CT26结肠癌耐药动物模型
CT26结肠癌耐药动物模型
分别取生长状态良好的 CT26、CT26/5- Fu/ADM（化疗后 91 d 肿瘤细胞），胰酶消化制备成单细胞悬液，浓度调整 5× 104 个/ml，接种到 96 孔板中（每孔 100 μl），于 490 nm 处检 测各孔的吸光值（OD 值），连续观察 7 d，实验重复 3 次。以培 养时间为横轴，吸光值为纵轴，绘制生长曲线，计算细胞倍增 时间。 1.3 MTT 法检测化疗前后肿瘤细胞对化疗药物的敏感性
小鼠CT26结肠癌耐药动物模型的建立
（ —ｌ ｏ ｒ ｅ ，—Ｐ 外排功能。结果 ： Ｐ ｇ ｃｐｏ ｉ Ｐ ｇ ） ｙ ｔｎ 耐药株 的倍增时间 比亲本细胞株长 ， 化疗后肿瘤对放线 菌素 Ｄ Ａ Ｔ 、 （ Ｃ ）阿霉素（ Ｄ 、 Ａ Ｍ）长 春新碱 （ Ｃ 、 Ｖ Ｒ）羟基喜 树碱（ Ｐ 、一氟尿 嘧啶（ 一 ｕ 、 ＨＣ Ｔ）５ ５ Ｆ ）柔红霉素（ Ａ 、 Ｄ Ｍ）依托泊甙 （ Ｐ ６ 的 Ｒ 分别为 ２ －、６ 、０９ ７０ Ｖ Ｉ） １ ９３２ ． １．、．、 ４ ５８３ 、．， ．、． ２ 敏感性降低 。 ０ ８ 耐药株 ＭＤ Ｉ Ｎ Ｒｂ ｍＲ Ａ表达水平 比亲本细胞株高 ， 对柔红霉素的外排能力明显高于亲本细胞株。结论 ： 本
实验 成 功建 立 肿 瘤 多 药耐 药 的 动 物模 型 ， 为化 疗后 肿 瘤 继 发 多药 耐 药 问题 的研 究提 供 动 物模 型 ， 为提 高 化疗 效 果 研究 奠 定 基 础 。
【 关键词 】 多药耐药 ； 动物模型 ； 化疗 【 中国图书分类法分类号 】 ７ — Ｒ ３３ 【 文献标识码 】 Ａ 【 收稿 日期 】０ ９ ０ — ２ ２０ — ３ ０
（ ｅ ａｔ ｅ ｔｆＰ ｄａ ｉ Ｓ ｒｅｙ Ｃ ｉ ｒｎ ｓ ｏｐｔ ， ｈ ｎ ｑｎ Ｄ ｐ ｒｎｎ ｅ ｉ ｒ ｕｇ ｒ ，ｈｌ ｅ ’ Ｈ ｓｉ ｌＣ ｏｇ ｉ ｒ ｏ ｔｅ ｄ ａ ｇＭｅ ｉａ Ｕ ｉ ｒｉ ） ｄｃ ｎｖ ｓ ｙ ｌ ｅ ｔ
【 ｂｔ ｃ］ ｂｅｔ ｅＴ ｓ ｂｉ ｅ ｕ ｉｒｇ ｅｉａｔ ｎｍ ｌ ｏ ｅｏ Ｔ ６ｃｌ ａｃｒ ｅｓｉ ｍｃ ｉ ｅ ｓ ｏ ｅ ｔｅａｙ Ａ ｓａｔＯ ｊｃｉ ：ｏｅｔ ｌｈｔ ｈｄｕ ｓ ｔ ｉａ ｍ ｄｌ ｆ ２ ｏ ｎｃｎｅ ｌ ｉ ｗｔ ｔ ｅ ｆ ｈｍｏ ｒｐ． ｒ ｖ ａ ｓ ｈｍ ｒ ｓ ｎａ Ｃ ｏ ｃ ｌ ｎ ｅ ｈｈ ｕ ｃ ｈ
小鼠结肠癌模型
Novel Murine Model for Colon Cancer:Non-OperativeTrans-Anal Rectal Injection 1Melissa Donigan,B.S.,*,†Laurie S.Norcross,M.D.,‡,§John Aversa,D.O.,‡,§Jimmie Colon,M.S.,*Joshua Smith,*Rafael Madero-Visbal,M.D.,*Shuan Li,M.D.,*,§Neal McCollum,M.D.,*,§Andrea Ferrara,M.D.,‡,§Joseph T.Gallagher,M.D.,‡,§and Cheryl H.Baker,Ph.D.*,†,2*Cancer Research Institute of M.D.Anderson Cancer Center Orlando,Orlando,Florida;†Burnett School of Biomedical Sciences,University of Central Florida,Orlando,Florida;‡Colon and Rectal Clinic,Orlando,Florida;and §Orlando Regional Medical Center,Orlando,FloridaSubmitted for publication April 11,2008Background.This study was conducted to develop a modified murine model of colon cancer that is non-operative.Currently,the most accurate orthotopic murine model of colon cancer requires an invasive procedure involving cecal injection of colon cancer cells and therefore limits the ability to perform immu-nological studies subsequent to cecal resections.Materials and methods.Murine colon cancer (CT26)cells were injected submucosally into the distal,pos-terior rectum of BALB/c mice.Care was taken not to pass transmurally into the pelvic cavity.Different magnifications (10؋versus 100؋)were used for injec-tion,and primary tumor growth and metastatic dis-ease were studied.Results.In the initial study,3/7mice injected using 10؋magnifications had notable,large tumor originat-ing from the rectal wall,and histology revealed that all excised tumors were poorly differentiated adeno-carcinoma.In the second study,8/10mice injected us-ing 100؋magnifications had notable tumor originat-ing from the rectal well,and 4/8mice had abnormal lung tissue with pathological evidence of hemorrhagic pulmonary edema.The use of 10؋magnification re-sulted in 43%tumor take.In sharp contrast,80%tumor take was observed with 100؋magnification.The over-all success of tumor take was 65%using the trans-anal rectal injection model.Conclusions.Our modified orthotopic murine model of colon cancer offers an alternative non-operativemurine model for colon cancer and is less invasive than the traditional orthotopic model (i.e.,cecal injec-tion).This model may allow for more accurate inves-tigations of inflammation and immune responses to surgical intervention without the influence of previ-ous abdominal surgery.©2009Elsevier Inc.All rights reserved.Key Words:colon cancer;orthotopic murine model;non-operative injection of cancer cells.INTRODUCTIONIt was estimated that in 2007over 1,500Americans would die of cancer each day.As the third most common cancer in both men and women,colon cancer represents 10%of these cancer-related deaths [1].Despite earlier detection and dropping death rates in colon cancer,112,340new cases were estimated for 2007[1].The most common treatment for colon and rectal cancer is surgical resection,followed by adjuvant therapy with oxaliplatin,5-fluorouricil,and leucovorin.Early detection can provide a 5-y survival rate of up to 90%,and surgery is most often curative.However,if patients present with distant me-tastasis at the time of diagnosis,the 5-y survival rate drops to only 10%[1].Since its inception in the early 1990s,laparoscopy has been an alternative technique to the more tradi-tional open laparotomy for colorectal pa-roscopic surgery incorporates a much smaller incision (ϳ2cm)than either hand-assisted laparoscopic (ϳ5–8cm)or open surgery (ϳ30cm).Some of the benefits of minimally invasive surgery include a shorter hospital stay,less pain,and a quicker return of bowel function [2].However,concerns for safety and adequate onco-logic resection slowed the acceptance of laparoscopy as1Melissa Donigan and Laurie S.Norcross contributed equally to this manuscript.2To whom correspondence and reprint requests should be ad-dressed at Cancer Research Institute of M.D.Anderson Cancer Center Orlando,110Bonnie Loch Court,Orlando,FL 32806.E-mail:cheryl.baker@ .Journal of Surgical Research 154,299–303(2009)doi:10.1016/j.jss.2008.05.0282990022-4804/09$36.00©2009Elsevier Inc.All rights reserved.a safe option in most colorectal settings,most notably in colorectal cancer.Since then,several large-scale ex-periments comparing traditional open surgery(open laparotomy)to minimally invasive surgery(laparo-scopic and hand-assisted laparoscopic)have been con-ducted.With the publication of the COST(Clinical Outcomes of Surgical Therapy)trial[3]published in the New England Journal of Medicine in2004and the “Barcelona Trial”[4]published in Lancet in2002,lapa-roscopic surgery became accepted as a safe alternative to traditional open laparotomy for colorectal resection. Both trials demonstrated that patients undergoing laparoscopy had either equivalent or better cancer-related survival compared with patients with major open laparotomy.Some believe that the possible bene-fits of minimally invasive surgery(i.e.,shorter recovery period,less pain,and earlier return of bowel function) may be related to the patient’s immune and cytological responses,such as serum protein concentration,cyto-kinefluctuations,as well as tumor growth,metastasis, and recurrence.Although minimally invasive surgical techniques have been widely accepted by the medical community,there is still active debate concerning the possible immunological benefit of limited surgical trauma with minimally invasive surgery.Preclinical evaluation and comparison of traditional open laparotomy and minimally invasive surgical tech-niques on the effects on colon cancer and metastasis require animal models.To date,there are multiple mu-rine models for the study of colon cancer[5,6].The orthotopic murine model,which involves injection of tu-mor cells into the cecum of mice,is one of the most accurate representation of human colon cancer[6].This orthotopic model requires a surgical incision for injection of cancer cells,and therefore,an initial immune response following this surgical model would limit the feasibility and reliability of future research goals of measuring im-mune responses following open or minimally invasive cecal resections.Therefore,the traditional cecal injection model must be modified to involve a non-operative ap-proach for injection of colon cancer cells(to establish a primary tumor).Previous studies have demonstrated that colon can-cer can be established orthotopically after the induc-tion of colitis[7].This enema model,however,requires initial induction of colitis to allow invasion of intralu-minal cells,leading to a significant inflammatory re-sponse.In addition,other laboratories developed a mu-rine model of rectal cancer using an intra-rectal injection,which resulted in minor lymph node metas-tasis noted in18%of animals[8].Despite their avail-ability,these models of colon cancer are not widely used and are not reliable models for preclinical evalu-ation of future immunological studies subsequent to cecal resection,most often performed clinically.In this article,we describe a trans-anal injection of colon cancer cells in BALB/c mice.The method is similar to the intra-rectal injection[8]but is performed with a few modifications.This modified orthotopic murine model that does not require abdominal surgery for injec-tion of colon cancer cells makes it a reliable and clinical relevant technique to study the inflammation and im-mune response subsequent to cecal resection.Further-more,in contrast to the colitis and intra-rectal murine models of colon cancer,this novel technique has the po-tential to allow for the study of metastasis and possible tumor recurrence following open laparotomy or the much debated minimally invasive surgical techniques.MATERIALS AND METHODSCell Line and Culture ConditionsThe murine colon cancer CT26cells were obtained from the Amer-ican Type Culture Collection(Manassas,VA).In brief,these cells were initially induced in a BALB/c mouse by chemical carcinogen, and stable cell lines were established[9].The murine colon cancer CT26cells have been demonstrated to be highly metastatic to the liver and lungs[10].Cells for injection were obtained from frozen stocks and maintained in Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)supplemented with10%fetal bovine serum(FBS),sodium bicarbonate,and a penicillin–streptomycin mixture(Invitrogen, Carlsbad,CA)for no more than12weeks.To account for the influ-ence of inflammatory cytokine(i.e.,IL-6,IL-1)production by the FBS in cell culture,enzyme-linked immunosorbent assays were car-ried out on different FBS concentrations.Results show(unpublished data)that FBS cytokine levels are below the detection limit,indicat-ing that the levels of cytokines present in the FBS are negligible. Adherent monolayer cultures were maintained on plastic at37°C in 5%CO2and95%air.All cultures were free of Mycoplasma and the following pathogenic murine viruses:retrovirus type3,pneumonia virus,K virus,Theiler’s encephalitis virus,Sendai virus,min virus, mouse adenovirus,mouse hepatitis virus,lymphocytic choriomenigi-tis virus,ectromelia virus,and lactate dehydrogenase virus(assayed by Microbiological Associates,Bethesda,MD).Animals and Animal CareMale BALB/c mice were purchased from the National Cancer Institute(NCI)Animal Program of Charles River Laboratory(Fred-erick,MD).The mice were housed and maintained in specific pathogen-free conditions and facilities approved by the American Association for Accreditation of Laboratory Animal Care,and in accordance with current regulations and standards of the United States Department of Agriculture,United States Department of Health and Human Services.The mice were used in accordance with institutional guidelines when they were8–12wk old.Preparation of Cell Suspension for Injection Murine colon cancer CT26cells were harvested from near-confluent cultures by a brief(3-min)exposure to0.5%trypsin and0.02%EDTA (Invitrogen).Trypsinization was stopped with DMEM containing10% FBS,and the cells were concentrated with centrifugation and resus-pended in DMEM containing10%FBS.Trypan blue staining was used to assess cell viability,and only cell suspensions consisting of single cells withϾ90%viability were used for the injections.300JOURNAL OF SURGICAL RESEARCH:VOL.154,NO.2,JUNE15,2009Trans-Anal InjectionMale BALB/c mice were anesthesized with100mg/kg ketamine and50mg/kg xylazine.Mice then received a gentle anal dilation using blunt-tipped forceps at the anal opening.A29-gauge syringe was used to inject2.5ϫ104CT26cells,suspended in DMEM with 10%FBS,submucosally into the distal,posterior rectum.The injec-tion was performed approximately1–2mm beyond the anal canal and into the rectal mucosa,which minimizes the chance of establish-ing anal tumors.In addition,care was taken not to pass transmu-rally into the pelvic cavity.Mice were observed for1h until fully recovered and were then monitored three times weekly for tumor burden.In thefirst experiment,seven mice were injected by using operating loupes(Designs for Vision,Inc.,Ronkonkoma,NY)with 10ϫmagnification and sacrificed on post-injection day17.In a sec-ond experiment,10mice were injected using a100ϫmagnification (Leica MC16F microscope;Leica Microsystems,Bannockburn,IL) and then sacrificed on post-injection day20.Necropsy,Tissue Preparation,and Hemotoxylinand Eosin StainingMice were killed by CO2inhalation on day17(experiment#1)or day20(experiment#2).After dissection and removal of the tumor (rectum),rectal wall,and lungs,the tissue samples were photo-graphed and prepared for histological analysis.For hematoxylin and eosin(H&E)staining procedures,the tissue samples werefixed in formalin(rectum and rectal wall)or bouins(lungs)and embedded in paraffin.All slides were reviewed by a board-certified pathologist.A normal BALB/c mouse,which had not received prior injection or surgical intervention,was dissected for normal anatomy description of the injection site.Images were collected using the100ϫmagnifi-cation(Leica MC16F microscope).RESULTSFormation of Colon Cancer in Distal Posterior RectumIn afirst set of preliminary in vivo injection studies, the investigators performed trans-anal injections on BALB/c mice using trypan blue as an indicator of in-jection location.Due to systemic dissemination of the trypan blue dye,the investigators carried out another set of preliminary in vivo studies,using India Ink.The success of injection was apparent on dissection.Subse-quent to these studies,murine colon cancer CT26cells were injected submucosally into the distal,posteriorrectum of another set of BALB/c mice(Fig.1A).As illustrated in Fig.1B,the injections were performed approximately1–2mm beyond the anal canal and into the rectal mucosa.The short,smooth,white epithelial tissue of the anal canal can clearly be identified as a separate tissue plane from the pink mucosa of the rectum.The submucosal injections were performed into the rectum proximal to the anal canal.In thisfirst set of experiments,7mice were injected with CT26 cells using10ϫmagnification(operating loupes)and killed on post-injection day17.Three of7mice(43%) had notable large tumor originating from the rectal wall.In the second set of experiments,10mice were injected with CT26cells using100ϫmagnification (Leica microscope)and killed on post-injection day20. Eight of10mice(80%)had gross tumor originating from the rectal wall(Fig.2A and B).Even more strik-ing,4of these8mice had the presence of abnormal lung tissue.There was an overall65%successful tumor take using the trans-anal,rectal colon cancer injection model. The discrepancy between successful tumor take in exper-iment#1(3/7)and successful tumor take in experiment #2(8/10)is believed to be due to the limitation of the10ϫmagnification used in experiment#1.Therefore,the use of100ϫmagnification is recommended.Histology Analysis of Rectal Tumors and LungsThe rectal walls and lungs from both experiments were examined by a pathologist for the presence of primary tumor and metastasis,respectively.Rectal tu-mors in both experiments showed poorlydifferentiated FIG.1.Non-operative trans-anal injection of murine colon can-cer CT26cells into BALB/c mice.(A)To demonstrate a non-operative approach to an orthotopic murine model of colorectal cancer,a29-gauge syringe was used to inject2.5ϫ104CT26cells,suspended in DMEM with10%FBS,submucosally into the distal,posterior rec-tum of BALB/c mice.(B)A normal BALB/c mouse,which had not received prior injection or surgical intervention,was dissected for an anatomical description of the trans-anal injections.The short, smooth,white epithelial tissue of the anal canal can clearly be identified as a separate tissue plane from the pink mucosa of the rectum.The submucosal injections were performed into the rectum proximal to the anal canal.301DONIGAN ET AL.:NOVEL MURINE MODEL FOR COLON CANCERadenocarcinoma originating in the submucosal tissue (Fig.3).The lung tissue was grossly abnormal when compared with normal lung (Fig.4A),and pathology showed diffuse,severe,hemorrhagic pulmonary edema (Fig.4B).There were no gross changes noted in the livers of the mice,therefore no histological examina-tion of hepatic tissue was performed.DISCUSSIONMurine models are useful in evaluation of human colon cancer [5,6],and the importance of orthotopic murine models to study the biology and therapy of neoplasm has been demonstrated [6].Nonetheless,these models tradi-tionally involve abdominal surgery for injection of the cancer cells.The non-operative murine model of colon cancer described in this report compliments the most recently reported murine models and may overcome some limitations (induced by surgery)associated with them.First,we verified that the trans-anal injection of colon cancer cells produces large tumor originating from the rectal wall.Second,we determined that 100ϫmag-nification is necessary to produce a more successful tu-mor take than 10ϫmagnification (80%and 65%,respec-tively).The growth of colon cancer cells within the rectal wall is similar to that observed clinically in patients with colorectal cancer,suggesting that the model is clinically relevant.In addition,changes within the lung paren-chyma were observed in four of eight mice.The appear-ance of pulmonary edema in these specimens is concern-ing and may indicate systemic inflammatory changes (i.e.,systemic inflammatory response syndrome).None-theless,these mice did not clinically appear sicker than the others in the series.These findings are currently under investigation in additional trials using the trans-anal model in a larger cohort of mice.The absence of metastatic disease is most likely due to the number of primary colon cancer cells injected and the termination date of the experiment.To overcome this,studies using a larger number of injected cells and longer periods of time between injection and termination will be performed.The most common treatment for colon and rectal cancer is surgery followed by treatment with chemo-therapy agents (with or without neoadjuvant therapy)[1].Furthermore,if the cancer is confined and no met-astatic disease is present,surgery is most often cura-tive and patients may not have to receive chemother-apy.Surgical resection of colon and rectal cancer can be performed using two techniques:a traditionallaparot-FIG.3.Histology of primary tumor growing orthotopically in BALB/c mice.H&E stains were carried out on the submucosal rectal tumor established 17d after 2.5ϫ104CT26cells were injected submucosally into the distal,posterior rectum of BALB/c mice.All slides showed similar findings of poorly differentiated adenocarci-noma arising in the submucosallayers.FIG.2.Gross primary tumor growing orthotopically in BALB/c mice.(A)Evidence of gross tumor protruding from the rectum of mice 17d after a 29-gauge syringe was used to inject 2.5ϫ104CT26cells submucosally into the distal,posterior rectum.(B)Anatomical dissection of gross tumor originating from the rectal wall of mice on day 17after injection of 2.5ϫ104CT26cells submucosally into the distal,posterior rectum of BALB/c mice.The growth of colon cancer cells within the rectal wall is representative of that observed clinically in patients with colorectal cancer,suggesting that the model is clinically relevant.302JOURNAL OF SURGICAL RESEARCH:VOL.154,NO.2,JUNE 15,2009omy with a large abdominal incision or newer mini-mally invasive techniques with significantly smaller incisions and laparoscopic instruments.The clinical benefits of laparoscopic surgery have been repeatedly proven throughout surgical literature.It is accepted that colorectal cancer patients undergoing minimally invasive surgical techniques have a shortened length of hospital stay,require less postoperative pain medica-tions,and have a shorter time to return of bowel func-tion and tolerating a diet.Additionally,some studies have suggested a potential benefit in cancer-free sur-vival,disease progression,recurrence,and metastasis in certain patients undergoing laparoscopic colon re-section for colon cancer,specifically in advanced onco-logic stages [3,4].The proven benefits of these mini-mally invasive surgeries may be related to the patient’s immune response.Therefore,these observed clinical differences need further evaluation,including assess-ment of the immunological differences in patient re-sponse to open and laparoscopic colon resection.Previously reported murine studies have shown that,in mice receiving an abdominal incision,there was a reduced cell mediated immune response as compared with mice receiving anesthesia alone [11].In addition,a significant increase in tumor growth was observed in mice receiving surgical intervention as compared with control [12,13].We have developed a murine model of colon cancer that involves a trans-anal injection of colon cancer cells which does not require abdominal surgery for injection.This model will provide a more accurate,unaltered in vivo tumor growth pattern for colon and rectal cancer.In the end,future in vivo studies involving cecal resections (i.e.,open laparot-omy or minimally invasive)and their associated im-munological benefits are now possible.ACKNOWLEDGMENTSWe thank Donna Schade (M.D.Anderson Cancer Center Orlando)for helping with preparation of this manuscript.REFERENCES1.American Cancer Society.Anonymous Cancer Facts and Fig-ures 2007.2.Lee SW,Whelan RL.Immunologic and oncologic implications of laparoscopic surgery:What is the latest?Clin Colon Rectal Surg 2006;19:5.3.Nelson H,Sargent DJ,Wieand S,et al.A comparison of lapa-roscopically assisted and open colectomy for colon cancer.N Engl J Med 2004;350:2050.4.Lacy AM,Garcia-Valdecasas JC,Delgado S,et paroscopy-assisted colectomy versus open colectomy for the treatment of non-metastatic colon cancer:A randomized ncet 2002;359:2224.5.Rashidi B,Gamagami R,Sasson A,et al.An orthotopic mouse model of remetastasis of human colon cancer liver metastasis.Clin Cancer Res 2000;6:2556.6.Heijstek MW,Kranenburg O,Borel Rinkes IH.Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.Dig Surg 2005;22:16.7.Takahashi T,Morotomi M,Nomoto K.A novel mouse model of rectal cancer established by orthotopic implantation of colon cancer cells.Cancer Sci 2004;95:514.8.Kashtan H,Rabau M,Mullen JB,et al.Intra-rectal injection of tumour cells:A novel animal model of rectal cancer.Surg Oncol 1992;1:251.9.Corbett TH,Griswold DP,Roberts BJ,et al.Tumor induction relationships in development of transplantable cancers of the colon in mice for chemotherapy assays,with note of carcinogen 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CT26细胞系移植瘤模型、高淋巴转移肿瘤模型的建立及评价的开题报告
CT26细胞系移植瘤模型、高淋巴转移肿瘤模型的建立及评价的开题报告一、研究背景癌症是一种常见的疾病，其中部分癌症具有高度的转移性。
目前，对于高淋巴转移肿瘤的研究尚不够深入。
CT26细胞系是一种分化程度低、高度转移的结直肠癌细胞系，具有广泛的应用价值。
因此，建立CT26细胞系移植瘤模型以及高淋巴转移肿瘤模型，对于研究高淋巴转移肿瘤的机制以及建立有效的治疗方案具有重要意义。
二、研究目的本研究的主要目的是建立CT26细胞系移植瘤模型以及高淋巴转移肿瘤模型，并评价其模型的可靠性和适用性。
其中，移植瘤模型用于研究CT26细胞系在体内形成转移瘤的过程，而高淋巴转移肿瘤模型则用于深入探究高淋巴转移肿瘤的生物学特性以及制定有效的治疗方案。
三、研究内容1.建立CT26细胞系移植瘤模型将CT26细胞根据细胞密度的需要，注射入小鼠皮下或肌肉内，观察移植瘤的生长情况，记录生长曲线，并测定体积和重量。
2.建立高淋巴转移肿瘤模型将CT26细胞注射到小鼠尾静脉中，随后观察淋巴结转移和肝、肺等远处转移的情况。
通过对小鼠血清和淋巴液中肿瘤标志物的检测，评估肿瘤转移的程度。
3.模型评价对模型进行数据统计和分析，评价模型的可靠性和适用性，并比较两种模型的差异。
同时，利用CT检查和病理学检测对模型进行确认，确保结果的准确性。
四、研究意义建立CT26细胞系移植瘤模型以及高淋巴转移肿瘤模型，有利于研究高淋巴转移肿瘤的机制，探究转移及其发生机制，同时有助于筛选新的治疗方法和药物。
该研究有望为临床治疗提供新的思路和手段，为结直肠癌及其他高淋巴转移性肿瘤的治疗和治疗监测提供新的方法和参考依据。
小鼠结肠癌完整组织块原位种植及肝转移模型的建立方法
中国中西医结合消化杂志
Ｖｏｌ ２０ Ｎｏ ７Ｐ３０４
２０１２ 年 ７ 月
Ｃｈｉｎ Ｊ Ｉｎｔｅｇｒ Ｔｒａｄ Ｗｅｓｔ ＭｅｄLeabharlann Ｄｉｇ Ｊｕｌｙ ２０１２
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－０３８Ｘ．２０１２．０７．００５
Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｍｉｃｅ ｒａｐｉｄｌｙ．［Ｍｅｔｈｏｄｓ］Ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＣＴ２６ｏｆ ｍｉｃｅ ｃｏｌｏｎ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｗａｓ ｉｎｏｃｕｌａ－ ｔｅｄ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｉｎｔｏ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｔｕｍｏｒ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｉｎｔａｃｔ ｔｕｍｏｒ ｔｉｓ－ ｓｕｅ ｗａｓ ｔｈｅｎ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ａｎｄ ｉｍｐｌａｎｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｃｏｌｏｎ ｗａｌｌ ｏｆ ｍｉｃｅ ｔｏ ｓｅｔ ｕｐ ａ ｍｏｄｅｌ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｐｌａｎｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｒａｔｅ，ｌｏｃａｌ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｅａｃｈ ｗｅｅｋ，Ｆｉｖｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｋｉｌｌｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｗｏ ｗｅｅｋｓ，ｔｈｒｅｅ ｗｅｅｋｓ， ａｎｄ ｆｏｕｒ ｗｅｅｋｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．［Ｒｅｓｕｌｔｓ］Ａ １００％ ｉｍｐｌａｎｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｒａｔｅ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｍｏｄ－ ｅｌ．Ｔｈｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ｗｅｒｅ １００％ ａｆｔｅｒ ３ｗｅｅｋｓ．Ｅｍａｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ａｆｔｅｒ ４ ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅ ｍｅｄｉａｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｔｉｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇ ｍｉｃｅ ｗａｓ ２９ ｄａｙｓ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｔｕｍｏｒ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｍｏｄｅｌ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｕｓｅｆｕｌ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ．
凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠血清免疫因子水平以及免疫细胞增殖、活性的影响
凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠血清免疫因子水平以及免疫细胞增殖、活性的影响孙朝文;张广钰;赵辰;成怀福;钟漓;戴凌【摘要】目的探讨凋亡大肠癌CT26细胞对小鼠血清免疫因子水平以及免疫细胞增殖、活性的影响.方法取对数生长期大肠癌CT26细胞制备凋亡、坏死肿瘤细胞.取Balb/c小鼠20只,分离T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞、获取巨噬细胞,并制备细胞毒性T淋巴细胞(CTL).将小鼠CTL、NK细胞、巨噬细胞分别经相应肿瘤细胞处理后,均分为凋亡肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组,应用51Cr释放实验测定各组CTL、NK细胞、巨噬细胞的活性,细胞计数(CCK-8)法检测各组CTL、NK细胞和巨噬细胞的增殖情况.另选取Balb/c小鼠分为凋亡肿瘤细胞组、坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组各10只,分别将凋亡、坏死、对数生长期CT26细胞按通过皮下及静脉输注小鼠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清可溶性Fas(sFas)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)4、IL-10、IL-12、转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平.结果与坏死肿瘤细胞组及肿瘤细胞对照组比较,凋亡肿瘤细胞组中不同效靶比的CTL、NK细胞及巨噬细胞活性均降低(P＜0.05).CCK-8法检测结果显示,凋亡肿瘤细胞组的CTL、NK细胞及巨噬细胞的A450值均低于坏死肿瘤细胞组、肿瘤细胞对照组(P＜0.05).ELISA检测显示凋亡肿瘤细胞组sFas相对表达量低于坏死肿瘤细胞组和肿瘤细胞对照组(P＜0.05).凋亡肿瘤细胞组IL-4表达水平高于肿瘤细胞对照组(P＜0.05),IL-10、TGF-β表达水平则高于其他两组(P＜0.05),IL-12表达水平低于其他两组(P＜0.05).结论凋亡大肠癌CT26细胞能够抑制小鼠特异性CTL、NK细胞、巨噬细胞增殖及其活性,影响大肠癌小鼠正常免疫功能.【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2016(038)010【总页数】6页(P1337-1342)【关键词】大肠癌;CT26细胞;细胞毒性T细胞;自然杀伤细胞;巨噬细胞;可溶性Fas 【作者】孙朝文;张广钰;赵辰;成怀福;钟漓;戴凌【作者单位】桂林医学院附属医院胃肠外科,桂林市541001;桂林医学院附属医院胃肠外科,桂林市541001;桂林医学院附属医院胃肠外科,桂林市541001;桂林医学院附属医院胃肠外科,桂林市541001;桂林医学院附属医院胃肠外科,桂林市541001;桂林医学院附属医院胃肠外科,桂林市541001【正文语种】中文【中图分类】R735.3大肠癌是最为常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率位居全球恶性肿瘤第3位[1]。
小鼠结肠癌肝转移模型的构建
ByDONGCP2015-03-17C6-/-转基因小鼠肠癌脾肝转protocol研究目的以C6-/-转基因小鼠为受试动物，评价补体系统抑制后对鼠CT26.WT肠癌脾肝转移模型的影响。
试验动物C6-/-转基因小鼠。
小鼠以C6-/-转基因小鼠与C57BL6Crossbreed十代以上。
实验材料麻醉剂：水合氯醛（或者戊巴比妥钠替代），生理盐水注射器：1ml注射器，2-5ml注射器手术器械：固定班，胶带，止血钳，眼科镊，手术缝合针术后：青霉素，电热毯（也可以无），纱布试验方法1, 小鼠肠癌CT-26细胞悬液的制备。
取对数生长期细胞，用0.25% 胰蛋白酶消化收集细胞，PBS或者无血清培养基洗涤重悬制成单细胞悬液。
台盼蓝染色测定活细胞率≥95%，细胞浓度为：1X10^7/只。
个人感觉是70-80%细胞活力最强。
注意将收集好的细胞放置于冰盒内。
2，小鼠麻醉与固定。
麻醉剂水合氯醛，一次配制10ml（10ml生理盐水融入0.38g水合氯醛）。
注射时候按照0.01ml/g体重注射。
麻醉后用胶带固定在手术展板上。
20g可以考虑0.25ml腹腔注射。
3，脾脏注射切脾组小鼠左上腹行横切口约6mm，逐层剥离进腹后于腹外侧找到柳叶状脾脏，小心显露脾脏，使脾上托于切口外用1ml注射器5号针头从脾上极进针约3mm，注意进针与脾脏平行，将肿瘤细胞悬液注入至脾被膜下，每只缓慢注入细胞浓度为1X10^7/ml细胞悬液0.2ml,可见注射部位脾被膜发白肿胀，待白色肿胀被膜消退后拔出针头压迫止血2分钟（结扎脾蒂,切除脾脏）查无出血，逐层关腹。
黄色字体步骤为切除脾脏方案的操作3，仔细缝合，两层缝合。
缝合后伤口用青霉素涂敷。
也可追加青霉素溶液注射，注射单位参考青霉素说明书。
注意：术中保持脾脏表面湿润，用5ml注射器滴加生理盐水。
术后小鼠的保暖工作对生存有一定影响。
可以用电热毯辅热。
小鼠结肠癌肝转移模型的构建
小鼠结肠癌肝转移模型的构建杨扬;李乃卿【摘要】目的建立适合基因表述谱研究的小鼠结肠癌肝转移模型.方法将小鼠结肠癌细胞(C26)悬液接种于BALB/C小鼠脾内,分为切脾组和保脾组,观察小鼠生存时间及腹腔内肿瘤生长情况.结果切脾小鼠自然生存期11～15d,平均(13.05±0.71)d,保脾小鼠自然生存期9～15d,平均(11.64±1.49)d.小鼠肝脏转移率均为100%.切脾小鼠肝各叶完全被肿瘤占据,保脾小鼠脾内肿瘤巨大,肝内转移多为散在的米粒大小瘤结节转移.结论用于基因表达谱研究的小鼠结肠癌肝转移模型应采用脾内注射切脾法.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2010(008)017【总页数】2页(P53-54)【关键词】结肠癌;肝转移;动物模型【作者】杨扬;李乃卿【作者单位】广东省中山市人民医院,528400;北京中医药大学东直门属医院,100700【正文语种】中文【中图分类】R-332随着分子生物学的深入研究，基因芯片作为基因组及后基因组时代的主要研究技术，已成为揭示药物作用机制的重要方法。
基因芯片检测技术的前提是成功而适用的动物模型，首先需要获得足够的RNA检测量，所以成功的造模方法是研究课题成败的关键所在。
下面就我们近期进行的结肠癌肝转移的造模方法总结如下。
1 材料和方法1.1 材料1.1.1 实验动物4～6周龄体质量20～24g的BALB/C小鼠雄性（♂）81只，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号：京动许字（2000）第004号总049号，在Ⅱ级动物实验室饲养。
1.1.2 瘤株小鼠结肠癌C26细胞株（美国引进，广安门医院肿瘤实验室惠赠）。
经3次皮下接种传代后，无菌条件下摘取瘤体，生理盐水洗涤，剪成小块，匀浆，离心后取沉淀，反复3次，培养于10%新生牛血清和RPMI1640培养液（含青霉素100U/mL、链霉素100U/mL），置37℃、含5%CO2培养箱中3d，每日换液。
《2024年CT26.WT结肠癌细胞对RAW264.7巨噬细胞增殖及分化的影响》范文
《CT26.WT结肠癌细胞对RAW264.7巨噬细胞增殖及分化的影响》篇一一、引言结肠癌作为一种常见的消化系统恶性肿瘤，其发生与发展往往伴随着多种复杂的生物学过程。
近年来，越来越多的研究开始关注肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用。
在免疫系统中，巨噬细胞作为重要的免疫细胞之一，在肿瘤微环境中扮演着重要的角色。
因此，研究CT26.WT结肠癌细胞对RAW264.7巨噬细胞增殖及分化的影响，有助于我们更深入地理解肿瘤与免疫系统的相互作用机制。
二、材料与方法1. 细胞系本实验采用CT26.WT结肠癌细胞系和RAW264.7巨噬细胞系。
2. 实验方法（1）细胞培养：使用DMEM培养基培养CT26.WT结肠癌细胞和RAW264.7巨噬细胞，分别以适当的比例将两种细胞进行共培养。
（2）细胞增殖检测：采用MTT法检测共培养后巨噬细胞的增殖情况。
（3）流式细胞术：通过流式细胞术检测共培养后巨噬细胞的分化情况。
（4）免疫荧光染色：利用免疫荧光染色技术观察共培养后巨噬细胞的形态变化。
三、结果1. 细胞增殖情况共培养后，我们发现CT26.WT结肠癌细胞的存在对RAW264.7巨噬细胞的增殖具有显著影响。
与单独培养的巨噬细胞相比，共培养条件下巨噬细胞的增殖率明显降低。
这表明CT26.WT结肠癌细胞的分泌物或代谢产物可能对巨噬细胞的增殖产生了抑制作用。
2. 巨噬细胞分化情况流式细胞术检测结果显示，共培养后RAW264.7巨噬细胞的分化情况发生了明显变化。
与单独培养的巨噬细胞相比，共培养条件下巨噬细胞向M1型（经典活化型）和M2型（替代活化型）分化的比例均有所增加。
这表明CT26.WT结肠癌细胞可能通过某种机制诱导巨噬细胞的分化。
3. 形态学观察通过免疫荧光染色观察共培养后的巨噬细胞形态，我们发现共培养条件下巨噬细胞的形态发生了明显变化，表现为胞体变大、突起增多等现象。
这可能与巨噬细胞在肿瘤微环境中的活化状态有关。
四、讨论本研究表明，CT26.WT结肠癌细胞对RAW264.7巨噬细胞的增殖及分化具有显著影响。
IDO抑制剂NLG919联合伊立替康抗小鼠结肠癌CT26研究
因子［４，８－９］．鉴于 ＩＤＯ在肿瘤免疫耐受的形成和维 持中所发挥的重要作用，其已经成为抗肿瘤免疫治 疗的新靶点［１０］．然而，临床前研究结果提示，ＩＤＯ抑 制剂单用的肿瘤杀 伤 活 性 较 弱，抑 制 率 在 ３０％ ～ ５０％［１１］．为提高 ＩＤＯ抑制剂的临床治疗效果，将其 与化疗药物联合使用是一种重要的策略 ． ［１２］
免疫逃逸是肿瘤发生与转移的重要生物学机 制，是影响肿瘤临床治疗效果的重要因素［１］．以“逆 转肿瘤免疫耐受，激活机体自身免疫系统清除杀伤 肿瘤细胞”为核心的免疫治疗已经成为一种非常有 潜力的治疗手段，已有 ５个靶向免疫检查点（ＣＴＬＡ －４和 ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１）的抗体药物上市，用于一线 或二线治疗多种肿瘤［２－３］．吲哚胺 ２，３－双加氧酶 （ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ２，３ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ，ＩＤＯ，ＥＣ１１３１１４２） 是肝脏外唯一 催 化 色 氨 酸 （Ｔｒｐ）沿 犬 尿 氨 酸 （Ｋｙｎ） 途径分解代 谢 的 限 速 酶［４－５］．ＩＤＯ与 肿 瘤 免 疫 逃 逸 密切相关，可通过多种机制介导肿瘤免疫逃逸：色氨 酸耗竭抑制局部 Ｔ细胞增殖，色氨酸代谢产物促进 Ｔ细胞凋亡，诱导调节性 Ｔ细胞增殖等［５－７］．ＩＤＯ在 结肠直肠癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌、膀胱癌 等多种肿瘤的微环境中高表达，是显著的不良预后
ＮＬＧ９１９，ＣＡＳ：１４０２８３６－５８－１，白色粉末，批号 ２０１６０７３１０１，ＨＰＬＣ鉴定纯度大于 ９８５％，购自上海 瀚香生物科技有限公司．ＮＬＧ９１９化学名为 １－环己 基 －２－（５Ｈ－咪唑并［５，１－ａ］异吲哚 －５－基）乙 醇，分子式为 Ｃ１８Ｈ２２Ｎ２Ｏ，相对分子质量为 ２８２４，化 学结构如图 １所示．ＮＬＧ９１９用 １％羧甲基纤维素钠 （ＳＣＭＣ，ｗ／ｖ）水 溶 液 配 制 成 所 需 浓 度 的 混 悬 液，室 温保存．
结肠癌肝转移裸鼠模型的建立
结肠癌肝转移裸鼠模型的建立李华驰;熊治国;谢敏;谈凯;殷涛;冯茂辉【摘要】目的构建一种转移率高、操作简便、结果可靠的结肠癌肝转移模型,用于结肠癌转移防治的实验研究.方法 15只Balb/c裸鼠平均分为3组(A组、B组、C 组),5只Balb/c小鼠单独为D组,以细胞浓度2.5×107/mL的HCT116、CT26细胞悬液0.2 mL分别行脾种植保脾法及切脾法构建结肠癌肝转移模型,对比四组动物模型造模成功率及肝转移灶大小、数目及腹腔内转移情况.结果 A组裸鼠造模成功率100％(5/5),肝及脾均成瘤,肝转移瘤数目较少,较分散,多分布于肝右叶,生存时间平均为(26.6±3.4)d;B组裸鼠造模成功率40％(2/5),转移瘤分散于肝表面,体积较A 组大,生存时间平均为(36.8±4.2)d;C组裸鼠造模成功率100％(5/5),肝及脾均成瘤,肝转移瘤数目较多,多个转移瘤融合成团,占据整个肝右叶,生存时间平均为(20.2±2.6)d;D组肝未发现转移灶.三组裸鼠部分出现腹腔转移(A组2只,C组3只),均未出现心、肺、脑、肾转移灶.3组裸鼠肝转移瘤组织细胞学形态符合腺癌的特征.结论保脾法能获得较高的造模成功率,能有效模拟人类结肠癌细胞经血行转移至肝的途径和过程.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2019(029)005【总页数】6页(P63-68)【关键词】结肠癌;肝转移;裸鼠【作者】李华驰;熊治国;谢敏;谈凯;殷涛;冯茂辉【作者单位】湖北省肿瘤医院胃肠外科,武汉 430079;湖北省肿瘤医院胃肠外科,武汉 430079;湖北省肿瘤医院胃肠外科,武汉 430079;湖北省肿瘤医院胃肠外科,武汉430079;湖北省肿瘤医院胃肠外科,武汉 430079;武汉大学中南医院胃肠外科,武汉430000【正文语种】中文【中图分类】R-33结肠癌血行转移最常见的靶器官是肝，约50%以上的患者最终会出现肝转移[1]。
siRNA沉默PARG基因表达对小鼠结肠癌CT26细胞肝转移影响的开题报告
siRNA沉默PARG基因表达对小鼠结肠癌CT26细
胞肝转移影响的开题报告
开题报告：
1. 研究背景
结肠癌是一种高发病，且易转移的癌症，肝转移是结肠癌患者最常见的治疗失败的原因。
因此，寻找有效的治疗手段来预防和治疗结肠癌肝转移具有重要意义。
2. 研究目的
本研究旨在探究siRNA沉默PARG基因表达对小鼠结肠癌CT26细胞肝转移的影响及其可能的机制。
3. 研究方法
3.1 细胞培养
采用无血清DMEM培养小鼠结肠癌CT26细胞。
3.2 siRNA转染
采用Lipofectamine 2000转染剂将siRNA转染至CT26细胞中，以沉默PARG基因表达。
3.3 免疫荧光染色
采用免疫荧光染色分析PARG基因的表达情况。
3.4 细胞增殖实验
采用MTT实验或CCK-8实验检测细胞增殖速率。
3.5 动物实验
将CT26细胞接种至小鼠体内，分为siRNA组和对照组，治疗一定时间后切除小鼠肝脏，进行组织学和免疫荧光染色分析。
4. 预期结果
本研究预期结果为：siRNA沉默PARG基因表达可以抑制小鼠结肠癌CT26细胞肝转移，并且可能通过影响血管生成和细胞凋亡等机制实现。
5. 结论
本研究的结果可以为预防和治疗结肠癌肝转移提供新的治疗手段，为结肠癌患者的治疗带来新希望。
5-氟尿嘧啶在小鼠结肠癌模型中的药效与毒性评价研究
5-氟尿嘧啶在小鼠结肠癌模型中的药效与毒性评价研究唐雪莲;付京花;PARK Hyun;杨新颖【摘要】为探讨5-氟尿嘧啶的药效、毒性与给药剂量之间的关系,采用BALB/c小鼠来源的CT26结肠癌细胞株构建小鼠结肠癌模型,分别给予10、20、30和50 mg/kg剂量的5-氟尿嘧啶,分析其抗肿瘤效果、对小鼠体质量的影响和死亡率等指标.结果表明,5-氟尿嘧啶的体内抑瘤效果及毒性与剂量密切相关.综合分析评价各指标,认为20～ 30 mg/kg剂量的5-氟尿嘧啶较适合于小鼠结肠癌模型中的药效评价.%To investigate the relationship of anticancer effects, toxicity and dose, tumor syngeneic models were made from murine colorectal adenooarcmoma cell line CT26 derived from BALB/c mice. Mice were treated with various doses (10, 20, 30 and 50 mg/kg) of 5-fluorouracil (5-FU) , and the indexes were analyzed, including the anti-tumorigenic effects, body mass and mortality of mice. The results showed that the efficacy and toxicity of 5 -FU was closely related to the doses, and the proposal dose was 20 - 30 mg/kg which may be the optimal dose for drug research in tumor syngeneic model of mice.【期刊名称】《华南农业大学学报》【年(卷),期】2012(033)004【总页数】4页(P535-538)【关键词】5-氟尿嘧啶;药效;毒性;结肠癌【作者】唐雪莲;付京花;PARK Hyun;杨新颖【作者单位】华南农业大学动物科学学院,广东广州510642;华南农业大学动物科学学院,广东广州510642;韩国圆光大学医学院,全罗北道益山 570749,韩国;中国科学院上海药物研究所,上海201203【正文语种】中文【中图分类】R73-3结肠癌是世界上致死率较高的疾病之一.在美国，结肠癌在癌症病人的死亡率中位居第二位［1-2］.尽管5-氟尿嘧啶、奥沙利铂、依立替康等有一定的毒性，但它们仍然是临床常用的几种抗结肠癌药物［3-5］.在抗肿瘤新药研究中，体内试验是必要的.5-氟尿嘧啶常被用作阳性药来间接评价新药的药效，但不同研究者采用5-氟尿嘧啶作为阳性药时使用的药物剂量不一［6-8］.剂量不同，5-氟尿嘧啶的药效与毒性差异很大，若试验中选用的剂量不合适，可能会因药效不好或毒性过大引起动物死亡率过高进而发挥不了阳性药的对照效果.本文对5-氟尿嘧啶在小鼠结肠癌模型中的药效与毒性进行研究，评价5-氟尿嘧啶的药效和毒性与给药剂量之间的关系，得到适合的剂量，以期为5-氟尿嘧啶在体内结肠癌模型研究中作为阳性药时的剂量选择提供参考.1 材料与方法1.1 试剂与材料细胞培养试剂为Invitrogen公司(美国)产品，5-氟尿嘧啶(Sigma公司，美国)用无菌生理盐水配制，其他常规化学试剂均为Sigma公司(美国)产品.1.2 细胞培养BALB/c小鼠来源的CT26细胞株购自韩国细胞库(the Korean Cell Line Bank，韩国，首尔).采用含体积分数为10%胎牛血清的RPMI1640培养液于37℃ 体积分数为5%的CO2培养箱培养，培养液中含青霉素(100 U/mL)和链霉素(100μg/mL).1.3 动物及分组动物试验在韩国圆光大学医学院实验动物中心进行.5周龄雌性BALB/c小鼠50只(SPF级，购自Orient Bio.公司，韩国，首尔).按后续试验操作，随机分为5组. 1.4 小鼠体内结肠癌模型的制备及药物效果观察小鼠皮下结肠癌模型参考文献［9］方法制备.取培养的CT26细胞用无血清RPMI1640调整为2×103μL-1注射于小鼠右前腋下的皮下部位，观察肿瘤的生长情况，待1周后各组肿瘤直径为4～5 mm时，将荷瘤小鼠随机分为5组;1组为空白对照组，腹腔注射生理盐水，每日1次，连续5 d;另外4组按体质量分别腹腔注射10、20、30、50 mg/kg的5-氟尿嘧啶，每日1次，连续5 d.定期称小鼠体质量，给药前一天记为第0天，第0天的荷瘤小鼠的体质量为初始体质量，不同天数的体质量变化率根据公式［(测定体质量/初始体质量)×100%］计算.每隔3 d用游标卡尺测量肿瘤的直径，按照公式(长×宽2)/2计算肿瘤体积，待对照组肿瘤直径为15 mm时［10］，将所有小鼠用乙醚麻醉后，分离肿瘤，摘取肺、脾、胸腺、肝称质量，用体积分数为10%的甲醛固定后，石蜡包埋，切片，HE染色，显微镜下观察肿瘤及各组织的形态学变化.1.5 数据处理与统计学分析所有数据采用“平均值±标准误”表示.统计学检验采用SPSS 12.0软件包单因素方差分析处理.2 结果2.1 5－氟尿嘧啶抗肿瘤效果在小鼠体内结肠癌模型中，5-氟尿嘧啶表现出剂量依赖性抗肿瘤效果(图1)，10 mg/kg剂量组有一定的抑制趋势，但效果不显著;20和30 mg/kg剂量组与对照组相比差异显著，尤其是30 mg/kg组，在第15天时，抑瘤率达56%.50mg/kg组的肿瘤体积与给药前相比几乎没有变化，其抑制效果最显著.从肿瘤切片的结果也可观察到相似的结果，10 mg/kg组与空白组相似，20 mg/kg组肿瘤细胞主要聚集于肿瘤块周围，中央的细胞大部分坏死，30和50 mg/kg组坏死面积更大(图2).图1 5-氟尿嘧啶抗肿瘤效果Fig.1 Anti-tumor effects of 5-fluorouracil in mice 2.2 5－氟尿嘧啶对小鼠体质量和存活率的影响从表1中可以看出，空白组体质量在试验期间比较接近初始体质量，而10和20 mg/kg组体质量有所增加;30 mg/kg组先减少，后恢复到接近初始体质量;50 mg/kg组小鼠从第8天开始出现死亡，至第10天仅有2只小鼠存活，但状态特别差，体质量大幅下降，此时处死取样，用作切片分析.表1 小鼠体质量变化率及死亡率1)Tab.1 Changes in body mass and mortality of mice1)n=10，给药前一天为第0天，第0天的荷瘤小鼠的体质量为初始体质量，不同天数的体质量变化率根据公式(测量体质量/初始体质量×100%)进行计算.处理体质量变化率死亡率/%对照组100.00±5.97 100.31±5.00 101.77±4.15 101.81/%第0天第3天第5天第8天第10天第12天第15天.1668.90±1.05 100±4.71 102.87±3.98 102.30±6.18 101.86±6.95 0 10 mg/kg组100.00±2.71 101.01±2.98 101.06±2.86 103.18±3.97 105.03±4.23107.06±4.84 106.32±6.42 0 20 mg/kg组100.00±2.68 101.39±3.25100.93±2.98 102.28±3.81 105.72±3.34 108.00±3.98 109.94±6.28 0 30mg/kg组100.00±2.93 99.21±2.52 97.04±2.78 84.68±3.67 88.80±6.60 97.08±7.31 102.18±5.82 0 50 mg/kg组100.00±2.74 100.04±2.8292.35±2.16 74.23±32.3 5－氟尿嘧啶对小鼠各组织的毒性肺、脾、胸腺、肝等各组织的质量指数见表2.除50 mg/kg组外，肺和肝的质量变化不大，但脾和胸腺指数却有明显改变.组织切片染色结果发现，除50 mg/kg 组有轻度的炎症损伤外，各组的肺的病理变化很小(图2).脾和胸腺在10和20 mg/kg组没有变化，但在30和50 mg/kg组有明显的淋巴坏死及淋巴数目减少的变化(图2).肝脏的病理变化最明显，即使在10 mg/kg组也有局部的炎性渗透，其他组更加明显，50 mg/kg组炎性渗透范围更大甚至出现坏死(图2).图2 小鼠肿瘤及不同组织HE染色结果Fig.2 Representative images following hematoxylin and eosin(HE)staining of tumor and the tissues in mice3 讨论表2 小鼠各脏器质量变化1)Tab.2 Mass changes of the tissues of mice1)除50 mg/kg组n=2外，其余各组n=10;脾(胸腺)指数=［脾(胸腺)质量×1 000］/［体质量×10］;* 示与对照组比较0.05水平差异显著，＊＊示与对照组比较0.01水平差异极显著，t检验.0.18±0.01 1.18±0.29 0.21±0.03 1.26±0.14 10 mg/kg 组0.19±0.02 1.24±0.19 0.19±0.05 1.24±0.10 20 mg/kg组0.18±0.021.32±0.22 0.18±0.05 1.29±0.16 30 mg/kg组0.19±0.042.03±0.47＊＊0.11±0.03＊＊1.31±0.10 50 mg/kg组0.14±0.02＊＊4.30±0.38＊＊0.05±0.01＊＊1.01±0.18/g对照组组别 m肺/g 脾指数胸腺指数 m肝*体内试验在抗肿瘤新药研究中非常必要，癌症的临床治疗，5-氟尿嘧啶常被用作阳性药来间接评价新药的药效.剂量不同，5-氟尿嘧啶的药效与毒性差异很大，若试验中选用的剂量不合适，可能会因药效不好或毒性过大引起动物死亡率过高进而发挥不了阳性药的对照效果.本研究结果发现5-氟尿嘧啶的体内抑瘤效果与剂量密切相关，毒性也是如此.10 mg/kg剂量的抑瘤效果较差.50 mg/kg剂量抑瘤效果最好，但毒性特别大，动物的死亡率高，不适合使用.从抑瘤效果看30 mg/kg剂量比20 mg/kg剂量好，但从体质量变化方面比较，20 mg/kg剂量体质量呈增长趋势，30 mg/kg剂量先下降后增长，且30 mg/kg剂量对脾、胸腺及肝脏等组织有影响，说明30 mg/kg剂量的毒性仍然较大.20 mg/kg剂量抑瘤率虽然较差，但体质量及组织变化很小，尤其是对免疫系统几乎没影响，因此有利于动物利用自身的免疫系统抵抗肿瘤.以上结果表明20～30 mg/kg剂量的5-氟尿嘧啶较适合于小鼠结肠癌模型中的药效评价.关于5-氟尿嘧啶在其他小鼠抗癌模型中剂量的应用也有不同报道.Cusack等［11］在人结肠癌细胞株LoVo裸鼠结肠癌模型中采用5-氟尿嘧啶作为阳性药，其剂量为33 mg/kg，腹腔注射，每周2次，整个试验周期为32 d.Stankova等［12］在人结肠癌细胞株SW-620的裸鼠模型中同样采用了5-氟尿嘧啶作为阳性药，其剂量为20 mg/kg，分别在试验的第 4、8、12、16 天腹腔注射，每天1次.Houghton等［13］对包括5-氟尿嘧啶在内的几种抗肿瘤药物在小鼠抗癌模型中的效果及毒性进行了评价，结果发现5-氟尿嘧啶的最大耐受量是50mg/kg.Ciomei等［14］在人结肠癌细胞株 HCT-116裸鼠肿瘤模型研究中也采用了50 mg/kg的剂量.Harris等［15］在人结肠癌细胞株HT29裸鼠肿瘤模型研究中采用了65 mg/kg的剂量.这些文献报道的剂量与本文有差异主要是因为所采用的动物模型、5-氟尿嘧啶来源以及使用方法不同等因素造成.总之，在试验时，应该根据具体情况合理选择药物的剂量，才能很好地起到阳性药的作用.参考文献［1］GENNARELLI M，JANDORF L，CROMWELL C，et al.Barriers to colorectal cancer screening:Inadequate knowledge by physicians［J］.Mt Sinai Med，2005，72(1):36-44.［2］JEMAL A，SIEGEL R，WARD E，et al.Cancer statistics［J］.CA Cancer J Clin，2008，58(2):71-96.［3］WOLPIN B M，MAYER R J.Systemic treatment of colorectal cancer［J］.Gastroenterology，2008，134(5):1296-1310.［4］OHTSU A.Chemotherapy for metastatic gastric cancer:past，present，and future［J］.J Gastroenterol，2008，43(4):256-264.［5］WILLIAM-FALTAOS S，ROUILLARD D，LECHAT P，et al.Cell cycle arrest by oxaliplatin on cancer cells［J］.Fundam Clin Pharmacol，2007，21(2):165-172.［6］JUNG G R，KIM K J，CHOI C H，et al.Effect of betulinic acid on anticancer drug-resistant colon cancer cells［J］.Basic Clin Pharmacol Toxicol，2007，101(4):277-285.［7］ALEXANDRE J，NICCO C，CHÉREAU C，et al.Improvement of the therapeutic index of anticancer drugs by the superoxide dismutase mimic mangafodipir［J］.J Natl Cancer Inst，2006，98(4):236-244.［8］CUSACK J J，LIU R，XIA L，et al.Neuteboom ST and palladinoMa.NPI-0052 enhances tumoricidal response to conventional cancer therapy in a colon cancer model［J］.Clin Cancer Res，2006，12(22):6758-6764.［9］LUO Xiao-ling，YU Yi-zhi，LIANG An-min，et al.Intratumoral expression of MIP-1 beta induces antitumor responses in a pre-established tumor model through chemoattracting T cells and NK cells［J］.Cell Mol Immunol，2004，1(3):199-204.［10］CHIKKANNA-GOWDA C P，MCNALLY S，SHEAHAN B J，etal.Inhibition of murine K-BALB and CT26 tumour growth using a Semliki Forest virus vector with enhanced expression of IL-18［J］.Oncol Rep，2006，16(4):713-719.［11］CUSACK J C Jr，LIU Rong，XIA Li-jun，et al.NPI-0052 enhances tumoricidal response to conventional cancer therapy in a colon cancer model［J］.Clin Cancer Res，2006，12(22):6758-6764.［12］STANKOVA J，SHANG Ji-jun，ROZEN R.Antisense inhibition of methylenetetrahydrofolate reductase reduces cancer cell survival in vitro and tumor growth in vivo［J］.Clin Cancer Res，2005，11(5):2047-2052. ［13］HOUGHTON J A，CHESHIRE P J.HALLMAN J D，et al.Evaluation of irinotecan in combination with 5-fluorouracil or etoposide in xenograft models of colon adenocarcinoma and rhabdomyosarcoma［J］.Clin Cancer Res，1996，2(1):107-118.［14］CIOMEI M，CROCI V，CIAVOLELLA A，et al.Antitumor efficacy of edotecarin as a single agent and in combination with chemotherapy agents in a xenograft model［J］.Clin Cancer Res，2006，12(9):2856-2861. ［15］HARRIS S M，MISTRY P，FREATHY C，et al.Antitumour activity of XR5944 in vitro and in vivo in combination with 5-fluorouracil and irinotecan in colon cancer cell lines［J］.Br J Cancer，2005，92(4):722-728.。
小鼠梗阻性结肠癌模型的建立与稳定性分析
小鼠梗阻性结肠癌模型的建立与稳定性分析赵雪峰;王艺;许广大【摘要】目的探讨建立小鼠梗阻性结肠癌模型的方法,并验证其稳定性.方法将50只BALb/c小鼠随机分成25只梗阻性结肠癌模型组(研究组)和25只PBS替代癌细胞模型组(对照组),制模后各组小鼠再分成5个亚组,分别在制模3天、7天、10天、14天、21天处死,并采用小鼠一般状态标注法、拟临床癌性肠梗阻监测法及病理学方法比较两组差异.结果研究组制模成瘤率100％(25/25).在小鼠模型一般状态的数据分析中,发现研究组与对照组相比在制模后10天起平均进食量、体重及粪便量明显减少,其差异有统计学意义(P＜0.05).在拟临床癌性肠梗阻监测数据分析中,发现研究组在制模后7天起平均腹围、肠道内压力及梗阻上段肠管周径明显高于对照组,其差异有统计学意义(P＜0.05).在病理学检测数据分析中,发现研究组在制模后7d起成瘤,制模后14天起肿瘤环腔生长,并逐渐出现梗阻性结肠癌样改变.结论小鼠梗阻性结肠癌模型的建立方法简便、肠管损伤程度小、可行、安全、死亡率低,且制模稳定性高;反映了临床梗阻性结肠癌的病理生理演变过程,为较理想的动物模型.%Objective To establish of obstructive colon cancer model in BALb/c mice with method and verify its stability.Methods The 50 BALb/c mice were randomized into two groups,25 obstructive colon cancer model group (study group) and 25 PBS replaces cancer cells model group (control group).Mter the model,the mice were divided into five sub-groups,and executed in postoperative 3,7,10,14 and 21 day respectively.BALb/c mice of general conditions,simulative cancerous intestinal obstruction of surveilance method,and histopathological examination were evaluated in two groups.Results The rates of tumor formation was 100.0％ (25/25) inthe study group.BALb/c mice model of general conditions of data analysis,study group had a significantly losses mean foodintake,weight,and excrement in the postoperative 10 days (P ＜ 0.05).The simulative cancerous intestinal obstruction of surveilance method of data analysis,study group showed significantly mean increase obdominal circumference,intestinal pressure,and circumference of the intestinal which located at upper the obstruction site in the postoperative 7 days (P ＜0.05).The histopathological examination of data analysis,tumor formation time was postoperative 7 days,and colon circumferential growth and obstructive colon cancer of times were postoperative 14 days.Conclusion The modified method to establish a BALb/c mice of obstructive colon cancer model are operational simple,reduces intestinal injury,technically feasible,oncological safety,loss mortality,and higher stability.That has basically reflected pathological physiological evolution of clinical obstructive colon cancer,and are desired animal models.【期刊名称】《大连医科大学学报》【年(卷),期】2017(039)006【总页数】5页(P584-588)【关键词】梗阻性结肠癌;小鼠模型;模型稳定性【作者】赵雪峰;王艺;许广大【作者单位】大连大学附属新华医院普通外科,辽宁大连116021;大连大学附属新华医院普通外科,辽宁大连116021;大连大学附属新华医院普通外科,辽宁大连116021【正文语种】中文【中图分类】R735.3+5梗阻性结肠癌(obstructive colon cancer, OCC)是临床上较常见的外科急腹症，约10%～30%结肠癌病人合并有肠梗阻，其中约80%为老年病人[1]。
结肠癌原位瘤模型方法探讨
结肠癌原位瘤模型方法探讨李凌云;张斌豪;张必翔【摘要】目的研究常用结肠癌原位瘤模型方法的优劣,建立稳定的结肠癌原位瘤成瘤模型及肝转移模型.方法采用CT26小鼠结肠癌细胞系直接接种于Balb/c小鼠盲肠浆膜下层,或皮下成瘤后采用组织原位种植接种于小鼠盲肠浆膜下层.分析接种4周后原位成瘤及肝转移发生情况.另外,将CT26细胞分别接种于小鼠的小肠浆膜下和盲肠浆膜下.比较接种后成瘤效果及并发症发生率.结果采用细胞注射和组织种植两种方法的原位成瘤率均为100％(5/5),但细胞注射组原位瘤明显大于组织种植组.细胞注射4周后肝转移率为60％(3/5),而组织种植组没有发生肝转移(P＜0.01).小肠原位种植成瘤率为100％(5/5),但早期肠梗阻发生率为80％(4/5),而盲肠注射组早期未见肠梗阻发生.结论就接种类型而言,细胞原位注射较组织原位种植更适合结肠癌肝转移模型;而就注射部位而言,结肠癌肝转移模型应首选盲肠注射,而非小肠注射.【期刊名称】《腹部外科》【年(卷),期】2016(029)004【总页数】5页(P314-318)【关键词】结肠癌;原位种植;动物模型【作者】李凌云;张斌豪;张必翔【作者单位】434001湖北荆州,荆州市第三人民医院普通外科;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科中心;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科中心;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科中心【正文语种】中文【中图分类】R735.3结肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，而肝转移是结肠癌最常见的转移方式和死亡原因。
结肠癌原位瘤模型可以更好地模拟肿瘤的体内发生发展过程。
原位瘤模型对于结肠癌肝转移尤为重要，因为这一模型可以在体内模拟结肠癌细胞通过门静脉血流进入肝脏的全过程，是目前为止最好的结肠癌肝转移模型。
由于技术难度或者肿瘤生物学特征导致原位瘤肝转移发生率难以达到研究要求，目前结肠癌肝转移模型很多采用脾脏注射肿瘤细胞或者门静脉注射肿瘤细胞。
小鼠结肠癌细胞ct26 培养方法
小鼠结肠癌细胞ct26 培养方法嘿，朋友们！今天咱就来唠唠小鼠结肠癌细胞 CT26 的培养方法。
这可真是个有趣又有点挑战性的事儿呢！你想啊，这小小的细胞，就像是一个个小生命，得精心呵护着它们成长。
首先呢，咱得给它们准备一个舒适的“家”，这就像是给小宝贝准备一个温暖的小窝一样。
得是专门的培养瓶或者培养皿，干净又卫生。
然后呢，就是培养基啦！这培养基就好比是细胞的“食物”，可得营养丰富才行。
就像咱人吃饭得有菜有肉有主食，细胞的“食物”也得搭配好各种成分。
这里面有各种营养物质，能让细胞们吃得饱饱的，有力气生长分裂。
接下来，就是把细胞小心翼翼地放进去啦！这可得轻拿轻放，可别把它们给弄伤了。
这就跟抱小婴儿似的，得温柔点儿。
放进去之后，还得给它们创造一个合适的环境。
温度啊、湿度啊都得控制好。
温度不能太高也不能太低，不然细胞可不乐意了。
湿度也得刚刚好，太干太湿都不行。
这就好比咱人，夏天热了难受，冬天冷了也不舒服，得在一个适宜的环境里才开心呢。
培养的过程中，还得时刻关注着细胞的状态。
看看它们长得好不好呀，有没有啥问题呀。
这就跟咱家长时刻关注孩子的成长一样，有个头疼脑热的就得赶紧想办法。
有时候啊，细胞可能会闹点小脾气，长得不那么顺利。
这时候咱可不能着急，得慢慢找原因，看看是培养基不行啦，还是环境不合适啦，然后对症下药，把问题解决掉。
而且啊，培养细胞可不是一天两天就能完成的事儿，这得有耐心。
就像种一棵小树苗，得天天浇水施肥，等它慢慢长大。
培养细胞也是一样，得一天天看着它们变化，看着它们越来越多。
哎呀，想想看，从那么小小的一个细胞，慢慢培养成一大片，这多有成就感啊！就像看着自己的孩子一点点长大一样开心。
总之呢，培养小鼠结肠癌细胞 CT26 可不是件容易的事儿，但只要咱细心、耐心，给它们提供最好的条件，它们一定能茁壮成长的！咱也能从中学到好多知识和技巧呢！怎么样，是不是很有意思呀？赶紧去试试吧！。
片仔癀对小鼠结肠癌细胞增殖及肝转移的抑制作用
片仔癀对小鼠结肠癌细胞增殖及肝转移的抑制作用郑良朴;曹治云;陈旭征;林薇【期刊名称】《福建中医药》【年(卷),期】2016(047)005【摘要】目的观察片仔癀对小鼠结肠癌细胞(CT26)增殖及肝转移的抑制作用. 方法用MTT法观察片仔癀对CT26的增殖抑制作用,以BALB/c小鼠为研究对象,用脾脏注射法建立结肠癌CT26小鼠肝脏转移瘤模型,随机分为对照组、片仔癀组,观察各组小鼠的生存状态等一般情况,分析脾脏、肝脏成瘤情况,计算成瘤率.结果片仔癀对CT26增殖有明显的抑制作用,并呈剂量依赖关系;脾脏注射法成功建立CT26肝转移的动物模型,成瘤率100％,1周内对小鼠一般情况没有明显影响;片仔癀能抑制CT26肝转移作用. 结论脾脏注射法建立的CT26肝转移小鼠模型可用于结肠癌肝转移的研究,片仔癀对CT26增殖及肝转移有明显的抑制作用.【总页数】2页(P16-17)【作者】郑良朴;曹治云;陈旭征;林薇【作者单位】福建省中西医结合老年性疾病重点实验室,福建福州350122;福建中医药大学中西医结合研究院,福建福州350122;福建中医药大学中西医结合研究院,福建福州350122;福建中医药大学中西医结合研究院,福建福州350122;福建省中西医结合老年性疾病重点实验室,福建福州350122;福建中医药大学中西医结合研究院,福建福州350122【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.小鼠肝B220~+/DEC205~+树突状细胞对结肠癌肝转移的影响 [J], 柯奇周;王娅兰;于红2.力达霉素对小鼠结肠癌生长及其肝转移的抑制作用 [J], 刘秀均;戴垚;商悦;李毅;甄永苏3.小鼠结肠癌肝转移模型的建立及其活化肝星状细胞的表达 [J], 朱巍莹;张学利;陈宗祐n;夏蓓莉;陈忠清;项建斌4.槐果碱联合奥沙利铂对裸鼠结肠癌肝转移抑制作用的实验研究 [J], 张晓微;杨宇慎;赵雪峰5.四君子汤对结肠癌肝转移小鼠Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用研究 [J], 马漪;谢琼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《靶向c-Met的CAR-T细胞对人结肠癌细胞的作用》
《靶向c-Met的CAR-T细胞对人结肠癌细胞的作用》一、引言结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，其发病率在全球范围内呈上升趋势。
目前，针对结肠癌的治疗手段主要包括手术、化疗和放疗等，但治疗效果仍不尽如人意。
因此，研究新的治疗方法和策略对于提高结肠癌的治疗效果具有重要意义。
近年来，CAR-T细胞疗法在肿瘤免疫治疗领域取得了显著的进展，其中靶向c-Met的CAR-T细胞在结肠癌治疗中显示出巨大的潜力。
本文将探讨靶向c-Met的CAR-T细胞对人结肠癌细胞的作用及其机制。
二、c-Met与结肠癌c-Met是一种受体酪氨酸激酶，在多种肿瘤中高表达，包括结肠癌。
c-Met的过度表达与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移密切相关。
因此，针对c-Met的靶向治疗成为结肠癌治疗的一个重要方向。
三、CAR-T细胞疗法CAR-T细胞疗法是一种新兴的免疫治疗方法，通过基因工程改造T细胞，使其表达特异性抗体结构域，从而识别和杀伤肿瘤细胞。
CAR-T细胞具有高度的特异性和杀伤力，在多种肿瘤治疗中取得了显著的疗效。
四、靶向c-Met的CAR-T细胞对人结肠癌细胞的作用靶向c-Met的CAR-T细胞通过识别并结合人结肠癌细胞表面的c-Met蛋白，进而引发T细胞的杀伤作用。
这种治疗方法可以有效地抑制结肠癌细胞的增殖、侵袭和转移，从而达到治疗结肠癌的目的。
具体而言，靶向c-Met的CAR-T细胞的作用机制包括以下几个方面：1. 识别与结合：CAR-T细胞表面的c-Met特异性抗体结构域能够识别并结合人结肠癌细胞表面的c-Met蛋白，从而实现靶向杀伤。
2. 激活T细胞：结合c-Met后，CAR-T细胞被激活，释放一系列细胞因子和酶类物质，如穿孔素、颗粒酶B等，进而诱导肿瘤细胞凋亡。
3. 抑制肿瘤生长与转移：通过激活的CAR-T细胞，能够有效地抑制结肠癌细胞的生长和转移，降低肿瘤负荷。
4. 协同作用：CAR-T细胞可以与其他免疫细胞协同作用，增强对肿瘤细胞的杀伤效果。
BALBc小鼠结肠癌血性腹水模型的建立及机制探讨
１．１ 实验动物 雌性 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠 ２０只，由北京维通利华生物
科技股份有限公司提供，周龄 ６～８周，体质量 １６～ １７ｇ。ＳＰＦ条件下饲养，所有饮用水、饲料及笼具均 经无菌消毒处理。 １．２ 肿瘤细胞
表达绿色荧光蛋白鼠结肠癌 ＣＴ２６细胞株由安 泰康生物技术（北京）有限公司提供，培养于含 １０％ 胎牛血清、１００Ｕ／ｍｌ青霉素及 １００μｇ／ｍｌ链霉素的 ＤＭＥＭ完全培养基内。 １．３ 肿瘤细胞悬液的制备
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【摘要】 目的 通过腹腔注射建立结肠癌血性腹水的动物模型，探究结肠癌血性腹水的生成机制。方法 以 ＢＡＬＢ／ｃ雌性小鼠为实验对象，通过腹腔注射鼠结肠癌 ＣＴ２６细胞株建立结肠癌血性腹水动物模型，观察小鼠不 同时间腹水产生情况，并留取标本做组织病理学检查。结果 小鼠出血性腹水率可达 ９５％（１９／２０），腹水色暗红， 质浑浊，成瘤率 ９５％（１９／２０），腹水中可见肿瘤细胞。结论 通过小鼠腹腔内接种鼠结肠癌 ＣＴ２６细胞株可成功建 立结肠癌血性腹水动物模型。
ＤＯＩ：１０．１３９３５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｓｊｚｘ．１９０４１６ 作者单位：北京中医药大学东方医院，北京 １０００７８ 通讯作者：左明焕，Ｅｍａｉｌ：ｚｕｏｍｈ＠２６３．ｎｅｔ
课题组尝试通过腹腔注射的方法建立 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠 结肠癌血性腹水模型，为今后探索结肠癌血性腹水 的产生机制、提高临床疗效奠定实验基础。
【关键词】 血性腹水；腹腔注射；结肠癌；动物模型 【中图分类号】Ｒ２８５ 【文献标识码】Ａ
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＢＡＬＢ／ｃＭｉｃｅＣｏｌｏｎＣａｎｃｅｒＡｓｃｉｔｅｓＭｏｄｅｌａｎｄＭｅｃｈａｎｉｓｍ Ｄｉｓｃｕｓ
ｓｉｏｎ
ＺＨＥＮＧＪｕｎ－ｃｈａｏ，ＦＥＩＰｅｎｇ－ｆｅｉ，ＦＥＮＧＢａｏ－ｙｕｅ，ＺＨＯＵＱｉｎ，ＺＵＯＭｉｎｇ－ｈｕａｎ
表达抗PD-1抗体的溶瘤病毒在结肠癌腹腔移植瘤模型中的抗肿瘤作用
表达抗PD-1抗体的溶瘤病毒在结肠癌腹腔移植瘤模型中的抗肿瘤作用刘文琦;胡宗风;李淑珍;李劲风;李小鹏【期刊名称】《烟台大学学报（自然科学与工程版）》【年(卷),期】2024(37)2【摘要】为了研究表达小鼠抗PD-1抗体(VT1093M)的溶瘤病毒对结肠癌腹腔移植瘤模型的抗肿瘤作用,利用BALB/c小鼠成瘤的小鼠结肠癌CT26-luc细胞株建立了结肠癌腹腔移植瘤模型。
接种后第8天进行分组,设置生理盐水(normal saline,NS)组、病毒VT09X组和VT1093M组,每组5只,注射剂量为2.5×10^(7)pfu/250μL,NS注射250μL,每隔一天注射一次,共注射5次。
末次注射后6 d,脱颈处死小鼠,提取外周血中CD45^(+)细胞和腹水细胞,进行体外杀伤实验。
治疗组初次出现荧光消失后第13天,进行再挑战实验。
结果表明,造模实验确定最佳接种条件为200μL的2.5×10^(6)个/mL细胞悬液;药效实验中,VT09X组和VT1093M组较NS组具有明显的肿瘤抑制效果,VT1093M组治疗期间出现肿瘤消失情况,较VT09X组抑瘤效果明显,但差异无统计学意义;再挑战实验中,VT1093M组均未出现肿瘤再次生长;在体外杀伤实验中,注射病毒组的外周血CD45^(+)细胞在靶效比为1∶40时对CT26-luc杀伤效果明显,对4T1细胞,各组杀伤效果较差。
因此,重组溶瘤病毒VT1093M在结肠癌腹腔转移瘤模型中具有显著的抗肿瘤作用,且能激发小鼠产生较为持久的特异性免疫反应。
【总页数】8页(P199-206)【作者】刘文琦;胡宗风;李淑珍;李劲风;李小鹏【作者单位】烟台大学药学院(烟台大学)【正文语种】中文【中图分类】R735.35【相关文献】1.PD-1抗体联合低剂量白蛋白结合紫杉醇对肺癌裸鼠移植瘤抗肿瘤作用的实验研究2.溶瘤流感病毒联合PD-1抗体增强对肝癌的抗肿瘤活性研究3.药动学/药效学模型研究抗CD3/EpCAM双特异性抗体M701在人结肠癌异种移植小鼠中的抗肿瘤作用4.重组溶瘤单纯疱疹病毒对小鼠结肠癌移植瘤的抑制作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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MDR 分为原发耐药和继发耐药，继发耐药是指患者在 初次接受化疗药物时敏感，以后对原药产生耐药并对同类或 作者介绍：桂琳玲（1982-），女，硕士，
研究方向：肿瘤。 通讯作者：金先庆，男，教授，E-mail：etzhl@。
其他类药物产生交叉耐药，其治疗效果递减，称为继发耐药， 原发性耐药和继发性耐药是目前某些临床化疗治疗肿瘤疗 效差的重要原因之一[2]。
5.8、3.0、2.8，敏感性降低。耐药株 MDR1b mRNA 表达水平比亲本细胞株高，对柔红霉素的外排能力明显高于亲本细胞株。结论：本
实验成功建立肿瘤多药耐药的动物模型，为化疗后肿瘤继发多药耐药问题的研究提供动物模型，为提高化疗效果研究奠定基础。
【关键词】多药耐药；动物模型；化疗
【中国图书分类法分类号】R73- 3
【文献标识码】A
【收稿日期】2009- 03- 02
Es tablis hme nt of multidrug re s is tant animal mode l in mice CT26 colon cance r ce lls
GUI Lin-ling，et al （Department of Pediatrie Surgery，Children’s Hospital，Chongqing Medical University）
横坐标代表天数，纵坐标代表 MTT 测得光密度值，根据 公式计算获得化疗前后肿瘤细胞的倍增时间分别为（64.8± 4.2）h 和（70.6±5.17）h，（t=1.2，P>0.05）化疗前后肿瘤细胞 倍增时间有差异（图 2）。 2.3 MTT 检测未化疗和化疗 91 d 后肿瘤细胞对化疗药物敏 感性及对应化疗药物的 RI
重庆医科大学学报 2010 年第 35 卷第 8 期 （Journal of Chongqing Me dical Unive rs ity 20材料与方法
1.1 建立小鼠结肠癌细胞株 CT26 的肿瘤模型及化疗药物 诱导耐药
CT26 小鼠结肠癌细胞株由华西医科大学馈赠，Balb/c 小 鼠购于重庆医科大学动物中心，实验分为实验组和对照组， 每组 7 只，每只接种肿瘤细胞数为 5×105 个，接种部位为右 腋下。接种后第 3 d 对照组给予生理盐水腹腔注射作对照。 而实验组给予化疗药物，5- Fu（上海旭东海普药业有限公司） 0.1 mg/g 腹腔注射，连续 5 d 后间歇一周为一个疗程，连用两 个疗程后改用 ADM（Pharmacia Italia S.P.A）0.01 mg/g，腹腔注 射，每 3 周 1 次。 1.2 生长曲线及倍增时间测定
分别取生长状态良好的 CT26、CT26/5- Fu/ADM（化疗后 91 d 肿瘤细胞），胰酶消化制备成单细胞悬液，浓度调整 5× 104 个/ml，接种到 96 孔板中（每孔 100 μl），于 490 nm 处检 测各孔的吸光值（OD 值），连续观察 7 d，实验重复 3 次。以培 养时间为横轴，吸光值为纵轴，绘制生长曲线，计算细胞倍增 时间。 1.3 MTT 法检测化疗前后肿瘤细胞对化疗药物的敏感性
提取化疗前后原代培养的肿瘤细胞 1×106 个/ml，加柔 红 霉 素 终 浓 度 7.5μg/ml，37℃ 5 % CO2 培 养 箱 内 孵 育 30 min，1 500 r/min，弃培养基，无血清的 D/F12 培养基洗 1 次， 加异搏定终浓度 10μg/ml，终止泵功能，孵育 10 min，1 500 r， 5 min，弃培养基，加 PBS 1 ml，于流式细胞仪上检测，吸光值 570 nm。 1.6 统计学处理
性及耐药指数（Resistance index，RI），RT- PCR 检测化疗前后 MDR1b mRNA 表达情况，流式细胞技 术检测多药耐药蛋白
（P- glycoprotein，P- gp）外排功能。结果：耐药株的倍增时间比亲本细胞株长，化疗后肿瘤对放线菌素 D（ACT）、阿霉素（ADM）、长
春新碱（VCR）、羟基喜树碱（HCPT）、5- 氟尿嘧啶（5- Fu）、柔红霉素（DAM）、依托泊甙（VP16）的 RI 分别为 29.3、26.4、10.9、7.0、
各化疗药物最大浓度为：ADM 1 mg/ml、VCR 10μg/ml、 5- Fu 1 mg/ml、HCPT 0.1μg/ml、DAM1 mg/ml、ACT 0.1 mg/ml、 VP16 0.01 mg/ml 分别按 10 倍比例稀释成 5 个浓度梯度。 MTT 法分别检测 CT26、CT26/5- Fu/ADM细胞对 ADM、5- Fu、 VCR 等药物的敏感性。MTT 法测定肿瘤细胞增值抑制率，计 算耐药指数（Resistance index，RI）。 1.4 RT-PCR 检测化疗前后肿瘤组织与外周血单个核细胞 MDR1b mRNA 表达 1.4.1 引物设计 引物根据已知的 MDR1b mRNA 序列设计 并合成一对扩增引物，PCR 扩增产物 196 bp，上游引物： 5- GCC AAA ATA ACA AGG GTT AGC TT- 3，下游引物：5TGC GAC AGC AGA TAG GCT G- 3。选用 GAPDH 作内参照， PCR 扩增产物 439 bp，GAPDH 上游引物：5- AGC AGT CCC GTA CAC TGG CAA A- 3，GAPDH 下游引物：5- TCT GTA GTG ATG TAA ATG TCC TCT- 3。以上引物由重庆鼎国生物科技有 限公司合成。 1.4.2 RT- PCR Total RNA 提取试剂 TaKaRa RNAiso Reagent 购于宝生物工程（大连）有限公司，按试剂说明书提取总RNA， 紫外光分光光度仪检测总 RNA 含量。ReverTra Ace- α- TM
设检验水准 α=0.05，统计软件使用 SPSS11.5，两组数据 比较，计量资料的 t 检验，P<0.05。
2结果
2.1 对照组与实验组肿瘤生长情况 B 超显示对照组开始化疗后第 21 d 肿瘤生长情况，平均
肿瘤体积（0.63±0.11）cm3，100 %成瘤，彩超显示肿瘤血供丰 富（图 1），第 47 d 时开始出现死亡。实验组于开始化疗后第 21 dB 超未探及肿瘤，化疗后第 35 dB 超显示肿瘤体积（0.48±0.09） cm3。化疗第 49 d，肿瘤体积达到（1.62±0.34）cm3 时开始生长 迅速。小鼠毛发仍较光泽，体重无明显下降，活动度可。化疗 后第 91 d 肿瘤体积（8.76±2.17）cm3。化疗第 91 d，小鼠活动 度明显降低，包块增大明显，毛发稀疏零乱，肿瘤体积大，不 能完整剥离，肉眼可见肿瘤中央明显的出血坏死区域，无 1 例死亡。 2.2 生长曲线和倍增时间
DOI:10.13406/ki.cyxb.2010.08.036
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重庆医科大学学报 2010 年第 35 卷第 8 期 （Journal of Chongqing Me dical Unive rs ity 2010. Vol.35 No.8）
技术与方法 文章编号：0253- 3626（2010）06- 1224- 03
肿瘤细胞多药耐药（Multidrug resistant，MDR）的主要原 因应归于一个高度保守（从细菌到人类）的跨膜蛋白家族某 些成员的过度表达，这个家族以 ATP 结合盒（ATP- binding cassette，ABC）为特征，因此称为 ABC 转运蛋白超家族。ABC 转运蛋白超家族是人类最大的转运蛋白基因家族，编码产物 是一组跨膜蛋白，即 ABC 转运蛋白，ABC 转运蛋白在细胞的 生长发育过程中起着重要的作用[1]。
小鼠 CT26 结肠癌耐药动物模型的建立
桂琳玲，金先庆，罗 庆
（重庆医科大学附属儿童医院普外科，重庆 400014）
【摘 要】目的：化疗药物诱导建立小鼠 CT26 结肠癌多药耐药（Multidrug resistance，MDR）动物模型。方法：建立小鼠 CT26 结肠
癌皮下肿瘤模型，5- 氟尿嘧啶和阿霉素联合化疗，MTT 法绘制化疗前后细胞株的生长曲线、计算倍增时间及对各化疗药物敏感
【Abstract】Objective：To establish the multidrug resistant animal model of CT26 colon cancer cells in mice with the use of chemotherapy. Methods：CT26 colon cancer cells were injected subcutaneously into the right oxters of the mice. Fluorouracil and doxorubicin were combined into chemotherapy. Drown growth curve and calculate doubling generation time，chemotherapeutics drug sensitivity and drug fast index number of the tumor cells before and after chemotherapy were evaluated by MTT method. Levels of MDR1b mRNA were measured by RT- PCR. Eliminate function of P- gp were measured by flow cytometer. Results：Doubling generation time of the persister was higher than the parent cells. Drug resistance indexes were 29.3，26.4，10.9，7.0，5.8，3.0、and 2.8 respectively to ACT，ADM，VCR，HCPT，5- Fu， DAM，and VP16 after chemotherapy and the drug sensitivity were lower .The levels of MDR1b mRNA increased after chemotherapy and P- gp excretive ability was higher than that of no chemotherapy group. Conclusion：The multidrug resistant animal model has established successfully，which provided animal model for our study and research in the acquired multidrug resistance，and established groundwork for the research in increasing the chemotherapy effect. 【Key words】Drug resistance；Animal model；Chemotherapy