照薄层色谱法
薄层色谱法
薄层色谱法薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。
1.仪器与材料（1）薄层板市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等。
自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板。
最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、微晶纤维素等，其颗粒大小，一般要求粒径为10～40μm，加水或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.2%~0.5%）适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。
使用涂布器涂布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。
（2）点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。
（3）展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或有双槽展开缸，展开时须能密闭，水平展开用专用的水平展开缸。
（4）显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出，浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。
（5）检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。
（6）薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。
2.操作方法(1) 薄层板制备市售薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟。
聚酰胺薄膜不需活化。
铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损。
如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，110℃活化，置干燥器中备用。
经典色谱法分析技术—薄层色谱法(分析化学课件)
小
极性
大
薄层色谱固定相和流动相选择
2. 流动相展开剂的选择要求
薄层色谱分离中一般要求各斑点的Rf值在0.2～0.8之间，Rf值之 间应相差0.05以上.
3. 流动相展开剂的选择方法
如果单一展开剂分离效果不好，可用两种或两种以上的单一溶剂按 照一定比例混合而成的溶剂展开,可以达到较好的分离效果.
薄层色谱固定相和流动相选择 被测组分、吸附剂和展开剂的选择原则
常用溶剂的极性顺序为：
常用吸附剂的极性顺序为：
增
增
大
大
薄层色谱固定相和流动相选择
多糖、蛋白质等大分子、生物碱盐
极 性
苷类（皂苷、黄酮苷、蒽醌苷）
渐 黄酮、蒽醌等苷元、有机酸
小
香豆素、萜类、挥发油等亲脂性成分
烷烃＜烯烃
＜二甲胺＜酯类＜酮
＜醚＜硝基化合物
类＜醛类＜硫醇＜胺 类
＜酰胺类＜醇 类＜酚类＜羧 酸类
分离原理
吸附薄层色谱分离原理
展开（分离）
分离过程：
制板→点样→展开→显色→定性定量分析
固定相--吸附剂
薄层色谱的固定相所用的吸附剂
流动相---展开剂
薄板的底端浸入到适当的流动相溶剂
吸附薄层色谱分离原理
薄 层 色 谱
点样
展开剂
吸附薄层色谱分离原理
分离原理：
展开剂在毛细管的 浸润作用下，带着 各组分沿着薄板向
薄层色谱固定相和流动相的选择
薄层色谱固定相和流动相选择
一、固定相（吸附剂）的选择
1. 选择原则 根据被分离组分的极性选择吸附剂：
被分离组分的极性强——弱极性吸附剂； 被分离组分的极性弱——强极性吸附剂；
薄层色谱固定相和流动相选择
薄层色谱法操作流程
薄层色谱法操作流程
薄层色谱法是一种常见的化学分析方法，其操作流程如下：
1. 样品的制备与稀释：首先需要将待测物质制备成可供操作的样品，
并根据实验要求加入适量的溶剂稀释。
2. 色谱板的准备：根据需要选择相应的色谱板，并将其装入色谱槽中。
3. 样品的上样：使用毛细管或者微量注射器，在色谱板的起点处滴加
适量的样品。
4. 色谱板的开发：将色谱槽加入一定量的移动相，观察样品的运移情
况并记录。
5. 结果的观察与记录：当样品在色谱板上达到一定的移动距离时，将
其取出并进行观察和记录。
6. 结果的计算与分析：根据实验结果进行比对和计算，从而得出有关
样品的相关数据。
7. 结果的报告：将实验结果进行归纳和总结，并编写出符合学术要求
的分析报告。
总之，薄层色谱法是一种操作简单、分析快速的分离技术，在实际应
用中有着广泛的应用。
通过正确的操作流程和合理的结果分析，可以为研究人员提供大量有关样品的信息。
薄层色谱法注意事项
薄层色谱法注意事项薄层色谱法是一种常用的化学分析技术，用于分离、鉴定和定量分析化合物。
在进行薄层色谱实验时，需要注意以下几点：1. 实验前准备：在进行薄层色谱实验之前，应先准备好所需的试剂、溶剂、色谱板和开发室等实验器材。
同时，要确保色谱板的纯净度和质量良好，避免板上有杂质或损坏。
2. 样品的处理：样品在进行薄层色谱之前需要进行合适的处理，如提取、纯化等操作。
样品的处理要严格控制条件，避免产生不必要的干扰物。
3. 色层施加：色层施加是薄层色谱实验的关键步骤，要注意施加的均匀性和厚度的控制。
色层应均匀地覆盖在色谱板上，厚度一般为0.1-0.3毫米。
施加色层时要避免过程中的振荡或晃动，以确保色层的平整度。
4. 试剂的选择：在进行薄层色谱实验时，要根据不同的分析目的选择适当的试剂和溶剂。
试剂和溶剂的选择要有一定的理论基础，避免对被测物质产生干扰或损坏。
5. 开发条件的控制：开发是薄层色谱的重要步骤，要控制好开发室的湿度和温度。
湿度和温度的变化会影响色层的分离效果，因此要保持开发室的相对稳定。
6. 结果的解读：薄层色谱实验得到的结果需要进行正确的解读和分析。
需要注意结合实验数据和色谱数据来对结果进行推断和判断，避免因误解结果而导致错误的结论。
7. 安全操作：在进行薄层色谱实验时，要注意安全操作，避免接触有毒、易燃、腐蚀性的物质。
实验时要佩戴适当的防护装备，如实验手套、护目镜等。
总之，薄层色谱法是一种常用的化学分析技术，能够在短时间内对混合物进行分离和鉴定。
在进行实验时，注意以上几点，可以保证实验结果的准确性和可靠性。
薄层色谱法原理
薄层色谱法原理
薄层色谱法（TLC）是一种分离技术，对物质进行分离和纯化。
其原理基于物质在固定相和流动相之间的不同亲和性来实现分离。
薄层色谱法使用一种薄而均匀涂敷在玻璃、铝箔或塑料片上的液体或固体层，称为薄层层片。
这个层片通常是由无定型的吸附剂，如硅胶或氧化铝组成的。
待分离样品通常是在物理或化学处理后溶解在适当的溶剂中，然后以一小点或线状的方式施加到层片上。
在色谱过程中，层片与溶剂系统保持接触，而溶剂会在吸附剂上升出现浸润，形成一个移动相。
移动相通过表层片，将溶解物质带上升。
移动相的速度取决于吸附剂的性质和选择性，以及溶剂在薄层上的升力和展开行为。
在运行过程中，溶质分子与吸附剂的相互作用力不同，以致有了多项移动的速度。
这导致了溶质分子的分离，从而使它们以不同的速度通过层片。
最终，通过观察分离物质在层片上的位置和形成的斑点，可以确定分离效果并进行定性或定量分析。
这可以通过显色剂或紫外光照射等方法来实现。
总的来说，薄层色谱法原理是基于样品分子与吸附剂的吸附作用和移动相的逐渐上升，利用它们在层片上的差异速度实现分离。
薄层色谱法用于鉴别的参数
薄层色谱法用于鉴别的参数薄层色谱法是目前化学分离科研领域中经常使用的一种技术，其最大的特点就是能够快速、准确的鉴别出化合物在混合物中的存在情况及其种类。
在实际应用中，为了更好地应用这项技术，需要重点掌握一些关键参数，下面详细介绍薄层色谱法用于鉴别的参数。
一、色谱材料薄层色谱法中色谱材料是重中之重，其选择应该根据化合物的化学特性来进行。
按组成分为有机及无机两类，有机材料由分散性大的亲水性或疏水性粉末，有机或无机胶乳等成为基料，常用的有机材料有硅胶，正相材料如氨基硅胶、胺基硅胶，反相材料如C18硅胶等。
无机材料包括氢氧化铝、硼酸纤维等。
不同种类的材料具有不同分离特性，因此需要按照不同的物质进行选择。
二、色谱动力学参数色谱动力学参数是指影响色谱分离的情况下进行控制的因素，如吸附驱动力、扩散速度等等，并且这些参数与溶液性质、外界环境、色谱柱材料、化合物状况等都是有关联的。
具体的参数如下：1.反应速率：根据反应速率与峰形状的相关性质以及反应过程的颜色变化来确定具体化合物的存在。
2.产品分离：利用薄层色谱法进行检测，能够快速地鉴别出固、液等型态的产物，然后根据相关峰值的特性进行分析。
3.质量传递：在化学反应中，质量传递和化学反应动力学紧密相关，研究该因素可以用于鉴别特定化合物在混合物中含量的多少。
4.表面性质：表面张力、表面电位、溶解度等都是影响化合物鉴别的重要参数，不同因素影响化合物分离的方式也不同，需要根据实际情况加强分析。
三、溶剂的选择对于薄层色谱法，溶剂的选择对鉴别过程有着至关重要的影响，不同种类的化合物适用的溶剂不一样，合理的选择可以提高检测的精度及鉴别度，并缩短分析时间。
一般情况下，溶剂的选择需要遵循以下原则：1.选择非极性溶剂时可定子受体和供体特性，如甲醇、乙醇等。
2.选择极性溶剂时可基于氢键捕捉以及双极分子的性质等特点，如水、乙醇等。
3.选择弱极性溶剂时需要根据实际情况进行选择，如二甲基甲酰胺、丙酮等。
薄层色谱法的基本原理及其应用
薄层色谱法的基本原理及其应用
薄层色谱法（Thin layer chromatography，TLC）是一种广泛应用于生物化学、有机化学等领域的分离技术。
它利用吸附剂或分子筛作为固定相，在薄薄的层面上，将要分析的混合物溶液涂敷在固定相表面上，然后通过溶剂的上升或下降逐渐分离出不同成分，最终在固定相表面形成各种不同的斑点，进而实现目标化合物的分离和纯化。
薄层色谱法的基本原理是根据不同化合物在固定相上的吸附性能、极性、分子大小等特性，将混合物中的各种成分按照不同程度的吸附和分配系数沿着固定相的表面迁移，从而实现分离纯化的目的。
固定相可以是硅胶、氧化铝、碳等物质，而溶剂可以是水、乙醇、乙醚、石油醚等有机溶剂。
薄层色谱法的应用非常广泛，主要用于对有机化合物的分离和鉴定。
例如，可以对不同的药物、天然产物、有机合成产物等进行初步分离和纯化，或者确定混合物中某个组分的含量、结构等信息。
此外，薄层色谱法也可以用于分离分子量较小的小分子物质，如脂肪酸、氨基酸、糖类物质等。
最近，薄层色谱法被广泛应用于食品、环境和生命科学领域，以对食品质量、毒性物质、植物代谢产物等进行鉴定或检测。
薄层色谱检查法标准操作规程
依据：《GMP》与药品生产质量检验的要求目的：建立一个薄层色谱鉴别的标准操作规程范围：各种检验中薄层鉴别的操作1．定义：薄层色谱法，系将细粉状的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料板或铝基片上，成一均匀薄层，经点样、展开与显示以后，再与适宜的对照物质按同法所得的色谱图作对比,用于进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
2．仪器与材料2.1 展开室：可选用适合薄层板大小的玻璃缸,并有严密的盖子、底部平整。
必要时在展开槽盖处可涂抹少量凡士林增加密闭性，但需注意勿沾污薄层板或溶入展开剂。
2.2 玻璃板：除另有规定外,用5cm×20cm、10cm×20cm或20cm×20cm的规格。
也可用载玻片进行预试验。
各种薄层板要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。
玻璃板的质量有一定要求，厚度为2mm或3~4mm，预制板一般使用1mm的玻璃板。
应有良好的平面性，可用镜面玻璃或浮法玻璃，还应有一定的耐热性，以使在烘烤时不致破裂。
2.3 涂布器：有手工涂布器和自动涂布器(用于定量分析),均应能使吸附剂或载体在玻璃板上涂开层符合厚度要求的均匀薄层.2.4 点样器：玻璃毛细管2.5 吸附剂或载体首选为硅胶G、硅胶GF254.硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
其颗粒大小，一般要求为直径10~40μm。
其比表面积可达约600m2/g。
由于硅胶的质量、颗粒大小、分布均匀程度直接影响分离度及检出限度。
而且不同厂家生产的硅胶，其质量也有差别，甚至同一厂家生产的不同批号也会有分离效果不同的差别。
因此要使薄层分离的结果比较稳定，应严格控制硅胶质量。
3．薄层板的制备薄层板分为无粘合剂(软板)和有粘合剂(硬板)两种.前者系将吸附剂直接放在洗净干燥的玻璃板一端,置涂布器上并调节好一定的涂布厚度,一般为0.25～0.5mm(供分析用).由于使用中易被分散,现多采用含有粘合剂的薄层板。
薄层色谱法原理
薄层色谱法原理
薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用
的色谱分离技术。
它基于混合物中不同成分在固定相上的亲疏性差异，利用了物质在固定相和移动相之间的分配行为来实现分离。
薄层色谱法的基本原理是将需要分离的样品溶解在合适的溶剂中，然后在一张薄石英玻璃或铝箔片上均匀涂覆一层薄的吸附剂作为固定相。
常用的吸附剂包括硅胶、氧化铝和硅胶凝胶等。
接下来，将涂层的薄片置于一个密闭的玻璃槽中，底部加入浸润吸附剂的移动相。
浸润过程中，样品分子会与固定相亲疏性不同，部分样品分子会被吸附在固定相上，而其他成分则会相对快速地移动。
移动相的选择是根据溶剂性质和样品成分的亲疏性来确定的。
当移动相通过薄片时，样品中的各个成分会根据其在固定相和移动相之间的分配系数在薄片上形成不同的斑点。
移动距离较短的成分代表亲吸附性较强，而移动距离较远的成分代表亲吸附性较弱。
通过比较样品成分的不同斑点之间的特征，可以确定其组成和相对含量。
为了可视化分离结果，通常会使用化学试剂进行显色。
不同的化学试剂可以与特定化合物反应，产生颜色变化或发光，从而使分离出的物质清晰可见。
薄层色谱法具有操作简单、快速、经济等优点，广泛应用于各个领域中，如药物分析、食品检验、环境监测等。
薄层色谱法
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薄层色谱法
（thin layer chromatography; TLC) （一）概述 1.背景
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。 因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高， 结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。 70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后 发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪 器化，并实现了计算机化。
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展开时的注意事项
产生原因：展开槽未被展开剂饱和。尤其是 使用混合溶剂时，极性较弱和沸点较低的溶 剂，在薄层边缘容易挥发，使边缘部分的展 开剂中极性溶剂的比例增大，Rf相对增大。 同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf 值比边缘的Rf值小，即边缘效应。
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展开时的注意事项
消除办法：若在展开前先将展开槽与薄层
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六味地黄丸中牡丹皮的薄层图谱
1.丹皮酚； 2～5.六味地黄丸
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薄层色谱法（TLC)应用实例
二、醋酸可的松中其他甾体的检查
取本品，加氯仿-甲醇(9︰1) 制成每1ml 中含10mg的溶 液，作为供试品溶液；精密量取适量醋酸可的松，加氯仿甲醇(9︰1) 稀释成每1ml 中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。 照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl， 分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水 (385︰60︰15︰2) 为展开剂，展开后，晾干，在105 ℃干燥 10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品 溶液如显杂质斑点，不得多于3 个，其颜色与对照溶液的主 斑点比较，不得更深。
⑵点样
将试样用最少量展开剂溶解，用毛细 管蘸取试样溶液，在薄层板上点样。在样 点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细 线。薄层色谱板载样量有限，勿使点样量 过多。
薄层色谱法的原理
薄层色谱法的原理
薄层色谱法是一种基于吸附作用的分离和纯化技术，其原理是根据化合物在高效吸附材料上的亲和性不同，通过在涂层在薄层状的基底上，由于不同物质对于固定相的亲和力、扩散速度等不同的影响，从而使样品分离出不同的成分。
其主要分离机制是通过涂层在薄层基底上的吸附效应，使样品中各成分间在固态载体上得到分离、富集和纯化的过程。
具体来说，薄层色谱的样品溶液滴于薄层板表面，待样品挥发后，以流动相为带动，并沿着固定相的吸附效应分离样品中的各组分。
在样品组分移动的过程中，移动速度越快，与涂层吸附的能力也越弱，所以分离程度越高；同时，结合了碘和紫外光的显色处理，可以明显地看到样品分离后的各组分。
因此，薄层色谱法的分离机理是基于各样品成分吸附在高效吸附材料的不同能力，而且吸附能力与溶剂有关，适用于非极性、微极性和极性物质的分离和检测。
它可以在分离效率高、分离时间短、简单方便以及样品损失小等方面显示出独特的优势。
薄层色谱法
• 理论塔片n主要是吸附剂性质的函数 • k 反映了两种溶质的平均迁移速度，其由流动相溶
剂强度 决定 • 取决于吸附剂和流动相的组成
• 溶剂优化规则：
• 增加溶剂强度，使Rf值增大，但也可能降低分 离能力。
– k ∞ 9 4 2 1 0.5 0 – Rf 0 0.1 0.2 0.33 0.5 0.67 1
– 3.分离度
– R=
2(Ls.2-Ls.1) W1+W2
– 因Ls=Rf L0，同时对相邻的两个斑点，假定 W1=W2=W
–
则R=
L0
Rf.2-
W
Rf.1
= L0
W
×⊿Rf
– 与n=16[Ls/W] 2式合并，得：
参 比
前
沿
Ls
– 注意： – 同一物质在不同展开方式中得到的比移值是不相同的
。 – 在同样溶剂的重复n次的多次展开后的比移值
(Rf)n=1-(1-Rf)n
• 2. 相对比移值（Rx）
– 在难以确定溶剂前沿的位置时，需要引入相对比移值 （Rx） Rx=Ls/Lr
– 二、分离效能参数
• 1.理论塔板数 • n=16[Ls/W] 2 ，考虑静态扩散对起始斑点半
一般，被分离组的极性强，选择吸附 能力弱的吸附剂；反之，选吸附能力较强 者。
种类：
• 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 • 氧化铝—有碱性、中性、酸性 • 硅藻土—为化学中性吸附剂 • 纤维素—天然多糖类 • 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形
成氢键的物质有特别的选择性
• 硅胶：化学分子式为mSiO2·nH2O,多孔性 微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。
薄层色谱法
检查活性的方法：（1）把青靛酚、苏丹红G、甲基黄等染料 等量混合，溶于苯中，点放到板上，用正己烷展开，所有染 料应不动，用苯展开应依次得到三个染料的圆形斑点；（2） 用苯展开时，溶剂上升10cm，应在30min左右，不应超过 45min；（3）薄层厚度应均匀，并具有一定的机械强度，板 的活性对Rf值的大小影响很大。 活化后的薄层板最好放储存于氢氧化钾（3~10毫米汞柱）干 燥器中备用。注意尽量避免吸收水分，降低活性。使用前最 好重新活化。
3、显色剂法 —— 通用显色剂50%H2SO4，喷洒，Δ110~120º C， 显斑；酸碱指示剂，遇酸或碱显色；0.05%KMnO4，氧化性，使 淡红色薄板背景呈黄斑；5%磷钼酸，遇到还原性物质，呈兰色 显示斑。要根据实际情况选择显色指示剂。
（四）应用 定性分析 —— 薄层色谱中Rf值较纸色谱差，须严格控制实验条 件，可通过作对照实验，获得可靠结果。 定量分析 ——直接法和间接法 直接法：
特点：波长范围宽、扫描 速度快、自动化程度高及 操作简便。
C10269薄层色谱扫描仪
间接法 利用测定Rf值进行定性分析 薄层色谱的定量方法：
将样组分斑点显色后，将被测组分用小刀刮下或用特 制的斑点吸取装置将斑点吸到收集器中，将被测组分 用溶液洗脱，溶液用其他方法定量测定
淀粉 —— 机械强度高，但不能在含有碘蒸气中显色。
羧甲基纤维素 —— 机械强度高，耐腐蚀性差。
5、展开剂的选择
要考虑被分离物质的极性、吸附剂的活性及展开剂的极性 这三者之间的关系来选择合适的展开剂。
B A
例如：
极性
非极性 被分离物质
Ⅰ Ⅴ
非极性物质B，选用 吸附剂的活性为Ⅰ~Ⅱ级， 展开剂应为非极性的。
5、层吸缸中溶剂饱和度 不饱和层吸缸中展时Rf较大
0502-薄层色谱法
0502 薄层色谱法薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。
1.仪器与材料（1）薄层板按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。
固定相中可加入黏合剂、荧光剂。
硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、G、H表示含或不含石膏黏合剂。
F254为在紫外光254nm波长下显绿色背景的荧光剂。
按固定相粒径大小分为普通薄层板（10～40μm）和高效薄层板（5～10μm）。
在保证色谱质量的前提下，可对薄层板进行特别处理和化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板。
固定相颗粒大小一般要求粒径为10～40μm。
玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。
（2）点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。
、（3）展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。
水平展开用专用的水平展开槽。
（4）显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。
（5）检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用。
暗箱内光源应有足够的光照度。
（6）薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。
2.操作方法（1）薄层板制备市售薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟。
聚酰胺薄膜不需活化。
铝基片薄层板、塑料薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的固定相层不得有破损。
薄层色谱法的步骤
实用文档
薄层色谱法的步骤
薄层色谱法是一种常用的色谱分离技术，其步骤如下：
1. 准备样品：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，得到待分离的样品溶液。
2. 准备薄层色谱板：将薄层色谱板放入烘箱中预热，然后用毛刷均匀地涂上一层薄层色谱剂，待干燥后即可使用。
3. 样品上色：将准备好的样品溶液用微量注射器或毛玻璃棒点在薄层色谱板上，待样品点干燥后，再重复涂抹样品，直到涂抹的样品斑点足够大。
4. 运行薄层色谱：将准备好的薄层色谱板放在色谱槽中，注入色谱移动相，然后将色谱槽放入薄层色谱槽槽浴中，使移动相向上渗透，直至移动相达到薄层色谱板的顶端。
5. 检测分离结果：将薄层色谱板在紫外灯下照射，观察样品斑点的位置和颜色，并将斑点切下进行进一步分析。
以上就是薄层色谱法的基本步骤，通过这种方法可以对混合物中的化合物进行有效的分离和检测。
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薄层色谱法应用
薄层色谱法应用
薄层色谱法（Thin Layer Chromatography, TLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于药物分析、食品检测、环境监测、有机合成等领域。
以下是薄层色谱法的一些常见应用：
1. 药物分析：薄层色谱法可以用于药物的定性和定量分析。
通过比较样品与标准品在薄层色谱板上的迁移距离和颜色等特征，可以确定药物的成分和含量。
2. 食品检测：薄层色谱法可以用于食品中有害物质的检测，比如农药残留、食品中的添加剂等。
通过与标准品的比对，可以确定食品中是否存在有害物质及其含量。
3. 环境监测：薄层色谱法可用于环境样品中有机物的分析。
通过将样品提取后在薄层色谱板上展开，可以分离出不同成分并进行定性和定量分析，从而评估环境污染程度。
4. 有机合成中的反应监测：薄层色谱法可以用于有机合成反应的监测和优化。
通过在不同时间点采集反应物料，在薄层色谱板上进行分析，可以确定反应的进行程度和副反应产物的生成情况。
总之，薄层色谱法具有简单、快速、灵敏和经济等特点，广泛应用于各种领域的分析和研究中。
薄层色谱法(TLC)
254nm和256呈现荧光背景
二薄层色谱操作过程
1.薄层制备（铺板） 1份吸附剂（硅胶/氧化铝）+3份粘合剂+水→硫 钵中搅拌均匀条糊状（无气泡和板结）→均匀涂 布薄层板 硅胶G：自含粘和剂（含5%-10%的煅石膏），仅 加水 硅胶H：不含粘和剂，需另加CMC(0.4%-1%）的水 溶液，需放置沉降纤维)
3.点样——成功分离和精确定量的关键
点样要求： 点样原点应小而圆，距板边缘2cm， 需要可多次点样（每次挥干后），防止边缘效应 点样量勿超载，防止拖尾 点样勿伤及薄层表面
点样装置：容量毛细血管
自动薄层色谱点样仪
4.展开
展开原理：差速迁移 展开方式：上行展开，75°夹角 展开过程： 展开室预先用展开剂饱和，平衡系统→点样薄板一端 浸展开剂展开（距边缘0.5~1cm）→挥尽溶剂
3.载板
具一定机械强度，化学惰性，耐一定温度，表
面平整，厚度均匀，价格便宜
玻板：5cm×10cm ,10cm×20cm ,20cm×20cm
光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥
4.粘结剂
作用：加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板润湿性改善 色谱分离 1）无机粘结剂：煅石膏 含粘结剂固定相：硅胶G——含13~ 15%煅石膏G——
2溶解、样品溶 液稀释和浓缩、均相溶液制备、化学衍生化。
HPLC:预处理复杂而严格
TLC:样品预处理较简单
3.进样
HPLC:对溶样溶剂和样品浓度要求严格 可自动进样，每次一个样品 TLC：溶样溶剂可以任意选择，点样体积是唯一需准 确控制的参数. 可自动进样，每次多个样品
4.色谱分离
HPLC: 每次进样一个，分析和平衡时间长 恒组分洗脱适于极性范围窄的样品 梯度洗脱适于极性范围宽的样品并需要更多的时间 若组分吸附则无法检测且污染柱子 反相色谱常用 使用相同固定相和流动相的R较高 TLC： 同时分析多样品，方便灵活 适于各类物质分离 正相色谱占主导 对复杂样品分离能力好
薄层色谱法
点样直径不超过 5mm，点样距离一般为 1~1.5cm 即可。 样品在溶剂中的溶解度很大，原点将呈空心环——环形色谱效应。因此配制样品溶液时 应选择对组分溶解度相对较小的溶剂。 点样方式有点状点样和带状点样。 展开 展开剂也称溶剂系统，流动性或洗脱剂，是在平面色谱中用作流动相的液体。展开剂的 主要任务是溶解被分离的物质，在吸附剂薄层上转移被分离物质，使个组分的 Rf 值在 0.2~0.8 之间并对被分离物质要有适当的选择性。作为展开剂的溶剂应满足以下要求：适当的纯度、 适当的稳定性、低黏度 、线性分配等温线、很低或很高的蒸气压一级尽可能低的毒性。 展开方式总的来讲平面色谱的展开有线性、环形及向心 3 种几何形式。 A 单次展开 用同一种展开剂一个方向展开一次，这种方式在平面色谱中应用最为广泛。 （垂直上行展开，垂直下行展开，一向水平展开，对向水平展开） B 多次展开 单向对此展开，用相同的展开剂沿同一方向进行相同距离的重复展开，直 至分离满意，广泛应用于薄层色谱法 C 双向展开 用于成分较多、性质比较接近的难分离组分的分离。 薄层展开展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二 条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定 操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边 0.5～ 1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，待展开至规定距离（一般为 10～15cm），取 出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。 显色 A 光学检出法 a 自然光（400~800nm） b 紫外光（254nm 或 365nm） c 荧光 一些化合物吸收了较短波长的光，在瞬间发射出比照射光波长更长的光，而在
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多次萃取（3-4次）
调整水相酸度，提取有机酸、有机碱
利用盐析作用，提高提取率
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（3）液-液萃取法
离子对萃取法 BH++ In- → BH+· In-（水相）→ BH+· In-（有机相） 适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃
水相酸度的控制
第四章
中药制剂的含量测定
【目的要求】
掌握中药制剂含量测定的样品前处理方法及测定方法
的效能指标。
掌握可见-紫外分光光度法、TLCS、HPLC、 GC在中 药制剂分析中的应用。
熟悉荧光分光光度法及原子吸收光度法在中药制剂分 析中的应用。
了解双波长、三波长、差示、导数光谱法在中药制剂
分析中的应用。
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（1）ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ淀法
处理样品的 核心
样品+沉淀剂 →沉淀→过滤→滤液→测定 →沉淀→重量法或溶解后测定 复方益母草口服液中水苏碱的含量测定 利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部 分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。
药物分析学 科
§1 样品的处理
相的分配色谱
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
离子交换树脂：用于除去样品中的离子及萃取可离解化合物(弱酸、 弱碱药物) （5）固相微萃取（SPME） 集萃取、浓缩、进样于一
体的样品前处理新方法
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（6）消化法--测定中药制剂中的无机元素
洗脱顺序：极性大→小 药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
大孔树脂：分为极性（丙烯酰胺聚合物 ）和非极性（苯乙烯和二乙烯苯 的共聚物）型 非极性型（XAD-2等）：分开脂溶性和水溶性成分 ※ 使用前需要用有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗 聚酰胺：与溶质形成氢键而产生吸附作用，常用于含酚、酸、醌类药物样 品液的净化分离 硅藻土、纤维素：以水基质液作为固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动
三、样品的分离纯化
（2）蒸馏法
适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、小分子的生物碱、 丹皮酚等 最常用的水蒸气蒸馏法：
共水蒸馏法
通水蒸气蒸馏法
水上蒸馏法
利用盐析作用，提高蒸馏效果
药物分析学 科
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（3）液-液萃取法
直接萃取法 萃取剂的选择：亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚； 弱亲脂性的溶剂，如乙酸乙酯、正丁醇等
药物分析学 科
§1 样品的处理
样品处理的主要作用
释放被测组分，制成稳定试样
除去杂质，纯化 浓缩
试样形式符合测定的要求
一、样品的粉碎
目的——取样均匀，提取完全 粉碎设备——粉碎机、研钵、匀浆机 ※ 粒度大小合适，全部过筛 ※ 防止污染或损失
药物分析学 科
§1 样品的处理
样品处理的主要作用
目的：破坏有机物，使无机物游离 湿法消化：
硝酸-高氯酸法：适用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制
剂的破坏，无机金属离子均为高价态。 ※ 对含氮杂环类有机物破坏不够完全。
硝酸-硫酸法：适用于大多数有机物的破坏。
※ 与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定，不宜采有此法。 硫酸-硫酸盐法：常用于含砷或锑的有机样品的破坏，破坏后得到 三价砷或锑。 药物分析学 科
柱填料：硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭、聚酰胺、大孔硅 藻土、离子交换树脂、键合相硅胶C8、C18等
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§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
硅胶：酸性吸附剂，适用于中性或酸性成分的层析，强烈保留碱性化合物
洗脱顺序：极性小→大
氧化铝：弱碱性，分离一些碱性中草药成分，不宜用于醛、酮、酸、内 酯等类型的化合物分离 中性氧化铝、酸性氧化铝：适用于中性、酸性成分的分离 键合相硅胶（C18或ODS）：分开脂溶性和水溶性成分
时，费溶剂
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§1 样品的处理
二、样品的提取
（二）回流提取法
采用回流装置，用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热提取 优缺点及适用范围： 提取效率高，提取时间短，为0.5～2小时；提取杂质较多， 不适用于热不稳定或具有挥发性的成分 （三）连续回流提取 用索氏提取装置，少用混合溶剂，其余操作同回流提取法。 优缺点及适用范围：提取效率高，所需溶剂少，提取杂质较少
释放被测组分，制成稳定试样
除去杂质，纯化 浓缩
试样形式符合测定的要求
一、样品的粉碎
目的——取样均匀，提取完全 粉碎设备——粉碎机、研钵、匀浆机 ※ 粒度大小合适，全部过筛 ※ 防止污染或损失
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§1 样品的处理 掌握每种提取方法的操
二、样品的提取
（一）冷浸法
作、优缺点及应用范围
操作：样品→精密称定→置容器内→精密加入溶剂→称定重量 →浸泡（12~24h）→称重→补足重量→测定 测定方法： 全部测定法：过滤→滤液→蒸干→定容→测定（低浓） 部分测定法：过滤→滤液→取若干体积进行测定（高浓） 优缺点及适用范围： 操作简便，适用于热不稳定的样品，提取杂质较少，但是费
离子对试剂的选择
有机溶剂的选择
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§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（4）色谱法（层析法）
分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱 操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱 装柱方法：湿法装柱、干法装柱 操作程序：①柱的活化；②上样；③清洗；④洗脱。
微柱色谱（固相萃取）
操作简便；不适用于受热易分解的成分。
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§1 样品的处理
二、样品的提取
（四）超声提取法
样品置容器中，加入提取溶剂，放入超声振荡器中进行提取 优缺点及适用范围： 提取效率高，速度快30min；超声波可引起化学成分的改变 （五）超临界流体提取法（SFE） 优点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择性高、节省 溶剂、易于自动化，而且可避免使用易燃，有毒的有机溶剂， 能与色谱和光谱等分析仪器直接联用
§1 样品的处理
三、样品的分离纯化
（6）消化法--测定中药制剂中的无机元素
目的：破坏有机物，使无机物游离 干法消化： 灼烧灰化
(+NaCO3/MgO) ※ 控制温度在420℃以下 ※不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等，）有机样品的破坏。 ※如果灰化不完全，可以加入硝酸-水（1：3）或稀盐酸-水（1：3） 水浴上蒸干后，继续小火灰化 药物分析学 科