遗传学小论文—

遗传学实验小论文

题目：染发剂对大蒜根尖产生微核的浓度研究班级：10生本班

学号：

姓名：

指导老师：高老师

日期：2012-10-1——2012-10-26

染发剂对大蒜根尖产生微核的浓度研究

摘要: 探讨染发剂在致突变性方面的作用，比较不同浓度的染发剂溶液对大蒜根尖微核率的影响作用。利用染发剂作为污染源剂对大蒜根尖细胞进行污染处理，做不同浓度处理大蒜根尖细胞，观察在不同浓度产生微核的数量，判定染保指标。

关键词：大蒜根发剂的污染指数，评价染发剂水质的综合毒性，对环境的保护提供环尖染发剂微核

引言微核(micronucleus，MN)也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构。是染色体畸变在中期的一种表现形式。它是有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体片段，在细胞的细胞质中形成的一个或多个圆形或杏仁状结构，位于细胞浆中独立于主核的核小体。大蒜根尖细胞在有丝分裂时受到外界有害因素刺激，部分断裂的染色体不能随着有丝分裂进入细胞，从而在核外形成1个或数个小核。

大蒜，易培养，用蒸馏水和烧杯就可简单培养出大量的根尖，材料易取得，大蒜市场上容易买到，价格也合理，即经济又实惠，且有丝分裂周期时间短，一天左右就分离一次，根尖多容易解离和染色，制做的装片效果好，所以是研究染发剂对环境污染的好材料。

随着人类文明的不断进步，科技地不断发展，人们生活水平的提高，对精神物质文化的追求也不断提高，人们对审美观念的不断

升华，对美的追求不断提升，新一代美容产品、美发剂也随着科技时代的发展孕育而生，而染发剂都为一些化学合成物，含有一些有害的化学物质，这无疑在使用过程中对人对环境造成较大的污染，对生态的平衡造成产生影响，对人类的身心健康构成很大威胁。染发剂的主要成分苯二胺，, 又名乌尔丝

（p-Phenylenediamine），是最简单的芳香二胺之一，也是一种有广泛应用的中间体，可用于制取偶氮染料，高分子聚合物，也可用于生产毛皮染色剂，橡胶防老剂和照片显影剂，另外对苯二胺还是常用的检验铁和铜的灵敏试剂。对苯二胺是极为重要的染料中间体，主要用于芳纶、偶氮染料、硫化染料、酸性染料等。染发剂已经正在投入生产，并再把陆续投放市场，从而进入环境。为了研究染发剂对生态系统的影响，本文用大蒜根尖细胞微核试验，对其致突变性进行了比较观察。

1 植物微核技术的建立与原理及方法

1.1 植物微核技术的建立

20世纪70年代初，Matter和Schmid等在研究人类和哺乳动物细胞损伤时，初步建立了间期细胞的微核测定技术。1978年马德修先生以美国产紫露草为材料，通过花粉母细胞4分体微核数量作为测定环境污染技术取得了良好效果。20世纪80年代初期．美国的Degrass和Schmid建立了蚕豆次生根尖微核监测系统。1982年Degrass提出利用微核千分率技术作为诱变剂的监测系统。此后，越来越多的人采用各种植物微核技术(如蚕豆、紫露草及大蒜等)进行不同领域的监测研究。实验证明，利用植物微核监测技术监测水质污染、大气污染和土壤污染，是一种行之有效的方法。

1.2植物微核技术的原理及方法

所谓微核(mieronueleus，MN)，即在有些情况下细胞中除了

有一个正常的细胞核外。还可以看到与核着色相同、大小不等、完全与主核分开的圆形或椭圆形微小核，细胞学上称为微核。植物染色体在复制过程中经常会发生些断裂，这些断裂在一般情况下能自行愈合恢复原状，细胞能维持正常生活。如若在细胞分裂过程中，受到污染因子的干扰、染色体断裂的愈合就会受阻，甚至增加断裂，断裂下来的染色体片断由于缺少着丝点，不能移到细胞的两极而游离在细胞质中。当细胞分裂完成而形成新的细胞时这些断片就独立成为大小不等的小核。即微核。在细胞分裂后．可以观察统计微核的数量，以此评估环境污染导致染色体畸变的程度，间接地体现环境污染的程度。植物微核技术方法主要分2种，一种是利用花粉母细胞减数分裂形成微核的4分体微核技术，常用的植物材料有美国紫露草、毛萼紫露草、紫竹梅等。其特点是对环境污染更为敏感，而且花粉母细胞分裂的同步性强，分裂指数高，且产生的4分体是单个细胞，染色制片容易，便于进行观察和统计分析。可用来监测大气、水体、土壤、放射性核素等污染。另一种是利用根尖分生组织细胞有丝分裂形成微核的根尖微核技术，常用的植物材料有蚕豆、大花凤眼莲、大米草、玉米、大蒜及洋葱等。其特点是操作更为简便，植物材料易得。不受时间、空间和设备的限制。

材料与方法

（一）材料

染发剂、大蒜、培养瓶、清水、标签纸、卡洛氏固定液、95%酒精、解剖器、0.1mol/mlHCL、酒精灯、烧杯、计时表、载玻片、盖玻片、吸水纸、显微镜、移液腔.

（二）实验方法

（1）大蒜根尖微核实验

1）选材与培养

选择好的大蒜，洗净后用清水培养使其生根，待根长至1.5cm 左右，挑选出发育良好长势大致相同的10个大蒜，随机分配到

10个培养瓶中并贴上标签

2）处理与恢复

CK作为对照组用蒸馏水培养，1-3号分别用0.1％染发剂溶液，4-6号用0.03％处理，7-9号用0.05％处理，处理8h后，将经处理后的大蒜用清水反复洗涤后恢复培养约8h。

3）根尖细胞固定

切取根尖约1.5cm，用新配制的卡洛氏固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）固定约23h,70%酒精中保存

4）根尖解离

从固定液中取出大蒜根尖，用清水充分漂洗放入培养皿中，加适量0.1mol/ml的HCL，使根尖软化、解离。

5）染色与压片

取解离后的大蒜根尖，用蒸馏水漂洗后，置于滴定板上，加1滴醋酸地衣红染液染色，染色约5min，染色后用解剖刀取下尖头一小块，置于载玻片上，滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片压片，用吸水纸吸取多余的水。

6）镜检

将制作好的压片置于显微镜下观察，在40*10倍显微镜下观察根尖分生区良好的区域并统计不少于1000个细胞中其微核数，测定其微核千分率MCN%。并进行统计数处理。（微核识别标准：细胞质内与主核分离、圆形或椭圆形、大小为主核的三分之一或以下、染核与主核一致或稍浅的小核即为微核）