分子生物学期末试题(最新整理)

分子生物学期末考试试题
一、名词解释
1、反式作用因子：能直接或间接地识别或结合各类顺式作用元件核心序列，参与调控靶基因转录效率的蛋白质。

2、基因家族：
3、C 值矛盾：C 值是指真核生物单倍体的DNA 含量，一般的，真核生物的进化程度越高，C 值越大，但在一些两栖类生物中，其C 值却比哺乳动物大的现象。

原因是它含有大量的重复序列，而且功能DNA 序列大多被不编码蛋白质的非功能DNA 所隔开。

4、核型：指一个物种所特有的染色体数目和每一条染色体所特有的形态特征。

5、RNA editing：转录后的RNA 在编码区发生碱基的突变、加入或丢失等现象。

二、判断：
1、真核生物所有的mRNA 都有polyA 结构。

（X ）组蛋白的mRNA 没有
2、由于密码子存在摇摆性，使得一种tRNA 分子常常能够识别一种以上同一种氨基酸的密码子。

（√）
3、大肠杆菌的连接酶以ATP 作为能量来源。

（X ）以NAD 作为能量来源
4、tRNA 只在蛋白质合成中起作用。

（X ）tRNA 还有其它的生物学功能，如可作为逆转录酶的引物
5、DNA 聚合酶和RNA 聚合酶的催化反应都需要引物。

（X ）RNA 聚合酶的催化反应不需要引物
6、真核生物蛋白质合成的起始氨基酸是甲酰甲硫氨酸（X ）真核生物蛋白质合成的起始氨基酸是甲硫氨酸
7、质粒不能在宿主细胞中独立自主地进行复制（X ）质粒具有复制起始原点，能在宿主细胞中独立自主地进行复制
8、RNA 因为不含有DNA 基因组，所以根据分子遗传的中心法则，它必须先进行反转录，才能复制和增殖。

（X ）
不一定，有的RNA 病毒可直接进行RNA 复制和翻译
9、细菌的RNA 聚合酶全酶由核心酶和ρ 因子组成。

（X ）细菌的RNA 聚合酶全酶由核心酶和σ因子组成
10、核小体在复制时组蛋白八聚体以全保留的方式传递给子代。

（√）
11、色氨酸操纵子中含有衰减子序列（√）
12、SOS 框是所有din 基因（SOS 基因）的操纵子都含有的20bp 的lexA 结合位点。

（√）
三、填空：
1、原核生物的启动子的四个保守区域为转录起始点、 -10 区、-35 区、-10 区与-35 区的距离。

2、根据对DNA 序列和蛋白质因子的要求，可以把重组分为同源重组、位点专一性重组/特异位点重组、转座重组、异常重组四类。

3、研究启动子功能的主要方法是启动子的突变，研究酶与启动子间识别与结合的方法有足迹法和碱基修饰法。

4、真核生物中反式作用因子的DNA 结合结构域有螺旋－转角－螺旋(HTH) 、碱性－螺旋-环-螺旋(bHLH) 、锌指(zinc finger) 、碱性－亮氨酸拉链(bZIP)。

5、根据DNA 复性动力学，DNA 序列可以分成哪四种类型？单一序列、轻度重复序列、中度重复序列、高度重复序列
四、选择题（10 分，每题1 分）
1、在真核基因表达调控中，( B )调控元件能促进转录的速率。

A、衰减子
B、增强子
C、repressor
D、TATA Box
2、核基因mRNA、的内元拼接点序列为( D )。

A、AG…GU
B、GA…UG
C、UG…GA
D、GU…AG
3、下列何种因子不会诱变DNA( D )
A、亚硝酸
B、UV
C、丫啶橙
D、饱和脂肪乳剂
4、RNA 聚合酶1 的功能是( C )
A 转录tRNA 和5sRNA 基因；
B 转录蛋白质基因和部分snRNA 基因；
C 只转录rRNA 基因；
D 转录多种基因
5、如果一段DNA 产生了＋1 的译码突变，可以加以校正的是（ D ）
A 突变型氨酰tRNA 合成酶
B 有突变型反密码子的tRNA
C 有切割一个核苷酸的酶
D 有四个碱基长的反密码子的tRNA
6、参与重组修复的酶系统中，具有交换DNA 链活性的是（ D ）
A DNA 聚合酶I
B RecB 蛋白
C RecC 蛋白
D RecA 蛋白
7、原核RNA pol 识别的启动子位于：( A )
A、转录起始点的上游；
B、转录起始点的下游；
C、转录终点的下游；
D、无一定位置；
8、在研究原核翻译过程中，可用不同的抑制剂研究翻译诸阶段，其中链霉素可抑制：( C )
A 、起始
B 、延长C、肽基有P 位移至A 位D、核糖体移位
9、在什么情况下，乳糖操纵子的转录活性最高（A ）
A 高乳糖，低葡萄糖
B 高乳糖，高葡萄糖C
低乳糖，低葡萄糖 D 低乳糖，高葡萄糖
10、设密码子为5’XYZ3’，反密码子为5’ABC3’，则处于摆动位置上的碱基为（ C ）
A X-C
B Y-B
C Z-A
五、简答：
1.叙述由一段DNA 序列形成多种蛋白产物的机制。

答：由一段DNA 形成多种蛋白产物的可能机制有：阅读框不同、抗终止作用、可变剪切和RNA 编辑。

重叠基因在фX174 中最早发现，两个邻近的基因以一种巧妙的方式发生重叠，转录出来的mRNA 以不同的阅读框阅读并被表达，产生两种以上的蛋白产物。

在λ 噬菌体中有不同时期表达的操纵子，如左向早期操纵子可以转录出两种mRNA，这是由于依赖于ρ 因子的终止作用以及早期基因编码的抗终止蛋白的抗终止作用造成的。

抗终止蛋白与RNA 聚合酶结合后修饰了酶的构象，使其不再识别弱终止子，从而使一段DNA 可以转录出多种mRNA，从而产生两种以上的蛋白产物。

真核生物的hnRNA 含有内含子，通过剪接可将其出去形成Mrna,但有的高等真核细胞存在可变剪接，即来自一个基因的RNA，其某个内含子的5‘供体在不同的条件下和不同内含子的3’受体进行剪接，从而将来自一个基因的mRNA 前体剪接产生多种mRNA，翻译出不同的蛋白质。

另外，在真核生物中存在RNA 编辑，将mRNA 在转录后进行插入、缺失或核苷酸的替换，改变DNA 模板的遗传信息，从而翻译出氨基酸序列不同的多种蛋白质。

1、各种二核苷酸对的排列顺序不同，对双螺旋结构的影响不同。

（1）请问那种的Tm 最低？
答：的Tm 值最低。

（2）含这种二核苷酸的序列有那些，为什么？（7 分）
答：含有A/T的主要有复制起始点、原核生物启动子的-10区、真核生物启动子的TATA框，此外，还有生物体选择以UAA作为最有效的终止密码子。

DNA在复制和转录时要在起始原点和启动子区形成起始复合物，复制起始点、原核生物启动子的-10区、真核生物启动子的TATA框富含AT对，二者之间有两条氢键，在此处易于解开双链，容易形成起始复合物，使复制和转录过程顺利进行。

生物体选择以UAA作为最有效的终止密码子，因为在64的密码子中，假使UAA 具有和它配对的反密码子，所形成的产物在生理条件下也是不稳定的，有利于肽链的释放，而且UAA 很少发生无义抑制突变，有利于肽链的正常终止。

3、详述大肠杆菌色氨酸操纵子的调控机理。

（12 分）
答：大肠杆菌色氨酸操纵子的转录受阻遏和衰减两种机制的控制，前者通过阻遏蛋白和操纵基因的作用控制转录的起始，后者通过前导序列形成特殊的空间结构控制转录起始后是否进行下去。

1）色氨酸操纵子的可阻遏系统：
在阻遏系统中，起负调控的调节基因的产物是一个无活性的阻遏蛋白，色氨酸是辅阻遏物；当色氨酸不足时，阻遏蛋白无活性，不能和操纵基因结合，色氨酸操纵子能够转录；当色氨酸充足时，阻遏蛋白和它结合而被激活，从而结合到操纵基因上，而色氨酸操纵子的操纵基因位于启动基因内，因此，活性阻遏物的结合排斥了RNA 聚合酶的结合，从而抑制了结构基因的表达。

2）色氨酸操纵子的衰减调控
在色氨酸操纵子的操纵基因和第一个结构基因之间有一段前导序列L，在前导序列上游部分有一个核糖体结合位点，后面是以起始密码AUG 开头的14 个氨基酸的编码区，编码区有两个紧密相连的色氨酸密码子，后面是一个终止密码子UGA，在开放阅读框下游有一个不依赖ρ因子的终止子，是一段富含G/C 的回文序列，可以形成发夹结构，因此可以在此处终止转录。

另外前导序列包含4 个能进行碱基互补配对的片断1 区、2 区、3 区和4 区。

它们能以1、2 和3、4 或2、3 的方式进行配对，从而使前导序列形成二级结构的变化。

在细菌中，翻译与转录偶连，一旦RNA 聚合酶转录出trp mRNA 中的前导肽编码区，核糖体便立即结合上去翻译这一序列。

当细胞中缺乏色氨酸时，Trp-tRNA Trp 的浓度很低，核糖体翻译前导肽至两个连续的色氨酸密码子处就陷入停顿，这时核糖体只占据1 区，由RNA 聚合酶转录的2 区和3 区便可配对，4 区游离在外，这样就不能形成终止子结构，RNA 聚合酶就可以一直转录下去，最后完成trp 全部结构基因的转录，得到完整的mRNA分子。

当细胞中存在色氨酸时，就有一定浓度的Trp-tRNA Trp，核糖体便能顺利通过两个连续的色氨酸密码子而翻译出整个前导肽，直到前导肽序列后面的终止密码子UGA 处停止。

此时，核糖体占据了1 区和2 区，结果3 区和4 区配对，形成转录终止子结构，使RNA 聚合酶终止转录。

实现衰减调控的关键在于时间和空间上的巧妙安排。

在空间上，两个色氨酸密码子的位置很重要，不可随意更改；在时间上，核糖体停顿于两个色氨酸密码子上时，序列 4 应当还未转录出来。

分子生物学试卷
一、名词解释（共10题，每题2分，共20分）
1、质粒：
2、目的基因：
3、转录：
4、染色体：
5、原核生物：
6、基因组：
7、翻译：
8、复制：
9、基因表达：10、HGP
二、填空题（共28空，每空1.5分，共42分）
1、DNA与RNA在组成成分上的基本区别包括，DNA含有、，而RNA含有、。

2、RNA主要包括、、、共三种。

3、真核生物基因组的基本特征包括、、
、。

而原核生物基因组的基本特征包括、、、。

4、DNA复制是一个的过程，即子代分子的来自亲代，而是新合成的。

这个复制特点保的。

5、基因工程包括五个基本流程：、、、和。

6、病毒根据其遗传物质可分为：病毒和病毒。

7、基因表达主要生成：、。

三、简答题：（共3题，每题6分，共18分）
1PCR技术有哪三大基本环节？
2tRNA和DNA的二级结构各有何基本特点？
3逆转录过程的基本原理是什么？有何医学意义？
四、问答题：（共2题，每题10分，共20分）
1、真核生物与原核生物基因表达调控各自有何基本特点？其意义是什么？
2、何谓人类基因组计划，其意义如何？
江西省高等教育考试(非主干课程)分子生物学试卷参考答案
一、名词解释(共10题,每题2分,共20分)
1、细菌核外环状DNA
2、生物技术中的应用基因
3、RNA的合成过程
4、核内遗传信息贮存形式
5、早期细胞类型
6、一物种全部基因之和
7、蛋白质合成过程
8、DNA合成过程9、转录加翻译的信息实现过程10、人类基因组计划
二、填空(共28空,每空1.5分,共42分)
1、脱氧核糖，T，核糖，U
2、tRNA, mRNA, Rrna,
3、断裂基因, 基因家族, 重复序列多, 细胞器基因; 操纵子, 连续基因, 重复序列少, 无细胞器基因
4、半保留, 一半, 另一半, 高保真性
5、分, 切接, 转, 筛,
6、DNA RNA
7、RNA 蛋白质
三、简答(共3题,每题6分,共18分)
1、变性, 退火, 延伸, (各2分)
2、tRNA含氨基酸臂与反密码环.(3分)DNA含两条平行螺旋链与碱基互补(3分)
3、逆转录酶以病毒RNA为模板合成c DNA进一步在缩主细胞转变成前病毒(4分)并予进一步说明医学意义(2分)
四、问答(共2题,每题10分,共20分)
1、特点: 从两类调控的环节与主要环节与方式加以区别(6分)前者环节多于后者,后者以操纵子模式并进一步说明意义(4分)
2、对人类自身基因序列等的研究(4分),其意义可从基础,医学,药学等方面说明(6分)
分子生物学试题及答案
分子生物学试题及答案
一、名词解释
1.cDNA 与cccDNA：cDNA 是由mRNA 通过反转录酶合成的双链 DNA；cccDNA 是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形 DNA。

2.标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称
为超二级结构。

几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。

3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白 CRP（cAMP receptor protein ），cAMP 与CRP 结合后所形成的复合物称激活蛋白 CAP（cAMP activated protein ）
4.回文序列：DNA 片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。

5.micRNA：互补干扰 RNA 或称反义 RNA，与mRNA 序列互补，可抑制 mRNA 的翻译。

6.核酶：具有催化活性的 RNA，在RNA 的剪接加工过程中起到自我催化的作用。

7.模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域
8.信号肽：在蛋白质合成过程中 N 端有15~36 个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。

9.弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。

10.魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。

产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。

PpGpp 与 pppGpp 的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。

11.上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的 DNA 序列，-10 区的TATA、-35 区的TGACA 及增强子，弱化子等。

12.DNA 探针：是带有标记的一段已知序列 DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。

13.SD 序列：是核糖体与 mRNA 结合序列，对翻译起到调控作用。

14.单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。

15.考斯质粒：是经过人工构建的一种外源 DNA 载体，保留噬菌体两端的 COS 区，与质粒连接构成。

16.蓝-白斑筛选：含 LacZ 基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物 X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株
变蓝。

当外源 DNA 插入后，LacZ 基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。

称之为蓝-白斑筛选。

17.顺式作用元件：在 DNA 中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。

18.Klenow 酶：DNA 聚合酶 I 大片段，只是从 DNA 聚合酶 I 全酶中去除了5’ 3’外切酶活性
19.锚定 PCR：用于扩增已知一端序列的目的 DNA。

在未知序列一端加上一段多聚 dG 的尾巴，然后分别用多聚 dC 和已知的序列作为引物进行 PCR 扩增。

20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。

二、填空
1.DNA 的物理图谱是 DNA 分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。

2.RNA 酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。

3.原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（ IF-2 ）和（IF-3 ）。

4.蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。

5.启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。

6.分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（ DNA 重组技术）三部分。

这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸7.证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）
收的外源 DNA 改变了其遗传潜能）。

8.hnRNA 与mRNA 之间的差别主要有两点：（ hnRNA 在转变为 mRNA 的过程中经过剪接，）、
（ mRNA 的5′末端被加上一个 m7pGppp 帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。

蛋9白．质多亚基形式的优（点亚是基对DNA 的利用来说是一种经济的方法（）可、以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响（）活、性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。

10.蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。

11.半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。

所以需要一个不依赖于 cAMP—CRP 的启动子 S2 进行本底水平的永久型同合；时成需要一个依赖于 cAMP—CRP 的启动子 S1 对高水平合成进行调节。

有 G 时转录从（ S2 ）开始无，G 时转录从（ S1 ）开始。

12.DNA 重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。

最终目的是（把一个生物体中的遗传信息 DNA 转入另一个生物体）。

典型的 DNA 重组实验通常包含以下几个步骤：
①提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一 DNA 分子上（克隆载体），形成一个新的重组 DNA 分子。

②将这个重组 DNA 分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。

③对那些吸收了重组 DNA 的受体细胞进行筛选和鉴定。

④对含有重组 DNA 的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。

13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。

14.PCR 的反应体系要具有以下条件：
a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA 引物（约20 个碱基左右）。

b、具有热稳定性的酶如：TagDNA 聚合酶。

c、dNTP
d、作为模板的目的 DNA 序列
15.PCR 的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段。

16、转基因动物的基本过程通常包括：
①将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中；
②接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；
③完成胚胎发育，生长为后代并带有外源基因；
④利用这些能产生外源蛋白的动物作为种畜，培育新的纯合系。

17.杂交瘤细胞系的产生是由（脾 B）细胞与（骨髓瘤）细胞杂交产生的，由于（脾细胞）可以利用次黄嘌呤，（骨细胞）提供细胞分裂功能，所以能在 HAT 培养基中生长。

18.随着研究的深入第一代抗体称为（多克隆抗体）、第二代（单克隆抗体）、第三代（基因工程抗体）。

19.目前对昆虫病毒的基因工程改造主要集中于杆状病毒，表现在引入（外源毒蛋白基因）；（扰乱昆虫正常生活周期的基因）；（对病毒基因进行修饰）。

20.哺乳类 RNA 聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件 TATA、GC、CAAT 所对应的反式作用蛋白因子分别是（ TFIID ）、（ SP-1 ）和（ CTF/NF1 ）。

21.RNA 聚合酶Ⅱ的基本转录因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、TFII-D、TFⅡ-E 他们的结合顺序是：（D、A、B、E ）。

其中TFII-D 的功能是（与TATA 盒结合）。

22.与DNA 结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子与DNA 结合的功能域常见有以下几种（螺旋-转角-螺旋）、（锌指模体）、（碱性-亮氨酸拉链模体）。

23.限制性内切酶的切割方式有三种类型分别是（在对称轴 5' 侧切割产生 5' 粘端）、（在对称轴3' 侧切割产生 3' 粘端（在对称轴处切割产生平段）。

24.质粒DNA 具有三种不同的构型分别是：（SC 构型）、（oc 构型）、（ L 构型）。

在电泳中最前面的是（ SC 构型）。

25.外源基因表达系统，主要有（大肠杆菌）、（酵母）、（昆虫）和（哺乳类细胞表）。

26.转基因动物常用的方法有：（逆转录病毒感染法）、（DNA 显微注射法）、（胚胎干细胞法）。

三、简答
1．分别说出 5 种以上 RNA 的功能？
转运RNA tRNA 转运氨基酸
核蛋白体RNA rRNA 核蛋白体组成成
信使RNA mRNA 蛋白质合成模板
不均一核RNA hnRNA 成熟mRNA 的前体
小核RNA snRNA 参与hnRNA 的剪接
小胞浆RNA scRNA/7SL-RNA 蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分
反义RNA anRNA/micRNA 对基因的表达起调节作用
核酶Ribozyme RNA 有酶活性的RNA
2．原核生物与真核生物启动子的主要差别？
原核生物
TTGACA --- TATAAT ----- 起始位点
-35 -10
真核生物
增强子---GC ---CAAT --- T ATAA—5mGpp—起始位点
-110 -70 -25
3．对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？
天然质粒往往存在着缺陷，因而不适合用作基因工程的载体，必须对之进行改造构建：
a、加入合适的选择标记基因，如两个以上，易于用作选择,通常是抗生素基因。

b、增加或减少合适的酶切位点，便于重组。

c、缩短长度，切去不必要的片段，提高导入效率，增加装载量。

d、改变复制子，变严紧为松弛，变少拷贝为多拷贝。

e、根据基因工程的特殊要求加装特殊的基因元件
4．举例说明差示筛选组织特异 cDNA 的方法？
制备两种细胞群体，目的基因在其中一种细胞中表达或高表达，在另一种细胞中不表达或低表达，然后通过杂交对比找到目的基因。

例如：在肿瘤发生和发展过程中，肿瘤细胞会呈现与正常细胞表达水平不同的 mRNA，因此，可以通过差示杂交筛选出与肿瘤相关的基因。

也可利用诱导的方法，筛选出诱导表达的基因。

5．杂交瘤细胞系的产生与筛选？
脾B 细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT 培养基中培养（内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾 B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。

细胞融合物中包含：
脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。

骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途径利用叶酸还原酶合成嘌呤。

氨基蝶呤对叶酸还原酶有抑制作用，因此不能生长。

骨-脾融合细胞：在 HAT 中能生长，脾细胞可以利用次黄嘌呤，骨细胞提供细胞分裂功能。

6、利用双脱氧末端终止法（Sanger 法）测定 DNA 一级结构的原理与方法？
原理是采用核苷酸链终止剂—2，，3，-双脱氧核苷酸终止 DNA 的延长。

由于它缺少形成 3/5/磷酸二脂键所需要的 3-OH，一旦参入到 DNA 链中，此DNA 链就不能进一步延长。

根据碱基配对原则，每当 DNA 聚合酶需要 dNMP 参入到正常延长的 DNA 链中时，就有两种可能性，一是参入 ddNTP, 结果导致脱氧核苷酸链延长的终止；二是参入 dNTP,使 DNA 链仍可继续延长，直至参入下一个 ddNTP。

根据这一方法，就可得到一组以 ddNTP 结尾的长短不一的 DNA 片段。

方法是分成四组分别为 ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP 反应后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出 DNA 序列。

7、激活蛋白（CAP）对转录的正调控作用？
环腺苷酸（cAMP）受体蛋白 CRP（cAMP receptor protein），cAMP 与CRP 结合后所形成的复合物称激活蛋白 CAP（cAMPactivated protein ）。

当大肠杆菌生长在缺乏葡萄糖的培养基中时，CAP 合成量增加，CAP 具有激活乳糖（Lac）等启动子的功能。

一些依赖于 CRP 的启动子缺乏一般启动子所具有的典型的-35 区序列特征（TTGACA）。

因此 RNA 聚合酶难以与其结合。

CAP 的存在（功能）：能显著提高酶与启动子结合常数。

主要表现以下二方面：
①CAP 通过改变启动子的构象以及与酶的相互作用帮助酶分子正确定向,以便与-10 区结合，起到取代-35 区功能的作用。

②CAP还能抑制 RNA 聚合酶与 DNA 中其它位点的结合，从而提高与其特定启动子结合的概率。

8、
典型的 DNA 重组实验通常包括哪些步骤？
a、提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一 DNA 分子上（克隆载体），形成一个新的重组 DNA 分子。

b、将这个重组 DNA 分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。

c、
对那些吸收了重组 DNA 的受体细胞进行筛选和鉴定。

d、对含有重组 DNA 的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。

9、
基因文库的构建对重组子的筛选举出 3 种方法并简述过程。

抗生素抗性筛选、抗性的插入失活、兰-白斑筛选或 PCR 筛选、差式筛选、DNA 探针
多数克隆载体均带有抗生素抗性基因（抗氨苄青霉素、四环素）。

当质粒转入大肠杆菌中后，该菌便获得抗性，没有转入的不具有抗性。

但不能区分是否已重组。

在含有两个抗性基因的载体中，如果外源 DNA 片段插入其中一个基因并导致该基因失活，就可用两个分别含不同药物的平板对照筛选阳性重组子。

如 pUC 质粒含 LacZ 基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物 X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。

当外源 DNA 插入后，LacZ 基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。

10、说明通过胚胎干细胞获得转基因动物的基本过程？
胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES）：是胚胎发育期的胚细胞，可以人工培养增殖并具有分化成其它类型细胞的功能。

ES 细胞的培养：
分离胚泡的内层细胞团进行培养。

ES 在无饲养层中培养时会分化为肌细胞、N 细胞等多种功能细胞，在含有成纤维细胞中培养时 ES 将保持分化功能。

可以对 ES 进行基因操作，不影响它的分化功能可以定点整合，解决了随机整合的问题。

向胚胎干细胞导入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宫，发育成幼鼠，杂交获得纯合鼠。

11。