抗疲劳实验方法

抗疲劳作用检验方法

1 负重游泳试验

1.1 原理

运动耐力的提高是抗疲劳能力加强最有力的宏观表现，游泳时间的长短可以反应动物运动疲劳的程度。

1.2 仪器

游泳箱（大小约50cmi X 50cm^ 40cm）,电子天平、铅皮。

1.3 实验方法

1.3.1 实验动物成年雄性小鼠，体重18-22g，推荐使用BALB/c小鼠。

1.3.2 剂量设置共设高、中、低、对照四个组,根据推荐的人体每公斤体重日摄入量, 扩大10倍作为其中一个剂量组，根据受试物的具体情况另设两个剂量组。经口给样。原则上连续给样30d,也可根据试验需要自行设定给样期限。

1.3.3 实验步骤

末次给予受试物30min后，置小鼠在游泳箱中游泳，水深不少于30cm水温25°C± 0.5 °C , 鼠尾根部负荷 5%体重的铅皮。记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间（min）。

1.4 数据处理及结果判定

游泳时间为计量资料，可以用方差分析。若受试物组游泳时间明显长于对照组游泳时间，

且差异有显著性（p V 0.05），可以判定该实验阳性。

1.5 注意事项

1.5.1 每一游泳箱一次放入的小鼠不宜太多，否则互相挤靠，影响实验结果。

1.5.2 水温对小鼠的游泳时间有明显的影响，因此要求各组水温控制一致，以25C为宜，如果过低可能引起小鼠痉挛，影响实验结果。

1.5.3 铅皮缠绕松紧应适宜。

1.5.4 观察者应在整个实验过程中使每只小鼠四肢保持运动。如果小鼠漂浮在水面四肢不动，可用木棒在其附近搅动。

1.5.5 不同批的小鼠因饲养环境、季节等原因的变化体质上会出现差异。因此受试物组和对照组应采用同一批动物同时进行。

2 爬杆试验

2.1 原理

运动耐力的提高是抗疲劳能力加强最有力的宏观表现，爬杆时间的长短可以反应动物静用力时疲劳的程度。

2.2 材料

爬杆架。直径0.8 — 1cm长约25cm的有机玻璃圆棒（经120目砂纸打磨），上端固定于木板上，下端悬空，距地面约 20cm结构见示意图。

（图略）

2.3 实验方法

2.3.1 实验动物雄性成年小鼠，体重18— 22g。推荐使用BALB/C

2.3.2 剂量设置同 1.3.2 。

2.3.3 实验步骤

实验时，将爬杆架置于水温15C、深约10cm的水盆中。末次给予受试物 30min后开始实验，将小鼠放在有机玻璃棒上，使肌肉处于静力紧张状态，记录小鼠由于肌肉疲劳从有机玻璃棒上跌落

下来的时间，第三次落水时终止实验，累计三次的时间作为爬杆时间。

2.4 数据处理及结果判定

爬杆时间为计量资料，可以用方差分析。若受试物组爬杆时间明显长于对照组爬杆时间，且差异有显著性（p v 0.05），可以判定该实验阳性。

2.5 注意事项

2.5.1 实验前小鼠经筛选，训练数次仍不肯爬杆者，废弃。

2.5.2 杆的质地和光滑程度明显影响小鼠的爬杆时间，要求杆的质地坚硬，光滑程度一致，以免小鼠爪子将杆表面刮损，影响光滑程度。

3 血清尿素氮测定二乙酰—肟法

3.1 原理

样品中尿素在氯化高铁—磷酸溶液中与二乙酰—肟和硫氨脲共煮，形成一种红色的化合物，其颜色的深浅与尿素含量成正比，与同样处理的尿素标准管比较，可求出其含量。

3.2 仪器与试剂

721分光光度计，10mL带塞试管，1mL（或 1.5mL）塑料离心管，电炉，锅，灌胃针头。

试剂盒；若无试剂盒，可自行配制试剂

1g/L 二乙酰—肟溶液：取二乙酰—肟 1.0g ，氨基硫脲（thiosemicarbazide）0.2g ，氯化钠 4.5g ，溶于蒸馏水并加至 1000mL。

33g/L三氯化铁溶液：取三氯化铁1.0g溶于浓磷酸20mL中，加蒸馏水10mL摇匀。

酸溶液：取蒸馏水800mL慢慢加入浓硫酸50mL边加边摇；再加入85%磷酸50mL摇匀。加入33g/L 三氯化铁溶液 1.5mL 加水至 1L。

10mmol/L尿素标准液（尿素氮28.01mg/dL）:精确称取尿素（AR）150.3mg溶于16mmo1/L 苯甲酸溶液并加至 250mL。

16mmol/L苯甲酸液：取苯甲酸 2.0g溶于蒸馏水1000mL中，加浓硫酸0.8mL。

3.3 实验方法

3.3.1 实验动物雄性成年小鼠或大鼠，小鼠体重18-22g,大鼠体重160-200g。推

荐使用BALB/C小、鼠，Wistar或SD大鼠，

3.3.2 剂量分组、给样途径及期限大鼠以人体推荐量的 5倍为基本剂量。其余同

1.3.2

3.3.3 实验步骤

3.3.3.1 末次给受试物30min后，在温度为30C的水中游泳90min,米血测定。

3.3.3.2 样本准备大鼠米尾血，小鼠拔眼球米血 0.5mL。草酸盐、肝素或EDTA抗凝

的血浆或血

。血清中的尿素在室温下可稳定 24h，在4 — 6C可稳定7d以上。

清

3.3.3.3 操作步骤

3.3.3.3

试剂盒按照说明书操作

.1

3.3.3.3

自行配制试剂按下表操作

.2

(表略)

充分混匀，置沸水浴准确15min,立即用自来水冷却。用波长520nm以空白管调零，读取各管吸光度(A值)。

3.3.4 尿素氮含量计算

A “ ■山粉

3. 3.社」试別盒方法尿索札E ig/dL )=—--------- —— X 20.0 ( BB/dL )

A “ - A *

3.3.

4.2 自配试剂尿素(m mo1/L) = Au X 10/As

尿素氮(mg/dL) = Au X 28.01/As

式中Au—测定管吸光度

As—标准管吸光度

3.4.2 结果判定