月季的花药培养PPT(1)

月季的花药培养
基础知识：
（一）、被子植物的花粉发育 （二）、产生花粉植株的两条途径 （三）、影响花药培养的因素
被子植物的花粉发育
花丝
雄蕊：
花药：囊状结构，内有很多花粉粒
花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花 粉是单倍体的生殖细胞。 花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、双核期
注意：
①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和 生殖细胞核。（精子在花粉管中形成） ②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞 进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟 时，含有一个营养核和两个精子。 ③两个精子和一个营养核的基因型相同。 减分 有分 ④ 4个小孢子 1花粉母细胞 4个花粉管细胞核 4个生殖细胞核 有分 8个精子
（二）材料的消毒
1、花蕾用V/V为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中 2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸 钙溶液或饱和漂白粉溶液） 5、无菌水冲洗3~5次 用于培养花药，实际上多数未熟，由 于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护， 通常处于无菌状态，所以只要将整个花 蕾或幼穗消毒即可。
影响花药培养的因素
一、材料的选择： 花期早期时的花药比后期的更容易产生花 粉植株。一般，月季的花药培养时间选在五月初 到五月中旬，即月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成 功率的重要因素。一般来说，在单核期，细胞核 由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最 高。 为了挑选到单核期的花药，通常选择完 全未开放的花蕾。
如果花药开裂释放出胚状体， 则一个花药内就会产生大量幼小植 株，必须在花药开裂后尽快将幼小 植株分开，分别移植到新的培养基 上，否则这些植株将很难分开。
在花药培养中，特别是通过 愈伤组织形成的花粉植株，常常会 出现染色体倍性的变化。（主要原 因是营养核和生殖核融合造成的。）
植物组织培养技术与花药培养技术的异同点
（三）接种和培养
灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和 花瓣，并立即将花药接种到培养基上。在剥离花 药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从 受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻 底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤 组织或胚状体的形成。 通常每瓶接种花药7-10个，温度控制在 25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要 光照。 一般经过20-30天培养后，会发现花药开 裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织 及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再 生植株。
项目 相同点 不同点
植物组织培养技 离体的植物组织 外植体为体细胞， 术 经脱分化形成愈 染色体数无需加 倍。 伤组织，再分化 成丛芽，诱导出 花药培养技术 根，然后进行移 取材为花药，培养 的为单倍体幼苗， 栽。 植株弱小，高度不
育，必须用秋水仙 素处理，使染色体 加倍，恢复正常植 株的染色体数，而 且为纯种。
Hale Waihona Puke 培养基的组成小麦中为N6，马铃薯、月季中为MS，油菜 中为B5培养基
实验操作
一、材料的选取 二、材料的消毒 三、接种和培养
（一）材料的选取
选择花药时，一般通过镜检来确定其 中的花粉是否处于适宜的发育期。 最常用的方法有醋酸洋红法。但是， 某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用 焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核 染成蓝黑色。
产生花粉植株的两条途径
分化 花粉 脱 分 化 胚状体 从芽 诱 导 生根 移栽
花粉
再分 愈伤组织 化 从芽
人工种子
又称人造种子、合成种子或无性种子， 就是将组织培养所产生的体细胞胚、 不定芽、顶芽、腋芽或小鳞茎等繁 殖体，包裹在能提供营养的胶囊 （人造胚乳）里，再在外面包上一 层具有保护功能和防止机械损伤的 外膜（人造种皮），造成一种类似 种子的结构，能在一定的条件下萌 发生长，形成完整植株。