细胞因子的检测ppt课件
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《细胞因子的检测》课件
干细胞治疗
干细胞分泌的细胞因子具有促进组织再生和修复的作用，可用于治 疗多种疾病。
基因治疗
通过将具有治疗作用的基因导入细胞，调控细胞因子的表达，达到治 疗遗传性疾病和罕见病的目的。
04
细胞因子检测的挑战与展望
检测灵敏度与特异性
检测灵敏度
提高检测方法的灵敏度，降低检测限，以便更早地发现细胞 因子的存在。
挑战
面临的挑战包括如何提高检测方法的 实用性和可靠性，以及如何降低检测 成本，使其更易于在临床推广应用。
05
案例分析
案例一：肿瘤细胞因子检测
总结词
肿瘤细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对肿瘤进行早期诊断、病情监测和疗效评估的方 法。
详细描述
肿瘤细胞因子检测通过检测肿瘤细胞分泌的细胞因子，如肿瘤坏死因子、白介素等，来判断肿瘤的存 在、发展阶段和预后情况。该方法具有无创、灵敏度高、特异性强等优点，有助于提高肿瘤的诊断准 确性和治疗效果。
案例三：感染性疾病细胞因子检测
总结词
感染性疾病细胞因子检测是利用细胞因子作 为生物标志物，对感染性疾病进行诊断和病 情监测的方法。
详细描述
感染性疾病细胞因子检测通过检测患者体内 异常升高的细胞因子，如白介素-1、白介素 -6等，来判断感染性疾病的类型和严重程度 。该方法有助于早期发现感染源，为患者提 供及时有效的治疗，同时有助于评估治疗效 果和预后情况。
药物研发
药物筛选
通过检测细胞因子水平的变化，可以筛选出具有潜在治疗作用的 候选药物。
药物疗效评估
在药物研发过程中，检测细胞因子水平的变化可以评估药物的疗 效和作用机制。
个体化治疗
根据患者细胞因子表达水平的差异，可以制定个体化的治疗方案 ，提高治疗效果。
干细胞分泌的细胞因子具有促进组织再生和修复的作用，可用于治 疗多种疾病。
基因治疗
通过将具有治疗作用的基因导入细胞，调控细胞因子的表达，达到治 疗遗传性疾病和罕见病的目的。
04
细胞因子检测的挑战与展望
检测灵敏度与特异性
检测灵敏度
提高检测方法的灵敏度，降低检测限，以便更早地发现细胞 因子的存在。
挑战
面临的挑战包括如何提高检测方法的 实用性和可靠性，以及如何降低检测 成本，使其更易于在临床推广应用。
05
案例分析
案例一：肿瘤细胞因子检测
总结词
肿瘤细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对肿瘤进行早期诊断、病情监测和疗效评估的方 法。
详细描述
肿瘤细胞因子检测通过检测肿瘤细胞分泌的细胞因子，如肿瘤坏死因子、白介素等，来判断肿瘤的存 在、发展阶段和预后情况。该方法具有无创、灵敏度高、特异性强等优点，有助于提高肿瘤的诊断准 确性和治疗效果。
案例三：感染性疾病细胞因子检测
总结词
感染性疾病细胞因子检测是利用细胞因子作 为生物标志物，对感染性疾病进行诊断和病 情监测的方法。
详细描述
感染性疾病细胞因子检测通过检测患者体内 异常升高的细胞因子，如白介素-1、白介素 -6等，来判断感染性疾病的类型和严重程度 。该方法有助于早期发现感染源，为患者提 供及时有效的治疗，同时有助于评估治疗效 果和预后情况。
药物研发
药物筛选
通过检测细胞因子水平的变化，可以筛选出具有潜在治疗作用的 候选药物。
药物疗效评估
在药物研发过程中，检测细胞因子水平的变化可以评估药物的疗 效和作用机制。
个体化治疗
根据患者细胞因子表达水平的差异，可以制定个体化的治疗方案 ，提高治疗效果。
细胞内因子的流式检测(共10张PPT)
所需试剂
1、细胞表面染色用的荧光标记的单抗试剂 如CD3、CD4、CD8、CD25等
2、荧光标记的细胞因子抗体： 如IFN-g、TNF-a、IL-2、IL-4等
3、溶血素：裂解红细胞
4、激活剂：
如PMA、Ionomycin，可以刺激T细胞活化并分泌细胞因子
所需试剂
5、阻断剂
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细胞免疫检测I细胞因子的检测.ppt
实验三 细胞免疫检测I： 细胞因子的检测
实验任务
市场上有一广告产品，据说有免疫增强作用， 请设计一个方案证实之（从细胞因子的角 度考虑
方案归纳
人体免疫包括细胞免疫和体液免疫。本次 实验从T细胞分泌的细胞因子着手检测细胞 免疫功能。
确定研究对象，给药途径，剂量，样本量。 给药后检测血清中细胞因子的含量。
竞争法 双抗体夹心法 改良双抗体夹心法 抑制性测定法 抗体夹心法
抑制性测定法
间接法测抗体
本次实验操作步骤
每孔加用pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释的IL-2 抗体，4℃过夜。
封闭：用10%小牛血清封闭，37℃孵育20 分钟，洗涤3次。
于每孔内分别加不同稀释度（如1:5，1:10， 1:20…1:80）的待测血清，PBS空白对照， 阴性对照血清，阳性对照血清各0.1毫升。 37℃孵育30分钟，洗涤3次
金免疫技术
金免疫技术的特点是以胶体金作为示踪标 记物 ，应用于抗原抗体反应的一种新型免 疫标记技术。
酶联免疫分析法
酶联免疫分析法是当前应用最广泛的免疫检测方法。 本法将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化 作用结合起来，根据酶作用底物后显色，以颜色变 化判断试验结果，可经酶标测定仪作定量分析，敏 感度可达ng水平。
免疫荧光技术免疫荧光技术放射免疫分析法放射免疫分析法酶联免疫分析法酶联免疫分析法化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法金标记技术金标记技术免疫荧光技术是用化学方法使荧光素标记免疫荧光技术是用化学方法使荧光素标记的抗体或抗原与组织或细胞中的相应的抗体或抗原与组织或细胞中的相应抗原或抗体结合进行定性定位检查抗原或抗体结合进行定性定位检查抗原或抗体的方法
常用于标记的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。
目前常用的方法有酶标免疫组化法和酶联免疫吸附 法。前者测定细胞表面抗原或组织内的抗原；后者 主要测定可溶性抗原或抗体。
实验任务
市场上有一广告产品，据说有免疫增强作用， 请设计一个方案证实之（从细胞因子的角 度考虑
方案归纳
人体免疫包括细胞免疫和体液免疫。本次 实验从T细胞分泌的细胞因子着手检测细胞 免疫功能。
确定研究对象，给药途径，剂量，样本量。 给药后检测血清中细胞因子的含量。
竞争法 双抗体夹心法 改良双抗体夹心法 抑制性测定法 抗体夹心法
抑制性测定法
间接法测抗体
本次实验操作步骤
每孔加用pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释的IL-2 抗体，4℃过夜。
封闭：用10%小牛血清封闭，37℃孵育20 分钟，洗涤3次。
于每孔内分别加不同稀释度（如1:5，1:10， 1:20…1:80）的待测血清，PBS空白对照， 阴性对照血清，阳性对照血清各0.1毫升。 37℃孵育30分钟，洗涤3次
金免疫技术
金免疫技术的特点是以胶体金作为示踪标 记物 ，应用于抗原抗体反应的一种新型免 疫标记技术。
酶联免疫分析法
酶联免疫分析法是当前应用最广泛的免疫检测方法。 本法将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化 作用结合起来，根据酶作用底物后显色，以颜色变 化判断试验结果，可经酶标测定仪作定量分析，敏 感度可达ng水平。
免疫荧光技术免疫荧光技术放射免疫分析法放射免疫分析法酶联免疫分析法酶联免疫分析法化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法金标记技术金标记技术免疫荧光技术是用化学方法使荧光素标记免疫荧光技术是用化学方法使荧光素标记的抗体或抗原与组织或细胞中的相应的抗体或抗原与组织或细胞中的相应抗原或抗体结合进行定性定位检查抗原或抗体结合进行定性定位检查抗原或抗体的方法
常用于标记的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。
目前常用的方法有酶标免疫组化法和酶联免疫吸附 法。前者测定细胞表面抗原或组织内的抗原；后者 主要测定可溶性抗原或抗体。
第五章细胞因子(共46张PPT)
PDGF)
肝细胞生长因子（hepatic growth factor, HGF)
细胞因子的基因
大肠杆菌表达
大肠杆菌
纯化
细胞因子 （产品）
第二节 细胞因子的分类和生物学活性
细胞因子的种类：
白介素 在白细胞间发挥作用的细胞因子； 干扰素 具有干扰病毒感染和复制的能力；
肿瘤坏死因子 一种能使肿瘤发生出血坏死的物质； 集落刺激因子 指能刺激多能造血干细胞和不同发育分化
阶段的造血干细胞进行增殖分化，并在半固体培养基中形 成相应集落的细胞因子；
➢ 同一种CK可由多种细胞产生，一种细胞可 产生多种CK。
一种细胞可产生多种细胞因子，不同类型的细胞也可产生一种或几种相 同的细胞因子；一种细胞因子可对多种靶细胞发挥作用，产生多种不同
的生物学效应，称多效性；几种不同的细胞因子也可同一种靶细胞发
生作用，产生相同或相似的生物学效应，称重叠性；一种细胞因子可
1.理化性质
大多数CK是低分
子量糖蛋白，单 体形式。
2.作用局限性
通过自分泌和旁
分泌方式在局部发 挥作用。
自分泌 autocrine
旁分泌 paracrine
作用于分泌细 胞自身
作用于相 邻细胞
血液循环
远距离作用
内分泌 endocrine
3.分泌具有自限性
无刺激信号，合成立即终止。
4.产生具有多源性
其它 近年来由于分子生物学和克隆技术的发展 和应用，陆续发现了许多新的细胞因子，其性质 与生物、分化、免疫创伤愈合、胚胎发育、神经 损伤修复和肿瘤发生发展有关。
三 细胞因子的功能分类
白细胞介素(interleukin, IL)
干扰素(Interferon, IFN)
肝细胞生长因子（hepatic growth factor, HGF)
细胞因子的基因
大肠杆菌表达
大肠杆菌
纯化
细胞因子 （产品）
第二节 细胞因子的分类和生物学活性
细胞因子的种类：
白介素 在白细胞间发挥作用的细胞因子； 干扰素 具有干扰病毒感染和复制的能力；
肿瘤坏死因子 一种能使肿瘤发生出血坏死的物质； 集落刺激因子 指能刺激多能造血干细胞和不同发育分化
阶段的造血干细胞进行增殖分化，并在半固体培养基中形 成相应集落的细胞因子；
➢ 同一种CK可由多种细胞产生，一种细胞可 产生多种CK。
一种细胞可产生多种细胞因子，不同类型的细胞也可产生一种或几种相 同的细胞因子；一种细胞因子可对多种靶细胞发挥作用，产生多种不同
的生物学效应，称多效性；几种不同的细胞因子也可同一种靶细胞发
生作用，产生相同或相似的生物学效应，称重叠性；一种细胞因子可
1.理化性质
大多数CK是低分
子量糖蛋白，单 体形式。
2.作用局限性
通过自分泌和旁
分泌方式在局部发 挥作用。
自分泌 autocrine
旁分泌 paracrine
作用于分泌细 胞自身
作用于相 邻细胞
血液循环
远距离作用
内分泌 endocrine
3.分泌具有自限性
无刺激信号，合成立即终止。
4.产生具有多源性
其它 近年来由于分子生物学和克隆技术的发展 和应用，陆续发现了许多新的细胞因子，其性质 与生物、分化、免疫创伤愈合、胚胎发育、神经 损伤修复和肿瘤发生发展有关。
三 细胞因子的功能分类
白细胞介素(interleukin, IL)
干扰素(Interferon, IFN)
细胞因子(共84张PPT)
二、干扰素（interferon, IFN）
1. 1957年发现 2. 广谱抗病毒作用 3. 间接杀伤或抑制病毒，通过与细胞表面受体
作用使细胞产生抗病毒蛋白，抑制病毒的复 制
4. 可增强NK、巨噬细胞和T淋巴细胞的活性，
发挥免疫调节作用
（一）分型（根据其来源、结构及生物学性质）
1. I型 IFN-α、IFN-β （1）细胞来源
重叠性：几种不同的细胞因子作用于同一靶细胞，产 生相同或相似的生物学效应（如IL-4和IL-6 均刺激B细胞增殖）
协同性：两种或两种以上的细胞因子共同作用，并
且一种细胞因子强化另一种细胞因子的功
能，两者表现为协同作用，如IL-3和IL-11
共同刺激造血干细胞的分化成熟。
拮抗性：一种细胞因子抑制另一种细胞因子的功 能。（如IL-4－－IFN-γ）
（1）局部低浓度 激活T细胞、激活巨噬细胞。 （2）大量产生 内分泌效应：诱导肝脏急性期蛋
白合成；引起发热和恶病质。
（二）IL-6
1. 细胞来源 主要由单核-巨噬细胞、Th2细胞、 血管内皮细胞、成纤维细胞产生。
2. 主要功能 （1）刺激活化B细胞增殖，分泌抗体； （2）刺激Ｔ细胞增殖及CTL活化； （3）刺激肝细胞合成急性期蛋白，参与炎症反 应； （4）促进血细胞发育。
2. 细胞来源：单核巨噬细胞（主要）；
肥大细胞。
T细胞、NK细胞和
3. 主要功能
(1) 低浓度 --- 自分泌、旁分泌效应 1) 诱导炎症反应： ①旁分泌：使血管内皮细胞表达ICAM-1，促白细胞聚集 于炎症局部； ②自分泌：刺激单核巨噬细胞等合成、分泌细胞因
子(如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α等)，导 致炎性细胞浸润和增强吞噬细胞的杀伤。
细胞因子检测方法ppt课件
用途：检测单个细胞内多个细胞因子；并可区 分表达特定细胞因子的细胞亚群。
细胞内细胞因子的流式细胞仪检测
方法：用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志 组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌，同时采用 特殊的化学与抗体选择，确保静止与无细胞因子分泌细胞 的最小荧光背景。
特点： 快速
简便：无需组织培养，可以全血分析，无需分离PBMCs； 灵敏度高：高度灵敏的荧光标记与检测系统； 高效：在同一细胞内同时检测两种或更多种细胞因子，也 可根据细胞免疫表型区分分泌细胞因子的细胞亚群； 接近生物体的分析条件：全血检测保留细胞及生化微环境 更准确反映了体内状况。
小结
生物学检测法比较敏感，又可直接测定生物学功能， 是最可靠的方法，适用于各种实验目的，是科研部门 最常用的技术，但需要长期培养依赖性细胞株，检测 耗时长，步骤繁杂，影响因素多，不容易熟练掌握。
免疫学检测法比较简单，迅速，重复性好，但所测定 的只代表相应细胞因子的量而不代表活性，同时敏感 度也低于生物活性检测法（约低10～100倍）。
免反复冻融 微孔板：将未使用的板条用箔纸包好，加上干
燥剂沿四周封口。2-8℃可以1个月左右
检测方法的进展
高通量细胞因子检测
CBA(Cytometric Bead Array)是一种微珠多 用途检测分析技术，它由一系列的微珠组合来 捕获并结合流式细胞仪技术检测细胞培养液、 EDTA血浆、血清样本中被检测物质的量。其 采用夹心法分析策略，与传统的ELISA分析技 术相比，此方法可以同时检测多项指标。用已 知的标准品和对照标准曲线就可以得出被测样 本的浓度。此分析方法不受样本量的限制，而 且可以得到一个样本的多个数据。
夹心ELISA
缺点：不能显示出单个细胞产生细胞因子的同 一性和频率性的直接信息
细胞内细胞因子的流式细胞仪检测
方法：用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志 组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌，同时采用 特殊的化学与抗体选择，确保静止与无细胞因子分泌细胞 的最小荧光背景。
特点： 快速
简便：无需组织培养，可以全血分析，无需分离PBMCs； 灵敏度高：高度灵敏的荧光标记与检测系统； 高效：在同一细胞内同时检测两种或更多种细胞因子，也 可根据细胞免疫表型区分分泌细胞因子的细胞亚群； 接近生物体的分析条件：全血检测保留细胞及生化微环境 更准确反映了体内状况。
小结
生物学检测法比较敏感，又可直接测定生物学功能， 是最可靠的方法，适用于各种实验目的，是科研部门 最常用的技术，但需要长期培养依赖性细胞株，检测 耗时长，步骤繁杂，影响因素多，不容易熟练掌握。
免疫学检测法比较简单，迅速，重复性好，但所测定 的只代表相应细胞因子的量而不代表活性，同时敏感 度也低于生物活性检测法（约低10～100倍）。
免反复冻融 微孔板：将未使用的板条用箔纸包好，加上干
燥剂沿四周封口。2-8℃可以1个月左右
检测方法的进展
高通量细胞因子检测
CBA(Cytometric Bead Array)是一种微珠多 用途检测分析技术，它由一系列的微珠组合来 捕获并结合流式细胞仪技术检测细胞培养液、 EDTA血浆、血清样本中被检测物质的量。其 采用夹心法分析策略，与传统的ELISA分析技 术相比，此方法可以同时检测多项指标。用已 知的标准品和对照标准曲线就可以得出被测样 本的浓度。此分析方法不受样本量的限制，而 且可以得到一个样本的多个数据。
夹心ELISA
缺点：不能显示出单个细胞产生细胞因子的同 一性和频率性的直接信息
6第六章--细胞因子PPT课件
二、细胞因子的共同特性
①受抗原、丝裂原等刺激后由细胞分泌产生，多为小分子。 ②对靶细胞作用通常无抗原特异性。在较低浓度下即有生物学
活性。 ③通过与靶细胞表面受体结合发挥作用。 ④以自分泌、旁分泌和内分泌的形式发挥作用。 ⑤一种细胞因子可由多种细胞产生，一种细胞也可产生多种细
胞因子；一种细胞因子可作用于多种类型细胞（多效性）， 多种细胞因子也可作用于同一种靶细胞（重叠性）；一种细 胞因子可抑制其他细胞因子的功能（拮抗性），一种细胞因 子可增强另一种细胞因子的功能（协同性）；细胞因子在体 内相互调节，形成复杂的细胞因子网络。
（四）诱导细胞凋亡
IL-2可诱导抗原活化的T细胞发生凋亡； TNF可诱导肿瘤细胞的凋亡。
（五）促进创伤的修复
第四节 细胞因子受体
一、细胞因子受体（CKR）分类: 膜结合型细胞因子受体（mCKR） 可溶性细胞因子受体（sCKR）
(一)免疫球蛋白基因超家族
如IL-1R、IL-6R、M-CSFR、SCFR
1.淋巴因子（lymphokine）淋巴细胞分泌 2.单核因子（monokine）单核巨噬细胞分泌 3.其他细胞分泌的细胞因子
干扰素治疗急性乙型肝炎
患者Gerald M.Edelman，男，35岁.主诉:因近日胃口 欠佳、乏力、反复出现头晕、肝区不适而入院。
患者入院前，自感全身乏力、萎靡、食欲不振，并有恶心、 呕吐、头晕、失眠、巩膜、皮肤出现黄染入院。患者自述6 年前体检发现HBsAg阳性，未作任何治疗。入院后，体格 检查：肝肿大于肋下1cm、压痛，左肋下可触及脾脏；实验 室检查：谷丙转氨酶升高，诊断为急性乙型肝炎。住院后经 用拉米夫定、肝泰乐、维生素等抗病毒和护肝药物治疗两个 半月，病情仍未明显好转；根据患者病情迁延不愈，医生随 即在原用药的基础上，使用干扰素抗病毒治疗（500万U/ 次），使用干扰素四个月后，病人自感觉状态好转，使用干 扰素抗病毒治疗6个月，患者血清谷丙转氨酶转正常， HbsAg转阴性，病人痊愈出院。 问题：1、为什么使用干扰素能治愈“乙肝”？干扰素有哪些特 点？2、除干扰素外细胞因子还有哪几大类？其理化性质和 作用特点如何？
细胞因子(免疫学检验课件)
态
免疫学测定方法学评价
➢优点： 特异性高 操作简便、快速，无需依赖细胞株 影响因素较少且易控制，重复性好，方法容易标准化。
➢缺点： 所测定的只是细胞因子的蛋白含量，与其生物活性不一
定呈正比 结果与所用的抗体来源及亲和力有很大的关系 敏感性相对较低 标本中细胞因子的可溶性受体，会影响特异性抗体对细
胞因子的结合
(四) 集落刺激因子（colony-stimulating factor， CSF） ：G-CSF、M-CSF、GM-CSF、SCF、 EPO、TPO等。
(五)趋化因子（chemokine）：促进淋巴细胞、中性 粒细胞、单核细胞等到达炎症部位并激活。
(六)生长因子（growth factor，GF） ：TGF-β、 EGF 、NGF、VEGF、FGF 等。
（六）两面性：通常情况下，发货 抗感染、抗病毒、促进造血和免疫 调节等功能，但在一些异常情况下 又参与炎症反应、诱导肿瘤等疾病 的发生。
（七）非特异性：细胞因子以非特异性 方式发挥作用,不受MHC限制，细胞因 子必须与相应受体结合才能发挥效应;
（八）网络性：细胞因子之间通过合成 分泌的作用相互调节、生物学效应的相 互影响，从而形成复杂而有序的因子网 络，达到机体稳态平衡。
三、细胞因子的免疫学检测法
利用抗原抗体反应的原理，制备出抗细 胞因子的单克隆抗体或多克隆抗体，通过 同位素、荧光素或酶等标记技术加以放大 和显示，从而定性或定量分析细胞因子。 （一）酶联免疫吸附试验（ELISA）
是定量分析中最常用方法。但不能判 断细胞因子的生物学活性。
ELISA方法
ELISA法是应用最为广泛的非均相酶标免疫分析技术，一 步或多步的抗原抗体反应和一步酶促反应构成ELISA的基 本步骤，可作定性或定量分析。ELISA法不仅可以用于细 胞因子检测，也可用于可溶性细胞因子受体或可溶性粘 附因子的测定
免疫学测定方法学评价
➢优点： 特异性高 操作简便、快速，无需依赖细胞株 影响因素较少且易控制，重复性好，方法容易标准化。
➢缺点： 所测定的只是细胞因子的蛋白含量，与其生物活性不一
定呈正比 结果与所用的抗体来源及亲和力有很大的关系 敏感性相对较低 标本中细胞因子的可溶性受体，会影响特异性抗体对细
胞因子的结合
(四) 集落刺激因子（colony-stimulating factor， CSF） ：G-CSF、M-CSF、GM-CSF、SCF、 EPO、TPO等。
(五)趋化因子（chemokine）：促进淋巴细胞、中性 粒细胞、单核细胞等到达炎症部位并激活。
(六)生长因子（growth factor，GF） ：TGF-β、 EGF 、NGF、VEGF、FGF 等。
（六）两面性：通常情况下，发货 抗感染、抗病毒、促进造血和免疫 调节等功能，但在一些异常情况下 又参与炎症反应、诱导肿瘤等疾病 的发生。
（七）非特异性：细胞因子以非特异性 方式发挥作用,不受MHC限制，细胞因 子必须与相应受体结合才能发挥效应;
（八）网络性：细胞因子之间通过合成 分泌的作用相互调节、生物学效应的相 互影响，从而形成复杂而有序的因子网 络，达到机体稳态平衡。
三、细胞因子的免疫学检测法
利用抗原抗体反应的原理，制备出抗细 胞因子的单克隆抗体或多克隆抗体，通过 同位素、荧光素或酶等标记技术加以放大 和显示，从而定性或定量分析细胞因子。 （一）酶联免疫吸附试验（ELISA）
是定量分析中最常用方法。但不能判 断细胞因子的生物学活性。
ELISA方法
ELISA法是应用最为广泛的非均相酶标免疫分析技术，一 步或多步的抗原抗体反应和一步酶促反应构成ELISA的基 本步骤，可作定性或定量分析。ELISA法不仅可以用于细 胞因子检测，也可用于可溶性细胞因子受体或可溶性粘 附因子的测定
细胞因子医学PPT课件
12
8 网络效应
CK的产生、生物学作用、受体表 达、相互调节等均具有网络性。
13
14
9 CK与激素、神经肽和神经递质共 同组成细胞间信号分子系统
15
三、 细胞因子的种类
白细胞介素 干扰素 肿瘤坏死因子 集落刺激因子 趋化因子 生长因子
interleukins，ILs interferon，IFN tumor necrosis factor，TNF colony stimulating factor，CSF chemokines growth factor，GF
44
五 干扰素（抗病毒）生物活性的研究方法
原理：用干扰素样品处理易感细胞，使细胞建立抗病 毒状态，然后用适当的定量病毒攻击细胞，通过病毒 复制的量或病毒引起的细胞病变程度可判断样品中干 扰素的生物活性。
45
常用细胞株
WISH（人羊膜细胞 ）、MDBK（牛肾细胞 ）、L929 （小鼠肺纤维瘤） 、Hep2/c（人喉癌细胞） 要求：易培养,对病毒敏感性高,易于诱导抗病毒状态, 对人体无害
7
(作用方面特性)
4 高效性 10-12mol/L
5 主要以自分泌（autocrine）、旁分泌（paracrine） 形式发挥效应
某些细胞因子（IL-1、IL-6、TNF-α）也可以内分泌 （endocrine）形式作用于远端靶细胞,介导全身性 反应。
某些ck还可以通过细胞内分泌（intracrine），直接与 细胞内受体结合。
30
抗原提呈？
抗原提呈：是指抗原提呈细胞(antigen-presenting cell， APC)摄取抗原并将其处理成免疫原性多肽，以 抗原肽-MHC分子复合物的形式表达于APC表面，供T细 胞识别，从而产生免疫应答的过程。
8 网络效应
CK的产生、生物学作用、受体表 达、相互调节等均具有网络性。
13
14
9 CK与激素、神经肽和神经递质共 同组成细胞间信号分子系统
15
三、 细胞因子的种类
白细胞介素 干扰素 肿瘤坏死因子 集落刺激因子 趋化因子 生长因子
interleukins，ILs interferon，IFN tumor necrosis factor，TNF colony stimulating factor，CSF chemokines growth factor，GF
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五 干扰素（抗病毒）生物活性的研究方法
原理：用干扰素样品处理易感细胞，使细胞建立抗病 毒状态，然后用适当的定量病毒攻击细胞，通过病毒 复制的量或病毒引起的细胞病变程度可判断样品中干 扰素的生物活性。
45
常用细胞株
WISH（人羊膜细胞 ）、MDBK（牛肾细胞 ）、L929 （小鼠肺纤维瘤） 、Hep2/c（人喉癌细胞） 要求：易培养,对病毒敏感性高,易于诱导抗病毒状态, 对人体无害
7
(作用方面特性)
4 高效性 10-12mol/L
5 主要以自分泌（autocrine）、旁分泌（paracrine） 形式发挥效应
某些细胞因子（IL-1、IL-6、TNF-α）也可以内分泌 （endocrine）形式作用于远端靶细胞,介导全身性 反应。
某些ck还可以通过细胞内分泌（intracrine），直接与 细胞内受体结合。
30
抗原提呈？
抗原提呈：是指抗原提呈细胞(antigen-presenting cell， APC)摄取抗原并将其处理成免疫原性多肽，以 抗原肽-MHC分子复合物的形式表达于APC表面，供T细 胞识别，从而产生免疫应答的过程。
《细胞因子检测概述》课件
化学发光法
化学发光法是一种利用化学发光反应来检测细胞因子的方 法。这种方法具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点， 适用于痕量细胞因子的检测。
化学发光法主要包括酶促化学发光和直接化学发光等方法 。这些方法在临床诊断、药物研发和环境监测等领域有广 泛应用。
荧光定量PCR法
荧光定量PCR法是一种基于PCR技术 的细胞因子检测方法。通过荧光染料 或探针标记的特异性引物，实现对细 胞因子基因的定量检测。这种方法具 有高灵敏度、高特异性和可定量等优 点。
THANKS
感谢观看
细胞因子在免疫应答、炎症反应、造 血等生理和病理过程中发挥重要作用 。
细胞因子种类
白细胞介素（IL）
如IL-1、IL-2、IL-6等，具有调节免疫和炎 症反应的功能。
干扰素（IFN）
如IFN-α、IFN-β、IFN-γ等，具有抗病毒、 抗肿瘤和免疫调节作用。
肿瘤坏死因子（TNF）
如TNF-α、TNF-β等，具有抗肿瘤和免疫调 节作用。
案例二：自身免疫性疾病细胞因子检测
总结词
自身免疫性疾病细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对自身免疫性疾病进行诊断和病情监测的方法。
详细描述
自身免疫性疾病细胞因子检测通过检测患者体内异常升高的细胞因子，如IL-17、IL-23等，来判断自身免疫性疾 病的存在、发展阶段和治疗效果。这种检测方法有助于提高自身免疫性疾病的诊断准确性和治疗效果，为患者提 供更好的治疗选择。
05
细胞因子检测案例分析
案例一：肿瘤细胞因子检测
总结词
肿瘤细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对肿瘤进行早期诊断、病情监测和疗效评估的方 法。
详细描述
肿瘤细胞因子检测通过检测肿瘤细胞分泌的细胞因子，如IL-6、TNF-α等，来判断肿瘤的存在、发展 阶段和治疗效果。这种检测方法具有无创、灵敏度高、特异性强的优点，有助于提高肿瘤的诊断准确 性和治疗效果。
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7、拮抗性
8、网络性
细胞因子检测的特点与方法
1、检测的特点
2、检测的方法
细胞因子检测的特点
免疫原性较弱
样品含量低
样品具有时效性 生物效应特异性差
细胞因子检测的方法
免疫学检测方法——抗原性检测 细胞生物学检测方法——生物活性检测 分子生物学检测方法——基因表达检测
第二节
细胞因子检测的方法与原理
一、细胞因子的细胞生物学检测
二、细胞因子的免疫学检测
三、细胞因子的分子生物学检测
细胞因子的细胞生物学检测
1、检测方法与原理
2、检测中的操作注意要点
检测方法与原理
细胞增殖或增殖抑制试验
细胞病变抑制试验
细胞毒试验 膜：计数受趋化细胞
趋化试验原理示意
检测中的操作注意要点
第一节
细胞因子检测概述
一、细胞因子的类型与作用特点
二、细胞因子检测的特点与方法
细胞因子
由非神经—内分泌细胞 产生的一大类与免疫应答活 动密切相关的低分子蛋白与 多肽。
细胞因子的类型与作用特点
1、细胞因子的分类
2、细胞因子的作用特点
以生物学作用进行划分的分类
白细胞介素（Interleukin）—— IL-1、IL-2、…… IL-18 干扰素（Interferon）—— IFN-、IFN-、IFN- 肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor）—— TNF- 、 TNF- 集落刺激因子（Colony-stimulating factor）—— M-CSF、G-CSF 转化生长因子（Transforming growth factor）—— TGF-
2、细胞毒或细胞病变状态的显示 活细胞染色法 胞内酶活性显示法 DNA断片测定法
细胞因子的免疫学检测
分泌型细胞因子的检测
细胞内细胞因子的检测
ELISPOT
激活
膜抗原标记
细胞内细胞 因子标记
细胞内细胞因子检测技术
细胞因子的分子生物学检测
原位杂交技术
Rt-PCR技术
第三节
常用细胞因子的检测方法
谢谢大家
TF-1（H）增殖法
GN-CSF、IL-5
IL-6、EPO
IL-4 IL-5
CTLL（M）增殖法 BCL-1（M）增殖法
IL-2 IL-4
各类细胞因子检测的常用靶细胞
细胞因子 IL-6 实验系统 B9（M）增殖法 BM60（H）增殖法 IL-7 IL-8 GM-CSF TNF/ IFN Clone-IXN/2b（M）增殖法 中性粒细胞（M、H）趋化法 TF-1（H）增殖法 IL-3、IL-5 干扰因素 IL-4、IL-11
靶细胞的选择与培养
检测标本的制备
显示检测结果
靶细胞的选择与培养
1、对所测的细胞因子有特异的敏感性 2、易培养、保存、生物学特性稳定 3、有良好的生长状态
4、种属适配
各类细胞因子检测的常用靶细胞
细胞因子 IL-1 实验系统 D10（M）增殖法 EL-4（M）增殖法 A352（H）增殖抑制法 IL-2 IL-3 CTLL（M）增殖法 KG-1（H）增殖法 IL-4 干扰因素 IL-2、IL-4 IL-4
IL-6、IL-5
L929 （M、H）细胞毒法 wish（H）病变保护法 L929（M）病变保护法 IFN- 、 IFN- IFN- 、 IFN-
检测标本的准备
1、分离特定的产生细胞 2、对产生细胞进行诱导、激活
3、选择适当的收集时间
显示检测结果
1、细胞增殖状态的显示： 放射性核素掺入法、 胞内酶活性显示法 活细胞染色法 细胞荧光测定法
一、IL-2的检测 二、IFN-γ的检测
三、TNF的检测
待检样品（细胞上清） 指示细胞（CTLL-2）
按不同稀 释度加入
白 细 胞 介 素 的 测 定 示 意 图
-2
37º C，16-20小时 加入3HTdR（1-5Ci）
37º C，4-6小时 收集细胞
测定
待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929）
趋化因子（Chemokine）—— IL-8、GROs、MCP-1
生长因子（Growth factor）—— EGF、FGF、IGF、PDGF
各 类 细 胞 因 子 间 关 系
ILs IFNs
TNFs
TGFs
CSFs
Chemokines
1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性 2、多源与同源性 3、高效性 4、多效性（pleiotropy） 5、丰余性（redundancy） 6、协同性
加入细胞裂解液，比色
第四节
细胞因子受体的检测
一、细胞因子受体的类型
二、细胞因子受体的检测
细胞因子受体的类型
膜型细胞因子受体
分泌型细胞因子受体
细胞因子受体的检测方法
膜型细胞因子受体的检测
配体检测法
抗体检测法
分泌型细胞因子受体的检测 标记抗体检测法
本章小结
1、细胞因子的作用特点与检测特点 2、细胞因子检测的原理与方法 3、常用的细胞因子检测 4、细胞因子受体的检测
按不同稀 释度加入
37º C，4小时 弃取上清，加入VSV
37º C，24-48小时 观察细胞病变（镜检或比色）
干 扰 素 的 测 定 示 意 图
待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929）
按不同稀 释度加入
37º C，24小时 弃取上清，洗涤
加入结晶紫染液，洗涤
肿 瘤 坏 死 因 子 的 测 定 示 意 图