(精选)分子细胞遗传学技术
分子遗传学资料
名词解释第一张绪论1. 独立分离定律：在生物体细胞中，控制同一性状的遗传因子成对存在，不相融合；在形成配子时，成对的遗传因子发生分离，分离后的遗传因子分别进入不同的配子中，随配子遗传给后代。
2. 自由组合定律：控制不同性状的遗传椅子的分离和组合是互不干扰的；在形成配子时，决定同一性状的成队的遗传因子彼此分离，决定不同性状的遗传因子自由组合．3. “连锁”：染色体可以自由组合，而排在一条染色体上的基因是不能自由组合的。
同源染色体的断离与结合，而产生了基因的“互相交换”。
4. 分子遗传学：研究遗传信息大分子的结构和功能的科学。
它依据物理、化学的原理来解释遗传现象，并在分子水平上研究遗传机制及遗传物质对代谢过程的调控。
第二章基因1.基因：遗传的物质基础，是DNA分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。
既是功能单位，又是重组单位和突变单位。
2.顺反子：编码单条多肽链的一个遗传功能单位，即转录单位。
3.朊病毒：一类不含核酸而仅由蛋白质构成的可自我复制并具有感染性的因子。
4.表观遗传学：在DNA序列不发生改变的情况下，基因表达发生表化的遗传学研究。
5.断裂基因：基因的编码序列在DNA放在上不是连续的，而是被不编码的序列隔开，形成镶嵌排列的断裂形式。
6.外显子：基因中编码的序列，与mRNA的序列相对应。
内含子：基因中不编码的序列。
7.重叠基因：是指两个或两个以上的基因共有一段DNA序列，或是指一段DNA序列成为两个或两个以上基因的组成部分。
8.DNA的转座：由可移位因子介导的遗传物质重排现象。
9.转座子：存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。
10.基因序列：指基因组里决定蛋白质(或RNA产物)的DNA序列。
11.非基因序列：是基因组中除基因以外的所有DNA序列，主要是两个基因之间的间插序列。
12.编码序列：指编码RNA和蛋白质的DNA序列。
13.非编码序列：指基因的内含子序列以及居间序列的总和。
细胞和分子细胞遗传学技术
细胞和分子细胞遗传学技术发表时间：2012-08-10T08:14:01.827Z 来源：《中外健康文摘》2012年第19期供稿作者：张亚丽[导读] 经典的细胞遗传学技术是指通过制备染色体标本，分析染色体数目和结构改变与人类疾病之间的关系。
张亚丽（黑龙江省森工总医院 150040）【中图分类号】R394.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）19-0151-02经典的细胞遗传学技术是指通过制备染色体标本，分析染色体数目和结构改变与人类疾病之间的关系。
近代分子生物学技术与细胞遗传学技术相结合，形成了细胞和分子遗传学技术。
其中比较成熟、具有实用价值的技术是：①荧光原位杂交；②比较基因组杂交。
1 人外周血淋巴细胞染色体检测技术人外周血淋巴细胞染色体检测属于经典的细胞遗传学技术。
用作染色体分析的标本包括外周血、脐带血、羊水、胎盘绒毛组织和肿瘤组织等。
外周血是应用最多的材料。
其他组织样本染色体制备方法与制备人外周血淋巴细胞的方法基本类同，只是标本的处理和培养条件有所调整。
1.1 基本原理体外培养的外周血淋巴细胞，在植物凝集素(PHA)的刺激下转化成为能进行有丝分裂的淋巴母细胞；在秋水仙素(纺锤体抑制剂)作用下，淋巴母细胞有丝分裂停滞，从而获得处于有丝分裂中期的淋巴细胞染色体标本。
1.2 基本操作程序(1)取血3ml(空针用0.1～0.2ml肝素抗凝)。
(2)用7号针头向每瓶培养液(内装有5ml培养液)接种血液标本15～16滴，摇匀后，静置于37℃的隔水式恒温培养箱中培养72h。
(3)终止培养前3h，用7号针头向培养瓶中加入秋水仙素3滴(浓度为20μg/ml)并混匀。
(4)按以下程序制片。
①收集细胞：由培养瓶中吸取培养物10ml置于离心管中，离,l～,10min(1 500～2 000r/min)离心后，弃上清液，留下沉淀物。
②低渗处理沉淀物：向沉淀物中加入已预温(37℃)的KCI(0.075mol/L)8ml，充分吹打，以使细胞分散，并将离心管置于37℃水浴中20～30min。
分子遗传学技术范文第9篇 (2)
分子遗传学技术范文第9篇关键词：动物遗传学实验教学教学改革创新型人才《动物遗传学》是畜牧科学和动物医学学科重要的专业基础课，具有基础理论抽象、逻辑思维强、知识涵盖面广等特点，是与家畜育种和畜牧生产密切相关的一门学科[1]-[3]，也是实验技能性很强的一门学科，实验教学在课程教学中占有十分重要的地位。
近年来，随着高等教育教学改革的不断深化，对创新人才的培养日益重视，注重学生创新能力的培养成为高校的重要任务之一。
传统动物遗传学实验教学依附于理论教学，实验只是为了验证理论，实验设计和教学都是围绕“教”而进行的，学生都处于接受式被动学习，主观能动性得不到调动，创新思维得不到培养[4]，在很大程度上影响教学质量与效果，难以满足新世纪对人才培养的需求。
因此，为适应新时期高等教育教学改革的需要，探索适合学生创新能力培养的专业基础课程实验教学改革和实践，对高等农业院校教学具有重要的理论和实践意义。
针对动物遗传学课程迅速发展的特点，笔者积极创造条件，从以下方面对动物遗传学实验教学进行了改革与实践，经过师生的共同努力，取得了较好的成效。
1.调整教学方案，精选实验教学内容华南农业大学《动物遗传学》是广东省精品课程，理论课时为32学时，实验课为单列实验课共16学时。
随着生物技术的快速发展和广泛应用，动物遗传学与其他相关学科相互渗透、交叉发展，产生新的知识内容。
因此，要在有限的学时内把《动物遗传学》的理论和实践知识教授给学生，使学生更好地了解《动物遗传学》的最新研究进展，掌握新的理论和方法，需要有最佳的教学方案。
我们在《动物遗传学》实验教学体系中不断对教学内容进行探索和改革，在以往以经典遗传实验教学为主要内容的基础上，将现代遗传学实验技术引入本科生实验教学，适当增设分子遗传学实验技术内容以适应遗传学的快速发展，加深学生对现代动物遗传学新理论和技术知识的理解。
经过两年实验教学实践，总结出“动物遗传学实验”涉及果蝇的相关实验包括：果蝇性别鉴定及性状观察、单因子杂交实验、双因子杂交实验及果蝇唾腺染色体观察等验证性实验内容，要求学生综合应用经典遗传学的知识自主设计果蝇杂交组合，并按制订的设计方案实施，把验证性实验与探索性实验相结合，整合成一个综合设计性实验，培养学生遗传学实验的综合设计能力、实验操作能力、数据分析能力和独立创新能力，提高实验教学效率。
细胞分子遗传学的研究方法
细胞分子遗传学的研究方法细胞分子遗传学是研究细胞遗传物质结构、功能和遗传变异的学科，其研究的基本单位是基因。
在现代分子生物学的蓬勃发展下，细胞分子遗传学得到快速发展，涌现出了许多重要的研究方法。
一、PCR（聚合酶链式反应）PCR是在体外不依赖于生物体的核酸聚合酶酶直接扩增DNA分子的技术，可以快速、准确地获得大量DNA样本，其应用广泛，如疾病诊断、基因工程、遗传治疗等。
PCR的应用非常灵活，可以应用在不同领域的研究中，例如：基因克隆、病毒检测、疾病诊断等。
二、基因敲除技术（CRISPR/Cas9）基因敲除技术是通过将外源DNA序列引入细胞内，利用CRISPR/Cas9酶来切断特定靶点DNA序列，从而实现基因敲除或突变。
该技术可以选择性地切断不同的基因，准确实现对生物表型的调控，不仅可以被应用在基础研究领域，还可在生物工程和医学应用中发挥重要作用。
三、基因转染技术基因转染技术是将外源化学物质引入到细胞内，引起目标基因的表达或抑制，或者使目标细胞发生一些变化。
基因转染技术是DNA递送系统的一种，主要应用于基因工程、疾病治疗、组织再生和干细胞研究等。
常见的转染方式有质粒转染、病毒载体转染、脂质体转染等。
四、全基因组测序技术全基因组测序技术即通过对整个基因组的测序，获得生物体所有基因的完整信息，该技术可以分析出人的基因序列，也可以研究各类动植物的基因。
该技术可以被广泛应用在基础研究、医学领域和农业领域，可以解决许多医疗问题、疾病诊断、新药物研发等。
五、原位杂交技术原位杂交技术是一种对单条DNA或RNA分子进行定位和检测的方法。
该技术可以确定某个DNA区域或RNA的存在、形态和浓度等，同时也可以研究DNA或RNA的组织分布、发生变化的区域和情况，具有足够的灵敏度和特异性。
该技术可以被应用于生态学、演化学、病理学和基因组学的研究等。
六、CAGE-seq技术CAGE-seq技术是全基因组转录测序技术中的一种，可以检测出mRNA序列起始的位置，并测量其相对表达强度。
(精选)分子细胞遗传学技术
各种类型病理性突变的比例
1. 无义突变和移码突变： 60％ 2. 稀有的错义突变： 20％ 3. DNA大片段缺失或重复: 20％
微小突变
4. 另外：可能和疾病风险评估有关的大量的多态 位点
24
（二）目前常用的对已知点突变的分析技术
• 限制性片段长度多态性（RFLP） • 等位基因特异性（PCR）扩增（ASA） • 等位基因特异性寡核苷酸杂交（ ASO） • DNA芯片
24种不同染色体涂染探针杂 交得到的彩色染色体
6
染色体技术的 应用－1
inv(14)(p12q24)
t(2; 11)(2q34; 11q13)
7
细胞遗传学研究中染色体技 术的应用—FISH技术检出 t(2; 14)
8
染色体技术的 应用－2
inv(9)(p12q13)
9
分子细胞遗传学：DMD基因第46号外显子缺失
9710531异源双链体形成分析heteroduplexanalysisha单链构象多态性分析singlestrandconformationanalysissscpdenaturinggradientgelelectrophoresisdgge变性高效液相色谱分析denaturinghighperformanceliquidchromatographydhplc32体外蛋白截短实验proteintruncationtestptt定量多重pcr技术quantitativemultiplexpcrqmpcr多重探针连接依赖性扩增技术multiplexligationdependentprobeamplifcationmlpadna序列分析dnasequencing33由突变型和野生型dna链形成的异源双链dna在其错配处形成一个凸起电泳时会产生与相应的同源双链dna不同的迁移率从而使两者得以分离
分子细胞遗传学技术课件
分子细胞遗传学是研究细胞内遗传信息传递和控制的科学，广泛应用于生物 学、医学和农业等领域。了解这些技术的原理和实验步骤对于我们理解生命 过程和开展研究具有重要意义。
背景介绍
分子细胞遗传学的定义
研究细胞内基因及其表达调 控的科学。
分子细胞遗传学的应用 领域
广泛应用于生物学、医学和 农业等领域。
分子细胞遗传学的重要 性
帮助我们理解细胞功能和疾 病发生机制。
技术原理
DNA测序技术
通过测定DNA序列，揭示基因 组的结构和功能。
基因编辑技术
利用工具酶对基因进行修改， 实现精准的基因组编辑。
基因表达分析技术
研究基因在细胞内的表达模式 和水平。
实验方法与步骤
1
DNA提取方法
从细胞或组织中提取纯净的DNA样本。
基因编辑实验步骤
2
选择合适的编辑技术和工具，进行基因
组编辑。Biblioteka 3基因表达分析实验步骤
收集细胞或组织样本，提取RNA，进行 表达分析。
案例研究
基因编辑的实际应用
针对某种疾病的基因进行编辑， 开发治疗方法。
基因表达分析案例
研究特定细胞中某个基因的表达 模式和调控机制。
基因组研究案例
通过测序和分析基因组，揭示基 因功能和遗传变异。
未来发展和挑战
分子细胞遗传学技术在不断发展，将为我们揭示更多细胞和基因的奥秘。然 而，技术的应用也面临着伦理和安全等方面的挑战。
分子细胞遗传学诊断技术简介
分子细胞遗传学诊断技术简介分子细胞遗传学诊断技术是一种用于分析人类遗传物质的方法，可用于诊断遗传疾病、基因突变和遗传性疾病的潜在风险。
该技术可以确定某些疾病所特有的基因突变，在生殖前探测到胚胎患病的风险，帮助家庭进行疾病预防和治疗。
原理分子细胞遗传学诊断技术采用一系列实验室技术，例如聚合酶链反应（PCR）、基因测序和基因芯片。
这些技术均可用于寻找DNA序列、检测基因突变或扩增DNA分子，进而确定个体是否患有特定遗传性疾病。
在PCR过程中，DNA的双链结构会被分解成单链形式，加入引物后，便会被聚合酶复制成为任意长度的片段。
这个过程可以是扩繁出的对基因序列进行测序，或者是检测基因缺陷。
另外，芯片技术可以在单片的微型芯片上同时测出数千个基因的存在情况。
这些技术与其他分子生物学技术相结合，能够在细胞水平上检测遗传性疾病和基因突变。
应用分子细胞遗传学诊断技术广泛应用于分析人类的遗传疾病、基因突变和遗传性疾病。
医生常用该技术寻找导致疾病的基因突变，并筛查携带这种基因突变的个体，便于疾病的早期诊断、预防和治疗。
基因诊断技术还可以用于生殖前诊断，即在妊娠早期对胎儿进行遗传学检测，以确定胎儿是否患有遗传性疾病，从而选择是否终止妊娠。
此外，该技术还可以用于细胞治疗、肿瘤治疗和产前诊断。
优缺点分子细胞遗传学诊断技术有许多优点，例如它具有高敏感性、高特异性、快速、准确和可重复。
相比传统的遗传学检测技术，该技术对样本要求较低，可以使用体细胞、血液、唾液、尿液等多种样本进行检测，不会受孕前诊断次数的限制，从而大大提高了疾病诊断的效率和准确性。
然而，分子细胞遗传学诊断技术也存在着一些不足之处。
其主要缺点是成本较高、操作要求精密、对实验室设备和技术要求高等。
分子细胞遗传学诊断技术是一种在现代医学和生命科学领域得到广泛应用的技术，可以有效帮助人们诊断和预防遗传性疾病，预测基因突变及风险，为生命科学、医学和治疗提供了强有力的支持。
分子细胞遗传学诊断技术简介
技术优势
➢ 重复性好、稳定；
➢ 高灵敏性及特异性；
➢ 可用于间期细胞，不需要细胞培养；
目前，FISH已成为一种常见检测手段，国外广泛地用 于产前、产后遗传病诊断及血液肿瘤、实体瘤等方面的
检测。在欧美发达国家应用FISH产前诊断检测染色体 异常占30-40%。
技术原理与方法
产前诊断检测非整倍体需要21、13、 18、X和Y染色体上的五种探针。其中21 号和13号染色体检测探针列为一组，为 位点特异探针，分别用Rhodamine (红 色和FITC (绿色)标记。18号、X和Y染色 体探针列为一组，为染色体着丝粒特异性 重复序列探针,分别用DEAC(蓝色) FITC (绿色)和Rhodamine (红色)标记。
➢ 试剂及设备成本高。
aCGH快速检测间期细胞全基 因组拷贝数
Байду номын сангаас
21世纪细胞遗传学的革命 – aCGH
简称：aCGH
英文名：array-comparative genomic hybridization； Microarray based Comparative Genomic Hybridization ）
SpectralWare® software provides a visual representation of the data generated from the microarray
Targeted aCGH
对已知病症提供清晰的信号
避免实验室反复用FISH 方法来 进行实验诊断
结果易懂 将错失不覆盖区域的基因缺失
因。 生育过先天性心脏病患儿父母进行检测，
可以预测下一胎儿患先心病的可能性。
光谱核型分析技术检测染色体异常
分子和细胞遗传学的新技术和方法发展
分子和细胞遗传学的新技术和方法发展近年来，随着科学技术的飞速发展，分子和细胞遗传学的研究也取得了巨大的进展。
在这个领域中，许多新的技术和方法被开发出来，这些技术和方法使得我们能够更深入地了解细胞和分子的运作机制，也为生命科学的发展带来了新的契机和可能性。
一、基因编辑技术基因编辑技术是分子和细胞遗传学领域的一项重要技术，它可以精确地修改生物体的基因组。
其中，CRISPR-Cas9技术是最常用的一种基因编辑技术，它可以在特定的DNA序列上切割出任意基因，并帮助科学家对其进行修饰、删除或添加。
这项技术已经广泛应用于生物学、医学、农业和环境保护等领域。
二、单细胞测序单细胞测序技术是近年来兴起的一项新技术，它可以对单个细胞的基因组、转录组和代谢组进行研究。
这项技术有助于科学家深入了解细胞的不同类型和功能，以及不同细胞之间的互动和沟通机制。
此外，单细胞测序技术也可以用于研究肿瘤细胞的特征和变异，有助于开发更为个体化的肿瘤治疗方案。
三、基因组学基因组学是研究生物基因组的一门学科。
近年来，随着高通量测序技术的发展，科学家们可以更加快速、精确地对基因组进行测序和分析。
这项技术可以帮助我们了解不同物种之间的基因组差异，以及不同群体和个体之间的遗传变异。
此外，基因组学也可以用于发现新的基因和基因型，以及开发基于分子和细胞机制的新型疗法和药物。
四、蛋白质组学蛋白质组学是研究蛋白质表达和功能的一门学科。
随着蛋白质芯片技术、质谱分析技术等的出现，科学家们可以更加深入地了解蛋白质的表达、结构和功能。
这项技术有助于发现新的蛋白质、鉴定蛋白质结构、了解蛋白质的相互作用和信号传递机制，同时也可以用于开发新型的诊断工具和药物。
五、表观遗传学表观遗传学是研究基因组中表型差异的一门学科，它主要关注基因组中非编码性DNA序列的功能。
近年来，随着染色质免疫沉淀、荧光内在性细胞成像等新技术的出现，科学家们可以更加深入地了解表观遗传组的组成和调控机制。
分子细胞遗传学新进展
• 我国开展FISH检测的现状是不系统、不规范、不普 及
• 本课题
– 将FISH技术研究应用的国际最新成果与中国的实际情况相 结合，争取在FISH平台上建立中国人群的相关疾病资料， 为临床在“个体化医学”概念下诊断及治疗这些疾病提供新 的依据
整理课件
37
谢谢!
整理课件
38
份划分）
• 32 (17p-)
• 79 (11q-)
• 111(normal)
• 114 (+12q)
• 133 (13q-)
整理课件
29
结论
• Binet 分级, IgVH 突变 , CD38以及FISH都 可独立的作为慢性淋巴细胞性白血病的预 后评价手段
• FISH 是一种有效且可靠的预测方法
整理课件
32
多发性骨髓瘤
应用FISH方法确定的三个预 后组 : – 预后差: t(4;14)(p16;q32); t(14;16)(q32;q23), 17p13- ( 24.7 个月) – 预后中等: 13q14(42.3 个月) – 预后好: 其他 (50.5 个 月)
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33
成人急性淋巴细胞性白血病的预后分类
FISH检测ASS缺失
整理课件
28
慢性淋巴细胞性白血病（慢淋）
• 是成人中常见的白血病 • 有的慢淋病人只能存活几个月，而有的病人则能生存超过
20年 • 目前的常规检测手段(Rai and Binet)不能很好的预测病
人的风险 • 分子细胞遗传学为预后提供关键参数信息 • 通过FISH检测可确定病人所属的预后组（依据平均生存月
• Unfavorable risk (median DFS 7 months)
细胞学和分子遗传学的最新技术和理论
细胞学和分子遗传学的最新技术和理论近年来，细胞学和分子遗传学领域的新技术和理论不断涌现，为相关研究提供了更广阔的研究领域和更准确的测量方法。
这些新技术和理论不仅可以用于深入探索细胞结构和功能，同时还可以用于对遗传信息的精细研究，以及相关疾病的诊断和治疗。
本文将从多个角度介绍细胞学和分子遗传学的最新技术和理论的应用和发展。
一、基因编辑技术CRISPR/Cas9基因编辑技术是当前最热门的分子生物技术之一。
它可用于在细胞或生物体中精确定位基因，通过切除或替换基因来精确调控基因表达。
这项技术复杂、多样的应用已经涉及到基因治疗、基因增加或删除，使得科学家可以通过改变DNA来治疗某些遗传疾病。
另一个相关技术是“基因剪切”技术，通过设计切割突变、删除突变或插入突变，可以特定地删除、插入或激活某个靶向基因位点，从而修复某个特定的基因或减轻病情。
“基因剪切”技术也可以被运用于植物培育、家畜生产等领域，是一项具有广泛应用价值的技术。
二、单细胞技术单细胞技术是指对个体生物中的单个细胞进行精细分析的技术。
这项技术可以用于研究细胞状态、特殊细胞类型、细胞之间的相互作用等问题。
通过利用单细胞测序技术，可以对不同细胞中的基因表达变化进行分类、特征提取和数据分析，有助于了解生物体中不同细胞之间的差异和相互作用。
随着单细胞技术的普及，越来越多地挖掘出那些疑难杂症中的细胞变异。
单细胞技术有助于对复杂疾病的诊断和治疗，如癌症、免疫疾病等等。
三、三维细胞模拟技术三维细胞模拟技术是三维打印技术的延伸应用。
通过将细胞纳米线和其他物质结合以模拟细胞，科学家可以在体外培养细胞，模拟人体细胞的生命周期和复杂的细胞信号传递途径，并探究与细胞信号相关的疾病的机制和治疗方法。
四、生物信息学和人工智能技术生物信息学和人工智能技术是结合分子生物学、计算机科学等领域进行跨界合作的一种新兴科技。
它可以利用大量的数据研究分子遗传学与疾病发生、发展之间的关系，并为基因治疗和创新药物研发提供方向和依据。
细胞分子遗传学和蛋白质组学
细胞分子遗传学和蛋白质组学：从基础到应用是现代生命科学的两个核心领域。
它们通过研究细胞内分子的结构、相互作用及其功能，揭示生命活动的本质和机制。
本文将从基础、应用两个方面阐述这两个领域的相关内容。
一、细胞分子遗传学细胞分子遗传学是研究DNA、RNA和蛋白质等分子在细胞内转录、转译、修饰以及相互作用等过程的学科。
其中，核酸序列分析、基因表达调控和基因变异等是其重要研究领域。
1、DNA与RNA的序列分析DNA和RNA分别组成生物体内的基因和转录产物，而核酸序列则信息载体。
研究人员可通过分子生物学和生物信息学手段，对DNA和RNA序列进行定序、比对和注释等操作。
这不仅是生命科学的基础，也支撑了生物基因组学、表观遗传学和系统发育学等领域的研究。
2、基因表达调控基因的转录、翻译及修饰等过程，决定了其功能和表达水平。
遗传学家通过构建激活或抑制基因表达的调控元件，研究其在细胞内的表达模式及作用机制。
这些研究有助于揭示基因调控的分子机制，为生理学、药理学及疾病治疗等领域提供了理论和实践基础。
3、基因变异和遗传疾病基因变异是指基因序列发生改变，导致其功能发生变化或失调。
基因变异是基因组多样性产生的主要途径，也是遗传性疾病以及癌症等疾病产生的主要原因。
因此，基因变异的研究对于疾病预防和治疗具有重要意义。
二、蛋白质组学蛋白质组学是研究蛋白质在细胞内表达、结构和功能等方面的学科。
其中，质谱分析、蛋白质互作和代谢组学等是其重要研究领域。
1、质谱分析质谱分析是蛋白质组学的核心技术。
它通过将蛋白质样品分离、离子化和检测等步骤，得到蛋白质的分子质量和结构信息。
质谱分析既可以鉴定特定蛋白质的存在和表达水平，也能揭示蛋白质的修饰状态以及作用通路等信息。
2、蛋白质互作和折叠蛋白质在细胞内相互作用，组成了细胞内复杂的分子网络。
蛋白质互作可以通过蛋白质-蛋白质相互作用、酶-底物互作等手段进行研究。
折叠是蛋白质由无序态向有序态转换的过程。
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5
应用15号染色体一基因特异性 探针（红色）杂交确定其是否 缺失；绿色探针鉴定15号染色 体着丝粒。
17
二、突变分析与分子诊断
18
（一）基因突变类型
• 点突变：只有一个或几个核苷酸的改变，是突 变中最多见的形式。
• 稳定突变：传递中不改变原有的突变。 • 动态突变：传递中不断改变自己，多见于短重
复序列的突变，在一代代传递中重复次数发生 明显变化。
19
点突变的结果：
（1）同义突变（samesense mutation）：碱基替换后， 虽然密码子发生改变，但编码氨基酸没有改变（遗传密码 的兼并性），亦称静止突变。
4
荧光原位杂交技术（Fluorescence in site hybridization, FISH）的特异性DNA探针
• 基因座特异性探针：克隆扩增获得。在基因制图方面的努 力，越来越多的这方面探针可以使用
• 着丝粒重复序列探针：这些特异性的探针可在中期染色体 和间期细胞核中产生强烈信号，可以鉴别特异性染色体。
（2）错义突变（missense mutation）：碱基替换，密码 子发生改变后，编码氨基酸亦发生改变，编码另一个氨基 酸。
（3）无义突变（nonsense mutation）：碱基替换后， 使编码氨基酸的密码子变成一个终止密码子。
（4）中性突变：包含两种情况，即“同义突变”和不改变 蛋白质功能的“错义突变”
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各种类型病理性突变的比例
1. 无义突变和移码突变： 60％ 2. 稀有的错义突变： 20％ 3. DNA大片段缺失或重复: 20％
微小突变
4. 另外：可能和疾病风险评估有关的大量的多态 位点
24
（二）目前常用的对已知点突变的分析技术
• 限制性片段长度多态性（RFLP） • 等位基因特异性（PCR）扩增（ASA） • 等位基因特异性寡核苷酸杂交（ ASO） • DNA芯片
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基因突变形式—碱基的插入和缺失
• 碱基的插入和缺失：基因编码序列中插入或丢失一个或几 个碱基，其结果是突变点下游碱基序列发生移码，编码氨 基 酸 序 列 都 发 生 改 变 ， 又 称 移 码 突 变 （ frameshift mutation），并可在突变点下游提前出现终止密码。
21
碱基的插入和缺失的结果：将导致移码突变
24种不同染色体涂染探针杂 交得到的彩色染色体
6
染色体技术的 应用－1
inv(14)(p12q24)
t(2; 11)(2q34; 11q13)
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细胞遗传学研究中染色体技 术的应用—FISH技术检出 t(2; 14)
8
染色体技术的 应用－2
inv(9)(p12q13)
9
分子细胞遗传学：DMD基因第46号外显子缺失
分子细胞遗传学技术 与产前诊断
南京大学医学院 王亚平
2006年11月
1
基因诊断的中心问题是认识 遗传变异、基因突变 及与表型之间的关系
2
一、分子细胞遗பைடு நூலகம்学技术
3
荧光原位杂交技术（fluorescence in site
hybridization, FISH）：用荧光物质标记特异性DNA探 针，与中期细胞染色体或间期细胞核杂交，鉴别和确定出 生缺陷、肿瘤细胞染色体异常，分辨率可达50－500 kb.
（frameshift mutation），并可在突变点下游提前出现 终止密码产生截短型蛋白
缺失突变
22
基因突变形式
• 框内突变（inframe mutation）：3个或是 的倍数的碱基缺失或插入导致的突变，使基因 丢失或增加1个或几个氨基酸。
• DNA 大片段缺失或复制（large deletion or duplication)：几百个bp至几十个kb的碱基 缺失或复制。
• 通过检测染色体上两种荧光信号的相对比值，了解肿瘤 细胞DNA拷贝数的变化，并可在染色体上定位。
• 这一技术已广泛应用于肿瘤基因组不平衡的检测。
12
比较基因组杂交的原理
13
• 待测DNA（肿 瘤细胞DNA， test DNA)为绿 色 • 参照DNA(正常 细胞DNA， reference DNA） 为红色 • 复染为蓝色
10
细胞遗传学研究中染色体技术的应用
21号染色体涂染探针FISH杂 交，显示21三体
9号染色体涂染探针杂交。 箭头示易位到10号染色体上 的来自9号染色体的片段
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比较基因组杂交（comparative genomic hybridization, CGH）
• 近年在FISH技术基础上发展起来的一种新的分子细胞遗 传学技术（1992，Kallioniemi）。其基本原理是用不 同荧光物质分别标记肿瘤细胞DNA和正常人细胞DNA， 然后与正常人中期细胞染色体杂交。
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1.限制性片段长度多态性（RFLP）分析
• 当突变影响到某一限制性内切酶位点时， 可通过酶切PCR产物，电泳分析:限制性片 段长度多态性（RFLP）
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2.等位基因特异性（PCR）扩增（ASA）
• 通过设计两个5’端引物，一个与正常DNA互补， 一个与突变DNA互补。分别加入这两种引物及3’ 端引物进行两个平行的PCR，分析结果。
人食管鳞癌细胞株的比较基因组杂交
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A. 中期染色体的DAPI 的
B. 复染图
B. 中期染色体比较基因组杂
交（CGH）：红色区域表 示
丢失，绿色区域表示扩增。15
CGH的优点：
• 经一次染色体原位杂交实验即可在整条染色体或染色体 区带水平对待检基因组DNA序列拷贝数改变进行检测和 定位。
• 无需进行染色体培养，对于不易制备良好分裂相的实体 瘤尤为适用。
• 所需染色体DNA可来自各种组织，如新鲜组织、福尔马 林固定的组织、石蜡包埋组织，可在很少量的基础上检 测，利于做回顾性研究。
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CGH的局限性：
• 难以检出以下异常：平衡易位，微小突变，基 因重排，倍体水平改变。
• 结果可能受到一些因素影响：正常细胞存在， 肿瘤自身的遗传异质性，系统的波动。
• 灵敏度：限于检测较大范围的缺失（10 — 30MB）