实验七-流式细胞仪检测技术
实验七 流式细胞仪检测技术
实验七流式细胞仪检测技术免疫细胞是一组不均一的细胞群体。
各种特定的细胞群其细胞表面表达有各自特异的表面标志分子，利用这些特异的表面标志，可以鉴定、分离和纯化相应的细胞群。
随着单克隆抗体技术的诞生和免疫标记技术（特别是荧光标记技术）的发展，以及计算机科学的应用，使利用仪器的方法检测特异的细胞膜表面分子成为可能。
本章介绍的荧光激活细胞分类技术就是采用单克隆抗体技术和免疫荧光标记技术，并结合光学检测和计算机分析技术而产生的鉴定和分离特定细胞亚群的技术。
实验原理流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sorter,FACS）,是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。
其原理是在一组混合的细胞群中，加入特异的针对特定靶细胞表面分子的荧光标记单克隆抗体，这种特异单克隆抗体与其对应的抗原靶分子结合，结合后的荧光标记抗体停留在特定细胞的表面，称为荧光抗体标记的靶细胞；将含有被标记细胞的混合细胞群混悬在一定容积的上样缓冲液中，再通过FACS的进样吸管孔，仪器就会将细胞悬液制成以单细胞排列的微细流束。
当每一个细胞通过仪器的激光束照射时，带在细胞上的荧光就会被相应的激光束激活并发出对应的荧光，通过敏感的光电倍增管即可检测到从细胞表面发出的荧光。
根据测得的散射光（scattered light ）可得到细胞大小及颗粒状态的信息；而从荧光的发射强度(fluorescence emissions)则提供了结合在细胞上的抗体信息，进而也被反映了该细胞表面相应分子的表达情况。
在流式细胞仪分离装置中，返回到计算机的信号，可用来产生一种电荷，这种电荷以特定准确的时间通过FACS的吸管孔，在与吸管孔的液体流相相遇时，可将液体流打碎成只含一个细胞的微滴。
最详细的流式细胞仪实验方法
最详细的流式细胞仪实验方法流式细胞仪（Flow cytometry）是一种高精度的细胞分析技术，可用于快速鉴定和分离多种类型的细胞。
本文将介绍一种常用的流式细胞仪实验方法，包括样品准备、细胞染色、细胞分析和数据分析等步骤。
一、样品准备1.收集细胞：制备单细胞悬液，如细胞培养物等。
2.细胞计数：使用细胞计数器或血细胞计数板等工具，计算细胞密度。
3. 调整浓度：根据流式细胞仪系统的要求，将细胞悬液的浓度调整至适当的浓度（一般建议在1×10^5至1×10^6个细胞/ ml之间）。
二、细胞染色1.封闭非特异结合位点：为了减少非特异性结合，可使用FBS（胎牛血清）或BSA（牛血清蛋白）等以阻断非特异位点。
2.添加荧光染料：选择合适的染料，如草酰胺（CFSE）、丙酮染料(ATTO)或FITC等。
按照厂家说明书中建议的浓度将染料添加到样品中，好洗脱或者可用来鉴定细胞的抗体，如表面标记、核酸染色剂或功能性抗体。
3.染色溶液：在4°C下孵育细胞悬液至少30分钟（具体时间根据实验需要决定）。
4.洗涤：向样本管中加入足够的缓冲液，使细胞悬液稀释五倍，并离心沉积细胞。
5.弃去上清液：将上清液弃去，然后用足够的缓冲液再次洗涤沉积的细胞。
6.重悬：向样品管中加入适量的缓冲液，使细胞形成合适的细胞密度。
三、设置流式细胞仪1.打开仪器：确保仪器已开启并运行正常，各通道和检测器已连接好，并预热至适当温度。
2.校正：根据仪器的手册，对流式细胞仪进行校正和标定，以确保流式细胞仪的准确性和稳定性。
3.样品管固定：将样品管插入到流式细胞仪中相应的槽中，以确保准确读取。
4.设置参数：在计算机或流式细胞仪仪器的界面上设置所需参数，如细胞个数、细胞染色等。
四、细胞分析1.利用流式细胞仪：启动流式细胞仪软件，并确保硬件与软件连接正常。
2.定位细胞：在细胞分析开始前，调整激光位置和侦测器的灵敏度，以确保对准确获取细胞。
免疫学实验中的流式细胞仪技术
免疫学实验中的流式细胞仪技术一、流式细胞仪技术介绍流式细胞仪是一种利用激光束通过细胞悬液，测定、计数、分析细胞数量、大小、形态、表面分子和细胞内分子的仪器。
主要由光学系统、电子器件和计算机分析系统组成。
二、流式细胞仪的原理原理就是将待检测的细胞样品通过一支单根的荧光染色悬液经过流式细胞仪时，通过需要的成像方式，不断将细胞送进一个分之装置中，然后对样品进行反向散射特异性扫描，并利用光敏探测器，以及荧光探测器进行检测。
当荧光探测器检测到发出的来自于荧光探针的荧光信号时，流式细胞仪就会记录此时的细胞数量、场景以及质量，直到细胞样品全部流经完成。
三、流式细胞仪的应用1. 细胞检测和分析：流式细胞仪可用于检测和分析动物、植物和微生物的细胞。
2. 免疫学研究：流式细胞仪使免疫学研究工作更容易和更准确。
它可用于评估白细胞亚型、分析细胞表面分子，以及确定细胞内免疫分子的级别。
3. 癌症研究：流式细胞仪可用于评估癌细胞中的某些分子，并确定这些分子对肿瘤发展的贡献。
4. 细胞分选：流式细胞仪可用于分选细胞亚型，从而使研究人员可以分析一组单细胞上的特定信息。
四、流式细胞仪技术在免疫学实验中的应用1. 人类淋巴细胞亚型检测：通过利用具有单克隆抗体的流式细胞仪检测，对人体的淋巴细胞亚型进行识别和分析，进而进行检测和防治方案分析。
2. 免疫功能检测：通过利用流式细胞仪测定白细胞受体的分子配体以及其它生物分子，从而判断免疫功能的强度和效果。
3. 细胞毒性检测：通过利用流式细胞仪对药物能够引起的细胞毒性的检测，进而研究药物的生物活性及作用机理。
4. 自动化流式细胞仪的应用：采用自动化流式细胞仪技术，可快速、准确地分析人源性T细胞受体 (T-cell receptor, TCR) 的不同亚型。
五、结论流式细胞仪技术在免疫学实验中，可以用于检测淋巴细胞亚型、检测免疫功能、检测细胞毒性和分析各种免疫功能相关细胞及分子，并可以对庞大的数据集进行分类、分析和展示，实现高通量的细胞分析，这对实现免疫学研究、药物开发、临床治疗以及新药研发具有重要意义。
流式细胞仪检测细胞凋亡实验
流式细胞仪检测细胞凋亡实验PI单染色法实验原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。
这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面：1. 细胞核的改变由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。
研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。
许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。
2. 光散射特性凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。
在流式细胞仪上，前散射光与细胞的大小有关，而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。
在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。
此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。
细胞坏死时，由于细胞肿胀，其前散射光增大；侧散射光在细胞坏死时也增大，因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。
但需要注意的是，根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。
因此在某些淋巴细胞凋亡中，用光散射特性检测凋亡的可靠性较好，而在肿瘤细胞凋亡中，其可靠性就较差。
根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来，用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。
也可用于活细胞的分类。
实验材料细胞试剂/试剂盒PBS PI 蒸馏水乙醇仪器/耗材棕色瓶 400目筛网流式细胞仪实验步骤一、收集细胞收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500~ 1 000 r/min 离心5 min，弃去培养液。
二、细胞洗涤3 ml PBS洗涤1次。
三、乙醇固定离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1-2小时。
最详细的流式细胞仪实验方法
流式细胞仪实验方法一、实验准备1．标本制备：2．最小化非特异性结合：二、凋亡1．凋亡的检测方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法三、细胞因子1．激活的细胞因子2．CBA四、血小板1．活化2．活化检测3．网织血小板五、红细胞1．网织红细胞2．PNH3．胎儿红细胞六、肿瘤学1．DNA 细胞周期2．蛋白3．多药耐药4．微小残留白血病第一部分标本处理一、流式细胞术常规检测时的样品制备(一)直接免疫荧光标记法取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。
孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。
本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。
虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。
(二)间接免疫荧光标记法取一定量的细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。
本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。
但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。
所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。
另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。
二、最小化非特异性结合的方法1．荧光标记的抗体的浓度应该合适，如果浓度过高，背景会因为非特异性的相互作用的增加而增加。
2．在使用第一抗体之前，将样品与过量的蛋白一起培育，如小牛血清蛋白（BSA），脱脂干奶酪，或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。
流式细胞术实验报告
一、实验目的本实验旨在通过流式细胞术技术，对细胞群体进行快速、精确的分析和定量测定，研究细胞的物理与化学性质，并对细胞进行分类和分选。
通过本次实验，掌握流式细胞仪的工作原理，了解其在细胞生物学研究中的应用。
二、实验原理流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒逐个进行快速定量分析和分选的技术。
其基本原理是将经过荧光标记的细胞或微粒，在流动系统中以高速通过，同时利用激光束照射细胞，通过光散射和荧光信号来获取细胞的大小、形态、表面标记物等信息。
最后，通过数据分析和可视化展示，对细胞进行计数、分类和分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 细胞样本：小鼠脾细胞、Jurkat细胞- 荧光标记抗体：CD45-FITC、CD3-PE、CD4-APC- 溶液：磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、荧光染料（如PI）2. 实验仪器：- 流式细胞仪（如BD FACS Calibur）- 离心机- 恒温培养箱- 移液器四、实验步骤1. 细胞制备：- 收集小鼠脾细胞或Jurkat细胞，用PBS洗涤后，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。
- 加入荧光标记抗体，室温下孵育30分钟。
- 用PBS洗涤细胞两次，去除未结合的抗体。
2. 流式细胞术分析：- 将处理好的细胞加入流式细胞仪，设置合适的参数进行检测。
- 收集数据，进行细胞分类和分析。
3. 数据分析：- 利用流式细胞术分析软件（如CellQuest、FlowJo）对数据进行分析，包括细胞计数、分类、DNA含量分析等。
五、实验结果与分析1. 细胞分类：- 通过流式细胞术，成功将小鼠脾细胞和Jurkat细胞分为不同的亚群，如T细胞、B细胞等。
2. DNA含量分析：- 通过PI染色，检测细胞的DNA含量，发现小鼠脾细胞和Jurkat细胞均处于G0/G1期。
3. 表面标记物分析：- 通过CD45-FITC、CD3-PE、CD4-APC抗体检测，发现Jurkat细胞为T细胞，小鼠脾细胞中含有B细胞和T细胞。
流式细胞仪实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除流式细胞仪实验报告篇一：流式细胞术实验报告流式细胞术实验目的掌握流式细胞仪的工作原理掌握用流式细胞仪测量细胞群体DnA含量分布的方法了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用实验原理流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。
在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。
通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、Dn(:流式细胞仪实验报告)A、RnA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。
细胞内的DnA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如g0/g1期的DnA含量为2c，而g2期的DnA含量是4c。
利用pI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DnA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。
仪器、材料与试剂仪器：流式细胞仪、离心机。
材料：hela细胞样品、试管、离心管、封口膜、微量移液器、Tip头、eppendorf管。
试剂：70％乙醇（保存于4℃），Rnase（-20℃保存），pI染液（避光保存于-20℃），pbs(ph7.4，保存于4℃)实验步骤样品细胞由老师于课前收集并置于70%(预冷)乙醇中4℃下固定过夜。
2000rpm15min收集固定细胞，pbs洗2次。
用100μLpbs重悬细胞并转至试管中轻轻吹打（防止细胞破碎）。
加pI染液50μL和Rnase约2μL室温放置15min。
上机检测。
样品测定并使用modFitLT软件分析结果。
实验结果与讨论:所测样品中各周期时相的百分比：g1期68.48%g2/m期16.63%s期14.89%g2：g1=1:1.77cV12.16提示结果可能不可靠或存在多倍体细胞。
流式细胞术是一种对悬液中细胞、微生物或细胞器等进行单个快速识别、分析和分离的技术。
用以分析细胞大小、细胞周期、DnA含量、细胞表面分子以及进行细胞分选等。
这种技术具有以下特点1.测量速度快；2.可进行多参数测量；3.是一门综合性的高科技方法（Fcm综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术）；4.既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。
流式细胞术实验报告
流式细胞术实验报告流式细胞术实验报告引言流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生物学研究和临床诊断的技术。
它通过测量细胞在流动过程中的荧光信号，可以快速、准确地分析细胞的数量、大小、形态和功能等特征。
本实验旨在利用流式细胞术对细胞进行表型分析，并研究不同条件下细胞的变化。
材料与方法1. 细胞样本准备：从培养皿中取出细胞，用PBS洗涤，离心沉淀后，再用PBS 悬浮细胞，使其浓度达到所需的范围。
2. 细胞染色：将细胞悬浮液分装于离心管中，加入适量的荧光标记染料，轻轻摇匀，避免产生气泡。
3. 流式细胞术仪器设置：根据实验需要，调整流式细胞术仪器的参数，如激光功率、荧光信号检测通道等。
4. 样本检测：将细胞悬浮液注入流式细胞术仪器，开始检测。
记录细胞的散射信号和荧光信号，并设置相应的控制样本。
5. 数据分析：利用流式细胞术软件对获得的数据进行分析，包括细胞数量、比例、荧光强度等参数。
结果与讨论通过流式细胞术实验，我们成功地对细胞进行了表型分析，并观察到不同条件下细胞的变化。
以下是我们的结果和讨论。
1. 细胞数量和比例的变化我们首先对细胞数量和比例进行了分析。
结果显示，在不同处理条件下，细胞数量和比例存在显著差异。
例如，在处理A条件下，细胞数量明显增加，而在处理B条件下，细胞数量有所下降。
这表明不同条件对细胞生长和增殖有不同的影响。
2. 细胞大小和形态的变化我们进一步分析了细胞的大小和形态的变化。
通过测量细胞的散射信号，我们可以得到细胞的大小和形态信息。
结果显示，在处理A条件下，细胞的大小明显增加，形态变得更加圆润。
而在处理B条件下，细胞的大小和形态相对稳定。
这可能与处理A条件下的细胞分化和增殖有关。
3. 荧光信号的变化我们还对细胞中特定蛋白的表达进行了分析。
通过标记特定蛋白的荧光染料，我们可以测量细胞的荧光信号强度。
结果显示，在处理A条件下，特定蛋白的表达明显上调，而在处理B条件下，特定蛋白的表达下调。
流式细胞仪分析技术
流式细胞仪分析技术流式细胞仪（Flow cytometry）是一种广泛应用于细胞学和免疫学研究的分析技术。
它结合了光学、生物技术和数字技术，可以迅速、准确地分析单个细胞的形态特征、生理状态、分子表达和细胞功能等。
流式细胞仪分析技术与传统的显微镜观察方法相比，具有高通量、高灵敏度、高分辨率、高准确性和自动化等优势。
流式细胞仪分析技术的原理是基于细胞在流体中的特性和细胞与激发光交互作用时所产生的光信号。
具体而言，流式细胞仪通过光源产生一束激发光，并经过一系列的光路元件，将光束聚焦在细胞悬液中的细胞上。
细胞在激发光的作用下，会发出散射光和荧光光，然后通过一系列的光学滤波器和光学器件，将光信号转化为电信号，并通过光敏器件转化为数字信号。
最终，这些数字信号可以被计算机采集和分析，从而得到细胞的相关参数和信息。
1.细胞计数和细胞大小测量：流式细胞仪可以通过细胞的散射光信号，计算细胞的浓度和大小。
这对于确定细胞的增殖状态、细胞密度和细胞生长速度等具有重要意义。
2.细胞凋亡分析：流式细胞仪可以通过荧光标记技术，检测细胞凋亡相关的标志物，如细胞膜外磷脂翻转和DNA断裂等。
这对于研究细胞凋亡的发生和调控机制非常重要。
3.细胞表面标记物检测：流式细胞仪可以利用荧光标记的抗体，检测细胞表面的特定抗原或受体，从而研究细胞的分型、功能和相互作用等。
这对于免疫细胞的表型分析和免疫细胞亚群的鉴定非常有价值。
4.荧光蛋白标记检测：流式细胞仪可以利用荧光蛋白标记，检测细胞内特定蛋白的表达水平和分布情况。
这对于研究基因表达调控和蛋白质相互作用等具有重要意义。
总之，流式细胞仪分析技术在生命科学研究中起到了重要的作用。
它可以为研究人员提供关于细胞数量、大小、形态、生理状态、分子表达和细胞功能等多样化信息，为细胞学和免疫学的基础研究、新药研发和临床诊断等方向提供有力的支持。
随着技术的不断发展和改进，流式细胞仪分析技术将在未来发展得更加成熟和广泛应用。
流式细胞检测方法
流式细胞检测方法流式细胞检测是一种常用的细胞分析技术，广泛应用于生命科学研究和临床诊断。
它通过流式细胞仪对细胞进行高通量的分析和排序，具有高灵敏度、高分辨率和高效率的特点。
流式细胞检测方法包括样本准备、细胞标记和流式细胞仪分析等几个步骤。
细胞标记是流式细胞检测的关键步骤之一、通过对细胞表面或细胞内特定结构或分子的标记，可以实现对不同类型细胞的鉴别和特定分子的表达或变化的测定。
细胞标记主要有两种方法：直接标记和间接标记。
直接标记是将荧光染料等直接结合到待测分子或细胞表面抗原上。
间接标记是通过结合在第一层标记上的一种特异性标记物，如抗体，再与待测分子结合。
细胞标记的选择需要根据研究目的和标记物的特异性来确定。
流式细胞仪分析是流式细胞检测的核心环节，它能够实现对细胞的高速精确检测和分类。
流式细胞仪利用流体力学原理，将单个细胞按顺序通过聚焦点，通过光散射和荧光信号等技术检测和记录细胞的特性。
光散射分析可以根据细胞的大小和形态进行粗略分类或鉴别。
荧光信号则可以根据特定荧光标记物的强度和频谱进行细胞鉴别和特定分子的定量测定。
通过采集细胞的多个参数，如荧光强度、散射光强度和荧光颜色等，可以对细胞进行多参数的定量和定性分析。
此外，流式细胞仪还可以实现单细胞的分选、分析和培养，对于研究特定细胞亚群或深入研究个体细胞的生物学特性非常重要。
总的来说，流式细胞检测是一种先进的细胞分析技术，具有高通量、高灵敏度和高分辨率的特点。
它在生命科学研究和临床诊断中有广泛的应用前景，可以用来研究细胞的表型和功能，鉴别和分析特定细胞类型，评估细胞的状态和变化，以及监测疾病的发展和治疗效果的评估。
随着新的标记技术和流式细胞仪的不断进步，流式细胞检测将在未来发展出更多的应用和挑战。
流式细胞仪检测细胞凋亡实验步骤
流式细胞仪检测细胞凋亡实验步骤流式细胞仪是一种用于检测和分析细胞的仪器，可以通过测量细胞的荧光和散射特性来了解细胞的生理状态和功能。
在细胞生物学研究中，流式细胞仪广泛应用于细胞凋亡实验。
细胞凋亡是一种重要的细胞程序性死亡方式，正常情况下是一种维持生态平衡的重要机制，而在疾病发生时，细胞凋亡的失控会导致一系列疾病的发生。
因此，对细胞凋亡的检测和研究具有重要意义。
本文将介绍流式细胞仪检测细胞凋亡的实验步骤。
实验材料和仪器流式细胞仪细胞培养物凋亡诱导剂PBS缓冲液1×绑定缓冲液1×洗涤缓冲液荧光标记的抗体PI（胰岛素脱羧酶）Annexin V-FITC套装实验步骤1.细胞处理首先，将培养好的细胞分到不同的培养皿中，添加凋亡诱导剂，以诱导细胞凋亡。
凋亡诱导剂的种类和浓度应根据实验的需要来确定。
通常可选择小分子化合物、放射线等方式来诱导细胞凋亡。
2.收集细胞处理好的细胞经过一定时间的培养后，使用离心机将细胞沉淀下来，并用PBS缓冲液洗涤细胞，以去除培养基和凋亡诱导剂等杂质。
然后使用1×绑定缓冲液将细胞重悬。
3.细胞计数将细胞悬液加入细胞计数板中，用显微镜或自动细胞计数器计算细胞密度，并将细胞密度调整到合适的浓度。
4.细胞染色将调整好浓度的细胞悬液分到不同的离心管中，添加荧光标记的抗体和PI荧光染料。
荧光标记的抗体通常选择Annexin V-FITC，它可以与凋亡细胞膜表面磷脂酰丝氨酸结合，从而可以用于检测凋亡细胞；PI荧光染料用于检测坏死细胞。
5.混匀和孵育将离心管中的细胞悬液混匀均匀，然后在室温下孵育一定时间，通常为15-30分钟。
期间可以轻轻摇晃管子以保证充分的染色反应。
6.流式细胞仪检测染色反应结束后，将细胞悬液加入流式细胞仪的样品管中，通过流式细胞仪的激光和光电探测器，可以分辨出细胞的荧光和散射信号，从而获得细胞凋亡的信息。
使用流式细胞仪之前需要对仪器进行标定和调试，以确保获得准确和可靠的数据。
流式细胞仪操作步骤
流式细胞仪操作步骤一、样品准备1. 确认样品是否符合实验要求，如细胞浓度、荧光标记等。
2. 根据实验需求，选择合适的试管和细胞样品。
3. 确认样品中是否有杂质或污染物，必要时进行离心和洗涤。
4. 尽可能缩短样品处理时间，避免细胞活性受到影响。
二、样品上机1. 打开流式细胞仪，确认仪器正常工作。
2. 将样品加入到流式细胞仪的样品管中。
3. 根据实验需求，设置合适的流速和压力。
4. 开始采集数据，观察仪器工作状态，确保数据准确可靠。
三、参数设置1. 根据实验需求，选择合适的荧光标记和检测参数。
2. 根据细胞类型和特性，设置合适的门控和阈值。
3. 确认仪器校准和定标工作已完成。
4. 根据需要，设置多色分析，以便于进行细胞分群和定量分析。
四、数据采集1. 在采集数据时，观察仪器工作状态，确保数据准确可靠。
2. 根据实验需求，确定采集的数据量，确保数据具有代表性。
3. 记录采集数据的时间和条件，以便于后续数据分析。
4. 在采集数据时，注意观察细胞活性、浓度和分布情况，及时调整实验条件。
五、数据分析1. 使用专业软件对采集的数据进行处理和分析。
2. 根据实验需求，对数据进行去噪、归一化和定量分析。
3. 进行细胞分群、细胞周期和细胞凋亡等分析。
4. 对数据进行统计学分析和可视化展示。
六、结果输出1. 根据分析结果，输出相应的图表和数据表格。
2. 对结果进行解释和注释，以便于读者理解和应用。
3. 如果需要，可将结果整理成报告形式，提供给相关人员参考和使用。
七、质量控制八、实验室清理。
流式细胞的测定方法
流式细胞的测定方法主要包括以下步骤：
1. 样品制备：样品需要充分混匀，以避免出现任何聚集或死区，尽可能在短时间内完成注射和检测。
2. 流动细胞室的选择：要确保流动细胞室清洁、无污染，否则可能会影响实验结果。
3. 激光源的选择：常用的激光源包括488nm、633nm和407nm等，不同波长的激光对不同特性的抗体或染色剂有选择性的激发。
4. 实验参数的设置：根据不同的实验需求，调整参数，如脉冲数、脉冲宽度、荧光强度等。
5. 实验过程：对样本进行检测，通过荧光仪检测散射光和荧光信号，借助计算机软件进行数据分析。
此外，还有细胞表面标志物测定、细胞周期和细胞凋亡的测定等方法，可以进一步对流式细胞术的应用进行扩展。
流式细胞术是一种在生物医学研究中广泛使用的技术，它能够快速、准确地分析大量细胞。
通过该技术，可以检测细胞群的多种参数，包括细胞表面标志物、细胞内部生理指标、细胞周期和凋亡率等。
同时，流式细胞术对样本的要求较低，能够快速获得大量数据，具有很高的灵敏度和精确度。
然而，流式细胞术也有其局限性，如对某些染色方法或特定细胞类型的适应能力有限，对实验环境和操作人员的要求较高。
因此，在进行流式细胞的测定时，需要根据具体实验需求和样本特性选择合适的方法和参数，以保证实验结果的准确性和可靠性。
流式细胞仪 技术要点
流式细胞仪技术要点学习流式细胞仪这么久，今天来说说关键要点。
首先呢，我理解流式细胞仪最基本的一个要点就是它的样本制备。
这个可得特别小心。
样本要是没弄好呀，后面那些高大上的检测啥的全白搭了。
就好比你要做饭，食材没洗干净或者没切对，那做出来的菜肯定不好吃。
在制备样本的时候，细胞得是分散的单个状态，不能有成团的现象。
我之前就老把这个搞砸，要么细胞太密集了，要么就有杂质，搞得检测出来的数据乱七八糟的。
我总结了个小技巧，在处理样本的时候啊，每一个步骤都要很轻柔很仔细，就像对待稀世珍宝一样。
另外，流式细胞仪的荧光标记这部分也超重要。
不同的荧光染料对应检测不同的细胞特性。
我记得我一开始总是搞混几种染料的用途，后来我就专门找了个小本子，把每一种常用的荧光染料对应的功能都抄下来，闲的时候就拿出来看看加强记忆。
这就像背单词似的，多重复才能记得住。
我理解这个荧光标记就像是给细胞穿上不同颜色的衣服，这样仪器就能识别不同类型的细胞了。
比如说你标记了绿色荧光的染料在某种细胞上，在仪器检测下，那种细胞就会显示出绿色的信号。
还有还有，参数的设置也是个难点啊。
好多个参数在那儿，什么散射光参数、荧光强度参数之类的。
我有时候看着那些参数就懵，不知道从哪儿下手。
后来我就慢慢一个个地去了解每个参数的意义，多试几次不同的设置，看看检测结果有啥变化。
就类似调整相机的参数来拍出不同效果的照片一样，这个参数设置错了，可能得出来的图像就很模糊或者根本看不出关键信息。
对了还有个要点，那就是仪器的校准。
我觉得这是很容易被忽视的一点。
校准没做好，准确性就无从谈起了。
这就跟秤没校准则称东西不准是一个道理。
要准确地使用标准微球等来校准仪器，这样检测的数据才有说服力。
我知道我对流式细胞仪的技术要点理解还不是非常全面，但这些都是我实打实学习过程中的一些经验分享。
我也是在不断学习摸索。
如果想要更深入精确的知识，可以去看一些专业的书籍，像《流式细胞术原理与应用》就很不错，还有很多相关的专业论文在知网上也能找到参考。
流式细胞检测实验方法篇
流式细胞检测实验方法篇流式细胞技术（Flow cytometry, FCM）是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术。
流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物，它能有效地从单细胞水平区分异质性细胞群体，检测对象包括但不限于悬浮细胞、贴壁细胞或从实体组织分离的单细胞悬液和其他生物颗粒。
一、细胞表面染色步骤1. 样本准备①采集全血或组织（脾，淋巴结，胸腺和骨髓）用细胞染色buffer(或含0.1%BSA的PBS)制成单细胞悬液。
对于体外刺激的细胞，直接将刺激后的细胞悬浮在细胞染色buffer(或含0.1%BSA的PBS)中，然后进行第2步。
②加满细胞染色buffer(或含0.1%BSA的PBS), 300g离心细胞悬液5分钟，弃掉上清。
2. 红细胞裂解①需裂解红细胞（如脾脏），将10x红细胞裂解液(ACK buffer)用去离子水稀释到1x，放置到室温。
将细胞重悬于3mL的1x ACK buffer中，室温孵育3-5分钟；如不需要裂解红细胞，直接进入第3步。
②加入10mL细胞染色buffer(或含0.1%BSA的PBS)终止红细胞裂解，300g离心细胞悬液5分钟，弃掉上清。
③重复洗涤一次，加满细胞染色buffer(或含0.1%BSA的PBS)至15mL, 300g离心细胞悬液5分钟，弃掉上清。
④细胞计数，用细胞染色buffer(或含0.1%BSA的PBS)将细胞制成1x107/mL悬液。
将100μL细胞悬液加入流式管中备用。
3. 封闭Fc受体封闭Fc受体能减少染色过程中的非特异性染色。
①小鼠中，纯化的CD16/CD32单抗能和FcγRⅢ/Ⅱ结合，封闭非特异性染色，使阴性细胞的背景荧光降至未标记细胞的水平。
加入0.5-1μg纯的抗小鼠CD16/32单克隆抗体，室温孵育10分钟。
②对于人和大鼠，可直接使用过量的与荧光抗体相同来源和亚型的纯化Ig或者相同来源血清进行阻断，或者用商业化的Fc受体阻断剂。
实验七流式细胞仪测A549细胞周期-陈的师姐
实验七流式细胞仪测A549细胞周期实验原理：细胞周期（cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，分为间期与分裂期（M期）两个阶段。
间期又分为三期即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。
用流式细胞仪检测细胞周期通常用PI染细胞核，PI在一定波长的光下发出荧光，其强度与DNA含量成正比。
通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数，可检测细胞的增殖、凋亡。
实验用品：（1）材料：A549细胞（2）试剂：培养液、0.25%胰蛋白酶、0.02%EDTA、1×PBS(PH=7.4)VB （3）设备：微量加样器、小烧杯、超净工作台、CO2孵育箱、倒置相差显微镜。
试剂配制：PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。
RNaseA：10mg/ml实验分组：空白对照0umol/L处理组：10、20、40、80umol/l,每浓度两个平行瓶。
实验步骤：（1）取对数生长期的细胞EDTA+胰酶消化至单个细胞悬液。
计数。
（2）取小方瓶，每瓶加4ml培养液约接种20万个细胞（理论可以20~50万），过夜待贴壁。
(3)每瓶加入相应浓度的处理因素，（终浓度为0、10、20、40、80umol/L）继续培养48小时。
（4）取离心管做好标记，将上清液转入离心管中。
（5）加胰酶消化之单个细胞（不用EDTA），弃消化液。
（6）将离心管的的液体重新倒入相应的小方瓶中，吹匀。
转离心管。
（7）离心1000转10min.弃上清。
（8）加适量PBS(5~10ml)吹匀。
离心1000转10min。
弃上清。
（9）重复（8）（10）加入2.5ml的酒精悬浮细胞。
放4℃冰箱至少30min，或过夜。
(11) 1000g离心5min,弃上清。
(12)加PBS，1000g离心5min弃上清。
（13）加500ulPBS重悬细胞。
转流式管。
（14）加PI、RNA酶各5ul。
（0umol/l的留一个不加）37℃，30min。
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤流式细胞仪是一种能够对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析和分选的技术。
在细胞生物学研究中，流式细胞仪常用于检测细胞周期，这对于了解细胞的增殖、分化和凋亡等生理过程具有重要意义。
以下是流式细胞仪检测细胞周期的详细操作步骤：一、实验前准备1、细胞培养选择处于对数生长期的细胞进行实验，以保证细胞状态良好且增殖活跃。
根据细胞类型和实验要求，在合适的培养条件下培养细胞。
2、试剂和材料70%乙醇：用于固定细胞。
碘化丙啶（PI）染液：用于染色细胞核中的 DNA。
RNA 酶：用于去除 RNA 对染色的干扰。
磷酸盐缓冲液（PBS）：用于洗涤细胞。
流式细胞仪专用的上样管。
3、仪器设备流式细胞仪，并确保仪器处于正常工作状态，包括光路校准、液流系统稳定等。
离心机：用于离心细胞。
二、细胞收集1、当细胞培养达到所需的密度和状态时，小心吸出培养基。
2、用 PBS 轻轻洗涤细胞两次，以去除残留的培养基和杂质。
3、加入适量的胰蛋白酶或其他细胞解离试剂，将细胞从培养容器表面解离下来。
4、加入含有血清的培养基终止胰蛋白酶的作用，防止过度消化细胞。
5、将细胞悬液转移到离心管中，离心（一般 1000 1500 rpm，510 分钟），使细胞沉淀。
三、细胞固定1、弃去上清液，留下细胞沉淀。
2、缓慢加入预冷的 70%乙醇，边加边轻轻涡旋或吹打细胞，使细胞充分分散在乙醇中。
乙醇的最终浓度应在 70%左右。
3、将细胞在 4°C 下固定至少 1 小时，可固定过夜以确保固定效果。
四、PI 染色1、离心固定后的细胞，弃去乙醇。
2、用 PBS 洗涤细胞两次，以去除残留的乙醇。
3、加入适量的 RNA 酶溶液，在 37°C 水浴中孵育 30 分钟，以去除 RNA 对染色的干扰。
4、加入 PI 染液，使其终浓度达到合适的范围（通常为 50 100μg/mL），在室温下避光孵育 30 分钟。
流式细胞术实验报告
流式细胞术实验报告实验报告：流式细胞术一、实验目的本实验的目的是通过流式细胞术技术进行细胞的分析和定量的测定，研究细胞的物理与化学性质，同时对其进行分类鉴定。
二、实验原理流式细胞术是利用细胞本身特有的荧光素和荧光物质来进行细胞分析的一种方法，其基本原理是将待检测的细胞样品通过加荧光素和荧光物质，使细胞样品产生荧光信号，并利用激光束扫描进行荧光信号的测定，根据信号的强度和时间对细胞进行分类和测定。
三、实验步骤1.准备样品：取细胞样品进行悬液处理，去除其中的杂质。
2. 加荧光素和荧光物质：在样品中加入荧光素和荧光物质，使细胞样品产生荧光信号。
3. 流式细胞术仪：将样品注入流式细胞术仪，并通过激光束扫描进行荧光信号的测定。
4. 分析结果：根据测定结果进行数据处理，对细胞进行分类鉴定。
四、实验结果通过测定发现，本实验的细胞样品产生了明显的荧光信号，通过激光束扫描进行测定，得出了一组详细的细胞数据结果。
根据测定结果，我们可以对样品进行分类鉴定，得出了准确的实验数据结果。
五、实验结论通过本实验的结果分析，流式细胞术技术可以对细胞样品进行高效、准确的分析和测定，具有重要的科学研究意义和应用前景。
六、实验注意事项1. 在实验室操作时要注意安全，佩戴好相应的防护用具，避免意外伤害的发生。
2. 在加荧光素和荧光物质时，要掌握好药品和样品的使用量，避免荧光信号出现过度强度，否则会影响实验的结果。
3. 流式细胞术仪的操作需要掌握好相应的操作技能和流程，避免操作失误或损坏仪器设备。
四、实验器材和试剂1.细胞样品，可以是细胞悬液或组织细胞。
2. 荧光素和荧光物质，可以根据需要选择相应的荧光剂。
3. 流式细胞术仪，包括激光束扫描仪和电脑数据处理系统等。
5.实验操作时间本实验的操作时间大概需要2-3小时左右，其中包括样品准备、荧光素添加和细胞测量等步骤。
6.参考文献1.罗一驹, 刘思成, 陈艳妮. 流式细胞术[J]. 临床检验杂志, 2018,36(1):159-161.2.王婷婷, 王斌, 陈永瑞. 流式细胞术在癌症检测中的应用研究进展[J]. 华西药学杂志, 2018, 33(7):703-706.3.刘志俊, 吴德福, 于炜. 流式细胞术在肿瘤治疗中的应用研究[J]. 中国实用医学, 2018, 13(8):201-202.。
实验七流式细胞仪检测技术
实验七流式细胞仪检测技术免疫细胞是一组不均一的细胞群体。
各种特定的细胞群其细胞表面表达有各自特异的表面标志分子，利用这些特异的表面标志，可以鉴定、分离和纯化相应的细胞群。
随着单克隆抗体技术的诞生和免疫标记技术（特别是荧光标记技术）的发展，以及计算机科学的应用，使利用仪器的方法检测特异的细胞膜表面分子成为可能。
本章介绍的荧光激活细胞分类技术就是采用单克隆抗体技术和免疫荧光标记技术，并结合光学检测和计算机分析技术而产生的鉴定和分离特定细胞亚群的技术。
实验原理流式细胞仪（flow cytome ter）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪（fluore scenc e activa ted cell sorter,FACS）,是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。
其原理是在一组混合的细胞群中，加入特异的针对特定靶细胞表面分子的荧光标记单克隆抗体，这种特异单克隆抗体与其对应的抗原靶分子结合，结合后的荧光标记抗体停留在特定细胞的表面，称为荧光抗体标记的靶细胞；将含有被标记细胞的混合细胞群混悬在一定容积的上样缓冲液中，再通过FAC S的进样吸管孔，仪器就会将细胞悬液制成以单细胞排列的微细流束。
当每一个细胞通过仪器的激光束照射时，带在细胞上的荧光就会被相应的激光束激活并发出对应的荧光，通过敏感的光电倍增管即可检测到从细胞表面发出的荧光。
根据测得的散射光（scatte red light）可得到细胞大小及颗粒状态的信息；而从荧光的发射强度(fluore scenc e emissi ons)则提供了结合在细胞上的抗体信息，进而也被反映了该细胞表面相应分子的表达情况。
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实验七流式细胞仪检测技术免疫细胞是一组不均一的细胞群体。
各种特定的细胞群其细胞表面表达有各自特异的表面标志分子，利用这些特异的表面标志，可以鉴定、分离和纯化相应的细胞群。
随着单克隆抗体技术的诞生和免疫标记技术（特别是荧光标记技术）的发展，以及计算机科学的应用，使利用仪器的方法检测特异的细胞膜表面分子成为可能。
本章介绍的荧光激活细胞分类技术就是采用单克隆抗体技术和免疫荧光标记技术，并结合光学检测和计算机分析技术而产生的鉴定和分离特定细胞亚群的技术。
实验原理流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sorter,FACS）,是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。
其原理是在一组混合的细胞群中，加入特异的针对特定靶细胞表面分子的荧光标记单克隆抗体，这种特异单克隆抗体与其对应的抗原靶分子结合，结合后的荧光标记抗体停留在特定细胞的表面，称为荧光抗体标记的靶细胞；将含有被标记细胞的混合细胞群混悬在一定容积的上样缓冲液中，再通过FACS的进样吸管孔，仪器就会将细胞悬液制成以单细胞排列的微细流束。
当每一个细胞通过仪器的激光束照射时，带在细胞上的荧光就会被相应的激光束激活并发出对应的荧光，通过敏感的光电倍增管即可检测到从细胞表面发出的荧光。
根据测得的散射光（scattered light ）可得到细胞大小及颗粒状态的信息；而从荧光的发射强度(fluorescence emissions)则提供了结合在细胞上的抗体信息，进而也被反映了该细胞表面相应分子的表达情况。
在流式细胞仪分离装置中，返回到计算机的信号，可用来产生一种电荷，这种电荷以特定准确的时间通过FACS的吸管孔，在与吸管孔的液体流相相遇时，可将液体流打碎成只含一个细胞的微滴。
含有电荷的微滴就会从主液体流中偏移，穿过一双极板。
带正电荷的微滴被吸引至阴极，而带负电荷的被吸引至阳极。
以这种方式，特定的细胞亚群由于标记着不同的荧光抗体而带有不同的电荷，从而将目的细胞从混合的细胞群中分拣出来。
实验应用流式细胞仪主要有两个最基本的用途：第一是可以定量分析鉴定活细胞表面表达的特异分子，第二是进行特定的活细胞群的分离和纯化。
1.免疫细胞群的分类静止淋巴细胞之间从其外观形态难以区分，都是以致密的核及少量细胞质组成的小而圆的细胞为特征。
然而，这些细胞确是由功能各异的不同细胞亚群所组成，各种细胞群表达各自特殊的表面分子。
例如,B淋巴细胞上表达有特异的膜表面免疫球蛋白（mIg），而成熟的T淋巴细胞表面表达特异的CD3分子。
T淋巴细胞又可进一步按其表达的不同表面标志细分成不同的亚群，如CD4+CD8-和CD4-CD8+亚群。
因此，可由这些特征性的表面标志，将细胞分为不同的群或亚群。
2.免疫细胞的分化发育免疫细胞分化发育的不同阶段，其表面标志也在不断地发生着变化。
如胸腺细胞（发育过程中的T淋巴细胞），在发育的不同阶段从不成熟到成熟，其表面标志经历了从双阴性（CD4-CD8-）到双阳性（CD4-CD8-），直到单阳性（CD4+CD8-或CD4-CD8+）的过程。
正常生理状态下，发育不同阶段的胸腺细胞以一定的比例存在于胸腺中。
通过检测这些标志，即可判定某些因素（基因突变等）对胸腺细胞发育的影响。
3.免疫细胞的分子表达免疫细胞的不同因素的影响下，其表达的分子也会发生变化。
通过检测这些分子的变化，可分析细胞功能以及细胞分化状态等。
例如，静止的T淋巴细胞不表达或低水平表达CD69分子；而一经活化，其表达CD69分子数量明显增加。
因此，可通过检测这些活化标志的变化来判定细胞状态以及研究影响细胞活化状态的因素。
4.免疫细胞的分离如前所述，免疫细胞是一组极不均一的群体。
所以在研究免疫细胞功能时，常常需要把某些特异的细胞分离和纯化。
虽然免疫细胞分离的方法很多，但用FACS来纯化特定的细胞群是目前最为有效和方便的手段。
例如，最近颇受关注的CD4+CD25+T 淋巴细胞是一群具有免疫调节（免疫抑制）功能的细胞群。
在对其特点及功能进行研究时，首要的问题是分离该细胞群。
用相应的单克隆抗体与其结合，再用FACS进行分离，就能得到纯度很高CD4+CD25+T淋巴细胞细胞群。
而其他分离方法不仅分离过程烦琐，也很难控制无菌条件及保证细胞纯度。
实验方法流式细胞仪的使用一般分为三个步骤。
第一，是仪器前阶段，包括试剂的准备，细胞制备、细胞的荧光染色；第二，是流式细胞仪阶段，主要是仪器的操作；第三，是结果分析阶段。
（一）细胞和试剂的准备材料（1）细胞样品：来源淋巴细胞或外周血的白细胞。
（2）荧光标记单克隆抗体：常用的有FITC（fluorescein -isothiocyanate）和PE(phycoerythrin)标记的单克隆抗体。
（3）封闭抗体：抗Fc受体抗体免疫细胞表面一般表达有Fc 受体，能和抗体的Fc段结合。
封闭抗体的作用就是阻断荧光标记的单克隆抗体的Fc段与免疫细胞表面Fc受体结合所产生的非特异性的结果。
（1）FACS缓冲液：1×PBS 950mlFCS 40ml10%叠氮钠溶液 10ml（2）仪器缓冲液（FACS-flow）：仪器厂家提供（3）FACS清洁液（FACS clean ）和FACS洗净液（FACS rinse）：仪器厂家提供。
操作步骤（1）单细胞悬液的制备：将1×105~1×107的细胞放入1.5ml离心管中3000r/min 离心5分钟，弃上清；加入FACS缓冲液100μl悬浮细胞。
（2）封闭细胞表面Fc受体：在步骤1中加入Fc受体抗体0.5μl（0.5mg/ml），水浴3分钟。
（3）细胞与荧光抗体结合：在步骤2中加入荧光抗体1μl（0.5mg/ml），水浴30分钟。
（4）洗细胞去除游离的荧光抗体：在步骤3中加入FACS缓冲液350μl，轻轻混匀，3000r/min，离心5分钟，弃上清，重复步骤（4）2次。
（5）上样前处理：取100μl仪器缓冲液加入步骤（4）获得的细胞沉淀中，轻轻混匀悬浮细胞，将细胞悬液移入FACS专用管中，准备进行仪器检测和分析。
（二）仪器的操作以FACSCaliburTM(BD Biosciences)仪器为例。
仪器主要分为主机部分（包括激光激活源，射流，射线探测器）和计算机部分（CELLQuest softwere）。
仪器的操作分为使用前的准备、使用中的操作和使用后的清洗。
1.使用前的准备（1）打开电源：包括系统电源和主机部分电源。
（2）检查供液槽和废液槽：供液槽应含足够的仪器缓冲液，废液槽应在上次使用后清洗干净。
（3）使机器处于负亚状态，才能使细胞悬液被吸入至机器的吸管口。
（4）机器处于可应用状态时，指示灯会变成绿色。
2.使用中的操作（1）计算机部分——使用CELLQuest程序系统软件：设定所要检测细胞的数量：一般设10 000~20 000个细胞。
命名本次实验：一般含使用者的和实验日期。
打开记数部分：显示进入的细胞数以及检测一定量的细胞所需要的时间。
将微机与主机连接：控制检测时的预检测和实际检测。
主机设定：一般是已设定好的适合测定淋巴细胞的条件，包括探测器的电压。
探测器的电压是调空光电倍增管所能检测荧光密度的围。
选择检测的波长和表达方式（plot）：如果用一种荧光抗体，一般选直方图（histogram）(表11-1)：如果用两种荧光抗体，常选点状二维图（dot plot）或轮廓线图（contour plot）表CD69分子表达检测直方图的数值说明a.anti-CD3(-)检测结果marke r Left,rightevents%gated %totalmean Geo,meanCV medianPeak ChAll 1,9910 10000 100.00 100.012.06 4.59 1453.37 3.22 1 M1 1,105 9969 99.69 99.69 8.04 4.53 134.41 3.22 1M2 105,9910 31 0.31 0.31 1304.57309.78 223.13 164.0112b.abti-CD3(2ng/ml)检测结果marker Left,right events %gated %total mean Geo,mean CV median PeakCh All 1,9910 10000 100.00 100.00 200.53 48.90 193.68 61.53 1M1 1,100 5776 57.76 57.76 24.41 11.69 109.22 12.86 1M2 100,9910 4237 42.37 42.37 440.31 344.57 114.76 361.90 417c.abti-CD3(10ng/ml)检测结果marker Left,right events %gated %total mean Geo,mean CV median PeakCh All 1,9910 10000 100.00 100.00 236.90 74.05 155.88 113.42 495 M1 1,90 4602 46.02 46.02 25.13 12.83 101.67 14.42 1M2 90,9910 5425 54.25 54.25 415.81 327.83 102.28 349.12 495CD4及CD8细胞点状二维图结果quad events %gated %total Xmean Xgeo.mean Ymean Ygeo.meanUL 1614 16.14 16.14 3.68 2.99 346.86 291.03UR 7425 74.25 74.25 99.38 76.39 308.36 256.26LL 558 5.58 5.58 4.00 3.39 9.91 6.88LR 403 4.03 4.03 123.32 93.65 7.14 4.35不同的荧光物要求选择不同的激发波长，参见下表用于FACS的荧光物荧光物激发波长（nm）FITC 525(green)PE 575(orabge-red)RED613 610(red)PI 620(red)PerCP 650(red)TRI-COLOR 650(red)CyChrome 670(red)(2)细胞的吸入：将装有细胞的FACS测定管放置到机器吸管孔处。
先预检测样品，然后进行实际检测。
可根据细胞的浓度选择测定的速度（低、中或高）。