赶黄草的有效成分分析

攀枝花学院
学士学位论文开题报告论文题目赶黄草有效成分研究
研究生：马海川
指导教师：龚自端
学号：201310902026
学院：生物与化学工程学院
专业：13级生物工程
二〇一六年十二月
选题的背景及意义
赶黄草为古蔺县地道药材，分布于海拔1000米左右的乌蒙山麓原始森林。

其生长、成活与否对土壤、日照、气温、降水等条件均有严格要求。

赶黄草始载于明代《救荒本草》，具有清热解毒、退黄化湿，活血散瘀，利水消肿之功效，是苗族民间治疗肝病的经验方，苗族人世代习用，称她为“神仙草”。

现代研究表明赶黄草内含多种有效成份均对肝损伤具保护作用，能恢复肝脏功能，减低饮酒及药物对肝脏的损害，抑制肝纤维化、肝硬化，并对甲肝、乙肝、慢性活动性肝炎具有显著的治疗作用。

一、国内外本学科领域的发展现状
赶黄草为虎耳草科，扯根菜，属植物扯根菜的干燥地上部分，始载于明代《救荒本草》，苗族民间历来作为药食两用植物，被誉为“神仙草”。

其性温、味甘、无毒，具有清热解毒、活血散瘀、利水消肿、退黄、平肝的功效，主要分布于华北、华东、中南及陕西、甘肃、四川和贵州等地，近年来逐渐驯化为家种，于四川省泸州市古蔺县境内大量种植。

目前关于赶黄草的化学、药理、临床研究已取得一定进展，以其为原料开发的肝苏片、肝苏颗粒、肝苏胶囊已在临床得到广泛应用，有关赶黄草及其制剂的质量标准评价多为单一的槲皮素、没食子酸或总黄酮测定，扯根菜的化学成分有没食子酸( gullic acid) , 槲皮素( quer cetin) , 槲皮素-3-O-α-L -吡喃李糖苷( quercetin-3-O-α-L -rhiamno side) 、乔松素-7-β-O-D-吡喃葡萄糖苷( pinocembirn-7-O-β-D-g lucoside) 、2 -6 二羟基苯乙酮4-O-β-D-吡喃葡萄糖( 2-6-dihydro x yacetophenon-4-O-β-D-g lucoside ) 、β-谷甾醇( β-sitosterol) 以及两个具有二氢黄酮骨架的化合物。

二、课题主要研究目标、研究内容、预期目标
1.研究目标
提取赶黄草中的活性物质，并进行含量测定，研究其生物学作用。

2.研究内容
本课题的研究内容主要是以下几个方面：
研究内容1
黄酮的提取鉴定
没食子酸的提取鉴定
槲皮素的提取鉴定
山奈酚的提取鉴定
3.实验步骤
黄酮的提取和鉴定：
实验仪器及材料：紫外分光光度仪， TP250型超声波仪，乙醇，高燥的赶黄草。

实验步骤：黄酮含量测定及计芦丁标准液配制，精确称量芦丁(120干燥至恒重)18.8mg,于100mL烧杯中,以60%EtOH溶解,定容于100mL量瓶中,浓度为0.188gL-1。

标准曲线的测定，分别取芦丁标准液0.0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0mL于6只10mL量瓶中,加入60%EtOH使成 5.0mL。

加5%NaNO2 0.3mL,摇匀,放置6min;再加10%Al(NO3)30.3mL,摇匀,放置6min;加4.0mL1.0molL-1NaOH,稀释至10.0mL,摇匀,放置10~15min,在=510nm处测定吸光度A,测得结果如下:当浓度为0.0094,0.0188,0.0376,0.0564,0.0752gL-1时,吸光度A分别为0.1222,0.2394,0.4802,0.6907,0.9619。

以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准吸收曲线。

用最小二乘法经线性回归,得芦丁浓度(c)与吸光度(A)的关系曲线的回归方程式:A=12.611c+0.0008,r=0.9995。

实验步骤：水浴法选定乙醇浓度80%温度80浸渍时间2h进行试
验，固液比1：15。

取浸提液0.1mL于10mL量瓶中,测定吸光度并计算黄酮含量。

●没食子酸的提取鉴定：
实验仪器及材料:高效液相色谱仪分析天平没食子酸对照品甲醇已腈均为色谱纯赶黄草乙醇（分析纯）
实验步骤：选定乙醇浓度80%，225ml，15克赶黄草在80摄氏度下水浴2个小时提取0.1ml提取液稀释到10ml再用HLPC测定其含量再与标准的没食子酸对照品进行比较。

●槲皮素和山柰酚的提取鉴定：
实验仪器及材料：高效液相色谱仪电子天平超声波清洗器超纯水系统槲皮素对照品山柰酚对照品赶黄草甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

实验步骤：对照液的配备精密称取槲皮素10.56mg,山柰酚2.36mg置于50ml的容量瓶中加甲醇定容至刻度摇匀，精密吸取5ml用甲醇定容到10ml容量瓶中即对照液。

供试液的配备称取0.25g赶黄草粉末加入25%盐酸溶液25ml称定质量加热回流1h再称定质量再用25%盐酸补足质量摇匀过滤用0.46微米的滤膜得取滤液。

HLPC 分别精密吸取对照液品和供试液品各10微升进行高效液相色谱测定其含量。