清热解毒片中黄芩苷的含量测定

清热解毒片中黄芩苷的含量测定

目的采用高效液相色谱法测定清热解毒片中黄芩苷的含量。方法用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，用甲醇-0.2%磷酸溶液（48：52）为流动相，流速1.0 ml·min-1，检测波长280nm。结果该试验的结果为清热解毒片中黄芩苷进样量在0.13～0.95μg范围中线性关系良好（该区间中r=0.9996），精密度试验RSD 为1.11%，重复性试验RSD为1.16%，平均回收率为100.13%，RSD为1.30%（n=6 ）。结论本方法操作比较简便，精密度好，结果准确可靠，适用于清热解毒片中黄芩含量的测定。

标签：高效液相色谱法；黄芩苷；清热解毒片

清热解毒片收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册。该药的功效主要为清热解毒，临床中流感，上感及各种发热性质的疾病首选该药。这种药物的主要成分是金银花、生石膏、黄芩、龙胆、玄参、地黄、金银花等12味中药组成。原标准中未对黄芩进行含量检测，在本实验中应用的较为先进的高效液相色谱法，通过该种方法测定黄芩在该成药中的含量，该法由于仪器可靠，方法和操作较为简单，因此结果相对的准确可靠。

1 资料与方法

1.1一般资料LC2010A型高效液相色谱仪，黄芩苷对照品，自中国食品药品检定研究院购得（含量测定用，批号：110715-201117）；样品来源于陕西盘龙制药集团有限公司，水为重蒸馏水，甲醇在色谱中是色谱纯，乙醇、磷酸在色谱中是分析纯。

1.2方法

1.2.1色谱的条件该试验的填充剂是用的十八烷基硅烷键合硅胶，试验中的色谱柱是VP-ODSC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；用甲醇-0.2%的磷酸溶液（48︰52）做流动相；该实验中设置的流速为10ml/min；检测的波长为280nm；温度检测设置为35℃；理论塔板数以黄芩苷计算，不能低于3000。

1.2.2制备对照品溶液用精密的方法称取60℃下已经减压干燥时间为4h的黄芩苷对照品适量，加入甲醇溶解该制剂，制成的溶液为每1ml含60μg的黄芩苷做对照品，即能够得到。

1.2.3制备供试品溶液从该成品中随机取10片，除去包裹着的糖衣，通过精密工具称重，然后研磨成粉末状。取出大约0.5g左右，放入带有塞子的锥形瓶里，加入甲醇（浓度为60%）25ml，称得重量之后，通过超声振荡20min（功率250W，频率35kHz），冷却之后，再测取其重量，减少的重量用甲醇补足（浓度为60%），然后摇匀，后滤过，测出滤出的液体5ml，放入25ml的量瓶中，用甲醇（浓度为60%）补至刻度，充分混匀，通过大小为0.22μm微孔滤膜，获取

滤出液，即可制得。

1.2.4制备阴性对照液按照该药物中的处方比例和制备工艺制备缺黄芩的阴性样品，按2.3项下制备阴性供试品溶液。

1.2.5线性关系考察分别用精密仪器量出对照品溶液（120μg·ml-1）1，2，4，6，8ml，分别放入容量为10ml的容量瓶里，用甲醇（浓度为60%）补足到刻度，充分振荡均匀，吸取各分组的稀释液各10μl，按照供试品项下试验方法，加入到液相色谱仪中。首先测量峰面积，然后用该面积和对照品的进样量X（μg），用最少二乘法进行线性回归，回归方程为：Y=217.1X-146.1 r=0.9996。线性范围为

0.12μg～0.96μg。

1.2.6精密度试验2.2项下对照品溶液，在同一天里连续进样6次，进样10μl/次，该峰面积的积分值的RSD为1.11% （n=6）。

1.2.7稳定性试验取同一批清热解毒片供试品溶液，分别于供试品溶液制备后第0，3，6，9，12，15，24h进样测定黄芩苷的峰面积，结果黄芩苷峰面积积分值的RSD为0.95%，该数据显示，在24h内供试品溶液的性质相对稳定。

1.2.8重复性试验取同批清热解毒片（批号为20120701）内容物，按照供试品溶液制备方法平行制备6份供试品溶液，测定黄芩苷的峰面积，测得平均含量为6.17mg·片-1，RSD为1.16%。

1.2.9加样回收率试验称取供试品6份（各约0.40g，已知含量），称定后，加入已知浓度的黄芩苷对照品溶液5ml，按照制备供试品溶液的方法法进行提取，测定含量，计算该组的回收率，见表1。

1.2.10样品的测定分别取不同批号的清热解毒片3批，按照制备供试品溶液的方法项下方法试验，吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测量并记录峰面积，试验结束后测得每片黄芩苷的含量分别为 6.43mg、6.06mg、6.19mg。

2 讨论

2.1对流动相磷酸的含量进行了比较，结果以磷酸的浓度为0.2%为宜，测得黄芩苷的分离度和峰形均较好。

2.2本试验考察了不同溶媒的（甲醇、70%甲醇、60%甲醇、乙醇），溶媒的用量（25、40、60 ml），提取方式（超声法、回流法、冷浸法），提取时间（20、30、50 min）对黄芩苷含量的影响，结果表明以60%甲醇为提取溶媒，超声20min 为提取含量最高。

2.3本方法的阴性对照品在不会产生干扰峰（在黄芩苷对照品的吸收峰处），并且方法相对的简单易行、可以重复进行，所有试验步骤均必须在精密仪器测量

下进行，试验的精密度良好，由此得出的黄芩苷的含量可以当做清热解毒片中的质量标准，由此试验的出的结果提示，需要在以后的标准修订中，适当增加黄芩苷的含量测定。

本试验对黄芩苷、连翘苷对照品进行了200～400nm紫外光谱扫描，结果表明，黄芩苷在278nm处有较强的吸收，在315nm处有次强吸收；连翘苷在228nm 处有较强吸收，在278nm处有次强吸收，考虑到黄芩苷的含量较高，故在278nm 处测定含量。

参考文献：

[1]赵琦.清热解毒口服液中含量测定方法的改进[J].陕西中医学院学报，2011，36（02）：82.

[2]吴永芹，冯凯，周慧，等.HPLC法同时测定葛根芩连片中葛根素和黄芩苷的含量[J].中国药事，2012，26（03）：282-284.