西维来司钠对ANP肺损伤保护作用及其机制研究

西维来司钠对ANP肺损伤保护作用及其机制研究丁云丽;吴晶;张爱其;徐佳【摘要】Objective To study the protective effect of sivelestat against acute necrotizing pancreatitis associated lung injury in SD rats. Methods 45 healthy adult SD rats randomly divided into 3 groups: control group, model group, medication group, each group of 15 only. Retrograde injection of 5% sodium taurocholic acid pancreatic and SAP model was established. Drug groups on the basis of model sivelestat intervention, control group and model group was given amount of saline solution. Detection between groups at 6 h, 12 h, 24 h point measuring serum amylase, arterial blood oxygen partial pressure, lung tissue malondialdehyde (MDA), tumor necrosis factor (TNF alpha), myeloperoxidase (MPO) and neutrophil elastase (NE) content, then observe the pathological changes of pancreas and lung. Results The histologieal injury of pancreas and lungs was milder than ANP group.PaO2 was higher than ANP group, serum amylase were lower than that of ANP group.NE of rat lung tissue, MDA, MPO level as the molding time increases, with the extension of ONO, the treatment group compared with ANP group, the level of MDA, MPO and NE lung tissue is low. Conclusions Treatment with Sivelestat sodium effectively inhibits the release and expression of proinflammatory cytokine in ANP lung injury of rats and relieved lung pathological injuries.%目的：探讨西维来司钠对SD大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的保护作用。

方法健康成年SD 大鼠45只随机分成3组：对照组、模型组、药物组，每组15只。

腹腔注射5%牛磺胆酸钠建立SAP模型。

药物组在模型基础上给予西维来司钠干预，对照组和模型组给予等量生理盐水。

检测各组在6h、12h、24h时点血清测淀粉酶，动脉血氧分压，肺组织丙二醛（MDA），肿瘤坏死因子（TNF），髓过氧化物酶（MPO）和中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）的含量，光镜下观察胰腺和肺的病理变化。

结果同期胰腺、肺病理改变ONO治疗组比ANP组明显减轻，且PaO2均高于ANP组，血清淀粉酶均低于ANP组。

大鼠肺组织的NE、MDA、MPO水平随着制模时间的延长而升高，ONO治疗组与ANP组相比较，肺组织MDA、MPO和NE水平均较低。

结论西维来司钠能明显抑制ANP肺损伤大鼠促炎细胞因子的释放和表达，起到对急性胰腺炎肺损伤进行保护作用。

【期刊名称】《浙江临床医学》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】3页(P31-33)【关键词】西维来司钠;急性坏死性胰腺炎;急性肺损伤【作者】丁云丽;吴晶;张爱其;徐佳【作者单位】322000 温州医科大学附属义乌医院普外科;322000 温州医科大学附属义乌医院普外科;310005 浙江中医药大学附属中山医院普外科;322000 温州医科大学附属义乌医院普外科【正文语种】中文急性坏死性胰腺炎（ANP）是临床上常见的危重疾病，容易并发多器官功能障碍综合征（MODS），其中肺脏是最常受累的胰外器官，肺损伤是重症急性胰腺炎（SAP）患者早期病死的主要原因之一［1～3］。

西维来司钠（ONO）是一种特异性中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂，可在炎症局部有效抑制中性粒细胞弹性蛋白酶（NE），减轻肺组织损伤并改善肺功能［4］。

作者通过建立大鼠急性坏死性胰腺炎（ANP）肺损伤模型［5］，并应用西维来司钠对大鼠ANP合并肺损伤进行干预处理，以探讨其对ANP合并肺损伤的保护作用及其作用机制。

1.1 动物分组及试剂购自上海实验动物中心的雄性SD大鼠45只，体质量220-250g。

按随机法均分为正常组、ANP组和ONO治疗组，每组15只。

西维来司钠购和牛磺胆酸钠购自美国Sigma公司，使用前用生理盐水溶解稀释。

MDA和NE检测试剂盒以及TNF-α和MPO 检测试剂盒购于北京紫衫生物技术有限公司。

1.2 建立模型 5%牛磺胆酸钠（美国Sigma公司）0.2ml/100g体重的方法腹腔注射制备ANP模型，从胰头部开始，胰腺开始变红、水肿，面积逐渐扩大。

正常组大鼠腹腔内注入等容积生理盐水。

ONO治疗组于造模后立即经尾静脉注射西维来司钠（12mg/kg）体重，其他两组注射等容积生理盐水。

1.3 收集标本并记录各组分别于6h、12h及24h时间点取腹主动脉血（肝素抗凝）5ml立即送实验室检测动脉血氧分压，大鼠处死后留取肺组织，检测MPO、TNF、NE。

取胰腺组织和肺组织用10%中性磷酸缓冲福尔马林液体固定，并进行石蜡包埋，连续切片，苏木素-伊红（HE）染色后留实验室光镜观察。

1.4 标本检测血清淀粉酶检测采用全自动生化分析仪，肺组织检测NE、MDA、MPO和TNF采用酶联免疫吸附试验。

ELISA，PaO2检测采用全自动血气分析仪。

1.5 统计学方法应用SPSS 17.0统计软件进行分析。

各组数据资料以（±s）表示，两组间比较采用两独立样本t检验，组间分析采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 TNF、MDA 、NE、血清淀粉酶、MPO 、PaO2的变化 ANP组TNF-α水平在对应时间点水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

血浆淀粉酶、MPO、NE、MDA水平的变化SAP组各时间点均较正常组升高，差异有统计学意义（P＜0.05），ONO治疗组MPO、血浆淀粉酶、MDA、NE水平均较SAP组降低（P＜0.05）。

ANP组PaO2各时间点较正常组组和治疗组均降低（P＜0.05）。

2.2 胰腺和肺组织病理学改变正常组胰腺组织和肺组织未见明显异常，无水肿、出血。

ANP组大鼠可见胰腺、肺泡及肺间质明显水肿充血，肺泡壁破坏，大量渗出，间质炎性细胞浸润，胰腺组织间隙明显增宽，腺泡细胞明显水肿及腺泡结构破坏并可见大量的炎性细胞浸润，可见胰腺细胞坏死，胰腺周围组织器官轻度粘连，并可见散在皂化斑， ONO治疗组与ANP组相比，胰腺病理改变均较轻，病理评分下降，病理评分与同时间点ANP组的差别有统计学意义（P＜0.05）。

很多研究表明，蛋白酶在ALI 、ARDS 的发病过程中起重要作用［4］。

多形核粒细胞和单核、巨噬细胞溶酶体中的丝氨酸蛋白酶（弹性蛋白酶等），在病理过程中，中性粒细胞释放的弹性蛋白酶最为重要，不仅数量多，而且在中性环境中对补体、免疫球蛋白、转运蛋白、各种抗蛋白酶及凝血、纤维蛋白溶解系统均有破坏作用［5］。

弹性蛋白酶也可破坏人体主要半胱氨酸蛋白酶拮抗药cystatin C 和激肽原，加重单核巨噬细胞生成释放的半胱氨酸蛋白酶对机体的破坏作用。

中性粒细胞弹性蛋白酶还能分解灭活凝血、纤溶和补体连锁系统中一些主要蛋白酶抑制药如抗凝血酶Ⅲ 、纤维蛋白单体溶酶原抑制药和补体C1 抑制药，引起大量凝血因子的消耗和炎症细胞趋化因子的形成［6］。

在体外动物实验中，弹性蛋白酶能增强肺血管内皮细胞及肺泡上皮细胞通透性，经大鼠气管给予弹性蛋白酶可引起出血性肺损伤。

而且在用各种方法引起的大鼠肺损伤模型中，都出现肺泡内出血及蛋白渗出，肺血管周围水肿及血管通透性增强等病理改变，表现为肺间质及肺泡性肺水肿症状，同时发现这些动物支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid ， BALF）及血浆中的弹性蛋白酶活性明显增高［7］。

弹性蛋白酶有分解蛋白质的活性，损伤肺血管内皮细胞、肺泡上皮细胞及血管基膜，促使血液成分的渗出，出现肺泡内出血，肺间质及肺泡性水肿等病理反应［8］。

西维来司钠是弹性蛋白酶的选择性抑制药，对于各种实验性肺损伤模型均有效。

在静脉给予内毒素引起的ALI 模型中，持续给予西维来司钠，能抑制肺水肿及肺泡中性粒细胞浸润，改善呼吸功能，在博来霉素造成小鼠肺纤维化的模型中［9］。

皮下注射该药能够抑制肺纤维化，西维来司钠能选择性抑制弹性蛋白酶，不仅在体外能抑制弹性蛋白酶引起的肺血管内皮细胞对蛋白通透性的增高，而且静脉滴注能抑制弹性蛋白酶引起的大鼠的出血性肺损伤［10］。

本研究通过腹腔注射牛黄胆酸钠建立大鼠SAP 肺损伤模型，在建模后立即给予西维来司钠干预SAP 大鼠，通过观察肺组织中性粒细胞的活性和肺水肿的程度以及胰腺病理变化来综合评价损伤程度。

本研究发现：ANP组TNF水平在对应时间点水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

血浆淀粉酶、MPO、NE、MDA水平的变化SAP组各时间点均较正常组升高，差异有统计学意义（P＜0.05），ONO治疗组MPO、血浆淀粉酶、MDA、NE水平均较SAP组降低（P＜0.05）。

ANP组PaO2各时间点较正常组组和治疗组均降低（P＜0.05）。

综上所述，西维来司钠对减轻大鼠急性胰腺炎肺损伤是有效的，主要是通过减少中性粒细胞在肺内的聚集起到缓解肺损伤的作用。

我们将在今后的研究中继续探索西维来司钠在胰腺炎中的作用机制，为今后在临床上应用西维来司钠治疗急性胰腺炎肺损伤提供实验参考依据。