GSK和proteasome免疫荧光共定位详细步骤
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1.盖玻片用砂轮切割为1/4大小，洗衣液浸泡清洗后，放入酸缸中浸泡过夜，冲洗干净后烘干备用；
2.24孔板中滴少量培养液，浸在100%酒精中的爬片，在酒精灯上灼烧后放入孔中（注意此时需要晾比较长的时间，以免细胞被烫伤），24孔板接种细胞，浓度以60~80个/μl为标准，量为300μl/孔；
3.细胞一般培养两天后处理，选择较好的孔进行标记；
4.PBS漂洗2次，2×5min（300μl/孔）；
5.100%甲醇-20℃预冷，-20℃固定细胞 8min（300μl/孔）；
6.0.2%Triton-PBS，漂洗3×5min（300μl/孔），摇床上摇动；
7. 0.5%Triton-PBS，破膜8min （300μl/孔），摇床上摇动；
）封8. 0.2%Triton-PBS，漂洗3×5min（300μl/孔），5%BSA（含有0.02%NaN
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闭1h（300μl/孔），加一抗（100μl/孔）（GSK-3与proteasome都为1：500），室温下摇2h，4℃孵育两天；
9. 4℃拿出之后，常温摇30min，37℃孵育1h，以为一抗能够很好的结合，且回收一抗；
10. 0.2%Triton-PBS，漂洗3×10min（300μl/孔）；
11.二抗（1：80，避光用5%BSA配制，100μl/孔）37℃孵育1h；
12. 0.2%Triton-PBS，避光漂洗3×10min（300μl/孔）；
13.Hoechst（1μg/ml）复染15min（100μl/孔），0.2%Triton-PBS，避光漂洗3×10min（300μl/孔）；
14.50%磷酸-甘油封片；
15.激光共聚焦显微技术观察；
16.避光4℃保存爬片，以备再次照相。