第八章细胞病理学基本检验部分一

图8-1 涂片制备方法（用于黏液性标本） 图8-2 涂片制备方法（用于非黏液性标本）
三、标本固定 1．湿固定 是通过使细胞的胞质脱水、蛋白质凝 固而达到固定的目的。 常用的固定液为乙醇类液体，常用方法有浸润法 和包被法。 湿固定可引起细胞皱缩，Carnoy固定液（乙醇-氯 仿-冰乙酸固定液）能溶解红细胞，适用于处理明显血 性的标本。聚乙二醇固定液能在涂片表面形成一层保 护性蜡质膜，适用于标本的长途转运和大规模人群筛 检。
（二）液基细胞学技术 液基细胞学（LBC）技术是一种半自动或全自动
标本处理技术，其优点是： ①涂片上细胞分布均匀、分布范围小、背景清晰。 ②筛检简便、快速。 ③能提高诊断的灵敏度和特异度。 ④能显著降低标本的不满意率。 ⑤可用于原位杂交和免疫细胞化学染色。
LBC技术是对传统技术的有效补充， 但对某些非妇科标本，因LBC涂片缺乏背 景成分，会影响细胞学的诊断。目前，常 用的LBC技术有ThinPrep法和SurePath Prep法。LBC技术与传统技术比较见表83。
二、涂片制备 直接涂片是将新鲜标本直接涂在载玻片上。间 接涂片是将各种液体标本进行浓缩处理后再涂片。 涂片制备方法见图8-1，图8-2。 渗出液、灌洗液和尿液等标本不易黏附在载玻 片上，宜采用蛋白类（如牛血清清蛋白）或离子类 （如多聚赖氨酸）黏附剂，增强细胞和载玻片之间 的黏附力，最大限度的保存标本中的细胞。
3．细胞核特征 细胞核特征是判断良性与 恶性细胞的关键。正常细胞核体积相对较小，呈 圆形或卵圆形，边界光滑，染色质呈细颗粒状。
涂片上同一类型细胞之间的差别很小，称为 单形性。细胞核变化与特征见表8-5。
4．细胞质特征 细胞质由Golgi体、核糖体、 内质网、线粒体和代谢物等组成，是影响细胞染色 性的重要因素之一。
（一）细胞形态学判断的基本原则 1．细胞数量和类型 细胞数量和类型提供了 靶组织或器官的重要信息，足够量的标本是提高结 果可靠性的重要因素。 2．结构特征 在细胞学涂片中常常缺乏结构特 征。正常上皮细胞常保持细胞极性和细胞间黏附性 典型的恶性上皮细胞的极性差，细胞间相互重叠， 有时三维状聚集呈圆形。分化差的癌细胞黏附性更 差，多散在分布。
细针穿刺细胞标本采集的主要特点有：
①通过触摸或导引法，可从体内任何实体器官采集标本。 ②方法简捷、费用低、创伤小、并发症少、禁忌证少， 经皮肤穿刺无需麻醉。 ③需要借助病理学知识解释结果。 ④良好的标本采集和制片技术可获得最佳的结果，但对 结缔组织、透明变性、血管性病变、大量坏死物、囊性变或 出血性病变等可导致标本采集不足。
2．空气干燥固定 是通过空气蒸发的方 法达到固定目的。最 好是逆着气流方向尽 快将涂片干燥。与湿 固定相比，空气干燥 固定有使细胞增大的 趋势（图8-3）。
图8-3 标本固定方法比较 （A. 呈圆形未固定的细胞， B. 平铺在载玻片上， C. 湿固定， D. 空气干燥固定）
四、标本浓缩技术 （一）传统技术 1．离心法和细胞离心法 ①离心法：适用于大 量液体的标本。②细胞离心法：适用于少量液体、中 等量细胞的标本。 2．滤膜过滤法 滤膜过滤法适用于大量液体、 少量细胞的标本。 3．细胞块法 适用于大多数悬液标本。制备方 法有血浆凝血酶法和琼脂法等。
正常细胞或分化好的肿瘤细胞常见黏液球、泡 沫状微空泡、微绒毛刷状缘和纤毛。邻近细胞会出 现细胞质铸模现象。少数细胞有吞噬现象，见于良 性或恶性疾病，后者更常见。
细胞质变性包括水肿性和空泡样变化等，质膜 完整性丧失使细胞内容物溢出，即细胞溶解。
5．涂片背景和人为因素 （1）涂片背景：包括细胞和非细胞成分，有 助于疾病的诊断，但明显的血性或炎症反应背景会 掩盖上皮细胞的细致结构，从而影响诊断。 （2）人为因素：是指人为污染或涂片制作过 程引起细胞形态学变化，与标本采集、运送和涂片 制备等因素有关。在操作过程中引入“外来成分” 是影响结果准确性的重要因素，人为因素包括内源 性、外源性。
五、染色方法 Papanicolaou染色法适用于湿固定的涂片。 Romanowsky染色法适用于空气干燥固定的涂 片，在非妇科标本染色中常用。 苏木素和伊红染色法是组织切片最常用的染色 方法，也是许多细胞病理学实验室常用的染色方法。 不同染色技术均适用于妇科或非妇科标本的永 久性染色。
六、细胞病理学诊断 细胞病理学诊断是一个复杂的过程，但不能 过分强调最终结论的重要性。因为细胞学检查的 影响因素很多（表8-4），当涂片上有大量保存 良好的细胞时，会提高诊断的准确性，而缺乏背 景资料、涂片不佳、染色模糊等则会导致误诊。
非自然脱落细胞主要特点有： ①能直接从病变器官表面采集标本，如子宫颈 和支气管。 ②能借助纤维镜直接从病变器官内部采集标本。 ③能获得上皮下病变的标本。 ④细胞成分保存良好，在解释结果时不能采用 与脱落细胞相同的标准。
（二）细针穿刺细胞标本的采集 通过穿刺吸取或非吸取法，可从充满液体的 器官或实体性器官中采集细胞标本，如肿瘤、心 包膜腔积液、胸膜腔积液、腹膜腔积液和脑脊液 等。影像学技术能对小而深、移动且难以触摸的 病变部位进行定位，有助于穿刺采集标本。
第八章 细胞病理学基本检验
第一节 细胞病理学基本检验技术 一、标本采集
（一）脱落细胞标本的采集 1．自然脱落细胞 自然脱落细胞是指从上皮表 面自然脱落的细胞。其采集方法包括咳出、排泄或导 尿、挤压。前者常单个散在，后者常聚集成群。脱落 细胞常呈圆形，与细胞膜僵硬、细胞骨架、表面张力、 局部微环境和脱落时间长短有关，细胞质和细胞核会 出现一系列退化性改变。其适用范围见表8-1。
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自然脱落细胞的主要特点有： ①易从病变器官采集标本。 ②标本内常含有大量不同来源、不同类型的 上皮细胞，亦可含有炎性细胞、巨噬细胞、微生 物和外源性污染物。 ③细胞成分保存较差。 ④能进行多次标本采集。
2．非自然脱落细胞 非自然脱落细胞是指通 过物理刮擦作用取得的细胞。其采集方法包括：① 刷取：如气管、子宫颈。②刮取：如乳头、皮肤、 子宫颈。③灌洗：用生理盐水溶液冲洗所得的液体， 如支气管。其适用范围见表8-2。