【WO2019205919A1】一种生物突变体库的构建方法【专利】
一种植株突变体的制备方法[发明专利]
![一种植株突变体的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/4d5706f210a6f524cdbf85a2.png)
专利名称：一种植株突变体的制备方法
专利类型：发明专利
发明人：米铁柱,张国栋,刘佳音,万吉丽,王克响,罗碧申请号：CN201810794442.6
申请日：20180718
公开号：CN108977459A
公开日：
20181211
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本申请公开了一种植株突变体的制备方法，包括以下步骤：T1.构建CRISPR/cas9基因敲除载体，敲除CYP78A13基因；T2.农杆菌转化；T3.基因敲除检测；T4.转基因植株表型鉴定。
本发明植株突变体的制备方法方法，以水稻细胞核育性基因作为目标基因，利用CRISPR/cas9基因沉默进行基因敲除，基因沉默后丧失功能，细胞发育长成完整植株，但不具备发育成正常功能的花粉，并能够以此为研究对象，用于创制不育系。
申请人：青岛袁策集团有限公司
地址：266000 山东省青岛市李沧区金水路171号青岛国际院士港16号楼
国籍：CN
代理机构：北京华仁联合知识产权代理有限公司
代理人：李冰
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一种基因定点突变载体及其构建方法和应用[发明专利]
![一种基因定点突变载体及其构建方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/84cc7b0281c758f5f71f6704.png)
专利名称：一种基因定点突变载体及其构建方法和应用专利类型：发明专利
发明人：姜临建,陈其军,倪汉文,许勇,陈易雨,王志平
申请号：CN201710030839.3
申请日：20170117
公开号：CN106834341A
公开日：
20170613
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种基因定点突变载体及其构建方法和应用。
本发明通过大量的优化，提供一种基因定点突变载体，通过CRISPR系统将胞嘧啶脱氨酶引导至胞嘧啶附近，将胞嘧啶变成尿嘧啶，随后植物细胞内的自发修复最终将尿嘧啶变成了胸腺嘧啶，最终在植物中实现C到T的定点突变，产生抗除草剂抗性。
另外还可在非sgRNA靶点区域产生点突变，带来新的抗除草剂的重大农艺性状。
申请人：中国农业大学
地址：100193 北京市海淀区圆明园西路2号
国籍：CN
代理机构：北京众合诚成知识产权代理有限公司
代理人：陈波
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基因饱和突变库及其构建方法、应用[发明专利]
![基因饱和突变库及其构建方法、应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/81eae0ebcf2f0066f5335a8102d276a20129604d.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611139117.3(22)申请日 2016.12.12(71)申请人 中国科学院天津工业生物技术研究所地址 300308 天津市滨海新区空港经济区西七道32号中国科学院天津工业生物技术研究所(72)发明人 冯淼 田会娟 王璐 王丽娜 田敬东 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限公司 11227代理人 赵青朵(51)Int.Cl.C12N 15/10(2006.01)C40B 50/06(2006.01)C40B 40/08(2006.01) (54)发明名称基因饱和突变库及其构建方法、应用(57)摘要本发明涉及生物技术领域，特别涉及基因饱和突变库及其构建方法、应用。
该长序列DNA中连续多点饱和突变库构建方法适用于高通量蛋白质功能筛选，以含有表达目的蛋白的基因的环状双螺旋DNA质粒为模板，采用一对序列完全反向互补的正向和反向突变引物，通过聚合酶链式反应，仅需一步反应即可实现在长序列DNA中连续排列的多个碱基的饱和突变，具有简单、快速、突变成功率高的特点，可实现在氨基酸水平上对蛋白质功能位点的快速筛选定位和高效突变改造。
权利要求书1页 说明书11页序列表39页 附图4页CN 106754875 A 2017.05.31C N 106754875A1.一种基因饱和突变库的构建方法，其特征在于，以含有表达目的蛋白的基因的环状双螺旋DNA质粒为模板，采用一对序列完全反向互补的正向突变引物和反向突变引物，通过聚合酶链式反应构建获得基因饱和突变库；所述正向突变引物和所述反向突变引物的序列中分别含有9个以上连续排列的兼并碱基。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述含有表达目的蛋白的基因的环状双螺旋质粒的长度不小于8kb。
3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述聚合酶链式反应的循环数不高于18。
生物活性突变体库构建及其应用
生物活性突变体库构建及其应用随着基因组学、蛋白质组学和代谢组学等技术的发展，越来越多的蛋白质被鉴定出来。
然而，仍然难以实现针对所有生物分子, 尤其是蛋白质一级结构与二级结构及其互作的全面研究。
而蛋白质的结构与功能紧密关联，因此，对蛋白质进行有针对性的突变分析是理解蛋白质结构与功能的关键方法之一。
为此，构建生物活性突变体库已成为实现对蛋白质与其互作的研究的一个非常重要的平台。
本文将介绍生物活性突变体库的构建方法及其应用。
生物活性突变体库的构建方法生物活性突变体库是由原有蛋白质进行有针对性的突变得到的，以此筛选出新的蛋白质或者对其继续进行更深入的研究。
构建生物活性突变体库的方法主要有四种：1.化学合成法利用氨基酸化学合成技术，往原有蛋白质的相应区域或位置引入特定的氨基酸改变原有蛋白质的性质，从而生成突变体库。
2. DNA shuffling技术DNA shuffling是一种基因重组技术，其基本思想是通过重组同一家族不同成员的基因，生成大量随机序列。
以此作为底物，通过PCR等方法将突变产生的DNA 片段转化为可表达的蛋白质，从而生成突变体库。
3. 误配聚合酶链式反应（error-prone PCR）误配聚合酶链式反应是一种体外基因突变技术。
它通过引入少量碱基错误（约为每Kb添加一次），使PCR扩增的插入DNA产生突变，从而生成突变体库。
4. 转位因子催化的DNA突变技术（transposon-mediated DNA mutagenesis）转位因子解析是被广泛用来构建位置随机的突变体库的一种方法。
该方法采用转位因子引入随机的插入缺陷，产生不同部位突变，最终得到突变体库。
生物活性突变体库的应用生成生物活性突变体库之后，可以通过高通量分析或者遗传筛选等技术来挖掘蛋白质结构与功能的相应关系。
以下是生物活性突变体库的一些应用：1. 挖掘蛋白质功能元件在拥有突变体库的前提下，科学家可以通过不同的筛选方案来鉴定出新型蛋白质，从而发现蛋白质功能中的新型元件。
一种突变体植株及其制备方法[发明专利]
![一种突变体植株及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/462f1dd1a32d7375a41780f3.png)
专利名称：一种突变体植株及其制备方法
专利类型：发明专利
发明人：高利芬,周俊飞,李甜甜,彭海,李丽丽,陈利红申请号：CN201710656971.5
申请日：20170803
公开号：CN107604000A
公开日：
20180119
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种突变体植株及其制备方法，属于植物生物技术领域。
所述突变体植株包括：第一突变体植株和第二突变体植株中的至少一种，所述第一突变体植株在Xa21基因编码区的第1869位～1878位碱基缺失，所述第二突变体植株在所述Xa21基因的第1867位碱基后插入A和T两个碱基。
本发明实施例提供了一种突变体植株，该突变体植株在Xa21基因的第一外显子处发生突变，使得该突变体植株丧失了Xa21基因的功能，在该突变体植株上，没有骨架载体序列残留，这使得突变体植株成功的排除了位置效应和骨架载体序列对Xa21基因功能的影响，且和受体植株的主要农艺性状保持一致，这使得该突变体植株能够准确的判定Xa21基因的效应，是较为理想的研究Xa21基因抗病机理的材料。
申请人：江汉大学
地址：430056 湖北省武汉市沌口经济技术开发区新江大路8号江汉大学
国籍：CN
代理机构：北京三高永信知识产权代理有限责任公司
代理人：徐立
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一种获得植物突变体的方法[发明专利]
![一种获得植物突变体的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/c76e5757c77da26924c5b094.png)
专利名称：一种获得植物突变体的方法
专利类型：发明专利
发明人：秦瑞珍,程治军,郭秀平,单雪艳,刘宗贤,陈红,万建民申请号：CN200510053483.2
申请日：20050311
公开号：CN1830242A
公开日：
20060913
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种获得植物突变体的方法。
本发明所提供的获得植物突变体的方法，是以植物同源四倍体花药为外植体，通过离体培养，得到花粉植株，在所述花粉植株及其后代植株中筛选获得突变体。
本发明的方法简便、快速、经济、高效，一般同源四倍体的植物或二倍体诱变为四倍体后(粮食，蔬菜，花卉)都可以利用该方法筛选其相应的突变体，具有广阔的应用前景。
申请人：中国农业科学院作物育种栽培研究所
地址：100081 北京市海淀区中关村南大街12号作物所
国籍：CN
代理机构：北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：关畅
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一种生物特征库更新方法、装置及电子设备[发明专利]
![一种生物特征库更新方法、装置及电子设备[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/53be1b88ddccda38366baf80.png)
专利名称：一种生物特征库更新方法、装置及电子设备专利类型：发明专利
发明人：颜雪军,王春茂,杨彭举
申请号：CN202011495346.5
申请日：20201217
公开号：CN112541446A
公开日：
20210323
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本申请实施例提供了一种生物特征库更新方法、装置及电子设备。
其中，所述方法包括：在生物特征库的注册生物特征中，获取待更新生物特征，所述待更新生物特征对应的识别特征与待识别生物特征对应的识别特征匹配；根据所述待识别生物特征和所述待更新生物特征，生成替代生物特征，其中，所述替代生物特征对应的识别特征与所述待识别生物特征对应的识别特征以及所述待更新生物特征对应的识别特征匹配；在所述生物特征库中，将所述待更新生物特征替换为所述替代生物特征，并将所述待更新生物特征对应的识别特征替换为所述替代生物特征对应的识别特征。
可以使得更新后的生物特征可以准确的反应出人员的身份。
申请人：杭州海康威视数字技术股份有限公司
地址：310051 浙江省杭州市滨江区阡陌路555号
国籍：CN
代理机构：北京柏杉松知识产权代理事务所(普通合伙)
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用于在细胞中体内产生突变体文库方法[发明专利]
![用于在细胞中体内产生突变体文库方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/16b07cc1bd64783e09122bff.png)
专利名称：用于在细胞中体内产生突变体文库方法专利类型：发明专利
发明人：T·V·伯彻特,S·D·埃尔利克
申请号：CN97191974.7
申请日：19970110
公开号：CN1210557A
公开日：
19990310
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本文描述了一种用于在包含许多突变的遗传元件的细胞中体内产生文库的方法,其中,一种易错聚合酶用于各祖代细胞复制所有或部分不依赖于宿主染色体复制机制的遗传元件。
这些遗传元件包括:i)复制起点,从该起点开始复制,ii)可有可无的遗传标记,例如,赋予对抗生素的抗性的基因,iii)编码兴趣多肽的基因。
本文也描述了用于产生编码所需的兴趣多肽变体的DNA序列以及测定这类DNA序列的方法。
申请人：诺沃挪第克公司
地址：丹麦巴格斯瓦德
国籍：DK
代理机构：中国国际贸易促进委员会专利商标事务所
代理人：李瑛
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构建定向进化突变体库的方法
构建定向进化突变体库的方法
构建定向进化突变体库的方法主要有以下几种：
1. 位点突变：这是最常用的构建定向进化突变体库的方法，它使用特定的基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）在基因上进行精确的位点突变，以改变基因的功能。
2. 插入突变：这是一种构建定向进化突变体库的方法，它使用特定的基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）在基因上进行插入突变，以改变基因的功能。
3. 基因重组：这是一种构建定向进化突变体库的方法，它使用特定的基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）在基因上进行基因重组，以改变基因的功能。
4. 杂合子突变：这是一种构建定向进化突变体库的方法，它使用特定的基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）在基因上进行杂合子突变，以改变基因的功能。
5. 杂合突变：这是一种构建定向进化突变体库的方法，它使用特定的基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）在基因上进行杂合突变，以改变基因的功能。
高通量制备模式生物基因编辑突变体的方法及相关质粒[发明专利]
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专利名称：高通量制备模式生物基因编辑突变体的方法及相关质粒
专利类型：发明专利
发明人：付宪,丁卫超,林涛,沈玥
申请号：CN202011271024.2
申请日：20201113
公开号：CN114480470A
公开日：
20220513
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种高通量制备模式生物基因编辑突变体的方法及相关质粒。
其中，该方法包括：以能够表达Cas蛋白和逆转录酶的模式生物的细胞作为试验起始细胞；向试验起始细胞导入靶向目标基因的敲入片段，敲入片段包括带有筛选标记基因的同源重组修复模板序列和向导RNA的DNA序列，得到可基因编辑的细胞；使可基因编辑的细胞启动基因编辑并对筛选标记基因对应表型进行筛选得到目标基因被筛选标记基因替换的基因编辑突变体。
该方法既充分利用了基因编辑高效率和高通量产生突变体的优势，又利用筛选标记基因将目标突变体快速、高效地筛选分离出来，克服了现有方法流程繁琐和耗时的问题，为大规模或高通量制备基因敲除突变体奠定了基础。
申请人：深圳华大生命科学研究院
地址：518000 广东省深圳市盐田区北山路146号北山工业区11栋8楼
国籍：CN
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一种生物突变体库的构建方法[发明专利]
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专利名称：一种生物突变体库的构建方法专利类型：发明专利
发明人：姜临建
申请号：CN201910274109.7
申请日：20190408
公开号：CN110408647A
公开日：
20191105
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种生物突变体库的构建方法。
本发明公开的生物突变体库的构建方法包括：1)向靶标生物中导入DNA片段，得到转基因生物；该DNA片段能在转基因生物中表达完成定点突变靶标DNA的所需的元件；2)培养转基因生物，得到生物突变体库；该生物为有性生殖生物，转基因生物能特异在生殖细胞中定点突变靶标DNA。
利用本发明的方法得到的突变体库可筛选到具有以下性状的生物：抗生物逆境，抗非生物逆境，高产量，好品质性状，高次生代谢物产量等。
因此，本发明的方法具有巨大的应用前景。
申请人：青岛清原化合物有限公司
地址：266000 山东省青岛市黄岛区青龙河路53号
国籍：CN
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(51)国际专利分类号：(72)发明人：姜临建(JIANG,Linjian);中国山东
C12N15/82(2006.01)C12N15/85(2006.01)省青岛市黄岛区青龙河路53号，Shandong A01H5/00(2018.01)C12N15/00(2006.01)266000(CN)。
(21)国际申请号：PCT/CN2019/081654(81)指定国(除另有指明，要求每一种可提供的国家
(22)国际申请日：2019年4月8日(08.04.2019)保护)：AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,
BH，BN,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU，
(25)申请语言：中文CZ,DE，DJ，DK，DM,DO,DZ，EC,EE,EG，ES，FI,GB，
(26)公布语言：中文GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IR，IS，
JO,JP,KE,KG,KH,KN,KP,KR,KW,KZ,LA,LC，LK，(30)优先权：
LR，LS,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX, 201810400607.72018年4月28日(28.04.2018)CN
MY,MZ,NA,NG，NI,NO,NZ,OM,PA,PE,PG,PH,PL，(71)申请人：青岛清原化合物有限公司(QING PT，QA,RO,RS,RU,RW,SA,SC,SD,SE,SG,SK,SL，
DAO KINGAGROOT CHEMICAL COMPOUND CO.,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG，LTD.)［CN/CN］:中国山东省青岛市黄岛区青US,UZ,VC,VN,ZA，ZM,ZW。
龙河路53号，Shandong266000(CN)。
(84)指定国(除另有指明，要求每一种可提供的地区
保护)：ARIPO(BW，GH，GM，KE，LR，LS，MW,MZ，
NA,RW,SD,SL,ST,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),欧业(AM, (54)Title：CONSTRUCTION METHOD FOR BIOLOGICAL MUTANT LIBRARY
(54)发明名称：一种生物突变体库的构建方法
(57)Abstract:Disclosed in the present invention is a construction method for a biological mutant library.The construction method for
a biological mutant library disclosed in the present invention comprises:1)introducing a DNA segment to a target organism to obtain a genetically modified organism,the DNA segment being capable of expressing elements required by implementation of site-directed mutation of target DNA in the genetically modified organism;and2)culturing the genetically modified organism to obtain a biological mutant library,the organism being a sexual reproductive organism,and the genetically modified organismbeing capable of site-directed mutation of target DNA in a germ cell.According to the mutant library obtained by using the present method,organisms having the characteristics of anti-biotic stress,anti-abiotic stress,high yield,good quality characteristics,high secondary metabolite yield,etc.can be obtained by screening.Therefore,the present method has a great application prospect.
［见续页］
WO2019/205919A1圓___關_1圓__1||關|||_|關
AZ,BY,KG,KZ,RU,TJ,TM),欧洲(AL,AT,BE,BG,
CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,
IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,
RO,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OAPI(BF,BJ,CF,CG,Cl,
CM,GA,GN,GQ,GW,KM,ML,MR,NE,SN,TD,TG)。
根据细则4.17的声明：
-关于申请人有权要求在先申请的优先权(细则
4.17(iii))
本国际公布：
-包括国际检索报告(条约第21条(3))。
-包括说明书序列表部分(细则5.2(a))。
(57)摘要：本发明公开了一种生物突变体库的构建方法。
本发明公开的生物突变体库的构建方法包括：1)向靶标生物中导入DNA片段，得到转基因生物；该DNA片段能在转基因生物中表达完成定点突变靶标DNA的所需的元件；2)培养转基因生物，得到生物突变体库；该生物为有性生殖生物，转基因生物能特异在生殖细胞中定点突变靶标DNA。
利用本发明的方法得到的突变体库可筛选到具有以下性状的生物：抗生物逆境，抗非生物逆境，高产量，好品质性状，高次生代谢物产量等。
因此，本发明的方法具有巨大的应用前景。