菠菜中草酸的提取及含量测定

菠菜中草酸的提取及含量测定

一、实验目的

1．学会沉淀法提取操作，进一步熟悉过滤，离心，提取等操作，掌握均匀沉淀法的原理。

2．学习文献资料的查阅方法，学会制定实验方案，综合运用各种分析方法解决实际问题。

3．学习食品采样方法，综合分析菠菜中草酸的含量分布情况。

二、实验原理

草酸是一种二元羧酸, 是植物体内普遍存在的一种组分, 在菠菜、苋菜、生菜等许多蔬菜作物体内都有较高的含量。从环境毒理学和食品营养学角度看, 草酸在蔬菜作物可食部位的大量累积会影响到人类的身体健康。

本实验采用灵敏度较高的比色法测菠菜中草酸含量。采用722型分光光度计法测定，

Fe在pH值1.8〜2.5的KCI- HCI缓冲液中与磺基水杨酸（SSAL）和草酸均生成络合

物,Fe3 +和草酸的络合物能使Fe3+与磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅，测定Fe3+的磺基水

杨酸络合物的吸光度, 随着草酸量的增加而降低, 据此可计算出样品中草酸根的含量。

三、仪器与试剂

仪器部分：榨汁机，722型分光光度计，水浴锅，电子天平，台秤，100mL容量瓶3个，

250mL容量瓶4个，200mL烧杯2个，500mL烧杯2个，离心机及离心管，长颈漏斗，铁架台，滤纸。

试剂部分：新鲜菠菜，磺基水杨酸（分析纯）（s）, FeCl3 （s），草酸钠（s），KCI

（s），12moI/L

浓盐酸，0.5mol/L稀盐酸，去离子水，pH试纸。

四、实验步骤

（一）样品制备

1铁标准液的配制（0.5 mg/ mL ）:称取0 .4 g FeCl3于500mL烧杯中，加去250mL离子水溶解。

2．磺基水杨酸（ SSAL）的配制（ 0 .5%）：称取0 .5 g 磺基水杨酸（分析纯）于100 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。

3．草酸钠标准液的配制（ 2 mg/ mL ） : 称取0 .2 000 g 草酸钠于200 mL 烧杯中，加去离子水，稍加热，使其溶解，移入100 mL 容量瓶用去离子水定容。

4. 缓冲液的配制（pH值2）:称取3.7g左右KCl于500 mL烧杯中，加去离子水少量，在水浴锅上微热溶解，加12mol/L浓盐酸用pH试纸使pH值为2移入250 mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度。

5. 草酸的待测液制备：将菠菜在去离子水中洗涤2 次，晾干。称取菠菜可食部分100 g, 加入100 mL水，压榨2〜3 min,每2g匀浆折算为1 g试样，称取1份匀浆50 g，用100 mL水洗入250 mL容量瓶，加入0.5mL浓度为0.5mol/L的HCI溶液，澄清，臵于70〜80 C水浴上加热30 min，其间摇动数次，取出冷却，加水至刻度，摇匀过滤。将滤液经10000r/min 离心

10min ,得到的即是草酸待测液。

6. 比色法测定菠菜中草酸含量的条件研究[2]

该最大吸收波长即为测定时所要选择的最佳波长508nm。

标准曲线的制作按照以上确定的条件, 按下列顺序：

加液: 2mL Fe3+, 20mL 缓冲液， 1.2 mL 磺基水杨酸, 从容量瓶中依次取出已经配制的Na2C2O4溶液体积为：0、0.1、0. 2、0. 4、0. 8 mL,再用蒸馏水定容至100mL容量瓶中。显色30min后，以蒸馏水为参比液，在508nm波长处进行比色测定。根据测定结果（见表一），

绘制草酸含量的标准曲线，通过计算机拟合，获得该标准曲线A关于x的方程。其中式中，x 为显色体系的草酸的质量浓度（mg/mL）, A为吸光度。

7. 菠菜中的待测液中草酸含量的测定：

用菠菜待测液替换草酸根溶液，依次取0,0.2, 0. 4, 0.6 mL用蒸馏水定容至100mL容量瓶

中。显色30min后，以蒸馏水为参比液，在510 nm波长处进行比色测定其余按照制作标准曲线相同的方法，进行显色反应，并测定其吸光度，填入表二。根据标准曲线方程，计算待测液

中草酸含量。 五、实验数据处理

FeCl 3： 0 .4 g

磺基水杨酸：0.5g Na 2C 2O 4： 0.2275g

KCl : 3.7534g

Na 2C 2O 4浓度的计算，以第二份为例：

3

-3

x=0.2275 g x 10 /100mL x 0.1mL/50mL=4.55 x 10 mg/mL

用origin 软件绘制的草酸含量标准曲线

■ B

吸光度A 与草酸的质量浓度x(mg/mL)的线性方程

A=0.25397-6.00549x

当体积为 0.20mL 时,A=0.210

0.210=0.25397-6.00549x

得x=0.00732mg/mL

草酸质量w=x x 50mL/0.2mL x 250mL=475.5mg

实际取了25g菠菜，所以100g菠菜含草酸的质量

m=w x 100g/25=1.83g

六、误差分析

1 ．杂质过程中，菠菜未完全榨汁，造成草酸不能尽数提取，从而造成实验结果比真实结果偏低一点。

2. pH对实验结果有很大影响，而实验过程中pH与反应的最适pH有一定偏差。

3. 在显色过程中，未等到显色完全，就进行了比色测定，导致偏差。

4•移取溶液过程中由于无1mL吸量管，造成测量结果不够精确。

七、注意事项

1. 比色实验的选择：在显色30min后进行比色较合适。

2. 在比色测定时，都是要以蒸馏水为参比溶液，注意不能用1号溶液作为参比。

3. 加液时要按顺序加入，分光分度计使用之前要预热。

4. 用标准曲线法测草酸含量时注意草酸的浓度要在线性范围内。

5. 要使吸光度控制在0.05〜0.8,这样才能提高准确度。

6. 为了使草酸提取完全，应将菠菜的榨汁在70〜80C下水浴加热，并加入适量盐酸。参考文献：[1] 曾芳，刘忠珍，许桂芝，王荣辉，欧俊. 蔬菜中不同形态草酸的提取测定[ 期刊论文] - 食品科学2009(16)

[2] 段立珍，汪建飞，赵建荣. 比色法测定菠菜中草酸含量的条件研究

[3] NOONAN S C， SAVAGE G P. Oxalate content of foods and its effect on humans[J]. Asia Pacific Journal of Clinical Nutrition， 1999， 8(1)： 64-74.

[4] 张英鹏，杨运娟，杨力，等. 草酸在植物体内的累积代谢及生理作用研究进展[J]. 山东农业科学， 2007(6)： 61-67.

[5] 刘拥海，俞乐. 植物草酸的功能及其代谢调控研究进展[J]. 安徽农业科学， 2006， 34(15)：3572-3573; 3575.