直接MAIPA对免疫性和非免疫性血小板减少性紫癜的鉴别诊断
免疫性血小板减少性紫癜诊断和治疗
免疫性血小板减少性紫癜诊断和治疗免疫性血小板减少性紫癜，是血小板上吸附一种抗体，导致血小板寿命缩短，在脾及肝内被破坏，急性型多见于儿童，常在上呼吸道感染2周后发病，慢性患者常在感染后病情加重，大部分患者激素治疗有效。
免疫性血小板减少性紫癜，是血小板上吸附一种抗体，导致血小板寿命缩短，在脾及肝内被破坏，急性型多见于儿童，常在上呼吸道感染2周后发病，慢性患者常在感染后病情加重，大部分患者激素治疗有效。
诊断主要依据临床表现、血常规检查、骨髓穿刺检查、血小板相关抗体及血小板相关补体检查和血小板生存时间检查。
急性型表现为全身皮肤出现瘀斑，牙龈、口腔、鼻腔粘膜出血，胃肠道、泌尿系统也可出血，严重时出现颅内出血，患者出现剧烈疼痛，喷射性呕吐，视乳头水肿，意识障碍，抽搐，是本病死亡的主要原因，发病数周或者数月后常常可以缓解。
慢性型起病隐袭，多见于青年女性，出血为持续性或者反复发作，有的妇女表现为月经过多，可以出现脾轻度肿大。
急性型血小板计数常在20*10^9/L以下，骨髓巨核细胞发育成熟障碍，数量轻度增加或者正常；慢性型常在血小板计数常在50*10^9/L左右，骨髓巨核细胞显著增加。
80%以上的患者PAIg及PAC3阳性，主要成分为IgG，亦可为IgM、IgA，90%以上患者血小板生存时间明显缩短。
诊断要点：1）广泛出血累及皮肤、粘膜及内脏；2）多次检验血小板计数减少；3）脾不大或者轻度肿大；4）骨髓巨核细胞增多或者正常，有成熟障碍；5）具备下列五项中任何一项：a.泼尼松治疗有效；b.脾切除治疗有效；c.PAIg阳性；d.PAC3阳性；e.血小板生存时间缩短[1]。
鉴别诊断需排除继发性血小板减少症，如再生障碍性贫血、脾功能亢进、MDS、白血病、SLE、药物性免疫性血小板减少等，与过敏性紫癜鉴别较易。
急性期出血需要输注新鲜血液，并应用肾上腺皮质激素，多先采用冲击治疗，后逐渐减量。
必要时脾切除术，脾切除适应症包括：1）严重的出血不能控制，危及生命，特别是有发生颅内出血可能者。
血小板减少鉴别诊断步骤
血小板减少鉴别诊断步骤第一步排外EDTA诱导的血小板聚集引起的假性血小板减少。
方法可通过外周血涂片或复查血常规（以柠檬酸钠为抗凝剂）。
另外一个需要考虑的情况就是健康妇女在妊娠时可出现轻到中度的血小板减少（75-150X10Λ9∕L）,这种一过性的减少不需要过多检查。
第二步要考虑血栓性血小板减少性紫瘢/溶血型尿毒症综合征（TTP/HUS）的可能，因为上述疾病需要特殊方法紧急治疗（如血浆置换）。
建议对于所有血小板减少的患者行外周血涂片寻找裂红细胞、检测血浆结合珠蛋白和LDH（以评估溶血）以及肌酎、行包括D二聚体在内的凝血检查。
TTP/HUS和DIC的共同特点为微血管病溶血性贫血、外周血涂片可见裂红细胞、LDH升高以及结合珠蛋白升高。
但是，TTP/HUS中凝血功能通常正常，而DIC凝血时间延长。
最后，当怀疑TTP/HUS时需请血液科会诊。
第三步应考虑药物诱导性血小板减少以及脾功能亢进的情况。
脾功能亢进合并肝硬化的患者更易出现血小板减少。
最常引起血小板减少的药物为抗生素（包括甲氧节唉磺胺甲异恶嗖合剂）、心脏药物（如奎尼丁、普鲁卡因）、喂嗪类利尿剂、抗风湿药物（如金盐类和肝素）。
肝素诱导性的血小板减少具有潜在的风险性，需要立即终止药物（包括肝素冲管）。
可通过体外检测肝素相关血小板抗体来诊断肝素诱导性血小板减少症。
排外微血管病溶血性贫血、药物诱导性血小板减少和脾亢后，特发性血小板减少性紫瘢（ITP）是孤立性血小板减少症的主要原因。
但是,ITP目前仍属于排外性诊断，在排外其他可能因素后才能诊断，如免疫介导的血小板减少，包括结缔组织病，淋巴组织增生症以及HIV感染。
因此，我们建议接下来检测检测HIV、抗核抗体和单克隆蛋白。
相反，对于ITP相关的孤立性血小板减少症我们并不建议行血小板抗体检测或骨髓活检。
如遗传性血小板减少症等罕见的孤立性血小板减少症有可能会在外周血涂片上见到巨大的血小板（如May-Hegglin病，灰色血小板综合征，Bernard-SOUlier综合征，以及X染色体相关的Wiskott-Aldrich综合征）、脊髓发育不良综合征（很少表现为单独血小板减少）、细胞性血小板减少征（此时需行骨髓活检），以及输血后紫瘢（输血罕见的并发症）。
介绍血小板减少性紫癜的诊断
介绍血小板减少性紫癜的诊断
一、概述
当人体发生血小板减少性紫癜之后会伴有出血的症状，同时患者的外周血血小板会减少，此病一般不会影响到患者的骨髓巨核细胞数目，患病之后人的骨髓巨核细胞会有成熟障碍。
此病是一种出血性疾病。
此病是一种自体免疫性出血综合征。
血小板减少性紫癜也可以叫做免疫性血小板减少性紫癜。
此病看病通常在内科。
发病之后在人的身体里面会产生抗自身血小板的抗体，使得患者体内的血小板寿命缩短，甚至血小板会遭到破坏。
二、步骤/方法：
1、当发生血小板减少性紫癜之后在人体的皮肤会出现出血的症状，特别是皮肤粘膜出血最为广泛，出血的血点呈现出散在分布，血点大约有针头大小，出血的地方可能再疲累也可能在皮下，形状多是瘀点或者是瘀斑。
2、血小板减少性紫癜导致脑出血一般发生在人体的四肢，也有可能是全身性的出血。
有的患者不光是皮肤出血，还会出现鼻子出血或者是牙龈出血的症状。
严重的患者会呕血或者大便发黑，还可以出现口鼻出血而且咽下食物都比较困难。
3、点此输入方法或步骤当出现血小板减少性紫癜的时候，一般不会导致胃肠道大出血，人体的球结膜下出血是最常见的血小板减少性紫癜容易引起的出血部位，有的患者在尿液当中也可能发现出血。
大约有1%左右的患者会发生颅内
出血，这也是血小板减少性紫癜导致死亡的一个原因。
三、注意事项：
血小板减少性紫癜导致患者的皮肤以及粘膜出血之外，大约有20%左右的患者还可能出现轻度的脾肿大，如果是急性发病还可能伴有身体发热，严重的可能导致失血性贫血。
特发性血小板减少性紫癜、过敏性紫癜
3)1980S直接检测PAIgG
4)其他：雌激素、毛细血管脆性、脾脏。
病因及发病机理(一)
1．急性型：病毒感染
病毒 感染
机体产生 与病毒有 关的抗体
抗体与血 小板膜发生
交叉反应
血小板 受到非特 异性损伤
16
过
敏
性 紫
Ⅰ型变态反应：
癜 小分子作为半抗原→与体内蛋白
allergic purpura
质结合成全抗原→ 刺激机体产
生抗体→吸附于血管及其周围的
肥大细胞→半抗原再入体内→与
肥大细胞上的抗体产生免疫反应
→肥大细胞释放炎性介质→引起
血管炎性反应。
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allergic purpura
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allergic purpura
过 敏
实验室检查
性
紫 癜
laboratory findings
毛细血管脆性试验 尿常规检查 血小板计数、功能及凝血检查 肾功能 毛细血管镜
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allergic purpura
过
敏 性
诊断与鉴别诊断
Idiopathic Thrombocytopenia Purpura
概述
1. ITP是一种自身免疫性疾病 2. 临床分型：急性型、慢性型 3. 发病年龄：育龄期多见 4. 性别差别：女性多于男性（2-4:1）
病因及发病机理
1)1960S公认ITP是一种自身免疫性疾病， 抗血小板因子→抗血小板抗体（PAIgG）
产科DIC
42
43
治疗原则
在治疗原发病的基础上采取分层治疗
------根据不同分期采取不同的措施综合治疗。
高凝期（早期）----阻断血管内凝血过程 低凝期（中期）----在抗凝基础上恢复正常血小板和血浆
凝血因子水平 纤溶亢进期（晚期）----抗纤溶治疗
在血流的推压下，红细胞 被细丝割裂，发生血管内 溶血；
红细胞暂时将缺口自行封 闭，在循环血液中出现三 角形、盔形等各种形状的 破碎细胞和球形细胞，
在脾脏或其他单核巨噬细 胞系统中被破坏。
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国内诊断标准
临床表现：
①伴有不同程度的 皮肤、黏膜出血; ②溶血多可突然加 重而出现发热、黄 疸和贫血。
发生。
既往文献报道母儿死亡率分别为75%和 85%，但早期诊断、早期治疗、及时终 止妊娠，可降低母亲死亡率，婴儿死亡 率可降至58.3%。
18
病因和发病机制
AFLP的病因不明，由于AFLP发生于妊 娠晚期，且只有终止妊娠才有痊愈的 希望，故推测妊娠引起的激素变化， 使脂肪酸代谢发生障碍，致游离脂肪 酸堆积在肝细胞和肾、胰、脑等其他 脏器造成多脏器损害。
C.有产科合并症或手术指征时，应及时行 剖宫产术。
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分娩时处理
A.控制产程不宜过长，尤应缩短第2产程，产妇不宜屏气， 可用低位产钳助产。
B.防止产后出血胎儿娩出后立即给予缩宫素(催产素)20U稀 释于葡萄糖液10ml静注随后用20U缩宫素(催产素)加入 500ml液体中静脉滴注，维持8～12h以加强子宫的收缩力 防止产后出血。
Organ Failure, MSOF）。”
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一、DIC概念的更新
新定义强调微血管体系（Microvasculature） 微血管体系是由血液和接触血液的血管组成。
诊断与鉴别特发性血小板减少性紫癜的关键因素
诊断与鉴别特发性血小板减少性紫癜的关键因素特发性血小板减少性紫癜（ITP）是一种自身免疫性疾病，主要特征为外周血血小板计数减少和黏膜出血。
在临床诊断和鉴别诊断过程中，了解与之相关的关键因素是非常重要的。
本文将重点讨论病因、病史、体征、实验室检查和影像学等方面与ITP诊断与鉴别的关键因素。
一、病因ITP的病因尚不完全明确，目前认为与免疫系统的异常功能密切相关。
这种自身免疫性疾病可能与免疫调节细胞的异常激活、抗体生成和破坏血小板的增加有关。
此外，遗传因素、感染、药物或疫苗暴露等都可能诱发ITP的发生。
因此，在初步判断ITP时需要考虑这些潜在的病因。
二、病史详细的病史采集是诊断与鉴别ITP的关键因素之一。
医生需要了解患者的个人史、家族史、病症的起始和持续时间、药物或疫苗接种史等。
ITP通常表现为周期性或持续性的紫癜、淤血和瘀斑症状，常见的病史特点包括血小板计数的波动性下降和出血症状的反复出现。
此外，相关的自身免疫疾病、感染和药物史也需要详细了解。
三、体征体格检查在诊断和鉴别诊断ITP时扮演着重要的角色。
关键的体征包括皮肤、黏膜和其他组织的出血征象，如紫癜、淤血、瘀斑等。
此外，红斑、脾肿大和肝肿大等其他异常体征也需要注意。
特别要注意与其他引起血小板减少和出血的疾病进行鉴别，如先天性血小板功能异常、白血病、恶性肿瘤、药物相关性血小板减少等。
四、实验室检查实验室检查是诊断与鉴别ITP的重要方法之一。
常规血液检查包括血小板计数、完整血细胞计数、外周血涂片等。
ITP的特点是血小板计数减少，但白细胞和红细胞计数通常正常。
此外，检查凝血功能也是必要的，以排除其他凝血疾病引起的血小板减少。
抗血小板自身抗体检测有助于确诊ITP，可通过间接免疫荧光试验（IIFT）或酶联免疫吸附试验（ELISA）进行。
五、影像学检查在鉴别诊断ITP时，有时需要进行影像学检查。
常用的影像学方法包括超声检查、骨髓检查和脾脏显像。
超声检查可用于评估脾脏的大小和形态，对于鉴别ITP和其他原因引起的血小板减少有一定的帮助。
特发性血小板减少性紫癜患者血小板相关抗体的表达及意义
中外医疗China &Foreign Medical Treatment特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpu ⁃ra ,ITP)是血小板减少性紫癜中的一种,也是一种常见的自身免疫性疾病,年发病率40~60/100万,主要以皮肤黏膜或内脏出血、血小板减少、骨髓巨噬细胞成熟障碍、血小板生存时间缩短及抗血小板自身抗体出现及自身抗体介导的破坏性血小板(platelet ,PLT )减少为特征[1]。
临床研究发现部分ITP 患者体内可检测到特异性抗血小板相关抗体(platelet associated immunoglobulin ,PAIg),提示PAIg 与特发性血小板减少性紫癜之间具有密切相关[2,3],为了解ITP 患者患病时PAIg 的表达及其临床意义,该院对2012年1—6月期间该院及周边医院诊治的ITP 患者PAIg 进行了测定,评价其在ITP 中的临床意义,现报道如下。
1资料与方法1.1一般资料选取该院门诊及住院ITP 患儿40例,包括急性型及慢性型各20例,均为初诊患者,在近期未接受过免疫抑制剂及糖皮质激素治疗,其中男14例,女26例,年龄4~18岁,平均(8.27±3.12)岁。
ITP 诊断标准依据中华医学会儿科分会血液学组推荐的《特发性血小板减少性紫癜诊疗建议(修订草案)》中的诊断标准进行诊断[4]。
选取同期本院门诊进行体检性别及年龄相匹配体检无异常儿童20例作为对照人群(对照组),其中男5例,女15特发性血小板减少性紫癜患者血小板相关抗体的表达及意义李杪沈阳市儿童医院内科,辽宁沈阳110032[摘要]目的探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者患病时PAIg 的表达评价其在ITP 中的临床意义。
方法选取40例ITP 患儿作为研究对象,同期门诊体检正常儿童20例为对照组,应用酶联免疫吸附法(ELISA 法)测定血小板相关抗体(PAIgA 、PAIgG)、采取单克隆抗体特异性俘获血小板抗原(MAIPA 法)测定血小板特异性抗体抗血小板膜糖蛋白抗体(GPIIb/IIIa 、GPIb/IX ),全自动血液分析仪测定血小板计数。
成人特发性血小板减少性紫癜诊断治疗专家共识
尽管国际Ｉ，Ｉ’Ｐ工作组新近提出将ｌｒｌ’Ｐ定义为免疫性血 小板减少（ｉｍｍｕｎｅ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ），以强调其免疫发病机 制，并以原发免疫性血小板减少（原发性ＩＴＰ）取代特发性血 小板减少性紫癜（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ
ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ
ｐｕｒｐｕｒａ，ｎ’Ｐ）的
３．难治性１１１Ｐ：满足以下所有三个条件的患者：①脾切 除后无效或者复发；②需要（包括小剂量。肾上腺皮质激素及 其他治疗）治疗以降低出血的危险；③除外其他引起血小板
减少症的原因，确诊为ＩＴＰ。 ４．重症ＩＴＰ：ＢＰＣ＜１０×１０９／Ｌ，显著的皮肤黏膜多部位 出血和（或）内脏出血。 三、ＩＴＰ的治疗 治疗流程见图ｌ。 四、１７ｒＰ的疗效判断 １．完全反应（ＣＲ）：治疗后ＢＰＣ≥１００×１０９／Ｌ且没有出 血表现。 ２．有效（Ｒ）：治疗后ＢＰＣＩ＞３０×１０９／Ｌ，并且至少比基础 血小板数增加２倍，且没有出血表现。 ３．无效（ＮＲ）：治疗后ＢＰＣ＜３０×１０９／Ｌ或者血小板数 增加不到基础值的２倍或者有出血表现。 在定义ＣＲ或Ｒ时，应至少检测两次ＢＰＣ，其间间隔７
一、ＩＴＰ的定义
ａｓｓａｙ，ＭＡＩＰＡ）法检测抗原特异性自身抗体的
特异性高，可以鉴别免疫性与非免疫性血小板减少，有助于 １１１Ｐ的诊断。主要应用于下述情况：骨髓衰竭合并免疫性血 小板减少；一线及二线治疗无效的Ｉ，Ｉ＇Ｐ患者；药物性血小板 减少；复杂（罕见）的疾病如单克隆丙种球蛋白血症和获得性 自身抗体介导的血小板无力症。ＭＡＩＰＡ不能鉴别特发性血 小板减少与继发性免疫性血小板减少。实验方法尚待标准 化。 ②血小板生成素（ＴＰＯ）不作为１１１Ｐ的常规检测，但对诊 断复杂原因引起的血小板减少可能有所帮助，可以鉴别血小 板生成减少（ＴＰＯ水平升高）和血小板破坏增加（ＴＰＯ水平 正常），从而有助于鉴别ＩＴＰ与不典型再生障碍性贫血或低 增生性骨髓增生异常综合征。 二、ＩＴＰ的分型 １．新诊断的ＩＴＰ：诊断后３个月内血小板减少的所有患 者。 ２．慢性ＩＴＰ：血小板减少持续超过１２个月的所有患者。
诊断与鉴别诊断特发性血小板减少性紫癜的方法与原则
诊断与鉴别诊断特发性血小板减少性紫癜的方法与原则特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）是一种常见的自身免疫性血液疾病，其特点是血小板数量减少导致出血症状。
诊断与鉴别诊断特发性血小板减少性紫癜的方法与原则是确定疾病的诊断和排除其他引起血小板减少的原因。
本文将介绍诊断和鉴别诊断特发性血小板减少性紫癜的方法和原则。
一、病史和临床表现的分析首先，医生应详细了解患者的病史信息，包括既往病史、用药史、输血史等。
特发性血小板减少性紫癜的患者多为女性，常见于青壮年，临床表现为皮肤和黏膜出血，如紫癜、瘀斑、鼻出血、月经过多等。
除此之外，还应对患者进行全面的体格检查。
二、血小板计数和外周血涂片检查血小板计数是诊断特发性血小板减少性紫癜的关键步骤。
正常成年人的血小板计数一般在150×10^9/L以上，而特发性血小板减少性紫癜的患者血小板计数通常低于100×10^9/L。
此外，外周血涂片检查有助于发现血小板形态异常和并发症，如破碎红细胞和肝脾肿大。
三、骨髓活检骨髓活检是确诊特发性血小板减少性紫癜的重要手段。
此检查可以评估血小板生成和释放情况，同时排除其他疾病，如骨髓增生异常综合征。
骨髓活检结果显示骨髓内巨核细胞正常或增多，但检查并不是必需的，特别是对于临床表现典型的患者。
四、免疫学检查免疫学检查可以帮助鉴别特发性血小板减少性紫癜和其他自身免疫疾病之间的关联。
常用的免疫学检查包括抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗血小板抗体的检测。
特发性血小板减少性紫癜的患者通常抗血小板抗体阳性。
五、排除其他原因特发性血小板减少性紫癜是一种排除性诊断，需要排除其他引起血小板减少的疾病，如药物反应、感染、肝病、骨髓增生异常综合征等。
对于疑似特发性血小板减少性紫癜的患者，还应进行相关的实验室检查和影像学检查，以排除其他疾病。
六、肝脾功能评估肝脾功能评估有助于了解特发性血小板减少性紫癜患者的肝脾功能是否正常。
血小板减少症的鉴别诊断
血小板减少症的鉴别诊断一、引言血小板减少症是一种常见的临床症状，可能是许多疾病的表现。
在临床实践中，准确诊断血小板减少症并进行鉴别诊断至关重要，因为不同病因导致的血小板减少需要不同的治疗方案。
本文将讨论血小板减少症的鉴别诊断方法及相关疾病。
二、血小板减少症的定义血小板减少症是指外周血中血小板计数低于正常范围的临床症状。
正常成年人的血小板计数范围为150-400×10^9/L，低于此范围则被认为是血小板减少。
三、血小板减少症的病因血小板减少症的病因复杂，可能包括以下几种：1.原发性血小板减少症：如特发性血小板减少性紫癜、血小板减少的自身免疫性疾病等；2.继发性血小板减少症：如感染、药物反应、全身性疾病等；3.遗传性血小板减少症：如家族性血小板减少等。
四、血小板减少症的临床表现血小板减少症的临床表现主要包括：1.皮肤和黏膜出血：如皮下淤血、鼻出血、牙龈出血等；2.紫癜：主要表现为皮肤、黏膜或内脏出现不规则的紫斑；3.其他出血表现：如消化道出血、尿路出血等。
五、血小板减少症的鉴别诊断针对血小板减少症的鉴别诊断，可采用以下方法：1.血液学检查：包括血小板计数、凝血功能检查等；2.骨髓穿刺检查：可以帮助确定血小板减少的病因；3.临床表现分析：结合患者的病史和临床表现，进行综合分析。
六、常见的与血小板减少症相混淆的疾病除了血小板减少症外，还有一些疾病也可能表现为血小板减少的相关症状，例如：1.感染性血小板减少：由于感染导致的血小板减少，需要针对感染治疗；2.药物性血小板减少：一些药物可能导致血小板减少，包括某些抗生素、解热镇痛药等；3.骨髓增生异常综合征：这种疾病也可能伴有血小板减少，但治疗方法不同于血小板减少症。
七、结论对于血小板减少症的鉴别诊断，需要综合运用血液学检查、骨髓穿刺检查和临床表现分析等方法，以确保准确诊断并进行有效治疗。
在临床实践中，医务人员应及时对血小板减少症进行鉴别诊断，以避免延误疾病诊断和治疗。
流式细胞术检测血小板相关抗体和cd61在原发性血小板减少性紫癜诊断中的作..
目录中英文缩略词表-------------------------------------------------------------------------1 中文摘要----------------------------------------------------------------------------------2 英文摘要----------------------------------------------------------------------------------4 前言----------------------------------------------------------------------------------------6 材料与方法-------------------------------------------------------------------------------11 结果----------------------------------------------------------------------------------------15 讨论----------------------------------------------------------------------------------------19 结论----------------------------------------------------------------------------------------24 展望----------------------------------------------------------------------------------------25 参考文献----------------------------------------------------------------------------------26 附录----------------------------------------------------------------------------------------29 致谢----------------------------------------------------------------------------------------30 综述----------------------------------------------------------------------------------------31英文缩略词表﹙abbreviations﹚原发性血小板减少性紫癜 Idiopathic thrombocytopenic purpura ITP流式细胞术 Flow cytometry FCM血小板相关免疫球蛋白Platelet-associated Immunoglobulin PAIg血小板Platelet PLT循环免疫复合物Circulating immune complexes CIC免疫球蛋白Immunoglobulin Ig糖蛋白Glycoprotein GP 酶联免疫吸附法Enzyme-linked immunosorbent assay ELISA直接单克隆抗体俘获血小板抗原技术Monoclonal Antibody-specific Immobilisation ofPlatelet AntigensMAIPA藻红蛋白Phycoerythrin PE异硫氰酸荧光素Fluorescein isothiocyanate FITC毫升Milliliter mL 每分钟转速rotate per minute Rpm分钟 minute min磷酸盐缓冲液Phosphate buffered saline PBS乙二胺四乙酸Ethylenediamine tetraacetic acid EDTA富血小板血浆Platelet-rich plasma PRP前向角散射Forward scatter FSC侧向角散射Side scatter SSC平均荧光强度Mean fluorescence intensity MFI流式细胞术检测血小板相关抗体和CD61在原发性血小板减少性紫癜诊断中的作用中文摘要目的使用流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测健康体检者、原发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenic purpura ,ITP）患者、非ITP继发性血小板减少患者血小板表面的CD61和血小板相关抗体（Platelet-associated Immunoglobulin, PAIg）；探讨FCM联合检测血小板表面的CD61和PAIg在ITP诊断和鉴别诊断中的价值。
血小板减少的鉴别诊断
血小板减少的疾病：特发性血小板减少性紫癜——起病突然，大多在出血症状发作前1~3周前有感染病史。
急性型ITP多见于儿童，起病急，可有畏寒、发热等前驱症状。
慢性ITP起病隐匿，以中青年女性多见。
ITP出血常常是紫癜性，表现为皮肤瘀点、瘀斑，紫癜通常分布不均、出血多位于血液瘀滞部位或负重区域的皮肤，皮损压之不退色，粘膜出血包括鼻出血、牙龈出血、口腔粘膜出血及血尿。
急性型ITP病情多为自限性，一般4~6周。
除非有明显的大量出血，一般不伴有贫血。
ITP病人无脾大。
外周血血小板数目明显减少，急性型发作期血小板计数常低于20×109/L，甚至低于10×109/L，慢性型常为30~80×109/L，血小板体积常增大，评价血小板体积增大，血小板分布宽度增加，红细胞计数、白细胞计数与分类一般正常。
出血时间延长，束臂试验阳性，而凝血机制及纤溶机制正常。
骨髓巨核细胞数目增多或正常，红系或粒系通常正常。
大部分ITP病人的血小板或血清可检测出抗血小板糖蛋白复合物的抗体。
ITP可伴随自体免疫性溶血性贫血，称之为Evans综合症，此时红细胞Coombs试验通常称阳性反应。
儿童患者常呈急性发病，与感染有关。
本综合征的血小板减少可先于溶血或同时或季候出现，多数先出现血小板减少，随后发生免疫性溶血。
慢性Evans综合症对切脾治疗反应性差，单纯的ITP切脾治疗效果明显优于Evans综合症。
血栓性血小板减少性紫癜——典型的五连征为特征，即血小板减少，微血管病性溶血性贫血，多变的神经系统症状和体征，肾损害和发热。
多见于30~40岁左右的成人。
血象可见红细胞异常表现有微血管病性红细胞破坏，血涂片检查室红细胞嗜多色性，点彩样红细胞，有核红细胞及红细胞碎片。
网织红细胞计数增高与贫血程度平行。
绝大部分病人血红蛋白低于100g/L，血小板多低于50×109/L，可有中度白细胞减少或周围出现不成熟粒细胞。
以血管内溶血为特征，结合珠蛋白浓度降低，非结合胆红素浓度增加，骨髓检查示增生性骨髓象，巨核细胞数目增加。
ITP血小板特异性自身抗体（GPⅡbⅢa和GPIbα）与糖皮质激素治疗..
目 录 中文摘要………………………………………………………………英文摘要………………………………………………………………前言……………………………………………………………… 材料和方法……………………………………………………………… 结果………………………………………………………………… 讨论…………………………………………………………………… 小结………………………………………………………………… 对课题的进一步设想…………………………………………………… 参考文献………………………………………………………………… 综述………………………………………………………………3 5 7 914 1826 272836ITP血小板特异性自身抗体（GPⅡb／Ⅲa和GPIbα）与糖皮质激素治疗临床疗效的关系中文摘要背景：免疫性血小板减少性紫癜（ITP）是一种常见的由抗体诱导血小板破坏而造成出血的自身免疫性疾病。
血小板主要的自身抗原为位于两个不同的血小板受体上的GPIb复合物和GPIIbIIIa。
我们最初发现抗GPIba抗体介导的ITP对静丙治疗效果较差。
因此在这里我们检测比较了激素治疗在两种抗体介导的ITP患者中是否具有同样的疗效。
对象和方法：本次研究的对象为ITP患者176例（女122例，男54例），接受激素治疗（DXM：20-40mg/d,3-5天，后改为口服泼尼松，剂量为1mg/kg.d,并据疗效逐步减量，维持治疗一个月以上）。
患者的血清样本均在治疗前采集。
我们应用改良的单克隆抗体特异性俘获血小板抗原（MAIPA）法检测抗GPIIbIIIa和GPIba特异性自身抗体，临床回顾性观察患者对激素治疗反应，比较不同血小板自身抗体与临床激素治疗疗效间的差异性。
同时对其中80例患者分别采用不同抗凝剂，比较不同抗凝剂与抗体检出间是否具有差异性，从而加深对抗体构型的了解。
结果：在176例接受激素治疗的患者中，24.4%(43/176)为单一抗GPIIbIIIa抗体阳性；19.3%(34/176)为单一抗GPIba抗体阳性；30.7%(54/176)为双抗体阳性；25.6%(45/176)为双抗体阴性。
血小板抗体检测专家共识
血小板抗体检测专家共识关键词：血小板抗体临床输血专家共识2016年7月25日，经国家标准化管理委员会批准，输血医学增设为临床医学二级学科。
输血医学的重要职能就是保障和指导临床安全、科学、精准输血，减少输血不良反应。
血小板具有复杂的抗原系统，包括与其它组织或细胞所共有的抗原，如ABO血型系统抗原和人类白细胞抗原（HLA）；血小板特异性抗原（HPA）；与单核/巨噬细胞及有核红细胞共有的GPⅣ/CD36抗原等。
妊娠、输血、器官移植等均可诱导机体产生血小板抗体，包括HLA抗体、HPA抗体和CD36抗体等。
这些抗体可以引起免疫性血小板输注无效（PTR）、胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症（FNAIT）、非溶血性发热反应（NHTR）、输血后紫癜（PTP）等。
红细胞抗体已经成为临床输血前免疫学检测的常规项目，而输血前血小板抗体检测并未得到临床充分重视。
目前，血小板输注的策略主要采用随机输注方式，反复输血及多次妊娠者容易产生血小板抗体，引起PTR、FNAIT等疾病，以及NHTR、PTP等输血不良反应。
为保障临床输血安全和疗效，预防PTR和输血不良反应，节约血液资源，诊断血小板抗体相关免疫性疾病，现形成血小板抗体检测专家共识，内容如下。
1 血小板抗体检测的临床意义1.1 免疫性血小板输注无效（PTR）诊断：血小板抗体是免疫性PTR的主要原因。
一般患者输注血小板后血小板抗体的阳性率为8.2%～60.0%，肿瘤患者和干细胞移植患者血小板抗体阳性率为12.6%～ 66.0%[8-10]，这些抗体是导致免疫性PTR的主要因素。
对患者进行血小板抗体筛查和鉴定，可以诊断免疫性PTR。
对血小板抗体阳性患者输注血小板交叉配合的血小板，可有效预防免疫性PTR。
1.2 HLA抗体导致NHTR诊断：NHTR在输血反应中占比最大，输注红细胞的NHTR的发生率约为0.08%～6.0%，输注血小板NHTR的发生率可高达20.3%～70.0%。
血小板减少性紫癜简介
血小板减少性紫癜简介病因血小板减少性紫癜的病因血小板减少性紫癜病因概要：血小板减少性紫癜的病因有3大方面：由于巨核细胞生成减少、巨核细胞生成无效而导致的血小板的生成减少或成熟障碍；免疫性、非免疫性原因而导致的血小板的破坏或消耗增多；脾贮留、血液稀释、血小板生成的调节紊乱等导致的血小板分布异常。
血小板减少性紫癜的详细解释：可由先天性和后天性各种的病因引起。
1、血小板的生成减少或成熟障碍：其主要特点是骨髓中的巨核细胞数量减少或缺乏，如有巨核细胞成熟障碍时，巨核细胞不能正常地产生血小板，可有巨核细胞的形态异常。
血小板的寿命常正常。
（1）巨核细胞生成减少：①遗传性：为范科尼（Fancon1）贫血、TAR综合征。
②获得性再生低下：放射因素、化学因素、感染、药物等所致。
③骨髓占位病变：如骨髓瘤、白血病、癌肿转移等。
（2）巨核细胞生成无效：①遗传性：如May-Hegglin畸形、Wiskott-Aldrich 综合征等。
②获得性：如维生素B12缺乏或叶酸缺乏，阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。
③其他：如DiGuglielmo综合征、白血病前期等。
2、血小板的破坏或消耗增多：在这一类中，骨髓中的巨核细胞并无减少，且常有代偿性增多。
巨核细胞的形态也可正常，幼稚的巨核细胞增多。
血小板的减少主要是由于血小板的破坏和消耗增加。
血小板的寿命缩短。
由于新生的血小板增多，血片中常表现为大形的血小板，和巨核细胞的增多呈一致性。
（1）免疫性：①自身免疫（特发性血小板减少性紫癜）：有急性、慢性和继发性（如系统性红斑性狼疮等）。
②输血后紫癜：少见，由于输血后同种免疫抗体引起。
③新生儿紫癜。
④药物性紫癜：药物可有免疫性巨核细胞生成抑制或破坏血小板的作用，如奎尼丁、奎宁、磺胺类等药物。
（2）非免疫性：①血管因素：如各种原因并发的血管炎、血栓性血小板减少性紫癜及溶血尿毒症综合征、弥散性血管内凝血（如蛇咬伤、外科手术、产科意外、感染、肿瘤）和巨大海绵窦状血管瘤即Kassabach-Merritt综合征。
血小板减少性紫癜的诊断和检查
小板减少性紫癜的诊断和检查在儿童当中有一种常见的疾病——血小板减少性紫癜，那么我们应该及早发现该疾病的症状及时的治疗，血小板减少性紫癜应该如何诊断也是非常重要的。
专家称，正是我们很难对血小板减少性紫癜确诊才很有可能延误了孩子们的治疗最佳时期。
以下是血小板性紫癜的诊断和检查的详细介绍。
本病分为急性和慢性两型，小儿多为急性特发性血小板减少性紫癜，急性ITP各年龄阶段均可发病，但以婴幼儿时期多见，春季发病数较高。
此病在小儿急性型中约80~90%于6个月恢复，10~25%转为慢性。
慢性病例多见于学龄儿童，病程在6个月以上，约有1/3~1/2于5年内恢复。
急性病例中个别可能发生严重出血(尤其是颅内出血)而导致死亡。
症状体症病前1~6周有病毒感染史，如上呼吸道感染、麻疹、水痘等。
2.突然起病，出血严重，以皮肤、粘膜自发性出血为主，常见为皮肤、口腔粘膜、牙龈及眼结膜，鼻腔及外伤部位。
胃肠道、泌尿道出血少见，偶见颅内出血。
3.皮肤见针点样出血点、瘀点，少数病例轻度肝脾肿大。
诊断依据1、多次化验检查血小板计数减少。
2、脾脏不增大或轻度增大。
3、骨髓检查巨核细胞数增多或正常，有成熟障碍。
4、以下5点中应具其中两点：(1)强的松治疗有效;(2)切脾治疗有效;(3)PAIg增多;(4)PAC3增多;(5)血小板寿命测定缩短。
排除继发性血小板减少症。
5、排除继发性血小板减少症。
急性ITP血小板明显减少，通常小于20×10^9/L。
慢性ITP多次化验血小板减少，多为(30～80)×10^9/L。
实验室检查一、血象1、急性型血小板明显减少，多在20×109/L以下。
出血严重时可伴贫血，白细胞可增高。
偶有嗜酸性粒细胞增多。
2、慢性者，血小板多在30-80×109/L，常见巨大畸型的血小板。
3、血小板平均容积(MPV)增大;4、血小板分布宽度(PDW)改变显著;5、血小板形态异常，可见大型血小板、颗粒减少和染色过深。
血小板减少性紫癜如何鉴别
血小板减少性紫癜如何鉴别血小板减少性紫癜亦称原发性或免疫性血小板减少性紫癜，其特点是外周血小板显著减少，骨髓巨核细胞发育成熟障碍。
慢性型多见于成人，病程为6个月以上。
起病缓。
出血症状轻，一般仅见皮肤瘀点或瘀斑反复发作性出现，或常见鼻衄、齿龈出血、结膜出血等其他出血倾向。
女性患者可以月经过多或子宫出血为主要表现。
长期反复大量出血而引起贫血者，可出现低热、乏力、头昏、失眠及脾肿大等。
急性型多见于儿童，发病前l-3周常有上呼吸道及其他病毒感染史。
起病急，出血严重。
突发广泛的皮肤粘膜血点或成片瘀斑。
甚至皮下血肿。
常伴有鼻衄、牙龈出血等。
胃肠和泌尿道出血可见便血及尿血。
偶见结膜下、视网膜出血。
少数患者同时伴有内脏或颅内出血而出现严重的不良后果。
血小板减少性紫癜如何鉴别过敏性紫癜：为对称性出血斑丘疹，以下肢为多见，血小板不少，一般易于鉴别。
再生障碍性贫血：表现为发热、贫血、出血三大症状，肝、脾、淋巴结不大，与特发性血小板减少性紫癜伴有贫血者相似，但一般贫血较重，白细胞总数及中性粒细胞多减少，网织红细胞不高。
骨髓红、粒系统生血功能减低，巨核细胞减少或极难查见。
特发性血小板减少性紫癜如何鉴别?急性白血病：ITP特别需与白细胞不增高的白血病鉴别，通过血涂片中可见各期幼稚白细胞及骨髓检查即可确诊。
Evans综合征：特点是同时发生自身免疫性血小板减少和溶血性贫血，Coomb ′s试验阳性，病情多严重，多数病人经激素或脾切除治疗有效。
特发性血小板减少性紫癜如何鉴别?红斑性狼疮：早期可表现为血小板减少性紫癜，有怀疑时应检查抗核抗体及狼疮细胞(LEC)可助鉴别。
我也曾是一位血小板疾病患者，在得病之初不仅翻看了很多书籍，还找了很多医院的权威专家，也算是久病成医吧，不仅对于血小板常识比较了解，对于用药及治疗更是深有体会，尤其是一些西药吃了很多，但血小板一直很低，最低的时候只有20多，要靠去医院输小板维持生命，说真的当时很害怕，但没有办法西药一直升不了血小板，后来一个亲戚给我寄过来康髓诺汤药，用了近半年的时间，血小板从20多到50多再到100多，最后逐渐恢复正常，现在不仅不用去医院输血小板了，而且血象一直很稳定，身体各方面也都恢复健康了，以前免疫力低三天两头生病，现在连个感冒都不得。
血小板减少性紫癜的辅助检查
血小板减少性紫癜的辅助检查
*导读：血小板抗体的检测用酶联免疫或荧光免疫法检测ITP 患者血小板相关抗体PAIgG，PAIgM，PAIgA，PAC3均可增高，与血小板破坏及减少程度成正比，其中PAIgG增高者占95％，PAIgM 增高者占20％左右，后者常伴有较严重出血。
……
(一)血象血小板计数减少，在急性型或慢性型急性发作期血小板计数常在20×10^9/L以下，在10×10^9/L以下时可有广泛或自发性出血。
慢性型慢性期一般在(30-80)×10^9/L之间，在50
×10^9/L以上者可无症状;血红蛋白和红细胞计数正常。
(二)出血时间可延长;凝血时间正常。
(三)血小板抗体的检测用酶联免疫或荧光免疫法检测ITP患者
血小板相关抗体PAIgG，PAIgM，PAIgA，PAC3均可增高，与血小板破坏及减少程度成正比，其中PAIgG增高者占95%，PAIgM增
高者占20%左右，后者常伴有较严重出血;另外ITP患者血清中
抗血小板膜糖蛋白GPⅡb、Ⅲa、Ⅰb自身抗体和抗心磷脂酶抗体ACA-IgG，ACA-IgM亦可增高，但无诊断特异性。
(四)骨髓象巨核细胞增多或正常，以未成熟型巨核细胞增多为主，部分病例可见幼稚巨核细胞，而产板型巨核细胞较少，常低于30%，提示血小板生成障碍。
急性型的巨核细胞数量增多及成熟
障碍表现为巨核细胞形态异常、体积增大、胞浆少而缺乏颗粒，细胞核圆形，甚少分叶状;在胞浆中可有各种大小不等的空胞以
及血小板形成不良。
(五)血小板动力学检查可采用核素法(51Cr或111In标记血小板)或丙三醛法检测血小板生存时间，ITP患者的血小板寿命较正常人明显缩短。
直接MAIPA对免疫性和非免疫性血小板减少性紫癜的鉴别诊断
结果
1 正常对照血小板膜表面洗脱 GP特异性自身抗 体 MA IPA 检测结果 20名正常对照血小板表面洗 脱 GPⅡb / Ⅲa、GPⅠb和 GPⅠa / Ⅱa特异性自身抗 体的水平分别为 0. 0126 ±0. 0011, 0. 0103 ±0. 0016 和 0. 0211 ±0. 0019。 2 各种血小板减少患者血小板膜表面洗脱 GP特 异性自身抗体的检测结果 A ITP患者血小板膜表 面洗脱 GP特异性自身抗体的总阳性率 ( GPⅡb / Ⅲa 或 GPⅠb或 GP Ⅰa / Ⅱa 特异性自身抗体阳性 )为 76. 4% ,显著高于非免疫组 ( 3. 6% ) (χ2 = 73. 02, P < 0. 05) 。自身抗体阳性的非免疫性血小板减少 患者 , 1例为骨髓增生异常综合征患者 , 1 例为非霍 奇金淋巴瘤患者 。慢性 ITP患者自身抗体的总阳性 率为 80. 9%与继发性 ITP患者 ( 61. 9% )间差异无 统计学意义 (χ2 = 3. 21, P > 0. 05) 。见表 1。 3 直接 MA IPA 诊断 A ITP的评价 直接 MA IPA 检 测 A ITP患者 GPⅡb / Ⅲa特异性自身抗体的敏感性 为 46. 1% ,同时检测 GPⅡb / Ⅲa和 GPⅠb特异性自 身抗体的敏感性为 60. 5% ,同时检测 GP Ⅱb / Ⅲa、 GPⅠb和 GPⅠa / Ⅱa特异性自身抗体的敏感性为 76. 4% ,特异性为 96. 4% ,阳性预测值为 97. 1% ,见 表 2。
新生儿血小板减少性紫癜应该做哪些检查
新生儿血小板减少性紫癜应该做哪些检查*导读：本文向您详细介新生儿血小板减少性紫癜应该做哪些检查，常用的新生儿血小板减少性紫癜检查项目有哪些。
以及新生儿血小板减少性紫癜如何诊断鉴别，新生儿血小板减少性紫癜易混淆疾病等方面内容。
*新生儿血小板减少性紫癜常见检查：常见检查：血管壁的检测、抗血小板抗体（APA）、血小板计数（PLT）、骨髓象分析、抗球蛋白试验（Coombs试验）*一、检查1.脐血可发现血小板亦减少。
2.外周血血小板计数100×109/L(10万/mm3)为血小板减少，也有人认为小于150×109/L (15万/mm3)便属不正常。
血小板减少轻重不一，同族免疫性血小板减少性紫癜，婴儿出生时血小板计数常小于30×109/L (3万/mm3)，甚至小于10×109/L (1万/mm3 )。
出生后感染性血小板减少性紫癜患儿，有感染性血象，白细胞计数明显增高。
先天性巨核细胞增生不良患儿约半数有白血病样反应，白细胞数超过40×109/L(4万/mm3)。
3.骨髓免疫性血小板减少时骨髓巨核细胞数正常，而中毒性者由于骨髓受到损害巨核细胞数减少。
遗传性血小板减少性紫癜，骨髓细胞正常或增多，能产生血小板，但血小板超微结构严重紊乱。
先天性巨核细胞增生不良患儿，骨髓穿刺检查巨核细胞可见减少或缺如。
4.抗体检测(1)抗血小板抗体：血清中抗血小板抗体检测，药物所致血小板减少可将将患儿血清(含抗体)、相应药物及患儿血小板相加，可见血小板凝集或溶解。
也可进行血块收缩抑制试验，即患儿血清加相应药物可抑制血型相合的血块收缩，阳性说明患儿血清中存在抗血小板抗体。
(2)同族免疫性血小板减少性紫癜，补体结合试验，婴儿血中的血小板抗体与父亲的血小板发生免疫反应，但不能与母亲血小板起反应。
(3)IgG、IgM检测主要是检查抗体，当孕母感染弓形体、梅毒、风疹、巨细胞病毒、疱疹病毒等，其血中可检测到相应抗体。
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·论著 ·
直接 Mห้องสมุดไป่ตู้ IPA对免疫性和非免疫性 血小板减少性紫癜的鉴别诊断
秦平 侯明 孙建芝 芦璐 石艳 朱媛媛 李丽珍 张茂宏
【摘要 】 目的 检测免疫性与非免疫性血小板减少患者血小板膜糖蛋白特异性自身抗体 ,评价 该方法在免疫性和非免疫性血小板减少性紫癜鉴别诊断中的价值 。方法 应用改良直接单克隆抗体 俘获血小板抗原技术 (MA IPA )检测血小板膜糖蛋白 ( GPⅡb / Ⅲa、GPⅠb 和 GPⅠa / Ⅱa)特异性自身抗 体 。结果 免疫性血小板减少患者自身抗体阳性率 ( 76. 4% ) 显著高于非免疫性血小板减少患者 (3. 6% ) ( P < 0. 05) 。直接 MA IPA 诊断免疫性血小板减少的敏感性为 76. 4% ,特异性为 96. 4% ,阳性 预测值为 97. 1% 。 GPⅡb / Ⅲa特异性自身抗体阳性的免疫性血小板减少患者血小板计数与自身抗体 吸光度比值呈显著负相关 ( r = - 0. 338, P < 0. 05) 。结论 直接 MA IPA 检测血小板膜糖蛋白特异性自 身抗体对于鉴别免疫性与非免疫性血小板减少有一定意义 。
【关键词 】 紫癜 ,血小板减少性 ; 血小板 ; 抗体 ,糖蛋白
Study on the d irectM A IPA techn ique in the d ifferen tia l d iagnosis of imm une and non2imm une throm 2 bocytopen ia Q IN P ing3 , HOU M ing, SUN J ian2zh i, LU L u, SH I Yan, ZHU Yuan2yuan, L I L i2zhen, ZHAN G M ao2hong. 3 D epa rtm en t of Hem a tology, Q ilu Hospita l, S handong U n iversity, J inan 250012, Ch i2
我们应用改良的直接单克隆抗体俘获血小板抗 原技术 (MA IPA ) ,检测了免疫性与非免疫性血小板 减少患者血小板膜表面洗脱糖蛋白 ( GPⅡb / Ⅲa、GP Ⅰb 和 GPⅠa / Ⅱa)特异性自身抗体的水平 ,评价该 方法在免疫性与非免疫性血小板减少性紫癜的诊断 和鉴别诊断中的价值 。
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30300312, 30470742) 作者单位 : 250012 济南 ,山东大学齐鲁医院血液科 (秦平 、侯 明 、孙建芝 、石艳 、朱媛媛 、李丽珍 、张茂宏 ) ;山东省交通医院血液科 (芦璐 ) 通信作者 :侯明
a sensitivity of 76. 4% , a specificity of 96. 4% , and a positive p redictive value of 97. 1% for the diagnosis of immune thrombocytopenia. There was a significant inverse correlation between p latelet2bound GP Ⅱ b / Ⅲ a specific autoantibody levels and p latelet counts ( r = - 0. 338, P < 0. 05). Conclusion The direct MA IPA
×g离心 ,每次 2 m in) 。然后每管加入溶解缓冲液 (含蛋白酶抑制剂 ) 100μl溶解血小板 ,置 4 ℃振荡 30 m in。4 ℃ 26 000 × g 离心 30 m in,取 100 μl上 清液以 400 μl溶解缓冲液稀释 。加样于羊抗鼠俘
获单抗包被的多孔板上 ,每孔加入 100 μl稀释上清 (设复孔 ) 。室温振荡孵育 60 m in, PB S / Tween 缓冲 液洗板 4次 。每孔加入 100 μl碱性磷酸酶标记的 羊抗人 IgG (1∶3000) ,室温振荡 60 m in, PBS / Tween 缓冲液洗板 6 次 。然后加 100 μl PNPP /底物缓冲 液 ,孵育 15 ～60 m in,至显色 。用自动酶标仪测定 405 nm 和 495 nm 处吸光度 (A )值 。
na
Correspond ing au thor: HOU M ing 【Abstract】 O bjective To evaluate the clinical usefulness of direct monoclonal antibody immobiliza2
tion of p latelet antigen (MA IPA ) technique in the differential diagnosis of immune and non2immune thrombo2 cytopenia. M ethods Platelet2bound autoantibodies in thrombocytopenic patients ( immune and non2immune) were measured by direct MA IPA. Monoclonal antibodies against GPⅡb / Ⅲa, GPⅠb and GPⅠa / Ⅱa were used. Results The positive rates of p latelet2bound GP2specific autoantibodies between immune ( 76. 4% ) and non2immune thrombocytopenia (3. 6% ) were significantly different ( P < 0. 05). The direct MA IPA had
technique can be used to differentiate immune from non2immune thrombocytopenias. 【Key words】 Purpura, idiopathic thrombocytopenic; Platelet antibody, glycop rotein
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中华血液学杂志 2005年 3月第 26卷第 3期 Chin J Hematol, March 2005, Vol 26, No. 3
例 ,年龄 18～78岁 (中位年龄 46岁 ) 。所有患者采 血时血小板计数均 < 100 ×109 /L ,且近 3 个月内未 接受过血小板输注 。 2 试剂 抗血小板糖蛋白 GPⅡb / Ⅲa (CD41,克隆 P2)单抗 、抗血小板 糖蛋 白 GP Ⅰ b ( CD42b, 克 隆 SZ2)单抗 、抗血小板糖蛋白 GPⅠa / Ⅱa ( CD49b,克 隆 Gi9)单抗及亲和纯化的羊抗鼠 IgG (H +L )均为 Immunotech 公司产品 , 碱性磷酸酶标 记的 羊抗 人 IgG为 Sigma公司产品 ,蛋白酶抑制剂 Leupep tin为 Boehringer M annheim 公司产品 ,其他试剂均为分析 纯。 3 方法 3. 1 血小板表面抗体洗脱 : EDTA 抗凝外周血 10 m l, 200 ×g离心 10 m in。取富含血小板的血浆 ,计 数血小板为 2. 5 ×1012 /L ,加入 EP管离心 (1000 ×g 离心 15 m in)取沉淀 , PB S / EDTA 洗 2遍 。弃上清 , 加入 800μl改良 Tyrode溶液 ,加入 180μl 0. 1 mol/ L HC l, 20 ℃振荡水浴中 10 m in。常温下 3900 × g 离心 12 m in。取 900 μl上清 ,即刻加入 80 μl 0. 2 mol/L NaOH中和 。常温下 3900 × g 离心 12 m in。 取上清 ,置 - 70 ℃保存 。 3. 2 改良 MA IPA :先将血小板与待测样本反应 ,洗 涤后再与单抗孵育 ,避免了人抗鼠 IgG抗体与鼠单 抗直接结合引起的干扰 ,具体操作步骤如下 。 3. 2. 1 羊抗鼠 IgG包被多孔板 :包被液抗体终浓度 3μg /m l,在多孔板上加样 , 100 μl/孔 ,塑料薄膜覆 盖 , 4 ℃过夜 。然后用 0. 01 mol/L PB S / Tween (含 0. 5% Tween 20)洗板 2 次 。加封闭液 , 200 μl/孔 , 室温下 30 m in。去除封闭液 ,控干 。 3. 2. 2 包被羊抗鼠 IgG的多孔板俘获单抗 : 制备 单抗 CD41、CD42b 或 CD49b 稀释液 (终 浓度 为 4 μg /m l) ,取上述包被板 ,每孔加入 50 μl单抗稀释 液 ,室温振荡 60 m in。PBS / Tween洗板 3次 ,待用 。 3. 2. 3 血小板抗体的检测 : 取 EDTA 抗凝的 O 型 外周血 50 m l, 260 ×g离心 15 m in,分离富含血小板 的血浆 。 1000 ×g 离心 10 m in,沉淀血小板 , PB S / EDTA 缓冲液洗涤 2次 。2 m l PB S / EDTA 缓冲液重 新悬浮血小板 ,调至 1 ×1012 /L 。移至 Eppendo rf管 中 ,每管 100μl,再加入 100 μl待测洗脱液 ,室温振 荡孵育 60 m in。 PB S / EDTA 缓冲液洗涤 3次 ( 3000
病例和方法
1 病例 血小板减少患者 145 例 。免疫性血小板 减少性紫癜 (A ITP)患者 89 例 ,男 31 例 ,女 58 例 , 年龄 19 ～63 岁 (中 位年 龄 32 岁 ) 。其 中 特 发 性 A ITP患者 (均为慢性 ITP) 68 例 ,全部符合慢性 ITP 的诊断标准 [ 2 ] ,男 22例 ,女 46例 ;继发性 A ITP患者 21例 ,包括系统性红斑狼疮 ( SLE) 13 例 ,抗磷脂抗 体综合征 2 例 ,类风湿关节炎 2 例 ,干燥综合征 2 例 , EVANS综合征 2 例 。非 A ITP患者 56 例 ,其中 急性白血病 24例 ,再生障碍性贫血 4例 ,骨髓增生 异常综合征 2例 ,淋巴瘤 2例 ,肺癌 14例 ,食管癌 10 例 ,均经骨髓穿刺或病理证实 ; 其中男 31 例 ,女 25