实验一分光光度计性能检测.

实验一分光光度计性能检测

【实验目的】

1、掌握分光光度计的性能检测，包括波长检测、杂光检测以及比色皿配对。

2、掌握分光光度计的使用方法。

【实验原理】

1、波长检测：⑴可见光区域的黄光波段比较狭窄，适用于光度计波长的粗测；⑵镨钕滤光片在529nm±1〜2nm处有较好的吸收峰，适用于光度计波长的细测。

2、杂光检测：镨钕滤光片在585nm 处吸光度A 最大，透光率T 最小，所产生的透光与杂光成正比，因此可用其透光率表示杂光的大小。

3、比色皿配对：一套比色皿之间的材质、厚薄、色泽、空白吸收等应该一致，误差小于0.5%才能配套使用。

【试剂与器材】

1、镨钕滤光片、白纸条、黑纸片、蒸馏水等；

2、722 型分光光度计、比色皿。

【操作步骤】

一、操作

1、波长检测

(1) 粗测：调仪器波长旋纽至580nm 处，打开遮光板，在比色槽中光路经过处放一白纸条，观察是否有均匀的黄光。

⑵细测：调波长至529nm处，打开遮光板，调0%T，盖上遮光板以空气调100%T，将镨钕滤光片插入光路，测出A 值。再在529nm附近每隔1〜2nm,各测其A值。

2、杂光检测

(1) 调波长为585nm，盖上遮光板，用黑纸挡住比色皿光路，调0%T。

(2) 盖上遮光板，用空气作空白调100%T。

(3) 插入镨钕滤光片，盖上遮光板，测出585nm时的T%，即为杂光水平。

3、比色皿配套

( 1 )选取几支大小、材质、色泽相同的比色皿，洗净，装入占比色皿体积2/3 的蒸馏水(D.W.) ，擦干，放入比色槽。

(2)在585nm处，调第1支比色皿透光度为100%T，依次测出其他几支比色皿的T%。

不合格的需反复剔除极端值，或重新配对，直至有2个以上的比色皿合格。

二、结果及讨论

【参考范围】

1、波长的检测：在529nm ±1nm 处有最大吸收值为合格。

2、杂光的检测：T% < 5涵合格。

3、比色皿配套：T max % -T min% W 0. 5%为合格比色皿配套。

【注意事项】

1、722型分光光度计的使用方法：选定检测波长，置调节模式为透光率T,将某一盛装参比介质

的空白比色皿置于光路，打开遮光板，调0%T，盖上遮光板调100%T，再将盛装待测液体的比色皿置

于光路，测出T值，或置调节模式为吸光度A ,即可测出A值。注意每次测定均需重新调0%T、100%T。

2、在杂光检测中，用于调0%T 的黑纸片应完好无孔洞，否则会导致假合格现象。

3、使用比色皿时，其盛装液体不能超过总体积的2/3，也不宜少于1/2，且在检测前必须用擦镜纸将比色皿外的液体擦拭干净。

【实验目的】

1、 掌握线性范围试验的原理及方法。

2、 掌握葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD ）法测定葡萄糖（Glu ）。

3、 熟悉分光光度计的使用。

【实验原理】

使用不同浓度的葡萄糖标准溶液，用

GOD-POD 法试剂测定各自的吸光度，以标准浓度为横坐标，

以其对应的吸光度为纵坐标，在方格纸上作图，即可绘制出一条直线，即剂量反应曲线。一般测定方法 的线性范围要求能覆盖临床上的参考值和常见疾病的医学决定水平，以减少标本稀释重测的机会。

【试剂与器材】

1、 蒸馏水，Glu 标准液，GOD-POD 法酶试剂。

2、 722型分光光度计，比色皿。

【操作步骤】

一、样品的处理与测定

1、原始的葡萄糖标准溶液浓度为

110mmol/L ，设为第1号管，将其稀释后得到 2种高浓度的葡萄

糖标准溶液管：第 2、3号管。注意稀释后要混匀。

2号吕

3号吕 110mmol/L 葡萄糖液（卩） 100 50 D.W.(卩)

50 50 葡萄糖液浓度（mmol/L ）

73.33

55

2、再将第2、3号管分别取50卩,1加D.W.50 □依次作等倍稀释（各 4管），得到8种较低浓度的 葡萄糖标准溶液，稀

释方法见下图：

AvV 口

吕号

浓度（mmol/L ）

3、取12支试管，其中设有空白管（B ）。按下表操

作:

试管编号 B

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

D.W. ( 4) 10

葡萄糖标准液（4）

10

10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 酶试剂（ml ）

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

混匀，37 'C 水浴 15分钟，取岀冷却至室温，在 505nm 处用0.5cm 的比色皿， B 管调零, 测各管吸光度

吸光度A 0

标准液浓度C 0

110

73. 33

55

36.67

27.5

18. 33

13. 75

9.17 6.88

4.58 3.44

(mmol/L )

、绘制A-C 曲线

实验二方法学评价试验（1）

线性范围试验

73.33 36.67 18.33 9.17 4.58 55 27.5 13.75 6.88 3.44