DNS法测定还原糖
用dns光度法测定还原糖的条件研究
用dns光度法测定还原糖的条件研究
dns光度法测定还原糖是一种常用的化学分析方法，它可以用来测定溶液中的还原糖，包括葡萄糖、果糖、半乳糖等。
由于它具有简便、快速、准确、可靠等特点，在食品、药品、环境监测等方面应用广泛。
dns光度法测定还原糖需要满足一些条件。
首先，溶液的pH值应该稳定，可以用碳酸钠或碳酸氢钠等调节，保证溶液在
7.5之间。
其次，溶液的温度应该在25~30℃，这是因为温度过高或过低都会影响测定结果。
此外，溶液的浓度也应该控制在一定的范围内，过高的浓度会导致测定结果的不准确。
DNS法测还原糖
3，5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范实验围内反应的还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，可测定生成化合物的吸光度，由标准曲线反推出还原糖的浓度。
操作简便，快速，杂质干扰较少，适于生物制氢中还原糖含量的测定。
显色条件包括:波长选择，显色剂用量，显色时间，溶液酸度，显色温度，有机络合物的稳定性及共存离子的干扰等。
此次实验选择波长选择，显色剂用量，显色时间，溶液酸度进行实验。
一．试剂的配置DNS试剂：称量18.1992g酒石酸钾钠溶于50ml蒸馏水中，加热，趁热加入0.6313g 3，5-二硝基水杨酸（DNS），另配制2mol/lNaOH溶液，取26.2ml加入上述溶液中，称量0. 5128g苯酚和0.5064g无水亚硫酸钠移入配置好的溶液中，蒸馏水定容至100ml，该试剂避光保存7～10天。
葡萄糖标准溶液（1.0*10-2mol/l）：准确称量0.1990g无水葡萄糖，待溶解后定容至100ml 容量瓶中。
葡萄糖标准溶液（1.0*10-3mol/l）：取10ml上述10-2mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。
葡萄糖标准溶液（1.0*10-4mol/l）：取10ml上述10-3mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。
二.显色条件的选择1. 波长选择取5支试管按下表加相应溶液，沸水浴15min, 均加入7ml水定容为1 0ml，流水冷却，在不同波长处分别进行扫描。
图1为不同条件下溶液的波长——吸光度图（水调零）。
由图1可以看出白色与绿色曲线几乎重合，说明0.0001mol/l葡萄糖溶液与DNS反应生成的氨基化合物极少，用比色法很难区分，故此法所能够测量的葡萄糖浓度应大于0.0001mol/l。
由DNS＋H2O曲线可以看出当波长大于530nm时，DNS的吸光度已经很小，这时DNS对反应生成的氨基化合物吸光度的影响可以忽略。
图2为4号试管稀释10倍后波长扫描图4号试管用高浓度的葡萄糖溶液和少量的DNS 试剂反应，使生成大量的氨基化合物，但其吸光度太大，仪器无法测定，故将其稀释10倍。
糖含量实验报告
一、实验目的1. 了解糖含量的测定原理和方法。
2. 掌握DNS比色法测定还原糖含量的操作步骤。
3. 通过实验，了解糖含量在食品、药品等领域的应用。
二、实验原理糖类是生物体内重要的营养物质，广泛存在于食品、药品等领域。
糖含量测定方法主要有直接滴定法、比色法等。
本实验采用DNS比色法测定还原糖含量，该方法具有操作简便、灵敏度高、准确度好等优点。
DNS比色法的基本原理是：在碱性条件下，还原糖与3，5-二硝基水杨酸（DNS）发生反应，生成橙红色的化合物。
在一定浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，通过测定光吸收值，可以计算出样品中的还原糖含量。
三、实验材料1. 样品：待测样品（如食品、药品等）。
2. 试剂：3，5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、苯酚、亚硫酸钠、酒石酸钾钠、葡萄糖、蒸馏水等。
3. 仪器：可见分光光度计、电子天平、真空干燥箱、数显恒温水浴锅、离心机、移液器、枪头、500ml容量瓶、试管、500ml烧杯、1000ml烧杯等。
四、实验步骤1. 样品预处理：将待测样品进行称量、溶解、离心等预处理，得到澄清的样品溶液。
2. DNS溶液配制：按照实验要求，配制DNS溶液。
3. 标准曲线绘制：分别配制不同浓度的葡萄糖标准溶液，按照DNS比色法操作步骤，测定各标准溶液的光吸收值，以葡萄糖浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
4. 样品测定：按照DNS比色法操作步骤，测定待测样品溶液的光吸收值。
5. 结果计算：根据标准曲线，计算待测样品溶液中的还原糖含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：通过实验，绘制了葡萄糖标准曲线，曲线线性良好，相关系数R²=0.998。
2. 样品测定：按照实验步骤，测定了待测样品溶液的光吸收值。
3. 结果计算：根据标准曲线，计算待测样品溶液中的还原糖含量。
六、实验讨论1. DNS比色法测定还原糖含量的准确性较高，但实验过程中要注意避免干扰物质的影响。
2. 实验过程中，样品预处理、DNS溶液配制、标准曲线绘制等步骤均需严格按照实验要求进行，以保证实验结果的准确性。
DNS法测定还原糖的含量
absorbency
1 y = -0.14971 + 0.035786x R= 0.9954
0.8
0.6
0.4
0.2
glucose standard curve 1
0
0
5
10
15
20
25
30
glucose standard curve1
glucose chroma/10-4mol/l
另外采用较高浓度的葡萄糖来制作标准曲线，得到下图2： 其回归方程为：y=-0.10483+0.031804x,R=0.99817.
试管号
0
1
2
3
4
56
7
8
9
10
11
12
13
14
DNS/ml
0
2
2
2
2
22
2
2
2
2
2
2
2
2
水/ml
3
1
葡萄糖/ml
0
0
1
1
1
11
1
1
1
1
1
1
1
1
浓度/104mol/l
3
5
7
9 11
13
15
17
19
21
23
25
27
下图1为葡萄糖标准曲线图，葡萄糖含量（mol/l） 与相应的吸光度（A）有一定的线性关系，且其回归方程为： y = - 0.14971+0.035786x， R= 0.9954。
二.显色条件的选择
1. 波长选择 取5支试管按下表加相应溶液，沸水 浴15min, 均加入7ml水定容为10ml，流水冷却，在不 同波长处分别进行扫描。
dns法测定还原糖的原理
dns法测定还原糖的原理宝子！今天咱们来唠唠DNS法测定还原糖的原理呀。
你知道吗，还原糖这小玩意儿可有趣了呢。
在这个DNS法里呀，有个超重要的试剂叫DNS试剂。
这DNS试剂就像一个超级侦探，专门去发现还原糖的秘密。
DNS试剂里面有好多成分呢。
它主要包含3,5 - 二硝基水杨酸。
这个物质可神奇啦，它和还原糖之间有着一种特殊的缘分。
当还原糖出现在它面前的时候，就像是两个久别重逢的老友，要发生一场奇妙的反应。
还原糖呢，它自身有一些特殊的性质。
它有还原性基团，就像它身上带着一把特殊的钥匙。
这把钥匙能够打开和DNS试剂反应的大门。
比如说葡萄糖、果糖这些常见的还原糖，它们的还原性基团就特别活跃。
当还原糖和DNS试剂混合在一起的时候，就像是一场热闹的派对开始了。
在一定的条件下，比如说合适的温度和酸碱度，还原糖的还原性基团就开始和DNS试剂中的3,5 - 二硝基水杨酸发生氧化还原反应。
在这个反应过程中，3,5 - 二硝基水杨酸被还原糖还原。
这就像是还原糖把自己的一部分能量给了3,5 - 二硝基水杨酸一样，特别慷慨呢。
被还原之后的3,5 - 二硝基水杨酸会发生颜色的变化。
原本它可能是一种颜色，反应之后就变成了另外一种颜色。
这个颜色变化可关键啦，就像是一个信号，告诉我们还原糖的存在。
一般来说，反应之后会变成棕红色或者红棕色。
颜色越深呢，就说明还原糖的含量越高。
咱们可以想象一下，这就像是还原糖在DNS试剂这个舞台上表演了一场魔术。
它把DNS试剂变得五彩斑斓，然后我们就可以通过观察这个颜色的变化程度来判断还原糖到底有多少。
而且呀，这个反应是有一定的定量关系的。
也就是说，在一定的范围内，还原糖的量和颜色变化的程度是成正比的。
这就给我们提供了一个特别好的测量方法。
我们可以通过比色的方法，用分光光度计之类的仪器，去测量反应之后溶液的吸光度。
吸光度越大，就代表颜色越深，那还原糖的含量也就越高啦。
这个DNS法测定还原糖的原理呀，在好多地方都超级有用呢。
燕麦还原糖的提取及含量测定dns法
燕麦还原糖的提取及含量测定dns法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖
3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖3,5-二硝基水杨酸比色法----标准曲线的制作 1.实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖10257 RP麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
2.实验材料、主要仪器和试剂2.1实验材料主要用到这些实验材料：红曲黄色素发酵液、钠虑膜浓缩后红曲黄色素液、旋转蒸发后红曲黄色素液。
2.2主要仪器本实验用到的实验仪器有：1) 具塞玻璃刻度比色管：25mL×19； 2) 烧杯：100mL×4； 3) 三角瓶：100mL×1；4) 容量瓶：100mL×3，50mL×3； 5) 刻度吸管：1mL×4；2mL×3；10mL×1； 6)沸水浴； 7) 冰浴； 8) 扭力天平；9) UV―2802SH型紫外可见分光光度计尤尼柯（上海）仪器有限公司；2.3实验试剂1) 1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
2) 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告
DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告实验目的：通过DNS比色法测定还原糖和总糖的含量。
实验原理：DNS比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
在碱性条件下，还原糖和总糖与二硫苏糖酸钠（DNS）发生酸碱反应，并在高温条件下生成含有醛基的络合物，形成深红色产物。
产物的吸光度与还原糖或总糖的浓度成正比关系。
实验步骤：1.准备样品溶液：将待测样品加入蒸馏水中，使体积恒定为50mL。
2.取2mL样品溶液加入试管中，加入2mL硫酸溶液，并用1%甲基绿稀溶液滴定溶液颜色变黄为止。
3. 在水槽中加热样品溶液至90°C，加入2 mLDNS试剂稀溶液，迅速搅拌均匀，继续加热5 min。
4.将试管取出，立即置于冷水中冷却。
5. 测定吸光度：使用比色计测定试管中产物的吸光度，以440 nm为波长。
实验结果：根据上述实验步骤，我们测定了三个不同样品的还原糖和总糖的含量，并计算出对应吸光度如下：样品编号，还原糖含量 (mg/L) ，总糖含量 (mg/L) ，吸光度--------，---------------，---------------，------样品1，50，100，0.345样品2，75，150，0.540样品3，100，200，0.726实验讨论：通过实验结果可知，样品1、样品2和样品3中的还原糖和总糖的含量分别为50/100、75/150和100/200 mg/L。
通过计算吸光度与还原糖/总糖浓度的线性关系，可以进一步推断未知样品中还原糖和总糖的浓度。
实验结论：通过DNS比色法，我们成功测定了三个样品中还原糖和总糖的含量，并得到了吸光度与浓度的线性关系。
实验结果表明，该方法可以用于定量测定还原糖和总糖的浓度。
11级DNS法测定还原糖含量最终版
2.0
1.0
1.0水杨酸/mlFra bibliotek1.5
1.5
1.5
结果处理
• 按下列公式计算样品中还原糖与总糖的 百分含量：
• 还原糖%=(m*100)/(M*1000) • 总糖%=（m*稀释倍数*0.9*100）/(M*1000) • 式中：m——根据标准曲线所得糖含量，mg M——所称样品质量，g
祝实验成功！
（3）碘-碘化钾溶液 （4）6mol/l NaOH （5）0.1%酚酞指示剂 （6）6mol/l HCl溶液 2、材料 淀粉 3、器材 分光光度计，天平，水浴锅，电子 万用炉，试管若干
• 一、制作葡萄糖标曲线
• 取10支试管，按下表加入试剂
试剂 葡萄糖标 准液/ml 蒸馏水/ml DNS/ml 葡萄糖含 量/mg 0 0 2.0 1.5 0 1 0.2 1.8 1.5 0.2 2 0.4 1.6 1.5 0.4 3 0.5 1.5 1.5 0.5 4 0.6 1.4 1.5 0.6 5 0.7 1.3 1.5 0.7
DNS法测还原糖含量
——3,5-二硝基水杨酸法
目 的
• 掌握还原糖和总糖的测定原 理，学习用比色法测定还原 糖的方法
原理
•
• 1.还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是 指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双 糖和多糖不一定是还原糖。 • 2.在NaOH和丙三醇存在下，DNS与还原糖共热后被 还原生成氨基化合物，在过量的碱性溶液中此化合物 呈桔红色，在一定范围内，还原糖的量与桔红色 物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计， 在550nm波长下测定吸光度，查对标准曲线并计算， 便可求出样品中还原糖和总糖的含量。 • 3.由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入 一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
DNS法测定还原糖
DNS法测还原糖方法一原理DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，540nm处有吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。
二试剂及方法2.1 试剂1. 1 mg/ml的葡萄糖溶液2. 3,5－二硝基水杨酸用400mL 蒸馏水溶解6.3g3，5—二硝基水杨酸，逐步加入21g 氢氧化钠，再加入182g 四水合酒石酸钾钠、5.0g 苯酚、5.0g 无水亚硫酸钠，温水浴(不超过48℃)，不断搅拌，直至溶液清澈透明。
用蒸馏水定容至1000mL，保存在棕色瓶中，与二氧化碳隔绝，静置5～7 天后使用，贮存期为6 个月。
2.2 葡萄糖标曲的绘制表1 葡萄糖标曲的绘制方法试剂试管0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 03,5-二硝基水杨酸(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 糖含量（mg）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5混合均匀，沸水浴5min，冷却后加入4mL蒸馏水，混匀，在540nm下测OD值2.3 发酵液样品测定将发酵液稀释一定倍数后，取3只比色管标号1,2,3，加入稀释和的发酵液0.5 ml，加入DNS试剂0.5 ml 混匀，沸水浴5min，冷却后加入4 ml蒸馏水混匀，测OD540表 2 样品的测定方法管号0 1 2 还原糖待测样品 （mL ） 0.0 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 0.5 0.0 0.0 DNS 试剂 （ mL ） 0.5 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 4 4 4 A 540 nm计算所得还原糖含量 （mg ）三 结果计算 3.1 标曲3.2样品的还原糖含量稀释倍数）加人样品的体积（）计算得到的还原糖量（）还原糖含量（⨯=ml 5.0mg /g L。
02-DNS法测定还原糖
5.反应液中加入4ml蒸馏水，测定OD540值。
6.整理数据，计算还原糖含量和总糖含量。
7.完成实验报告，下次实验课交给任课老师。
六、注意事项
1．用移液管准确吸取所需试剂。 2. 放入沸水浴时把试管捆好，保证整齐。 3. 沸水浴中反应时不要盖盖子，时刻关注水 浴锅中的水位，及时添加水。
4.沸水浴结束后，可放入冷水浴或冰水浴加速
实验二 3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖
一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材
四、材料与试剂
五、操作方法
六、注意事项
一、实验目的
1．掌握还原糖定量测定的原理和方法 2．掌握分光光度计的使用方法 3. 掌握标准曲线的制作方法
二、实验原理
1．还原糖的定义
2. 哪些糖是还原糖？
3. 还原糖测定的基本原理
三、实验器材
1. 常规的玻璃器皿 2. 分光光度计 波长：540nm 模式：ABS 比色皿 3. 沸水浴 注意安全
四、材料与试剂
1．原始实验材料
小麦粉
2. 其它试剂
6 mol/L HCl；6 mol/L NaOH；碘-碘化钾溶 液；1 mg/L葡萄糖溶液；3.5-二硝基水杨酸
五、操作方法
1．取13个试管，写好标记。 2.1-9号做葡萄糖标准曲线用（一个空白样）， 10-11号测还原糖，12-13号测总糖用。 3.根据教材上的表格添加相应试剂。 4.沸水浴中反应5min。
日下午1：00开始上课。
今天的值日：第3-4组
二、实验原理
还原糖测定的基本原理
棕红色化合物 540nm波长下 有最大吸收
标准曲线
• 标准曲线（英文为 standard curve）是指通 过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性 质，而建立标准物质的物理/化学属性跟仪器 响应之间的函数关系。建立标准曲线的目的是 推导待测物质的理化属性。 • 标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能 变异最低与最高值。 • 通常情况下的标准工作曲线是一条过原点的直 线（直线方程回归，相关系数ROD值时，混匀试管，使其颜色均匀。 7. 测定OD值时，从浓度低到浓度高的顺序测 定，未知浓度样品最后测定。 8. 洗涤比色皿时，先冲洗污物后，用酒精冲
还原糖的测定
1 还原糖的测定(DNS 法)DNS 试剂的配制:称取10g3，5-二硝基水杨酸（DNS ）溶于水中，全部溶解后，加入20gNaOH 、200g 酒石酸钾钠，加入蒸馏水，使总体积至500mL 左右，加热溶解后，加2g 苯酚、0.5g 无水亚硫酸氢钠，加热搅拌至全部溶解，冷却，用水稀释至1000mL ，储于棕色瓶中。
⑴反应原理利用糖的还原性质，将3,5-二硝基水杨酸（DNS ）与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，还原糖的量和棕红色物质颜色的深浅程度成一定的比例关系，可以用分光光度计进行测定。
⑵测定方法①葡萄糖标准曲线的绘制取洁净试管6支进行编号，分别按下表2-3加入各试剂。
表2-3试剂项目表管号 单位 0 1 2 3 4 5 含糖量 mg — 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 标准葡萄糖溶液mL — 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水 mL 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 3,5-二硝基水杨酸mL0.50.50.50.50.50.5沸水浴5min ，然后冷水冷却各加蒸馏水8mL 540nm 测吸光度值将上述各管混匀，然后在540nm 波长下以0号管为对照，测定各管分光光度值。
以葡萄糖含量（mg ）为横坐标，分光光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
②还原糖含量的测定将样品液经适当稀释后，取0.5mL 稀释液加入0.5mLDNS 试剂，煮沸5min 显色，然后冷水冷却至室温，加8mL 蒸馏水，同时以蒸馏水代替稀释液做空白对照试验，540nm 测定吸光值，根据标准曲线计算还原糖含量。
③计算公式（2-1）：公式（2-1）DNS 测还原糖含量2 总酸的测定(指示剂法)总酸的测定 采用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.05mol/L]以酚酞(10g/L)作指示剂直接滴 定。
吸取样品2ml —5ml[液温20℃；取样量可根据酒的颜色深浅而增减]，置于250ml 三角瓶中，加入50ml 水，同时加入2滴酚酞指示液，摇匀后，立即用氢氧化钠标准溶液滴定至终点，并保持30s 内不变色，记下消耗氢氧化钠标准溶液的体积(V1)。
3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖
3,5-二硝基水杨酸比色法----标准曲线的制作1.实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖10257 RP麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
2.实验材料、主要仪器和试剂2.1实验材料主要用到这些实验材料：红曲黄色素发酵液、钠虑膜浓缩后红曲黄色素液、旋转蒸发后红曲黄色素液。
2.2主要仪器本实验用到的实验仪器有：1)具塞玻璃刻度比色管：25mL×19；2)烧杯：100mL×4；3)三角瓶：100mL×1；4)容量瓶：100mL×3，50mL×3；5)刻度吸管：1mL×4；2mL×3；10mL×1；6)沸水浴；7)冰浴；8)扭力天平；9)UV—2802SH型紫外可见分光光度计尤尼柯（上海）仪器有限公司；2.3实验试剂1)1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
2)3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
3．实验步骤制作葡萄糖标准曲线取7支25mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
DNS法测定还原糖的含量
试管号 0
1
2
3
4
5
6
7
DNS/ml 0
2
1
1.5
2
2.5
3
3.5
水/ml
3
1
11*
0
0
1
1
1
1
1
1
10-
4mol/l
葡萄糖
8
由图3可以看出溶液的吸光度随着DNS用量的增大而 增大，但当DNS用量达到3.5ml时，吸光度反而下降， 这说明DNS的用量不是越多越好，只要在与糖的反应 中DNS有剩余即可。如果DNS用量过多，会使测量时 DNS溶液浓度过大，造成测量不准。综合考虑，此次
2
显色条件包括:
波长选择，显色剂用量，
显色时间，溶液酸度，显
色温度，有机络合物的稳
定性及共存离子的干扰等
。此次实验选择波长选择
，显色剂用量，显色时间
，溶液酸度进行实验。
3
一．试剂的配置 DNS试剂：称量18.1992g酒石酸钾钠溶于50ml蒸馏水中 ， 加热， 趁热加入0.6313g 3，5-二硝基水杨酸（ DNS），另配制2mol/lNaOH溶液，取26.2ml加入上述 溶液中，称量0.5128g苯酚和0.5064g无水亚硫酸钠移入 配置好的溶液中，蒸馏水定容至100ml，该试剂避光保 存7～10天。 葡萄糖标准溶液（1.0*10-2mol/l）：准确称量0.1990g无 水葡萄糖，待溶解后定容至100ml容量瓶中。 葡萄糖标准溶液（1.0*10-3mol/l）：取10ml上述102mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。 葡萄糖标准溶液（1.0*10-4mol/l）：取10ml上述103mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。
实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法
DNS法在测定总糖和还原糖中的应用
在植物组织中，总糖包括还原糖和非还原糖，通过DNS法可以测定总糖的 含量，再通过差减法得到还原糖的含量。
DNS法具有较高的灵敏度和准确性，操作简便，适用于多种植物组织中糖 含量的测定。
03
学习并掌握如何根据标准曲线计算糖含量，以及如何处理实验数据和 分析结果。
04
通过本实验的学习，学生将能够掌握植物组织中总糖和还原糖的提取 和测定方法，为后续相关研究打下基础。
02 实验原理
DNS法（二硝基水杨酸法）基本原理
DNS（二硝基水杨酸）法是一种常用 的糖类物质测定方法，通过在强酸环 境下，利用DNS与还原糖发生氧化还 原反应，生成有色产物，再通过比色 法测定糖的含量。
掌握DNS法测定总糖和还原糖的原理有助于理解实验操作步骤和结果分析，为后 续实验打下基础。
学习并掌握植物组织中总糖和还原糖的提取和测定方法
01
学习植物组织中总糖和还原糖的提取方法，包括采集样品、清洗、破 碎、浸提等步骤，以获取可用于测定的糖提取液。
02
掌握DNS法的操作流程，包括配置DNS试剂、糖提取液与DNS试剂 混合、加热煮沸、冷却、比色测定等步骤。
04 实验结果与数据分析
实验结果记录
实验组1
总糖含量为20.5mg/g，还原糖含量为15.3mg/g。
实验组2
总糖含量为22.1mg/g，还原糖含量为16.7mg/g。
实验组3
总糖含量为19.8mg/g，还原糖含量为14.9mg/g。
实验数据分析与处理
• 平均总糖含量：通过对三组实验数据的计算，得出平均总糖含量为 （20.5+22.1+19.8）/3=20.8mg/g。
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DNS法测还原糖方法
一原理
DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，540nm处有吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。
二试剂及方法
2.1 试剂
1. 1 mg/ml的葡萄糖溶液
2. 3,5－二硝基水杨酸
用400mL 蒸馏水溶解6.3g3，5—二硝基水杨酸，逐步加入21g 氢氧化钠，再加入182g 四水合酒石酸钾钠、5.0g 苯酚、5.0g 无水亚硫酸钠，温水浴(不超过48℃)，不断搅拌，直至溶液清澈透明。
用蒸馏水定容至1000mL，保存在棕色瓶中，与二氧化碳隔绝，静置5～7 天后使用，贮存期为6 个月。
2.2 葡萄糖标曲的绘制
表1 葡萄糖标曲的绘制方法
试剂
试管
0 1 2 3 4 5
葡萄糖标准液(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0
3,5-二硝基水杨酸(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 糖含量（mg）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
混合均匀，沸水浴5min，冷却后加入4mL蒸馏水，混匀，在540nm下测OD值
2.3 发酵液样品测定
将发酵液稀释一定倍数后，取3只比色管标号1,2,3，加入稀释和的发酵液0.5 ml，加入DNS
试剂0.5 ml 混匀，沸水浴5min，冷却后加入4 ml蒸馏水混匀，测OD540
表 2 样品的测定方法
管号
0 1 2 还原糖待测样品 （mL ） 0.0 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 0.5 0.0 0.0 DNS 试剂 （ mL ） 0.5 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 4 4 4 A 540 nm
计算所得还原糖含量 （mg ）
三 结果计算 3.1 标曲
3.2样品的还原糖含量
稀释倍数）
加人样品的体积（）计算得到的还原糖量（）还原糖含量（⨯=ml 5.0mg /g L。