盐酸氨基葡萄糖片检测标准操作程序

1. 目的建立盐酸氨基葡萄糖片检测标准操作程序。

2. 范围本标准适用盐酸氨基葡萄糖片。

3. 职责质量保证部、QC负责本标准的实施。

4. 程序
4.1 性状
目测：本品为为绿色薄膜包衣片，除去包衣后显白色或类白色。

4.2 鉴别
4.2.1 葡萄糖基的鉴别反应
⑴试剂与试液：碱性酒石酸铜试液（取硫酸铜结晶6.93g，加水使溶解成100ml；取酒石酸钾钠结晶34.6g与氢氧化钠10g，加水使溶解成100ml；将两试液等量混合，即得）。

⑵仪器与用具：电子分析天平、量筒、量瓶、移液管、试管。

⑶操作方法：取本品细粉适量（约相当于盐酸氨基葡萄糖0.1g），加水5ml，振摇使溶解后，过滤，滤液中加碱性酒石酸铜试液1ml，加热，即生成红色沉淀。

4.2.2 氨基的鉴别反应
⑴试剂与试液：茚三酮。

⑵仪器与用具：电子分析天平、量筒、量瓶、移液管、试管。

⑶操作方法：取本品细粉适量（约相当于盐酸氨基葡萄糖75mg），加水10ml，振摇使溶解后，过滤，取滤液1ml，加入茚三酮约2mg，加热，溶液显紫红色。

4.2.3氯化物的鉴别反应
⑴试剂与试液：硝酸银试液（取硝酸银17.5g，加水适量使溶解成1000ml，摇匀，即得。

）、氨试液（取浓氨溶液400ml，加水使成1000ml，即得。

）、碘化钾淀粉试纸、硫酸、稀硝酸、二氧化锰。

⑵仪器与用具：电子分析天平、量筒、量瓶、移液管、试管。

⑶操作方法：
①取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。

②取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即发生氯气，能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。

4.2.4 盐酸氨基葡萄糖的鉴别
⑴试剂与试液：水、磷酸、磷酸二氢钾、乙腈、盐酸氨基葡萄糖对照品。

⑵ 仪器与用具：电子分析天平、高效液相色谱仪、氨基硅烷键合硅胶。

⑶ 操作方法：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

4.3重量差异
⑴ 仪器与用具：电子分析天平、镊子。

⑵ 操作方法：取供试品20片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定每片的重量，每片重量与平均片重相比较，超出重量差异限度的药片不得多于2片，并不得有1片超出限度1倍。

⑶ 限度：平均片重×（1±5%）
4.4溶出度检查
⑴ 试剂与试液：
① 盐酸氨基葡萄糖对照品：称取盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加水溶解成25μg/ml 溶液。

② 乙酰丙酮溶液：乙酰丙酮2ml ，加0.5mol/L 碳酸钠溶液至50ml 。

③ 对二甲氨基苯甲醛溶液：对二甲氨基苯甲醛0.8g ，加无水乙醇15ml ，浓盐酸15ml 。

⑵ 仪器与用具：溶出仪、紫外-可见分光光度计、电子天平、注射器、量瓶、移液管 ⑶ 操作方法：
照紫外-可见分光光度法（中国药典2010版二部附录IV A ）测定。

测定法 取本品6片，照溶出度测定法（中国药典2010年版附录XC 第一法），以水900ml 为溶剂，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟吸取溶液10ml ，滤过，精密量取续滤液3ml 置100ml 量瓶中，加水稀释至刻度。

精密量取对照品溶液、供试品溶液各5ml ，置具塞试管中，加乙酰丙酮溶液1.0ml ，摇匀，置沸水浴中(1分钟后密塞)，准确加热25分钟，取出；用冰水迅速冷却后，加无水乙醇3.0ml ，60℃水浴中保温10分钟后，再加对二甲氨基苯甲醛溶液1.0ml ，强力振摇，并继续在60℃水浴中保温l 小时，立即用冰水冷却至室温。

照紫外-可见分光光度法在525nm 波长处测定吸光度，同时做空白试验，计算每片的溶出量。

⑷ 计算公式：
%100750
1000Abs 9003/100C Abs %⨯⨯⨯⨯⨯=⋅对对样）（盐酸氨基葡萄糖溶出量 式中：C 对——对照品的浓度（μg/ml ）;
Abs 样——样品溶液的吸光度；
Abs 对——对照品溶液的吸光度；
⑸ 限度：≥标示量的75%。

4.5 其他：应符合片剂项下有关的各项规定（中国药典2010年版二部附录I A ）。

4.6含量测定
⑴ 试剂与试液：水、乙腈、磷酸、磷酸二氢钾、盐酸氨基葡萄糖对照品。

⑵ 仪器与用具：电子分析天平、氨基硅烷键合硅胶柱、高效液相色谱仪、量筒、量瓶、移液管、离心机、离心管。

⑶ 操作方法
照高效液相色谱法（中国药典2010版二部附录VD ）测定。

色谱条件与系统适应性 用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.03mol/L 磷酸二氢钾 (磷酸调节pH=2.5)-乙腈（25:75）为流动相；检测波长为195nm ；柱温：30℃。

理 论塔板数按盐酸氨基葡萄糖峰计算应不低于1500。

主峰与相邻杂质峰分离度应符合规定。

测定法 取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于盐酸氨基葡萄糖25mg ），置25ml 量瓶中，加稀释剂（乙腈-水=3:1）适量，超声处理5min ，使盐酸氨基葡萄糖溶解，放冷至室温，加稀释剂至刻度，离心，精密量取上清液20μl 注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加稀释剂溶解并稀释制成1mg/ml 的溶液，同法测定。

按外标法以峰面积计算，即得。

⑷ 计算公式：
%100750
100025%⨯⨯⋅⨯⨯⋅⋅=粉对单对样量盐酸氨基葡萄糖标示含m A m C A ; 式中：A 样——样品溶液的峰面积；
C 对——对照品溶液的浓度（mg/ml ）;
m 单——单片盐酸氨基葡萄糖片的重量（g ）;
m 粉——称取细粉的重量（mg ）;
A 对——对照品溶液的峰面积。

⑸ 限度：含盐酸氨基葡萄糖（C 6H 13NO 5·HCl ）应为标示量的96.0%~104.0%。

4.7 有关物质
⑴ 试剂与试液：水、乙腈、磷酸、磷酸二氢钾、2,5-脱氧果糖嗪对照品、果糖嗪对照品、盐酸氨基葡萄糖对照品。

⑵ 仪器与用具：电子分析天平、氨基硅烷键合硅胶柱、高效液相色谱仪、量筒、量瓶、移液管、离心机、离心管。

⑶ 操作方法
照高效液相色谱法（中国药典2010版二部附录VD ）测定。

色谱条件与系统适用性试验 用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.03mol/L 磷酸二氢钾(磷酸调节pH=2.5)-乙腈（25:75）为流动相；检测波长为191nm ；柱温：25℃。

系统
适用性试验溶液的出峰顺序依次为盐酸氨基葡萄糖、2,5-脱氧果糖嗪杂质、果糖嗪杂质。

盐酸氨基葡萄糖与2,5-脱氧果糖嗪的分离度应≥1.0，2,5-脱氧果糖嗪与果糖嗪的分离度应≥1.0，且理论塔板数均≥1500。

测定法 取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于盐酸氨基葡萄糖50mg ），置25ml 量瓶中，加稀释剂［水-乙腈（1:3）］适量，超声处理5分钟，放冷至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。

精密量取供试品溶液1ml ，置100ml 量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。

精密量系统适应性溶液、自身对照溶液和供试品溶液各20μl 注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高为满量程的15~25%，记录色谱图。

供试品溶液记录的色谱 图中如有2,5-脱氧果糖嗪和果糖嗪杂质峰，两个杂质的峰面积与校正因子的乘积均不得大于自身对照溶液主峰面积的0.2倍（0.2%），其他单个杂质峰面积不得大于自身对
照溶液主峰面积的0.2倍（0.2%），2,5-脱氧果糖嗪和果糖嗪经校正后的峰面积与未知杂质的峰面积的和不得大于自身对照溶液主峰面积的1.0倍（1.0%）。

（杂质峰校正因子f ：2,5-脱氧果糖嗪=0.200、果糖嗪=0.208；其他未知杂质校正因子f 为1.0）
⑷ 计算公式：
f ⨯=杂质峰峰面积校正以后杂质峰峰面积
%1%⨯=对照溶液主峰
单个杂质）单个杂质（A A %1%⨯=对照溶液主峰总杂质）总杂（A A
式中：
A 单个杂质——供试品溶液色谱图中最大未知单个杂质峰的峰面积（用于计算单个杂质）
或供试品溶液色谱图中2,5-脱氧果糖嗪杂质和果糖嗪杂质校正后的峰面积（用于计算2,5-脱氧果糖嗪和果糖嗪杂质）；
A 总杂质——供试品溶液色谱图中所有未知杂质和校正后的已知杂质峰面积之和；
A 自身对照主峰——自身对照溶液主峰的峰面积。

⑸ 限度：2,5-脱氧果糖嗪应≤0.2%，果糖嗪应≤0.2%，其他单个杂质应≤0.2%，总杂 质应≤1.0%。

4.8.1 每1g 供试品中除细菌数不得过1000个、霉菌及酵母菌数不得过100个外，还不得检出大肠埃希菌。

4.8.2 检验方法：
4.8.2.1菌落总数检查标准操作程序SOP-09-10-04
4.8.2.2霉菌和酵母菌检查标准操作程序SOP-09-10-05
4.8.2.3大肠杆菌检查标准操作程序SOP-09-10-06。