室要求内外环境整洁，布局合理，操作区 域与办公区域分开。 洗涤室、培养室、消毒间、无菌室应分开，设有专室。
无菌室要设有套间或缓冲间，最好设推拉门，以防空气 振荡过大。 微生物检验室应备有自动或脚踩式洗手池和固定的消毒 设施。



4 检验环境
微生物检验室应制定合理、完善的卫生管理 制度，工作人员必须每天坚持做好环境卫生工作， 防止灰尘飞扬，定期对操作环境进行消毒。
对经培养后的培养基、培养液、用过的检样 及其他废弃物，应投入指定的容器内，经无害化 处理后方可排放，禁止乱扔乱放，以防某些病原 微生物散布。

3.1培养基

干粉培养基所要求的理化指标，可以从下 面几个方面进行初步检查：
（1）干粉培养基应为疏松颗粒状或粉末状，颜 色正常、一致； （2）溶解后清彻透明，无沉淀； （3）45℃时pH值为7.2士0.2；熔化温度70℃左 右，凝固温度为35-40℃； （4）水分含量符合标准。
3.1培养基

商品化培养基的平皿应对所用培养基做外观 检查，如培养基是否开裂、平皿有无破碎、血平 板有否溶血、有否冰冻、灌注是否均匀、有否过 多的气泡，清晰度和有无污染也需要检查。 培养基平皿的制备商必须按照标准随产品附 上书面鉴定资料，实验室应将此鉴定书保存一定 时期。

3.1培养基


实验室自制培养基应有质量控制，包括： 制备数量 制备日期 有效日期 制备者姓名

对经验不足者，每次染色时均应作对照染色。
3.4诊断血清
沙门氏菌属、志贺氏菌属、致病性大肠埃希氏菌等诊断 血清，使用时应注意有效期及效价。

每月用相应的菌株检查其有效性，过期血清和变混浊的 血清不应继续使用。 诊断血清一般放普通冰箱内保存，使用时应以最短的时 间暴露于空气中。 最好备有两个生物制品研究所生产的诊断血清，以便互 相对照，检查其可靠性。
3.2 检验试剂及药品
检验药品、试剂须在分析纯(AR)级以上。 在利用药品、试剂配制标准溶液、染色液、缓冲 液及其他试剂时应注意： (1)按要求选取溶剂； (2)用带塞的试剂瓶盛装； (3)易分解的试剂宜用棕色瓶； (4)挥发性的试剂其瓶口应予密封； (5)如发现溶液有变质现象，应停止使用； (6)标准溶液应定时标定。
1 检验人员
（1）微生物检验不能完全依赖全自动鉴定仪器， 检验工作中每一步骤均需要有高度的主观分析和 判断能力，与个人的经验、技能和微生物检验基 础知识水平密切相关。 （2）除要求微生物检验人员必须具备严肃认真 的工作态度、精密细致的观察和操作习惯，注重 个人卫生外，还必须熟练掌握微生物学检验技术。
3 检验培养基、试剂
3.1培养基
微生物学检验所用干粉培养基，必须由专 业厂家生产，产品质量必须符合有关的质量标 准，保存也应符合要求，防止潮解、结块等。 干粉培养基易受潮变性，需要重视。一旦 变质，不得再使用。

3.1培养基
为保证干粉培养基质量指标，在实际工作中 应注意： （1）加强包装的密封性能； （2）使用时尽量缩短开盖时间； （3）干粉培养基一般放在通风、干燥、避光的 环境中保存，对于易受潮的品种，启用后宜放入 干燥器中保存； （4）由于配制水分不同、启用次数或时间增加， 干粉培养基的pH值可能会有所变化，应随时略加 调整。
2.5 显微镜
按使用说明进行操作。
使用油镜后先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用 沾上二甲苯的擦镜纸擦拭，最后用干净擦镜纸 擦干。（建议使用无水乙醇+乙醚）
注意防尘，保持清洁、干燥。
ห้องสมุดไป่ตู้
2 仪器、设备

实验室需要使用的无菌器具应能正确实施灭 菌，无菌器具和器皿有明显标识，以便与非无菌 器具和器皿加以区别。
不装塑料袋 塑料袋密封
不装塑料袋 塑料袋密封
2周-1个月 2个月
2个月 4个月
3.1培养基

每批自制培养基必须做无菌试验和规定的质 控菌株测试，对各种不同培养基规定了专门的质 控测试菌株。

无菌培养试验可将灭菌后的培养基放入37℃ 的培养箱培养24～48小时，以检查灭菌是否彻底。
3.1培养基

效果试验是指按不同的培养基接种相应的 菌株，观察细菌的发育、菌落形态、色素、溶血 等特征，据此判断培养基是否符合要求。

若对这些样品进行分析，应将情况记录 并在分析报告中加以说明。 检验前，冷冻食品应在最高温度为4℃下 解冻，不超过18h； 较小、易解冻的样品可放置于最高温度为 37℃的恒温箱内最长达15 min。


6 样品的接收和预处理

微生物学检验室在收到样品后，必须及 时准备条件、组织力量进行检验。 送检的样品，一般需保持在2～8℃的环境 中，对于冷冻食品应保持在冷冻状态，直到检 验为止。

4 检验环境
对需在无菌条件下工作的区域应以明确标识并能有效 地控制、监测和记录；

检验人员应待无菌室过滤净化装置开机0.5－1h后，再 进入无菌室工作； 每天记录环境检测报告，并经常进行空气落菌实验： 空气落菌以营养琼脂开上皿15min后盖上盖子，36±1℃培 养48h计数；
定期对无菌室进行室内环境消毒，空气消毒可采用甲 醛熏蒸法，甲醛与高锰酸钾比例2:1。
6 样品的接收和预处理

样品送达实验室时，应检查样品标记是否与 样品相符，样品包装状况是否正常。
若存在下述情况，应考虑拒收样品： （1）抽样后样品送达实验室的时间太迟， 使其不能在规定的时间内进行检验； （2）样品温度太高； （3）在转运中样品遭到破损或受到污染。
6 样品的接收和预处理
7 检验质量
（1）在定量检验时用重量法还是用体积法，检验 结果会有误差，因为比重不等于1的样品，1mL和 1g的检验结果绝不会相等。 一般固态的样品宜用重量法，液体样品宜用 体积法。 但对于粘性液体(如酸牛奶)，如用体积法， 会粘附一定量的样品在吸管上，因此此类样品最 好用重量法。
3.2 检验试剂及药品

实验室内保存的试剂应定期进行清点，过 期或变质的试剂应弃去； 注意试剂在保存条件下的使用有效期以及最 佳保存方式。

3.3 染色液
染色液配制后，必须选用适当的标准菌株作 阳性及阴性对照来鉴定染色液的性能，如革兰氏 染色选用枯草杆菌、葡萄球菌和大肠杆菌作为对 照，鞭毛染色液采用普通变形杆菌和福氏志贺氏 菌作为对照。
2.2 干热灭菌器
（1）应遵守操作规则，放入箱内灭菌的器皿 不宜放得过挤，器皿与内层底板不能直接接触。 （2）灭菌完毕，不能立即开门取物，须关闭 电源，待温度下降至50℃以下再开门取物。 （3）带有纸包装的物品灭菌温度不能超过 160℃。
2.3 培养箱
（1）箱内不应放入过热或过冷的物品，取放物品时， 应随手关闭箱门，以维持恒温。 （2）如培养物不慎泼洒到箱内，应马上清洁，并采 取必要的消毒措施。 （3）培养物不宜与培养箱最底层直接接触。 （4）必要时，可放入装水容器以维持箱内的湿度。 （5）每天记录温度及湿度的变化，观察培养箱内温 度与设定温度是否一致。在两次计量周期之间要进 行至少一次内部校准。