生化反应曲线
化学发光动力学曲线-解释说明
化学发光动力学曲线-概述说明以及解释1.引言1.1 概述化学发光动力学曲线是用来研究化学反应中发光强度随时间变化的曲线。
这种曲线是通过测量反应体系中发光强度的变化来获得的，可以提供有关化学反应速率、反应机制以及反应动力学信息的重要数据。
化学发光动力学曲线的研究涉及到许多不同领域，包括化学、物理和生物学等。
通过对发光动力学曲线的分析，我们可以深入了解化学反应的细节，揭示反应的速率控制步骤和反应机制。
这对于理解生物体内发生的生化过程、药物研发以及环境污染等方面有着重要的意义。
本文将介绍化学发光动力学曲线的构成要素、分析方法以及其在不同领域中的应用。
此外，我们还将总结化学发光动力学曲线在研究中的重要性，并展望未来研究的发展方向。
通过对化学发光动力学曲线的研究，我们可以更好地理解和掌握化学反应的本质，并为实际应用中的问题提供解决方案。
希望本文能够为读者对化学发光动力学曲线的理解提供有益的启示，并促进相关领域的研究和发展。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以这样编写:2. 正文2.1 什么是化学发光动力学曲线2.2 动力学曲线的构成要素2.3 化学发光动力学曲线的应用文章的正文部分是对化学发光动力学曲线进行详细解释和探讨的部分。
其中，2.1节将介绍化学发光动力学曲线的定义和特点。
动力学曲线是指储存着反应速率随时间变化关系的曲线。
在化学发光动力学曲线中，反应速率随着时间的推移会呈现出特定的变化模式，这些模式对于我们研究和理解化学反应过程具有重要的意义。
在本节中，将从基本概念和实验方法等方面对化学发光动力学曲线进行全面介绍。
2.2节将重点阐述构成化学发光动力学曲线的要素。
化学发光动力学曲线的构成要素一般包括曲线的斜率、最大发光强度、半衰期等。
这些要素可以反映出反应速率的变化规律以及反应过程中的重要特性。
具体而言，本节将逐一讨论这些要素的定义、计算方法和物理意义，并通过实例加以说明。
2.3节将介绍化学发光动力学曲线的应用。
AU系列生化分析仪参数详解-图文
AU系列生化分析仪参数详解-图文不过，任何机器都会出问题，也都要保养，保养不够就会遭到报应。
现在的中国人恨不得回到石器时代，拿起来就用，用完不管。
要求所有的机器都做到召之即来，来之能战，战之能胜。
但就是没有保养，也不想维护，更不用说维修了，那是花钱的玩意儿，而前者则是费时费力的事情，也是不愿意做。
其实，严格的保养维护作业，成本并没有增加多少，时间也花费不多，却能得到稳定可信的结果。
所有的生化仪结果问题，大多出在保养和对设备的理解上。
而在设备的理解上，相关名词的理解最为重要，因为它直接引导你的操作，一旦理解错误，那么结果不好也就顺理成章了。
AU系列生化仪从速度上分为400、800、1600、2000速。
从反应盘数量上分为单盘和双盘，也就是800速以下和以上的区别。
单反应盘配套试剂针和样本针各一个，双反应盘则是双倍针配套。
冲洗站都是一组，搅拌系统有两组和一组的区分，AU400/480和2700/5400是一组，AU640/680/5800是两组。
800速以上的机型都是两组光度计，一个灯泡通过光纤分配使用。
以上是简单的机器上面板介绍，下图是AU系列反应曲线的示意图：图1AU系列生化仪反应曲线示意上图可以看出，AU的读点间隔都是18秒，整个反应周期有28个点，也就是28某18=504秒=8.4分钟。
R1+S+R2方式，只能双试剂。
R1加入读点为P0，S加入读点为P1，R2加入读点为P11。
R1至R2时间为11某18=198秒=3.3分钟，S至R2时间为10某18=162秒=3分钟，R2至P27最后反应点时间为16某18=288秒=4.8分钟。
AU的反应时间是固定的，只有28个点，没有长程反应。
搅拌一共进行三次，分别是R1、R1+S、R1+S+R2。
上图是两条曲线，下面那条是试剂空白，上面那条是样本曲线，下面以AU680为例，解释一些AU系列的名词。
1空白概念：AU的空白（Blank）的概念有杯空白，其实这是反应杯的检查，在Photocal里进行，也是水空白（WaterBlank，WB）；实时水空白;试剂空白（ReagentBlank，RB）。
反应速度和反应级数
二、反应级数
• 若反应 pA+qB→mC+nD的反应速度为： v=k[A]p·[B]q
这个反应称为（p+q）级反应； （p+q）称为反应的级数。
也可称这个反应是A的p级反应，或B的q级 反应。
零级反应——p+q=0； 一级反应——p+q=1； 二级反应——p+q=2；
• 对于生化反应： S=y·X+z·P
这些多聚糖类物质由于分子中含有很多的 羟基而具有较强的亲水性,使活性污泥的结 合水高达400%以上,远远高于100%的左右 的正常水平.结果使活性污泥呈粘性的凝胶 状,在二沉池内无法进行有效的泥水分离及 浓缩,因此这种膨胀又称为粘性膨胀. (2)是由于进水含有大量的有毒物质,导致活 性污泥中毒,使细菌不能分泌出足够的粘性 物质,形不成絮体,因此无法在二沉池内进行 有效的泥水分离及浓缩,因此这种膨胀又称 为非粘性膨胀或离散性膨胀.
2.发生污泥膨胀后,二沉池出水的SS将会 大幅度增加,直至超过国家标准,同时导致 出水的COD和BOD也超标。如果不采取 控制措施，污泥持续流失会使曝气池内 的微生物数量锐减，不能满足分解有机
污染物的正常需要，从而导致整个系 统性能的下降，甚至崩溃。如果恢复， 需要从培养、驯化活性污泥重新开始。
污泥膨胀可以通过检测曝气池混合 液的SVI（超过100）、沉降速度3; +级)来判断和预测，而通过观察二沉 池出水悬浮物和泥面的上升变化是最直 观的方法。
3.活性污泥中,丝状菌过度繁殖,会形成丝 状菌污泥膨胀。在正常环境中，菌胶团 的生长速率大于丝状菌,不会出现丝状菌 过度繁殖的现象,但如果活性污泥环境条 件发生不利变化,丝状菌因其表面积较大, 抵抗环境变化的能力比菌胶团细菌强,丝 状菌的数量就有可能超过菌胶团细菌,从 而导致丝状菌.
生化反应动力学 PPT课件
3、可逆抑制作用：
抑制作用可通过透析等方法除去。
• 原因：非共价键结合
可 逆 抑 制
竞争性抑制(competitive inhibition) 非竞争性抑制(non-competitive I.） 反竞争性抑制(uncompetitive I.)
（1）竞争性（Competitive)抑制
I： 抑制剂（ inhibitor）
依据： 能否用透析、超滤等物理方法 除去抑制剂，使酶复活。
1、不可逆抑制作用 ：
不 可 逆 抑 制
抑制剂与酶必需基团以牢固的共价键相连 很多为剧毒物质
重金属、有机磷、有机汞、有机砷、
氰化物、青霉素、毒鼠强等。
2、不可逆抑制剂
非专一性不可逆抑制剂
不 可 逆 抑 制
（作用于一/几类基团） 不可逆抑制剂 专一性不可逆抑制剂 （作用于某一种酶的 活性部位基团）
（2） 专一性不可逆抑制剂
①Ks型 • 具有底物类似的结构——（设计） • 带有一活泼基团：与必需基团反应（抑制）
∵利用对酶亲合性进行修饰
∴亲合标记试剂（affinity labeling reagent）
②Kcat型
•具有底物类似的结构 •本身是酶的底物 •还有一潜伏的反应基团 “自杀性底物”
物之间可能进行的历程。
一、底物浓度对酶反应速率的影响
研究前提
单底物、单产物反应；
酶促反应速度一般在规定的反应条件下， 用单位时间内底物的消耗量和产物的生 成量来表示； 反应速度取其初速度，即底物的消耗量 很小（一般在5﹪以内）时的反应速度； 底物浓度远远大于酶浓度。（[S] 》[E]）
初速度
产 酶促反应速度逐渐降低 物
0
生化需氧量的变化曲线及BOD5的确定
BOD（生化需氧量，mg/L） 0
10.434 4.794 26.79 26.5644 28.1436 37.8444 38.5212
数据分析：稀释后的 BOD5=2.81mg/L，大于 2mg/L，小于 6mg/L，符合《水和废
5
水监测分析方法》要求。
BOD 的变化曲线如下：
The Mutative Curve of BOD
生化需氧量的变化曲线及 BOD5 的 确定
实验第四小组
林廷坤(12324064) 实验时间：8 月 27 号—9 月 2 号
本次实验通过一周测得的数据绘制 DO、BOD 的变化曲线，运用不同的函数模型(最小二 乘法)拟合 BOD 的变化趋势，并预测 UBOD（完全生化需氧量）的数值，以及对实验误 差和实验数据的分析，最后提出实验的改进方法。
（三）将其余溶解氧样品做好标签与标记，统一放入（20±1）℃的培养箱 中保存。
（四）每天取出其中的一个溶解氧瓶，按溶解氧的测定(碘量法)的方法，测
3
定它的溶解氧。记录测定时间。直至将各瓶测定完毕。 （五）溶解氧（DO）的计算： (O2，mg／L)=M*Vx*8*1000/100 式中：M——硫代硫酸钠溶液的浓度(mol／L)；(1 O2—4 Na2S2O3) Vx——滴定样品时消耗硫代硫酸钠溶液的体积(m1)。
或含有剧毒物质时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。 本实验拟采取河涌水样，测定其生化需氧量随时间的变化情况，绘制生化需
氧量的时间变化曲线，通过实验数据和理论推导理解水质指标 BOD5 的物理意义， 并分析试验误差以及改进实验。
三、试剂
（一）硫酸锰溶液（由实验室准备） （二）碱性碘化钾溶液（由实验室准备） （三）浓硫酸（由实验室准备）。 （四）1％淀粉溶液（由实验室准备） （五）重铬酸钾标准溶液 C (1/6 K2Cr2O7)=0.0250 mol／L（由实验室准备） （六）硫代硫酸钠溶液（学生完成）：通过滴定测得 Na2S2O3 的体积 V0=17.7ml。 根据公式 M=10.00*0.0250/V0 可以得出: M（Na2S2O3）=10.00*0.0250/17.7=0.0141mol/L
反应曲线在临床生化检验中的意义
反应曲线在临床生化检验中的意义目的对临床生化检验中反应曲线的意义进行分析和探讨。
方法分别观察临床标本检测、质控品、标准品和试剂空白的检测中出现的反应曲线，对正常反应曲线和异常反应曲线进行对比和分析。
结果在临床生化检验中，反应曲线能够对标本性状、标本检测结果异常、试剂变质、生化分析仪不稳定等情况进行反应。
结论反应曲线对临床生化检验具有重要的意义，有助于迅速地发现异常结果，提高临床生化检验的准确性。
标签：反应曲线；临床生化检验；异常结果在临床中经常用到生化检验来为临床诊断提供必要的依据，这就要求临床生化检验的结果必须准确。
在临床生化检验的每一个环节中，都要严格遵守操作规范，提高临床生化检验结果的准确性[1]。
反应曲线在临床生化检验中能够对异常结果进行反应，及时发现异常结果，使临床生化检验更加科学。
本文对反应曲线对检验仪器、试剂变质、标本检测过程、临床患者标本方面的异常问题进行了分析，现报告如下。
1资料与方法1.1一般资料选取正规厂家生产的、质量合格的生化检测试剂、生化分析仪和校准品，确保其能够通过每天的质检品测验。
1.2方法通过将临床标本检测、质控品、标准品和试剂空白检测中的正常反应曲线和异常反应曲线进行对比，分析异常反应曲线的特点。
反曲线的横轴为时间，纵轴为吸光度，无明显波动、光滑平坦的曲线为正常反应曲线，相反则为异常反应曲线[2]。
2结果2.1反应曲线对生化检验仪器问题的反应在进行临床标本碱性磷酸酶在检测过程中，检测结果是224 U/L。
此时可以发现，反映曲线在试剂2加入后，呈现出了一个向下峰，反应曲线明显异常。
此时再重新检测该标本，曲线无异常波动，检测结果是77 U/L。
此时可以对反应曲线的异常原因进行分析，很可能是第一次检测时检测仪器的状态不稳定导致的。
在进行临床标本直接胆红素的检测时，反应曲线出现异常波动，此时发现在同时段内进行的其他检测的反应曲线也出现了类似的波动，究其原因可能与光源灯的老化或者不稳定有关系。
生化试剂65个项目定标及反应曲线图-BS400
NO.Item剂型方法学定标类型校准品1ALB单试剂终点法两点线性常规生化复合2Ca单试剂终点法两点线性常规生化复合3Mg单试剂终点法两点线性常规生化复合4TG单试剂终点法两点线性常规生化复合5TP单试剂终点法两点线性常规生化复合6TC单试剂终点法两点线性常规生化复合7T-Bil(DSA)单试剂终点法两点线性常规生化复合8D-Bil(DSA)单试剂终点法两点线性常规生化复合9P单试剂终点法两点线性常规生化复合10CO2单试剂固定时间法两点线性常规生化复合11AFU单试剂动力学法K因数法无12ACE单试剂动力学法两点线性自带13ApoA1双试剂终点法Logit-Log(5P)脂类校准品14ApoB双试剂终点法Logit-Log(5P)脂类校准品15C3双试剂终点法Logit-Log(5P)特种蛋白校准品16C4双试剂终点法spline特种蛋白校准品17Crea-S双试剂终点法两点线性常规生化复合18CRP双试剂终点法Logit-Log(5P)特种蛋白校准品19IgA双试剂终点法Logit-Log(5P)特种蛋白校准品20IgG双试剂终点法Logit-Log(5P)特种蛋白校准品21IgM双试剂终点法Logit-Log(5P)特种蛋白校准品22LDL-C双试剂终点法两点线性脂类校准品23Lp(a)双试剂终点法Logit-Log(5P)单独另购24UA双试剂终点法两点线性常规生化复合25UREA双试剂终点法两点线性常规生化复合26PA双试剂终点法spline单独另购27Glu（HK）双试剂终点法两点线性常规生化复合28GLu（POD）双试剂终点法两点线性常规生化复合29T-Bil(VOX)双试剂终点法两点线性常规生化复合30D-Bil(VOX)双试剂终点法两点线性常规生化复合31HDL-C双试剂终点法两点线性脂类校准品32Fe双试剂终点法两点线性自带33HCY双试剂终点法两点线性选择自带34HbA1C/Hb双试剂终点法两点线性选择自带35CysC双试剂终点法Spline选择自带36FER双试剂终点法Spline自带37TRF双试剂终点法Spline自带38IgE双试剂终点法Spline自带39MYO双试剂终点法Spline自带40MALB双试剂终点法Spline自带41β-HB双试剂终点法两点线性自带42UIBC双试剂终点法两点线性自带43RBP双试剂终点法Spline自带44Dimer双试剂终点法Spline自带。
生化分析基础知识
C＝ΔA×F＝ΔA×Vt/Vs×1000/ε，
式中：C：酶活力浓度，单位是U/L， F：换算因子， ε：为毫摩尔消光系数 Vt：为总反应量 Vs：为样品量 ΔA：为每分钟吸光度的变化量
A ＝ lg（I0/It) = εb c
朗伯—比耳定律数学表达式
A＝lg（I0/It)= εb c
式中A:吸光度；描述溶液对光的吸收程度；
b:液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位；
c:溶液的物质的量浓度，单位mol·L－１；
ε:摩尔吸光系数，单位L·mol－１·cm－１；
或:
A＝lg（I0/It)= a b c
2.不同浓度的同一种物质，其吸收 曲线形状相似。而对于不同物质， 它们的吸收曲线形状和λmax则不 同。
吸收曲线的特性：
3.吸收曲线可以提供物质的结构 信息，并作为物质定性分析的依 据之一 4.不同浓度的同一种物质，在某 一定波长下吸光度 A 有差异，在 λmax处吸光度A 的差异最大。此 特性可作为物质定量分析的依据
Sample Reag. at R1 timing
1st. mp
Last mp
2点速率法2-point Rate
• 指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，此两点既非反应初始吸光 度亦非终点吸光度，这两点的单位时间吸光度差值用于结果计算。
例：读点区读点72个由于采用两点速率法2PA，所以不进行线性验证，曲 线的弯曲导致的线性问题并没有引发报警
一点终点法的特点：
1.不包含样本的本底 2.仅进行一个点的测量
生化测定中13例ALT和AST数据不符原因分析及措施
生化测定中13例ALT和AST数据不符原因分析及措施ALT即丙氨酸氨基转移酶，主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌中。
肝细胞或某些组织损伤或坏死，都会使血液中的ALT升高。
AST是天门冬氨基转移酶，也是反映肝脏功能的其中一项指标。
需要注意的是，转氨酶升高的原因有很多，当患者出现有ALT和AST升高的情况后，要先查明病因，再进行针对性的治疗。
资料与方法一般资料：标本来源于我院门诊和住院患者的标本。
仪器：深圳迈瑞BS-400型全自动生化分析仪，试剂为深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供的相配套的酶偶联双试剂。
结果4例样本ALT、AST稀释前后测试情况：见表1。
分类情况：标本分类情况，见2。
讨论测定ALT和AST均为速率法。
速率法是在一定速率下，反应开始时的瞬时速率为初始速率。
由反应物浓度的变化确定反应速率和速率方程式的方法为初始速率法。
将反应物按不同组成配制成一系列混合物。
先只改变一种反应物A的浓度，保持其他反应物浓度不改变。
在某一温度下反应开始，获得CA-t图,确定△t→0时的瞬时速率。
若能获得至少两个不同CA条件下的瞬时速率，即可确定反应物A的反应级数。
同样的方法，可以确定其他反应物的反应级数。
不过由于ALT和AST过高，在到达测定区域前底物已被耗尽，在到达测定区域时酶反应曲线已成为一条平坦的直线，从而使测定结果很低甚至为负值。
在测定过程中，应在程序设置时解决好。
很多仪器在编程中有一试剂质量控制步序，即试剂空白不能不低于1.0，也不能＞2.5。
在加样本后到反应读数结束时不能＜0.6(跟仪器设置)也不能＞2.5。
并且注意反应时间不能太长。
对于经常检查的病员要充分利用计算机的储存和查询功能，对比前后的测试结果，对某些急诊检验项目，如血钾、血糖、血钙等，遇到特别异常结果要与临床医师及时取得联系，以便对病员的紧急处置。
检验工作者应能对一些常见的异常检验结果能够做出合理解释，这就要求具备一定的临床基础知识。
血液标本测定完毕，应至少保留7天，以备临床医师对检查结果有疑惑的复查核对之用，这对寻找检验结果出错原因很有好处。
生化试剂培训完整ppt课件
.
15
二、常见校准方法
（2） 2点线性法 测定校准液1（试剂空白）与校准液2，形 成 线性工作曲线,校准曲线如图2-7所示：
.
16
二、常见校准方法
（3） 多点线性法 通过空白（或校准液1）和校准液（第2校准液及第6校准液）的测定 用线性回归制成线性工作曲线,校准曲线如图2-8所示:
图2-8 多点线性校准曲线（线性）
生化试剂培训教材
.
1
第一部分 基本术语
• 一、临床化学自动分析使用术语
• 1、双波长 由主波长和副波长构成，可以消除对实 验结果的影响。主波长是生成的产物颜色对光吸收 的特有波长。副波长是为消除其他干扰物质在主波 长造成测定干扰所设定的波长。
• 2、反应杯空白 在特定波长下，光通过以蒸馏水 或空气为反应体系所测得的吸光度值。
.
9
一、测试方法
反应曲线; R1
AL AL 1 2
SB B1 B2 B3
( AM AM 1) 2
时间（s）
分析项目：如酶法的肌酐（CRE）等。
图2-3 2点法终点
.
10
一、测试方法
• 2点速率 测定2个测光点，此两点既不测反应初始吸
光度也不是终点吸光度，在单位时间内计算2点 间的吸光度之差用于样本浓度的计算，称为2点 速率法，反应曲线如图2-4所示：
• 5、延迟时间
•
指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。
一般用于两点法和速率法。
• 注意：在速率法和两点法中，延长延迟时间必然缩 短线性监测期，减少测定的线性范围，也易发生底 物耗尽.ALT,AST,BUN,HBDH等负反应试剂 ，浓度 极高时测值不一定是超线性，还有可能是底物耗尽 而导致测值很低，这时要注意看线并且把吸光度界 限设定在0.5 。当有吸光度界限超出报警进行稀释再 测定。一般进行10倍稀释再做，如有超出继续稀释。
生化仪器技术参数
用户名：Server 密 码：3112772 仪 器密码：3112749 参数密码： 3113662
用户名：Server 密 码：3112772 仪 器密码：3112749 参数密码： 3113662
*此仪器延迟和测量时间要适量延长
35，总和150-550，第21点加R2，总点数41.
仪器技术参数
名 仪 器 技 术 称 参 数 备 注 （15-16）14/17点加R2，最大点数42，单试剂从1 14/17点加入R2,反应终点42点。检测 英诺华240/280 点开始计算。周期14秒。反应曲线数据显示44为 点终点法测光点结束时2个点 终点数据。 1点加R1，16点加S，29点加R2，最大点数50，单 1点加R1+S,14-15加R2,反应52点， 英诺华320 试剂从16点开始计算。周期16秒。 14秒/点 实际反应共52点反应曲线(52点之后监测不到） （有的仪器数据终点52点）40个试剂位，60个样 英诺华DS-301 本位，14秒/点。起始加入R1+R2,15点加入样本开 始反应。空白介质选择试剂。（说明书提示：速 率法单试剂25-35点，双试剂35-45点。提供参 1点加R1+R2，第27-28/25-26点加样本S，最大点 数43/47。周期18秒。R=kC+b。设置读点时，终点 法第一点要设置在反应之前。两点法反应点选在 28-48点间。新软件：双试剂R1+S起始加入，23森龙8020 秦工18948152306 24点加入R2.单试剂 R1+S起始加入，2-3反应。 老软件：15秒/点，单双试剂4点开始反应，吸完 R1直接吸R2，在洗针处洗针后直接吸样本后一起 注入反应杯，反应终点测至30点。 1点加R1+R2，第12-13点加样本S，最多测至32 有软件：20秒/点，13点加入样本， 点，数据显示最大点数35。周期22秒。R=kC+b。 20点加入R2，反应终点33点。（测量 设置读点时，终点法第一点要设置在反应之前。 详细数据显示：15点加入样本，22点 森龙8030 试剂位R1、R2同时设置（默认一起设置）。如果 加入R2，反应至35点。与参数设置和 定标是选自动试剂空白，普通样本测试是也要 实际曲线点相差2个点，计算以参数 选，自动空白水80号位置。 和实际曲线点为准） 1点加R1+R2，第8-9点加样本S，最大点数35（数 据监测至40点），周期18秒。R=kC+b。设置读点 森龙8008 杨工18948152302 时，终点法第一点要设置在反应之前。S:2-30 R1:150-300 R2:20-300 单试剂15点加样，双试剂15点加R2，最大读数 35，R=kC+b。设置读点时，终点法第一点要设置 在反应之前。 苟林工程师13452118755
生化反应曲线探讨
生化反应曲线探讨一、生化反应曲线定义生化反应曲线是以时间为横坐标，以反应物浓度的变化为纵坐标，描述生化反应过程中反应物浓度随时间变化的曲线。
它反映了在特定的生化反应条件下，反应物浓度的变化趋势和速率。
通过分析生化反应曲线，我们可以了解生化反应的速率、反应机制、以及反应过程中的调控机制等。
二、生化反应曲线种类根据生化反应过程中反应物浓度变化的特点，可以将生化反应曲线分为以下几种类型：1. 零级反应曲线：反应速率与反应物的浓度无关，反应速率是一个常数。
这种反应曲线通常出现在酶催化的反应中，其中酶的活性不受底物浓度的影响。
2. 一级反应曲线：反应速率与反应物的浓度成正比关系。
这种反应曲线通常出现在底物浓度相对较低的情况下，其中酶的活性受到底物浓度的正反馈调节。
3. 二级反应曲线：反应速率与反应物浓度的平方成正比关系。
这种反应曲线通常出现在底物浓度相对较高的情况下，其中酶的活性受到底物浓度的负反馈调节。
此外，根据生化反应过程中是否出现稳定态，可以将生化反应曲线分为稳态曲线和非稳态曲线。
稳态曲线是指反应过程中各组分的浓度保持不变，而非稳态曲线则是指各组分的浓度随时间发生变化。
三、生化反应曲线的绘制绘制生化反应曲线需要选取合适的实验条件和检测方法，记录不同时间点上的反应物浓度，并将数据绘制成曲线。
在绘制过程中，需要注意以下几点：1. 实验条件要保持一致，以确保实验结果的可靠性。
2. 检测方法要准确可靠，以避免误差对曲线的绘制造成影响。
3. 数据点要均匀分布，以避免出现过度拟合或欠拟合的情况。
4. 曲线要光滑，以方便观察和分析。
四、生化反应曲线的影响因素生化反应曲线的形状和趋势受到多种因素的影响，包括反应条件、底物浓度、酶的活性与浓度、产物抑制等。
下面分别对这些因素进行探讨：1. 反应条件：反应温度、pH值、离子强度等条件都会对生化反应速率产生影响，从而影响生化反应曲线的形状和趋势。
2. 底物浓度：底物浓度的变化会对生化反应速率产生影响，从而影响生化反应曲线的形状和趋势。
全自动生化分析仪常见异常结果及原因分析
全自动生化分析仪常见异常结果及原因分析反应曲线波动、跳动1．几乎所有反应曲线跳动l 电源接地不良：主电源接地不良、光电盒接地不良l 反应盘进水：真空泵压力密封圈磨损、真空泵电源接触不良、管接头处漏气、管路漏气、吸废液钢管堵塞、单向阀坏、比色杯破裂l 搅拌杆不搅拌：搅拌电机坏、搅拌电机线接触不良、搅拌杆顶住比色杯底l 光路歪：灯泡装歪、比色杯装歪、温控锅装歪、透镜装歪l 试剂加入异常：试剂针堵塞、试剂注射器脱落、试剂针接头处脱落、快速接头脱落l 一次性比色杯不干净l 阳光直射反应光电系统l 外界干扰因素：如发动机，电钻等2．只有个别波长反应曲线跳动l 电源接地不良：主电源接地不良、光电盒接地不良3．只有个别项目反应曲线跳动l 试剂异常：试剂变混浊、变色或试剂放错位置试剂经搅拌后起较多气泡，挡住光路反应曲线异常1．几乎所有反应曲线形状正确，反应曲线平稳，但基本无反应l 样本未加入：样本针堵塞、样本注射器脱落、样本针接头处脱落、快速接头脱落2．个别项目反应曲线形状正确，反应曲线平稳，但基本无反应l 第二试剂未加入：第二试剂放错位置3．个别项目反应曲线形状改变，但反应曲线平稳l 试剂加入异常：试剂盘固定销钉脱落、试剂注射器漏气。
4．个别项目反应曲线形状改变，剧烈上升或下降，反应曲线或平稳，或小幅波动l 试剂异常：试剂性能差或失效，最易发生在ALP、GGT、AMY等项目上5．个别测试反应曲线形状改变，剧烈上升或下降，但反应曲线平稳l 试剂间交叉污染：最易发生在TG、TC、Glu和Bun等项目上l 样本异常：样本中含有某些药物或干扰成分，最易发生在TB、DB等项目上反应曲线正常，结果重复性差1．几乎所有项目重复性差l 样本加入异常：样本针半堵塞、样本注射器中有气泡、样本针接头处密封不严、样本针内壁阀关闭不严l 试剂加入异常：试剂针半堵塞、试剂注射器中有气泡、试剂针接头处密封不严、试剂针内壁阀关闭不严l 搅拌异常：搅拌电机坏、搅拌电机线接触不良、搅拌杆顶住比色杯底l 试剂/样本内外壁清洗不够，交叉污染大：液泵压力下降、第二级过滤器堵塞l 反应盘温度不稳定：反应盘温度波动较大2．个别项目重复性差l 试剂放错位置l 试剂异常：试剂性能差或失效，最易发生在ALP、GGT、AMY等项目上l 项目参数设置异常：样本量少、反应时间短、反应方法设置错误l 定标异常：定标液浓度设置错误、定标液失效反应曲线正常，结果为零或很低1．几乎所有项目结果为零或很低l 样本加入异常：样本针堵塞、样本注射器中有气泡、样本针接头处密封不严、样本针内壁阀关闭不严l 搅拌异常：搅拌电机坏、搅拌电机线接触不良、搅拌杆顶住比色杯底2．个别项目结果为零或很低l 试剂空白测试异常l 试剂放错位置：特别是第二试剂放错位置l 试剂失效或变色：最易发生在ALP、GGT、AMY等项目上l 试剂量少3．个别项目测试结果为负数l 试剂空白测试异常l 试剂失效或变色。
生化反应曲线简介ppt课件
☆其数学表达式：A = ɛ×C×L
I0
I
透射光
light detector
根据Lambert- Beer定律来计算待测物浓度 如若吸光系数 (ε )未知，我们就需要采用定标曲线来计算 待测物的浓度。
(amount of color)
70
吸 光
60
度 50
40
30
20
10
此值为定值
1
2
3
4
5
6
浓度 (amount of substance)
底
物
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成 反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红
棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸
的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处
理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清
中ALT的活性。
连续监测法反应曲线
A单试剂连续监测法
B双试剂连续监测法
连续监测法的优点
可以确定线性期并计算ΔA/min，根据此值再准确地计算酶 活性，因而使自动生化分析仪在酶活性测定方面显著地优于手 工法。连续监测法也可用于测定呈线性反应的代谢物浓度，一 般是某些基于酶法测定的代谢物。
酶活性（U/L）＝ΔA/min×理论（或校准）K值。 代谢物浓度CU=ΔA/min×校准K值。
目录
A 生化分析基本原理 B 生化反应曲线
物质对光吸收的基本定律－ Lambert- Beer定律
-------光吸收的基本定律
Lambert－Beer定律表达为:
当一束平行的单色光通过含有均匀吸光物质的溶液时,溶液的吸光度(A) 与溶液的浓度(C)和光透过液层厚度(L)的乘积成正比。物质对光吸收的吸 光系数（e）为常数。
生化反应曲线资料
两点终点法
在被测物反应或指示反应尚未开始时，选择第一个吸 光度，在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度，此两 点吸光度之差用于计算结果。
18
Endpoint assays
两点终点法的特点 去除了样本的本底
采用两个测量点
针对两个或多个试剂的项目
第一个读数点一般选在添加最后一个试剂之前
第二个读数点一般选在加入最后一个试剂之后且已经达到了反应终点
尿素氮
2点速率法
36
Rate assays 2-point Rate assay
A (sample) + B1 (reagent 1) + B2 (reagent 2)
C + D (product)
Enzyme
37
Rate assays 两点速率法的特点2-point Rate assay
采用一种或多种试剂 检测两个测量点检测固定的间隔时间内两点的吸光度变化。
Concs = 标准品浓度 Δ Absx = 样本吸光度 Abss = 标准品吸光度
Calibrator/standard 标 准品 (cfas)
(amount of color)
吸 光 度
1
2
3
4
浓度 (amount of substance)
5
6
6
Lambert-Beer 定律
分光光度法定量分析的依据 Lambert-Beer 定律
11th
7-8th
34th
19-20th
n/a
n/a
时间 T0 = 0 min T1 ≈ 0 min T2 (≈ 1.5 min) T3 (≈ 5.0 min) T4 (≈ 10 min)
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
▪ 1st entry: ▪ 2nd entry: ▪ 3rd - 6th entry:
方法类型 总分析时间 测量点
27
Endpoint assays 一点终点法分析项目举例
TRIGL
CHO
28
三点终点法
即双终点法,在一个通道内一次进行两项反应相关的终点 法测定.
ABS
15
17
t 35
例如,多项同测组合试剂盒,CHO与TG同一测定
cobas® 8000 模块化组合分析系统 智能、高效、强劲
4
物质对光吸收的基本定律－ Lambert- Beer定律
-------光吸收的基本定律
Lambert－Beer定律表达为:
当一束平行的单色光通过含有均匀吸光物质的溶液时,溶液 的吸光度(A)与溶液的浓度(C)和光透过液层厚度(L)的乘积成正 比。物质对光吸收的吸光系数（e）为常数。
生化反应曲线
1
内容概况
生化分析基本原理 生化反应曲线
2
罗氏生化分析系统产品线
Cobas c111 180T/H
Cobas c311 300T/H
Cobas 6000 (c501) 600T/H
Modular P 800T/H Modular D 2400T/H
3
Cobas 8000 2000T/H
10
7000
Bichromatic Difference
6000
5000
Absorbance
4000
3000
2000
1000
0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61 63 65 67 69 cycles Bichromatic Difference
11
仪器读数的原理
反应转盘不停的周期旋转 当相应的比色杯通过光路系统时，光 路系统会测量并记录下相应的吸光度
在不同的时间点加入相应的反应试剂
不同仪器每个循环周期的时间间隔 Modular P 18秒 Cobas c702 16秒 Cobas C501 8秒 Modular D 12秒 C311 12秒
RF-II
C4
C3
ASL
CRPL
IGG
IGA
IGM
22
一点终点法
在反应到达终点，即在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时 选择一个终点吸光度值，用于计算结果。
A单试剂一点终点法 例如:CHOL/TG….
B双试剂一点终点法 Mg(双试剂)…
23
Endpoint assays
单试剂一点终点法的特点（1-point endpoint assay – one reagent） ▪ 不包含样本的本底 ▪ 仅进行一个点的测量 检测项目举例：甘油三酯（TG）
A (样本) + B1 (试剂1) + B2 (试剂 2)
C + D (显色产物)
19
Endpoint assays
两点终点法的反应曲线–Cobas c702
Mp1 abs before addition of R3
Sample+R1
Mp2 abs at reaction end
20
2Point Endpoint assay application settings 两点终点法的应用参数 – Cobas c702
Roche Diagnostics (Shanghai) Limited Shanghai 200031 China
COBAS and LIFE NEEDS ANSWERS are trademarks of Roche
This presentation is our intellectual property. Without our written consent, it shall neither be copied in any manner, nor used for manufacturing, nor communicated to third parties.
1st. mp 34
Last mp
Rate assays
速率A 法-分析项目举例
GOT/AST GPT/ ALT ALP Amylase CHE CKMB
GGT Lipase GLDH LDH
Enzymes
Байду номын сангаас35
2点速率法
指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，此两点既非反应初始吸光度亦 非终点吸光度，这两点的单位时间吸光度差值用于结果计算。
11th
7-8th
34th
19-20th
n/a
n/a
时间 T0 = 0 min T1 ≈ 0 min T2 (≈ 1.5 min) T3 (≈ 5.0 min) T4 (≈ 10 min)
14
自动生化分析常用的方法有:
▪ 终点法（End Point Assays）：一般在整个反应完成后再来检测吸光度 ▪ 速率法（Rate assays） ：一般在反应的过程中监测吸光度的变化情况
☆其数学表达式：A = e*C*L
I0
I
=
透射光 light d=etector
5
根据Lambert- Beer定律来计算待测物浓度
如若吸光系数 (ε )未知，我们就需要采用定标曲线 来计算待测物的浓度。
此值为定值
Concx =Δ Absx x Concs Abss
Concx = 待测样本浓度
70 60 待测样本 50 40 30 20 10
尿素氮
2点速率法
36
Rate assays 2-point Rate assay
A (sample) + B1 (reagent 1) + B2 (reagent 2)
C + D (product)
Enzyme
37
Rate assays 两点速率法的特点2-point Rate assay
采用一种或多种试剂 检测两个测量点检测固定的间隔时间内两点的吸光度变化。
57
通过最小二乘法（least squares method）
A 单试剂速率法 例如:ACP\AFU
B 双试剂速率法 例如:ALT\AST\CK…
33
Rate assays Rate A assay – Modular P
Reag. at R3 timing
Sample Reag. at R1 timing
16
终点分析法（Endpoint assays）
▪ 两点终点法（2-point end） ▪ 一点终点法 （1-point end）
一点终点单试剂（1-point endpoint assay – one reagent） 一点终点双试剂（1-point endpoint assay – two reagents） ▪ 三点终点法（3-point end）
方法类型
总反应时间（min） 测量的两个读数点
两点读数的时间点: 第19点测量包含了样本和试剂1的本底
sample + reagent 1
第 38点在加入所有试剂后，反应达到终点
sample + reagent 1+ reagent 2
21
Endpoint assays 两点终点法分析项目举例
17
两点终点法
在被测物反应或指示反应尚未开始时，选择第一个吸 光度，在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度，此两 点吸光度之差用于计算结果。
18
Endpoint assays
两点终点法的特点 去除了样本的本底
采用两个测量点
针对两个或多个试剂的项目
第一个读数点一般选在添加最后一个试剂之前
第二个读数点一般选在加入最后一个试剂之后且已经达到了反应终点
应用项目举例： Magnesium
不采用两点终点法主要是样本和R1体积相加 仍<180uL(最小反应体积，无法测量）
A (sample) + B1 (reagent 1) + B2 (reagent 2)
26
C + D (product)
一点终点法应用参数（1 Point Endpoint assay） Utility - Application - Analyze
t1 t2 t3 t4 t 时间
利用线性反应期，计算出单位时 间的吸光度变化△A/min，来计算酶 的活性。
31
速率法（Endpoint assays）
▪ 速率A法 （Rate A） ▪ 两点速率法（2-point Rate）
32
速率A法
在较长的反应时间区段内,每隔一定时间读取一次吸光度值,至少读 取4点,得到3个△A,求出单位时间的反应速率 △A/min .
Urea
Non-prostatic phosphatase Bicarbonate
40
Reaction Direction
上升decreasing 或 下降increasing
41
生化反应曲线
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
Thank you for your attention
换算成 Abs/min参与计算 在加入最后最后一个试剂之后进行吸光度检测。
38
Rate assays 2-point Rate assay – Modular P
39
Rate assays 2点速率 法-分析项目举例