睾酮检测标准操作流程

概述

雄性激素睾酮（17β-羟雄烯二酮）的分子量为288道尔顿。男性体内的睾酮几乎全由睾丸间质细胞合成。分泌受黄体生成素（LH）的调节，并负反馈影响垂体-下丘脑的调节机制。睾酮促进男性第二性征的形成，维持前列腺和精囊的功能。血循环中的睾酮绝大部份与载体蛋白质结合（如性激素结合球蛋白（SHBG））。女性的卵巢可产生少量睾酮。生理水平浓度的雄激素对妇女没有特殊的作用。女性雄激素水平的升高可导致男性化（取决于雄激素水平的增加程度）。检测女性体内睾酮含量有助于诊断雄激素综合征（AGS）、多囊性卵巢（Stein-Leventhal综合症）以及怀疑卵巢肿瘤、肾上腺肿瘤、肾上腺发育不良或卵巢功能障碍时。检测男性体内睾酮含量可用于诊断睾酮产生不足的疾病，如性腺发育不足、雌激素治疗、染色体异常（如Klinefelter综合征）和肝硬化。

1 目的

规范睾酮检测测试，确保检测结果准确性和重复性。

2 检测方法和原理

2.1检测方法：竞争法

2.2检测原理：ADVIA Centaur睾酮检测是一种竞争性的免疫测定方法，使用直接化学发光技术。病人样品中的睾酮与标记试剂中经过吖啶酯标记的睾酮共同竟争有限量的与单克隆小鼠抗兔抗体结合的多克隆兔抗睾酮抗体，前者在固相试剂中结合到顺磁性颗粒上。检测过程中，使用睾酮释放剂将样品中的结合睾酮从结合的蛋白质上释放出来。

3 标本采集与保护

新鲜无溶血血清

遵守以下推荐的血清标本处理，运行和储存步骤

3.1用真空采样管采集血液标本时须遵守常规注意事项

3.2离心前使标本完全自然形成凝块

3.3全程保证样品管的密闭状态

3.4尽快分离血清，并及时测定

3.5如果标本不能在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在4℃或更低温度的环境中：3.6冷藏标本室温放置20分钟后再测定；

3.7冷冻标本室温解溶后放置20分钟后再测定

3.8不符合标本处理

3.8.1溶血和乳糜血标本在报告单的备注栏注明

3.8.2标本量过少的标本，严重溶血和乳糜血标本与临床沟通并将标本退回，填写不合格标本拒接登记。

4 试剂和设备

4.1试剂

SIEMENS原装配套试剂

4.1.1试剂组成

标记试剂：2.5mL/盒，用吖啶酯标记的睾酮（~3.2ng/mL)，置于含防腐剂的缓冲盐水中。固相试剂：15.0mL/盒，在磷酸盐缓冲液中结合到单兑降小鼠抗兔抗体(~0.53μg/mL)的多克隆兔抗睾酮抗体（~0.03μg/mL)，前者通过共价键结合到顺磁性颗粒上，含叠氮化钠（0.1%)和防腐剂。

探针冲洗液：10.0mL/盒，含叠氮化钠（0.1%)和防腐剂的缓冲盐溶液。

释放剂：5.0mL/盒，类固醇释放剂(~0.1μg/mL),其置于含叠氮化钠(0.1%)和防腐剂的缓冲液中。

4.1.2试剂准备：手工混合所有试剂包。肉眼检查试剂底部以确保所有颗粒分散均匀并处悬

浮状态，然后将混合物载入系统直接使用

4.1.3试剂保存

试剂2~8℃避光保存，并保持竖直向上

4.2质控品

SIEMENS原装配套质控品

4.3校准品

SIEMENS原装配套标准品。

4. 4警告和注意事项

4.4.1只可用于体外诊断；

4.4.2试剂中含有叠氮钠，请小心处理，请勿吞服或与皮肤粘膜接触！叠氮钠在与铜或铅等重金属接触后会产生有毒的叠氮化物；

4.4.3试剂盒的测定结果仅作为临床各种疾病的辅助诊断依据

4.5仪器

ADVIA Centaur CP 全自动化学发光免疫分析仪

5 操作程序

5.1检测过程流程

签收样品→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存

5.2样本签收

严格按标本接收程序签收标本

5.3标本处理

以3000r/min，离心6~10min，分离血清上机测定，若标本不能及时检测，将分离血清冷藏于2~8℃的冰箱内

5.4标本检测

5.4.1手工编排测试项目：在主界面选中样本区域→选择样本架→选择样本→点击Samples区域中的样本类型选择按钮→切换至样本类型→选择样本ID编排区→没有通过扫描样本管条形码输入ID号的样本，在此处手工输入样本ID →然后在Assay Selection 区域选择测试项目

5.4.2样本运行确认样本装载，必要的样本信息输入完毕→确认所有耗品及试剂已装载→

按开始运行样本。

5.5检验后标本保存

保存在标本冰箱内，保存期为7d

6 校准程序

6.1校准品的准备和储存

将校准品从冰箱中取出，加5ml蒸馏水复融，轻轻旋转摇匀，室温放置30min，待充分混匀后分装。-20℃冰冻保存可保存20d，复融后2~8℃可稳定24h。

6.2校准条件

在室内质控失控，或使用新批号试剂，或更换仪器主要配件，或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为28d

6.3校准程序

参见生化组的校准操作程序

7 质量控制程序

7.1控制品的准备和储存

每瓶准确加入5.0ml蒸馏水复融，轻轻旋转摇匀，室温放置30min待充分溶解后分装，保存于-30℃冰箱，启用前取出，室温放置30min待充分融化后使用，2~8℃可稳定24h。

7.2控制品水平和分析批长度

每24h至少进行1批。

7.3质控操作程序

参见生化组的质量控制操作程序。

8 性能参数

8.1不准确度±12.5%

8.2不精密度 CV≤8.33%

8.3线性范围10-1500ng/dl

9 生物参考区间

14-76ng/dl

10异常结果的处理

结果与诊断不符或两次结果差异较大时，应及时与临床沟通。

11 临床意义

雄激素睾酮的分子量为288D。在男性睾酮几乎全由睾丸的间质细胞合成，并由LH调节其分泌，受垂体-下丘脑负反馈机制的影响。睾酮促进男性第二性征的发育，维持前列腺和精囊的功能。血循环中的睾酮绝大多数与载体蛋白质结合（SHBG=性激素结合球蛋白）。女性的卵巢可产生少量睾酮。生理水平的雄激素对妇女没有特殊的作用。雄激素含量升高可引起女子男性化。检测女性体内睾酮含量有助于诊断雄激素综合征（AGS）、多囊性卵巢。当怀疑卵巢肿瘤、肾上腺肿瘤、肾上腺发育不良或卵巢功能不足时，也可检测睾酮。检测男性体内睾酮含量可用于诊断睾酮产生不足的疾病，如性腺发育不足、雌激素治疗、染色体异常（如Klinefelter综合征）和肝硬化。

12 干扰因素

检测结果不受黄疸（胆红素<513μmol/L或<30 mg/dL），溶血（血红蛋白<0.372 mmol/L 或< 0.6 g/dL），脂血(脂肪乳剂<1000mg/dL)和生物素<60 ng/mL或<123 nmol/L的影响

13 安全防护措施

13.1血液标本运输必须保证运输过程的生物安全，防止溢出。血液标本溢出后，应立即对污染环境和设备进行消毒处理；

13.2对标明有污染性疾病的血液标本应特别的防护，以不污染环境和保证工作安全为前提；

13.3在进行血液分析的一切操作过程中应按照《检验科生物安全管理程序》进行；

13.4与血液标本接触的一切器皿。仪器组装/拆卸组合零件都应视为污染源，因此操作人员不小心接触到了这种污染源时，应立即用清水清洗被污染区域并进行消毒；

13.5如果操作人员皮肤或衣服上污染（沾到）了血液或废液应立即冲洗并进行消毒处理。如果眼睛被溅入了血液或废液应立即用大量清水冲洗并进行必要的医疗措施。

13.6血液标本离心的过程中所有标本都应该加盖，离心后，开启试管时应注意防止气溶（雾）胶污染环境；

13.7所有检测过的血液标本及有关废物，都会给您带来潜在的危险及生物污染。所有废弃样本及废物的处理方法同血液标本的处理程序。

14 参考文献

14.1《SIEMENS试剂盒说明书》

14.2《临床实验室操作规程编写要求》

14.3《生化组仪器设备操作程序》

14.4《全国临床检验操作规程》第4版

15 支持文件

15.1《标本签收制度》