荧光显微成像技术和应用

谢
谢
荧光显微镜应用技术
1. 对细胞结构或组分的定性位、半定量研究 免疫荧光技术 用荧光标记的抗体或抗原与样品(细胞、组织或分离的物质等)中相应的 抗原或抗体结合，以适当检测荧光的技术对其进行分析的方法。将抗原或 抗体与荧光染料连接，用于检测相应特异性的抗体或抗原的方法称“直接 免疫荧光技(directimmunofluorescent technique)”。用荧光染料标记的 第二、第三抗体等检测相应抗原抗体复合体的方法则称“间接免疫荧光技 术(indirect immunofluorescent technique)”。

1.分子标记
利用绿色荧光的发光机制，可将GFP作为蛋白质 标签(protein tagging)，即利用DNA重组技术，将 目的基因与GFP基因构成融合基因，转染合适的细 胞进行表达，然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋 白质进行细胞内活体观察
2.药物筛选
荧光探针分布是利用信号传导中信号分子 的迁移功能，将一荧光蛋白与信号分子相偶联， 根据荧光蛋白的分布情况即可推断信号分子的 迁移状况，并推断该分子在迁移中的功能。由 于GFP分子量小，在活细胞内可溶且对细胞毒 性较小，因而常用作荧光探针
暗场聚光镜
来自下面光源的光线经过暗场聚光镜，形成了横过显微镜视野而不进 入物镜的强烈光束。因此视野是暗的
荧光图像的记录方法
荧光显微镜所看到的荧光图像具有： 形态学特征和荧光的颜色、亮度
判断结果时，必须将二者结合起来综合判断
记录结果：主观指标（即工作者目力观察）
客观指标（细胞分光光度计、图像分析仪等）
荧光显微技术和应用
12级生物科学 邱修明
原理
普通光学显微镜
通过普通光源的照明观察标本
荧光显微镜(fluorescence microscope)：
利用较短波长的光(激发光)照射样品， 使样品受到高能量激发，产生较长波长的 荧光(发射光)，用来观察和分辨样品中产 生荧光的物质的成分和位置。
荧光显微镜的种类
பைடு நூலகம்
由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进 行细胞定位
2.作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。
绿色荧光蛋白 绿色萤光蛋白(green fluorescent protein)，简称 GFP，其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的 光线激发下，会发出绿色萤光，在生物学研究中绿 色荧光蛋白具有广泛用途，包括有
透射式
●落射式
透射荧光显微镜原理图
目镜
吸收滤色镜
物镜
标本
暗场聚光镜
汞灯
激发滤色镜
落射荧光显微镜原理图
吸收滤色镜
汞
灯
分色镜 物 镜 激发滤色镜
标
本
荧光显微镜的主要部件
透射式
汞灯光源 激发滤色镜
落射式
汞灯光源 激发滤色镜 分色镜 吸收滤色镜
暗场聚光镜
吸收滤色镜
分色镜
反射激发光，透过荧光