高效液相色谱法测定多种维生素多种矿物质片中的维生素D3含量
复方钙片中维生素D3的含量测定
复方钙片中维生素D3的含量测定目的建立高效液相色谱法测定复方钙片中维生素D3的含量。
方法采用Venusil MPC18（4.6×250 mm，5 μm）色谱柱；流动相：甲醇；流速：1 ml/min；检测波长：265 nm；柱温：25℃；进样量：20 μl。
结果维生素D3在0.6～3.0 μg/ml 的范围内有良好的线性关系，平均回收率为98.62%。
结论本实验建立的高效液相色谱法快速，简便，准确，可用于复方钙片中维生素D3的含量测定。
标签：维生素D3；高校液相色谱法；含量测定维生素D为固醇类衍生物，具抗佝偻病作用，又称抗佝偻病维生素。
它可以帮助人体更好地吸收钙，增强骨骼韧性和密度，预防骨质疏松，此外还能预防很多慢性病像癌症，糖尿病，风湿性关节炎，多发性硬化，自体免疫等疾病[1-3]。
人体所需钙量因年龄、生理及病理等不同而异。
人们可以根据自己的需求适当补充维生素D和钙。
维生素D3是维生素D家族中的重要成员。
实验室前期制备了维生素D3和钙的复方制剂，为了控制该制剂中维生素D3的质量，建立了高效液相色谱法测定维生素D3的含量。
1仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ5200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；RJ-TGL-16C臺式高速离心机（无锡市瑞江分析仪器有限公司）；复方钙片（本院自制）；维生素D3对照品（1000611-200607，中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙醇均为分析纯。
2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：Venusil MPC18（4.6×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇；流速：1 ml/min；检测波长：265 nm；柱温：25℃；进样量：20 μl。
2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取5 mg的维生素D3对照品置于250 ml的棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，使成为20 μg/ml的对照品溶液。
精密吸取该对照品溶液3 ml置于50 ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得1.2 μg/ml的对照品溶液。
HPLC法测定多维片中痕量维生素D3的含量
HPLC法测定多维片中痕量维生素D3的含量王乔飞【摘要】建立了运用HPLC法对痕量VD3进行含量测定的分析方法.实验中采用菲罗门硅胶(silica)柱,以异丙醇:正己烷(0.5:99.5) 为流动相, 流速:2ml/min,紫外检测波长:264nm,柱温:30℃.实验表明:VD3在0.1μg/ml ～0.8μg/ml范围内,其色谱峰面积与质量浓度呈良好线性关系,r=0.9999(n=5),平均回收率为99.04%,进样精密度为1.26%.本法操作简便、快速,准确,适用于痕量成分的含量测定.【期刊名称】《淮阴工学院学报》【年(卷),期】2010(019)003【总页数】3页(P82-84)【关键词】维生素D3;高效液相色谱;含量测定【作者】王乔飞【作者单位】江苏江山制药有限公司,江苏,靖江,214500【正文语种】中文【中图分类】R917多维片是综合营养保健品，其成份极其复杂，不但包括各种水溶性和脂溶性维生素，还有多种补充的微量元素，其中VD3是一种脂溶性维生素，其含量极低，样品中仅约含2.5ug/g，且性质不稳定，遇光和空气均易变质、降解，而且其它杂质对其稳定性和检测都有影响和干扰，其含量测定一直是个瓶颈难题。
有关资料提供的方法，主要采用添加碱液进行皂化反应，然后采用石油醚、乙醚多次萃取，再用氮气流吹干处理。
不但操作过程繁琐，而且样品的回收率不稳定，操作的重现性很差。
有的方法在对样品中VD3充分溶出作了考虑，但在处理过程中缺少抗氧、防吸附，减少干扰等措施，致使成分仍有损失而回收率偏低。
有文献报道，采用反相色谱系统测定，但对于脂溶性维生素采用反相系统，样品回收率不满意。
本文提供了一个实用、易操作的检测方法，无需进行皂化处理和反复萃取等繁琐操作，而是针对VD3性质不稳定，制剂成分复杂的情况，分别采取了避光、抗氧，抗干扰分离手段，取得了较好效果。
特别适用痕量VD3的准确测定。
该方法未见报道。
1 仪器与试药1.1 仪器Agilent 1200 HPLC系统，配紫外检测器。
高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D_2和维生素D_3的含量
高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D_2和维生素D_3的含量梁晓艳【期刊名称】《广西中医学院学报》【年(卷),期】2007(10)2【摘要】[目的]建立反相高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素133的含量。
[方法]采用KromasilC18反相色谱分离柱，流动相为甲醇．乙腈（90：10），检测波长为265nm，流速为0．8ml／min，加入维生素A和维生素E进行干扰试验。
[结果]维生素耽、D3在0．5～100mg／L浓度范围内线性关系良好，维生素D2平均加样回收率98．9％～108．4％，RSD2．22％～4．28％；维生素A和维生素E不干扰测定。
[结论]本方法简单，易于操作，分离效果好，结果准确，受干扰因素小，适宜测定片剂中的维生素D2和维生素D3。
【总页数】4页(P58-61)【关键词】维生素D2;维生素D3;高效液相色谱法;钙镁D片【作者】梁晓艳【作者单位】广西中医学院附属瑞康医院【正文语种】中文【中图分类】R917【相关文献】1.高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量 [J], 梁晓艳2.浅谈高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量 [J], 张良;毕翠芳;杜昕;王会强3.正相高效液相色谱法测定钙加维D咀嚼片中的维生素D3含量 [J], 胡桂丽;钱金华;张晓燕;朱荣成4.高效液相色谱法测定碳酸钙D3咀嚼片中维生素D3的含量 [J], 邢俊波;姜春来;靳守东;曹红;陈玉敏;水彩红;单婷婷;胡丹5.浅谈高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量 [J], 张良; 毕翠芳; 杜昕; 王会强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定维多宝泡腾片中的维生素D3的含量
高效液相色谱法测定维多宝泡腾片中的维生素D3的含量
张玫;刘新宇
【期刊名称】《上海医药》
【年(卷),期】1998(019)002
【摘要】目的：探讨维多宝泡腾片中维生素Ｄ３的含量的测定方法。
方法：高效
液相色谱法。
采用Ｎｏｖａ－Ｐａｋ硅胶色谱柱，二氧六环－１－辛醇－正乙烷（３：１：９６）为流动相，紫外检测波长２６５ｎｍ。
结果：维生素Ｄ３平均回收率为９９．４０％，ＲＳＤ为１．４０％（ｎ＝３）。
结论：本方法简便、准确、快速，且重现性好，适用于维生素Ｄ３的常规分析。
【总页数】2页(P36-37)
【作者】张玫;刘新宇
【作者单位】上海市药品检验所;上海市药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R977.24
【相关文献】
1.反相高效液相色谱法测定复方维生素泡腾片中维生素C的含量 [J], 薛继雄;刘金来
2.高效液相色谱法测定碳酸钙D3咀嚼片中维生素D3的含量 [J], 邢俊波;姜春来;
靳守东;曹红;陈玉敏;水彩红;单婷婷;胡丹
3.一维反相高效液相色谱法测定保健食品中维生素D2和维生素D3 [J], 刘剑;易
路遥;晏亮;吉伟佳;虞雪军
4.高效液相色谱法测定多种维生素多种矿物质片中的维生素D3含量 [J], 韦月早;杨世联;黄艳芳;韦艳妮
5.高效液相色谱法测定婴幼儿营养米粉中维生素A、D3和E含量的不确定度评定[J], 张荣彬;戴志勇;李梦怡;陈振桂;任国谱
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量
（ 辑 编
陈明 伟 ）
高效液 相 色谱法 同时测定钙镁 Ｄ片 中 维生 素 Ｄ 和维生素 Ｄ 的含量 ‘ ２ ３
梁晓 艳
（ 西 中 医学院 附属 瑞康 医院 ， 西 南宁 广 广
摘
５０１） ３ ０ １
要 ： 目的］ ［ 建立反相 高效液相 色谱 法 同时测定钙镁 Ｄ片中维生素 Ｄ 和维生素 Ｄ 的含 量 。［ 法］ 用 Ｋｏ ａ ｌ ｌ ２ ３ 方 采 ｒ ｓ Ｃ８ ｍ ｉ
宜测定 片剂 中的维生 素 Ｄ 和 维生素 Ｄ 。 ２ ３
关键词 ： 维生 素 Ｄ ； 生 素 Ｄ ； ２维 ３ 高效 液 相 色谱 法 ； 镁 Ｄ 片 钙
中图分 类号 ： ９ ７ 文献标识码 ： 文章编号 ：０ ８ ４ ６ ２ ０ ）２ ０ ８—０ Ｒ １ Ａ １ ０ —７８ （０ ７０ —０ ５ ４
．
Ｖ
图 ３ 金花茶 叶 乙醇液 二阶导数光谱 图
Ｖ 一
图 ６ 金 花茶叶氯仿液二 阶导 数光谱图
３ 讨
论
３ １ 在可见 紫外 鉴别中 ， 花茶 叶可 供鉴别 的特征峰较 多 ， ． 金
特别是其 氯仿提取液在 可见 光区和紫外 光 区特征 峰更 明显 。 在 乙醇液零 阶光 谱图 中， ２ ３ ２ ６ ６ ３１ Ｉ 长处 有 明显 在 ４ 、 ７ 、 ６ １ 波 ２ Ｔ
骨质 疏松 症 ， 以及 预 防癌 症 、 多囊 性 卵巢综合 征 、 牛皮癣 、 糖
Ａ ｎ：３ ．９ Ｃ一１ １７ ， ＝０ ９ ９ ６ ３５ ９ ．９ ９ ｒ ．９ ９ 。结果 表明维 生素 Ｄ 、 ２ 在 ０．～１ ０ ／ ５ ０ ｍｇ Ｌ浓 度范围内均有 良好的线性关系 。
一维反相高效液相色谱法测定保健食品中维生素D2和维生素D3
一维反相高效液相色谱法测定保健食品中维生素D2和维生素D3分析检测一维反相高效液相色谱法测定保健食品中维生素D2和维生素D3刘剑易路遥* 晏亮吉伟佳虞雪军江西省药品检验检测研究院江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心章提出利用一维反相高效液相色谱法测定片剂、颗粒、软胶囊和硬胶囊保健食品中维生素D的含量。
方法：样品经淀粉酶水解，其中加入抗氧化剂；水解后加入氢氧化钾皂化，再用石油醚提取，经氮吹至近干，用甲醇溶解摇匀。
经0.22μm 有机滤膜过滤后供液相色谱仪分析。
以Thermo Accucore Polar Premium(100mm*4.6 mm)为分离柱，甲醇-乙腈为流动相，流速为0.8ml/min，进样量为20μL,在DAD波长264nm处作检测。
检出限为0.7μg/100g，方法中维生素D2平均回收率为93.7%-98.8% ；相对标准偏差0.5%-5.6 %；维生素D3平均回收率为92.8%-99.1% ；相对标准偏差0.3%-6.7 %。
该方法快速、简便、准确，适用于片剂、颗粒、软胶囊和硬胶囊保健食品中维生素D测定。
试验部分仪器与试剂。
高效液相色谱仪(美国，型号Ultimate)，电子天平(美国，型号XS205DU)、紫外可见分光光度计(日本，型号U-3900)，氮吹仪（美国Orgnomation公司）。
维生素D2（中国食品药品检定研究院）标准品和维生素D3标准品（中国药品生物制品鉴定所）。
乙腈、甲醇、2，6-二叔丁基对甲酚、无水乙醇均为色谱纯；石油醚、抗坏血酸、氢氧化钾为分析纯；α-淀粉酶活力300U/mg。
标准溶液配制。
标准储备液的制备:精密称取维生素D2标准品11.86mg，置50mL棕色量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
精密称取维生素D3标准品12.09mg，置50mL棕色量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；于4℃条件下储存备用。
标准储备液浓度的校正：精密吸取维生素D2和D3标准储备液各500μl于各10ml棕色容量瓶中，用乙醇定容至刻度,混匀，分别用1cm比色皿中，以无水乙醇为空白参比，在264nm波长处测定吸光值，得维生素D2储备液浓度为222.4μg/ml和维生素D3储备液浓度为236.8μg/ml。
高效液相色谱法测定保健品中维生素D 含量
高效液相色谱法测定保健品中维生素 D 含量
□ 罗 骁 吴帅龙 李彩玲 广电计量检测（合肥）有限公司
摘 要：建立了一种使用液相色谱 - 紫外检测器，以维生素 D2、D3 互为内标，测定保健食品中维生素 D 的方法。样 品经淀粉酶水解，无水乙醇 - 氢氧化钾皂化，皂化液用石油醚萃取、水洗、干燥，旋转蒸发至约 2 mL，氮吹至干，甲醇溶 解定容，内标法定量。维生素 D2 和维生素 D3 的分离度为 1.5，线性范围为 0.01 ～ 5.0 μg/mL，相关系数 R2 ≥ 0.999； 相对标准偏差 RSD（n=6）为 2.82% ～ 5.10%；加标回收率 96.23% ～ 104.26%。当取样量为 5.000 g 时，VD2、VD3 的 检出限均低于 0.2 μg/100 g。
关键词：维生素 D；保健食品；液相色谱（HPLC）；内标法
维 生 素 D3 与 维 生 素 D2 为 脂 溶 性 维生素，主要功用是调节细胞生长分 化和人体免疫功能，有利于新骨生成 和钙化，促进骨骼生长 [1]，预防骨质 疏松症。但维生素 D 摄入过多，可引 起高血钙、甚至软组织异位骨化等 [2]。
Toledo），高效液相色谱仪（LC-20A， 5009.82-2016）第四法，准确称量某
维生素 D2 D3
线性范围 μg/mL 0.01 ～ 5.0 0.01 ～ 5.0
表 1 线性方程、相关系数（r2）及定量下限
线性方程
相关系数，r2
检出限 μg/100 g
C=1.0575A-0.0552
0.9999
0.1954
C=1.3888A-0.4966
0.9996
0.1723
Hale Waihona Puke 定量限 μg/100 g 0.6513 0.5743
药片中维生素D含量的测定方法
测定药片中的维生素D含量的方法摘要：本方法采用高效液相色谱法测定维生素D(包括维生素D2和D3,下同)及其制剂、维生素AD制剂或鱼肝油中所含维生素D及前维生素D经折算成维生素D 的总量，以单位表示，每单位相当于维生素D是0.025μg。
关键词：高效液相色谱法、维生素D、半暗室、避免氧化、第一种方法、第二种方法、第三种方法引言：本方法采用高效液相色谱法测定维生素D(包括维生素D2和D3,下同)及其制剂、维生素AD制剂或鱼肝油中所含维生素D及前维生素D经折算成维生素D 的总量，以单位表示，每单位相当于维生素D是0.025μg。
测定应在半暗室中及避免氧化的情况下进行。
无维生素A醇及其他杂质干扰的供试品可用第一种方法测定，否则应按第二种方法处理后测定；如果按第二种方法处理后，前维生素D峰仍受杂质干扰，仅有维生素D峰可以分离时，则应按第三种方法测定。
第一种方法(1)对照品贮备溶液的制备根据各制剂中所含维生素D的成分,精密称取相应的维生素D2或D3对照品25mg,置100ml棕色量瓶中，加异辛烷80ml，避免加热，用超声处理助溶1分钟使完全溶解，加异辛烷至刻度，摇匀，充氮密塞，避光，0℃以下保存。
测定维生素D2时，应另取维生素D3对照品25mg，同法制成维生素D3对照品贮备溶液，供系统适用性试验用。
(2)内标溶液的制备称取邻苯二甲酸二甲酯25mg，置25ml量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀。
(3)色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂，正己烷－正戊醇（997∶3)为流动相，检测波长为254nm。
量取维生素D3对照品贮备溶液5ml，置具塞玻璃容器中，通氮后密塞，置90℃水浴中加热1小时，取出迅速冷却，加正己烷5ml，摇匀，置1cm具塞石英吸收池中，在2支8W主波长分别为254和365nm的紫外光灯下，将石英吸收池斜放成45°,并距灯管5～6cm,照射5分钟,使溶液中含有前维生素D3、反式维生素D3、维生素D3和速甾醇D3；取此溶液注入液相色谱仪，测定维生素D3的峰值，先后进样5次,相对标准偏差应不大于2.0％；前维生素D3(与维生素D3的比保留时间约为0.5)与反式维生素D<[3] >(与维生素D3的比保留时间约为0.6)以及维生素D3与速甾醇D3(与维生素D3的比保留时间约为1.1)的峰分离度均应大于1.0。
高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量
高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量:墨:oliTraditionalChineseMedicalUniversity2007,voI.10No.2图3金花茶叶乙醇液二阶导数光谱图图4金花茶叶氯仿液零阶光谱图图5金花茶叶氯仿液一阶导数光谱图^.^^人^i^!6.VV一图6金花茶叶氯仿液二阶导数光谱图3讨论3.1在可见紫外鉴别中,金花茶叶可供鉴别的特征峰较多,特别是其氯仿提取液在可见光区和紫外光区特征峰更明显.在乙醇液零阶光谱图中,在243,276,663121TI波长处有明显的吸收,其中243nm为最大吸收峰,276为肩峰;叶的氯仿液零阶光谱图在246,416,458,668nm波长处有明显吸收峰.其中416啪为最大吸收峰,这些特征均具有一定的鉴别意义.3.2在一阶,二阶导数光谱图中,金花茶叶的乙醇液在200～32Onto和650～70Ohm;氯仿液在200～3o0啪,400～500nm和600--700nm中均有鉴别特征.整个光谱曲线均具有鉴别意义.3.3金花茶是我国一级保护的珍稀物种,不仅具有较高的观赏价值,而且具有一定的营养价值和药用价值.本研究可为金花茶叶药材的鉴定提供依据.参考文献[1]中国科学院.中国植物志[M].北京:科学出版社,1998.49.[2]梁盛业.金花茶[M].北京:中国林业出版社,1993.123.(编辑陈明伟)高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量'梁晓艳(广西中医学院附属瑞康医院,广西南宁530011)摘要:[目的]建立反相高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量.[方法]采用KromasilCl8反相色谱分离柱,流动相为甲醇-乙腈(90:10),检测波长为265nm,流速为0.8rnl/min,加入维生素A和维生素E进行干扰试验.[结果]维生素,03在0.5～lOOmg/L浓度范围内线性关系良好,维生素平均加样回收率98.9%～108.4%,RSD收稿日期:2006—09—202007年第10卷第2期广西中医学院?59?2.22%--4.28%;维生素A和维生素E不干扰测定.【结论]本方法简单,易于操作,分离效果好,结果准确,受干扰因素小,适宜测定片剂中的维生素D2和维生素D3.关键词:维生素D2;维生素D3;高效液相色谱法;钙镁D片中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:1008—7486(2007)02—0058—04脂溶性维生素D是人体必需的营养素,其主要形式是维生素D3(Ch)lecaldferol,胆骨化醇)和维生素132(~dferol,骨化醇),分别来源于动物和植物,结构相似,功能相近.维生素D能够维持血钙水平稳定,调节钙磷代谢,维持骨骼的正常钙化,肌肉收缩,神经传导和所有细胞的正常功能,还有免疫调节作用,增强机体对感染的反应;主要用于预防和治疗骨质疏松症,以及预防癌症,多囊性卵巢综合征,牛皮癣,糖尿病等疾病[.由于维生素D2和D3的结构相似,色谱行为相近,对其有效分离和定量具有一定难度,因此同时测定药品中两种维生素D的报道尚不多见_2q].本文建立了反相高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和D3的含量,结果满意,现报道如下.1实验材料1.1仪器Agilem1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司),紫外检测器,自动进样器(安捷伦公司);HS20500D超声波清洗器(BENCHTOP);离心机(上海安亭科学仪器厂). 1.2药品与试剂钙镁D片(市售品);维生素D2,D3对照品(购自Sigma公司,含量>99.0%);水为超纯水;甲醇,乙腈(色谱纯).2实验方法2.1对照品溶液的制备混合对照品贮备液分别精密称取维生素D2,D3对照品各0.1g,置100ml量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,制得浓度为lmg/ml的混合对照品贮备溶液.贮存至4℃条件下.混合对照品溶液精密吸取混合对照品贮备液5ml,置于50ml量瓶中,用流动相定容至刻度,制得浓度为0.1mg/ rnJ的混合对照品溶液.2.2供试品溶液的制备取样品10片,研细,混匀.取1g,精密称定,置lOml具塞比色管中,加流动相8ml,摇匀,超声提取20mln,加流动相定容至刻度,摇匀,转移至离心管,置离心机中以4000r/rnln离心5min.吸取上清液,经0,45tan滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液.2.3对照品溶液的纯度校正由于维生素D2和对光不稳定,因此在配制对照品溶液之前需用紫外分光光度法进行纯度校正.具体方法参照中国药典l-8J.2.4色谱条件色谱柱:KromasilC18柱(4.6×150mm,3/zrn);流动相:甲醇一乙腈(90:10);流速:0.8ml/mln;检测波长:265nm;柱温:25℃;进样量:10.2.5线性关系考察分别精密吸取混合对照品溶液0.25,1.0,5.0,10.0,25.Oml,置50ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,进样.以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线.得回归方程:=32.756C一1.4072,r=0.99996.An:33.599C一1.1979,r=0.99996.结果表明维生素D2,j在0.5～100mg/L浓度范围内均有良好的线性关系.检测限按3倍空白噪声计算.维生素D2,D3的检出限均为0.3ng,若称样1g,最低检出浓度为0.3~g/g.按信噪比(S/N)为10时,最低定量浓度为1.O~g/g.2.6系统适用性试验精密吸取供试品,混合对照品溶液各10,按2.4项色谱条件进样测定,色谱图见图1.结果表明供试品在混合对照品色谱图相应位置上有相同保留时间的色谱峰.且被测成分与相邻杂质峰分离良好.2.7干扰试验在维生素D2,D3的混合对照品溶液中加入维生素A,a,B,,占四种维生素E和维生素E醋酸酯的对照品,在上述色谱条件下分离,色谱图见图2.从图2中可以看出,维生素A,E,D2,D3都得到很好的分离,维生素A,E不干扰维生素D2,的测定.2.8精密度试验对同一份供试品溶液,连续进样测定6次,结果维生素D2,D3峰面积RSD分别为1.05%和1.17%.2.9重复性试验精密称取同一批供试品6份,按供试品溶液制备方法制备,依法测定,结果维生素平均含量0.1013mg/~,RSD为1.64%.维生素D3平均含量<0.0003mg/片.2.10稳定性试验对同一供试品溶液,在棕色瓶中和室温下放置Oh,lh,2h,4h,6h,8h,分别进样测定峰面积,结果维生素D2峰面积的RSD为2.08%(,z=6),维生素D3峰面积的RSD为2.26%(,z=6),表明供试品溶液在8h内有良好的稳定性.2.11加样回收率试验精密称取已测知含量的样品1g于10ml具塞刻度管中,分别精密加入维生素D2对照品适量,分高,中,低三种浓度加标,按"供试品溶液制备方法"项下操作,进样测定含量,计算加样回收率.每个浓度均平行试验6次.结果见表1.表1维生素D2加样回收率试验结果JournalofGuangxiTraditionalChineseMedicalUniversity2007,V ol.10No.2 mA【JmAUVWDIA.Wavelength265nm(VITD6213/H/ST3.D)占'200150loom^U扣田0246810l2A混合对照品VWDIA,Wavelength=265nm(VITD6213/IS-33D)l6min口F-.豢壁&八山.02468l0l2B供试品图1}玎Lc色谱图16min图2混合对照品加维生素A,EHPLC图谱2.12样品测定取3批样品,根据供试品溶液制备方法制备样品溶液,按2.4项色谱条件进样测定含量,每批平行测定3次,结果见表2.3讨论3.1色谱柱的选择实验中曾采用ZorbaxSBCl8柱(Stun,4.6mmX250mm)和Waterst~BondapakCl8柱(1Opm,4.6mm ×250ram)反相分离柱,不断改变流动相配比,但维生素D2 如加巧mO2007年第10卷第2期广西中医学院?61?和维生素D3分离度均小于1.2,不能达到基线分离.本文采用KromasilC18柱(m1,4.6mmx150mm)进行分离,维生素D2和维生素D3分离度均大于2.5,分离良好.表2样品测定结果(=3,mg/h")3.2色谱流动相的选择单独采用甲醇,出峰时间较长;单独采用乙腈,毒性和成本加大.通过改变甲醇和乙腈的比例,保留时间和分离度均随之改变.本文选用甲醇.乙腈(90:10),分离度等于2.0,保留时间合适,避免了杂质的干扰.3.3本方法能将维生素D2和维生素D3良好分离;方法简便,易于操作,出峰时间适宜,干扰小,色谱峰重现性好,结果准确.由于目前市售的药品和保健食品很多没有标明添加的是维生素D2还是维生素D3,往往给检测工作带来诸多不便.本方法可以同时测定片剂中的维生素和维生素,节约了时间成本,提高了工作效率.参考文献[1]周建烈,柳启沛.实用维生素矿物质补充剂手册[M].北京:中国轻工业出版社,2003.46~48.[2]蒋晔,刘红菊,郝晓花.4种脂溶性维生素的非水反相HPLC测定[J].中国医药工业杂志,2005,36(2):93～94.[3]张玫,刘新字.高效液相色谱法测定维多宝泡腾片中的维生素D3的含量[J].上海医药,1998,19(2):36～37.[4]张学农,周慧,苗爱东,等.正相高效液相法测定碳酸钙颗粒剂中微量维生素D3含量[J].新疆医科大学学报,2002,25(1):39～41.[5]周春兰,金锡然,韩宁.高效液相色谱法测定维生素D2糖丸的含量[J].黑龙江医药科学,2004,27(1):97.[6]历士旺,赵亚平,张亚锋,等.HPLC法测定钙一D颗粒剂中维生素D3的含量[J].西北药学杂志,2003,18(1):3--4.[7]彭清涛,谭生建,崔瑞芳,等.高效液相色谱法测定钙维康胶囊中维生素D3的含量[J].药物分析杂志,1998,18(6):395--396.[8]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社,2000.55.(编辑陈明伟)高效液相色谱法测定排石Ⅱ号颗粒剂中绿原酸的含量农英高.莫海玲,李以军.于灿华(广西壮族自治区民族医院,广西南宁530001)摘要:[目的]建立高效液相色谱法测定排石Ⅱ号颗粒剂中绿原酸的含量.[方法]色谱柱为ZorbaxC18柱(250mm×4.6mm,5tan),流动相为乙腈一0.5%磷酸溶液(11:89),检测波长为326nm,流速为1.0ml/min.[结果]绿原酸进样量在0.2064～2.064txg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r:0.9997),平均回收率为100.3%,RSD=0.66%(=6).[结论]本方法简便,灵敏,准确,重现性好,可用于该制剂的质量控制.关键词:绿原酸;排石II号颗粒剂;高效液相色谱法中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1008—7486(2007)02—0061—03我院自制制剂排石Ⅱ号颗粒剂来源于临床经验方,由广金钱草,石韦,海金沙,泽泻,赤芍等九味中药组成,对尿路结石,肾盂肾炎,胆囊炎等有很好的疗效.目前该制剂的质量标准尚元含量测定,为了控制该制剂的质量,保证临床用药效果,本文采用高效液相色谱法对方中君药石韦的主要有效成分绿原酸进行含量测定,结果满意,现报道如下.收稿日期:2007—03—20l仪器与试药1.1仪器美国Beckman公司高效液相色谱仪(125泵,166检测器);电子天平(BP_211D,sartorius,德国);德国Elma13-78224型超声仪.1.2试药绿原酸对照品(批号:110753.200212,供含量测定用,由中国药品生物制品检定所提供);排石Ⅱ号颗粒剂为广西民族医院研制品;乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯;。
用改进的高效液相色谱法测定维生素D_2与D_3
用改进的高效液相色谱法测定维生素D_2与D_3刘振秀;杨玉华;柳应华【期刊名称】《航天医学与医学工程》【年(卷),期】1992(5)2【摘要】本文叙述了用高效液相色谱[HPLC]测定强化食品中维生素D_2和D_3的方法,包括样品的皂化、抽提、浓缩、残渣、用甲醇溶解并用半制备色谱分离含有维生素D的部分,收集浓缩后再用ODS柱和预柱将维生素D再分为D_2和D_3。
我们将正相柱(硅胶柱)改为反相柱(ODS柱.4.6×250mm 5μm),并参照George,w等人的方法,在样品处理、流动相的比例方面做适当的改进,使分离效果明显改善,定量分析时,D_2和D_3的检测限度各为0.2个IU。
在已知的样品中加入标准D_2和D_3,测定其回收率,D_2平均为87.3%(范围80～104%),D_3平均为103.3%(范围92.2～109.6%),重复性的标准误差D_2和D_3分别为5.1%和6.4%。
【总页数】5页(P140-144)【关键词】高效液体色谱;食品分析;维生素D【作者】刘振秀;杨玉华;柳应华【作者单位】航天医学工程研究所【正文语种】中文【中图分类】TS201.24【相关文献】1.高效液相色谱法测定维生素AD_3微粒中的维生素D_3含量 [J], 边玉胜;茅功宇2.高效液相色谱法测定蚕蛹冻干粉中维生素B_2,D_3含量 [J], 庄向平;唐炜虹3.化妆品中维生素D_2、维生素D_3的高效液相色谱测定 [J], 朱英;杨艳伟;王歆4.高效液相色谱法同时测定强化牛奶中的维生素A和D_2 [J], 赵慧芬;李克杰;曹燕叔;郑建国5.高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D_2和维生素D_3的含量 [J], 梁晓艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
反相高效液相色谱法测定补钙保健品中的维生素D_3
流动相 甲醇 水 检测波长
流 室温 ∀
标准溶液的配制 用无水乙醇配 制
Ù 维生素
速 标准溶液
储于
ε 的冰箱中备用 ∀
实验结果
磨口具塞锥形 后 放入超声 波 清 氯仿洗滤 梨形瓶中 在旋 无水
样品处理 称取适量待测样品 置于 氯仿浸泡
线性关系及灵敏度 取浓度为
∗ Ù 的维生素
进行
瓶中 加入 洗器中振荡 渣再用 渣 ∗
回收率试验 称取不同批号的补钙宝各 份 分别加入已知量 标样 按本法提取维生素
∀ Λ
不必经过皂化 ∀我们分别采用无水乙醇 乙醚 氯仿 作萃取液 结果表明 对氯仿萃取后的样液进行色谱 分离时 分离效果最佳 ∀ 维生素 献 是一种与人体健康关系密切的重 要物质 ∀本法简化了以往的操作步骤 并将本法与文
讨论
有些补钙品中添加了奶粉 测定时蛋白质会 干扰分离 降低色谱柱寿命 因此在用无水乙醇定容 时 如发现沉淀必须先离心除去 才能进行分析 ∀ 提取后的样液中可能有些杂质同时被萃取 因此必须调节流动相中甲醇和水的比例 使维生素 在
∗
ห้องสมุดไป่ตู้样品编号
文献法
本法
之间出峰 否则会使测定结果偏高 ∀ 补钙品中的维生素 是添加的 测定时样品
Ξ
本文收稿日期
修回日期
期
吴红京等 反相高效液相色谱法测定补钙保健品中的维生素
进行样品预处理 结果列于表 ∀
表 两种预处理方法测定维生素 ∆ 含量的结果 Λ Ù
Ταβλ ε Ρ εσ υλ τσ οφ ϖιτα ιν ∆ ωιτη διφφερεντ ρε- τρεατ εντ ετηοδσ Λ Ù
液相色谱法测定保健食品维生素AD片中维生素A和维生素D3的含量探讨
液相色谱法测定保健食品维生素AD片中维生素A和维生素D3的含量探讨摘要：目的：应用反相高效液相色谱法分离和测定保健食品维生素AD片中维生素A和维生素D3的含量。
方法：该供试品经皂化提取和浓缩后，以甲醇定容至10mL，经0.45μm滤过后采用INERTSIL.ODS-SP为色谱柱，甲醇为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长分别为325和265nm。
结果：维生素A和维生素D3的线性范围分别为2.40～24.0μg/mL和0.8～4.0μg/mL，并与相应的峰面积呈线性关系，相关系数分别为r=0.9990和r =0.9990；测得维生素A和维生素D3的平均回收率分别为98.51%和98.34%。
结论：该法可快速、灵敏、准确测定维生素A和维生素D3含量，并应用于日常样品维生素AD片的分析。
关键词：反相高效液相法；维生素A；维生素D3引言;维生素A和维生素D3是机体维持正常代谢和机能必需的脂溶性维生素，严重缺乏可致夜盲症、佝偻病等。
脂溶性维生素于体内自身合成较难，即便能合成且供应量也不足，需从食物或其他途径中摄取，但该物质又易蓄积于体内造成过量中毒[1]，故此，对物质应严格控制并定量检测。
目前，液相色谱仪法对脂溶性维生素的测定已被广泛的应用。
但在实验中发现其维生素A和维生素D3测定的方法过于繁琐、时间长和效率较慢。
因此，为了能快速、准确地测定保健食品中的维生素A和维生素D3含量，本文建立其分析方法，并应用于日常样品维生素AD 片的分析。
1 仪器与试剂高效液相色谱仪（日本岛津公司,配备LC-10ATVP型二元溶剂输送泵、SPD-10AVP型紫外-可见检测器、CTO-10ASVP型柱温箱、7725i型手动进样器和2010色谱工作站）、紫外分光光度计（型号TU-1810PC型）、全机械加码分析天平（TG328AS）和电子恒温水浴锅(型号HH·S12·Gr4Ⅱ) 。
维生素A标准品（中国食品药品检定研究院提供，批号100368-201502），标准贮备液（300μg/mL）的制备：精密称取维生素A标准品15mg，加甲醇溶解并定容至50mL棕色量瓶，摇匀，备用。
浅谈高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量
浅谈高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生
素D3的含量
张良;毕翠芳;杜昕;王会强
【期刊名称】《医学信息》
【年(卷),期】2010(023)014
【摘要】目的用高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量。
方法采用Kromasil C18反相色谱分离柱,流动相为甲醇-乙腈（90：10）,检测波长为270nm,流速为0.75ml/min,并且加入维生素A和维生素E进行干扰试验。
结果维生素D2、D3在0.8～98mg/L浓度范围内线性关系良好,维生素A和维生素E不干扰测定。
结论本方法对于测定片剂中的维生素D2和维生素D3具有简单,易于操作,分离效果好,结果准确的优点,适宜推广使用。
【总页数】2页(P2344-2345)
【作者】张良;毕翠芳;杜昕;王会强
【作者单位】山东达因海洋生物制药股份有限公司,山东荣成264300
【正文语种】中文
【中图分类】R286.0
【相关文献】
1.HPLC法测定维生素D2果糖酸钙注射液中维生素D2含量测定 [J], 刘丹;赵慎非
2.反相高效液相色谱法测定维D2磷酸氢钙片中维生素D2含量 [J], 冯国
3.高效液相色谱法测定碳酸钙D3咀嚼片中维生素D3的含量 [J], 邢俊波;姜春来;靳守东;曹红;陈玉敏;水彩红;单婷婷;胡丹
4.浅谈高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量 [J], 张良; 毕翠芳; 杜昕; 王会强
5.高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D_2和维生素D_3的含量 [J], 梁晓艳
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种快速测定维生素D3含量的色谱方法[发明专利]
![一种快速测定维生素D3含量的色谱方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/9310cd3a49649b6649d7477a.png)
专利名称：一种快速测定维生素D3含量的色谱方法专利类型：发明专利
发明人：包亚君,徐小明,孙青,张沛霞
申请号：CN201410823882.1
申请日：20141226
公开号：CN104502501A
公开日：
20150408
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种快速测定维生素D3含量的色谱方法，运用高效液相色谱法(HPLC) 测定维生素D3含量的方法，通过对色谱条件的巧妙优化，最终达到快速而准确地对复杂组分样品中维生素D3含量的测定。
该色谱方法包括以下步骤: （1）对照品溶液的制备；（2）样品处理；（3）液相色谱条件：色谱柱：硅胶柱，50×4.6mm，2.7μm；流速：2ml/min；流动相：将异丙醇与正己烷按照异丙醇：正己烷=0.5：99.5的体积比混合均匀；检测波长：264nm；进样量：75μl。
该色谱方法能够简便、快速、准确的测定维生素D3含量，缩短分析时间，减少溶剂使用量，降低分析成本。
申请人：江苏艾兰得营养品有限公司
地址：214500 江苏省泰州市靖江市江山路20号
国籍：CN
代理机构：靖江市靖泰专利事务所
代理人：陆平
更多信息请下载全文后查看。
高效液相色谱法测定制剂中维生素D3粉的含量
高效液相色谱法测定制剂中维生素D3粉的含量摘要用高效液相色谱法测定VD3粉中VD3的含量。
采用菲罗门氨基键合硅胶柱（250mm×4.6mm，5μm），以正己烷-异丙醇（99：1）为流动相，流速为1.5ml/min，检测波长为265nm，柱温为25℃。
在此色谱条件下，维生素D3浓度在18.86μg/ml时进样量在10μl～100μl范围内呈良好的线性关系，r=1.0000，平均回收率为99.46%，RSD（n=6）为0.90%。
结论：本方法操作简便易行，系统使用性良好，适用于VD3粉中VD3的含量测定。
关键词：维生素D3粉；维生素D3；复方制剂；高效液相色谱法维生素D3（胆钙化醇；英文名：Vitamin D3）是一种脂溶性维生素，被看作是一种作用于钙、磷代谢的激素前体，帮助肠道内钙和磷的吸收，促进骨钙沉积，增加肾脏对钙、磷的重吸收，提高血钙、磷的浓度，有利于骨的矿化作用。
上市的补钙和补维生素的复方制剂中大多都含有VD3，由于VD3在复方制剂中含量极低，对光、热不稳定，在空气中易氧化和光解成前维生素D3、反式维生素D3、光甾醇和速甾醇等多种产物，在品种开发时多选取制成包合物的VD3粉为原料，以便提高产品的稳定性。
DSM生产的VD3粉加入维生素E、大豆油、明胶制成包合物的形式提高了稳定性。
但包合物的形式造成测定时VD3提取难度增大，有文献报到采用皂化后提取测定，此方法操作繁琐，而且提取中有损失影响结果。
另有采用稀释剂（DMSO-水10：2，0.2%BHT）溶解后，正己烷提取浓缩的方法，以达到液相测定浓度的要求，此方法操作时间长，提取浓缩过程中人为误差较大。
维生素D3粉进口注册标准JX2008006[7]中提取采用的是回流、萃取、旋蒸、充氮、溶解等方法，操作时间长、操作步骤繁琐，误差大。
本文参考相关文献[1] [2] [3] [8]并经验证，证明采用方法准确可靠，且操作简便、快速。
1仪器与试药高效液相色谱仪（赛默飞U3000、岛津SPD-M20A）；分析天平（奥豪斯AUW120D）；VD3对照品（批号：100061-201208，含量：99.8%，中国食品药品检定研究院）；VD3粉（10万单位/g，瑞士DSM Nutritional Products Ltd）；正己烷、异丙醇和甲醇为色谱纯；二甲基亚砜、二氯甲烷为分析纯。
高效液相色谱法测定维生素AD_3微粒中的维生素D_3含量
高效液相色谱法测定维生素AD_3微粒中的维生素D_3含量边玉胜;茅功宇
【期刊名称】《化学世界》
【年(卷),期】1990(31)6
【摘要】维生素AD_3微粒是以维生素A(V_A)和维生素D_3(V_(D))为原料,配以一定量丁基化羟基甲苯(BHT)作稳定剂,采用明胶和淀粉等辅料,用喷雾法制备成的微粒。
本品为维生素类药物,有促进兽禽发育、繁殖、催肥,防治佝偻病、骨软化症等。
【总页数】4页(P269-272)
【关键词】维生素AD3;维生素D3;高效液相色谱
【作者】边玉胜;茅功宇
【作者单位】上海第六制药厂
【正文语种】中文
【中图分类】TQ466.4
【相关文献】
1.高效液相色谱法同时测定保健食品中泛酸、烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量 [J], 陈彩云;魏鲜娥;蔡伟江;黎小兰;张喜金
2.高效液相色谱法测定饲料添加剂维生素D3微粒含量 [J], 施杏芬;吕军伟;应永飞;陆春波
3.高效液相色谱法测定蚕蛹冻干粉中维生素B_2,D_3含量 [J], 庄向平;唐炜虹
4.高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D_2和维生素D_3的含量 [J], 梁晓艳
5.高效液相色谱法测定预混剂中维生素D_3方法 [J], 李兰生
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
反相高效液相色谱法测定维生素D2和维生素D3
反相高效液相色谱法测定维生素D2和维生素D3许强;刘金生;王轶鹏;张志涛;孙晓萌【摘要】提出了用反相高效液相色谱法（RP—HPLC）分离和测定胶囊、油状试剂中维生素D2及维生素D3的含量。
样品用甲醇超声提取，提取液用甲醇定容至100mL，经0．45μm滤膜过滤后供HPLC分析。
采用Zorbax SB-C18反相色谱柱及C18保护柱作为分离柱，乙腈作为流动相，流量为1．0mL·min^-1，在波长265nm处作紫外检测，进样量为20μL。
维生素D2和维生素D3的质量浓度在0．50-20mg·L^-1范围内与相应的峰面积呈线性关系，测得检出限（3S／N）依次为0．030，0．026mg·L^-1。
此方法应用于实样分析并在此基础用标准加入法做回收试验，同时进行精密度试验，测得回收率在95．0％～99．4％之间，测定值的相对标准偏差（n=6）在1．2％～2．6％之间。
%Vitamin D2 and D3 either in capsules or in oil preparations were determined by RP-HPLC. The sample was extracted ultrasonically with methanol. The extract was diluted to 100 mL with rnethanol, which was used for HPLC analysis after filtering on 0. 45 μm filtering membrane. The reverse phase chromatographic column Zorbax SB-C18 and the protective column C18 were used for separation with pure acetonitrile as mobile phase （flow rate 1.0mL·min^-1 ）. UV detection at the wavelength of 265 nm was adopted in the deternaination. Volume of sample solution taken for introduction was 20 μL. Linear relationships between values of peak area and mass concentration of both Vitamin D2 and D3 were found in the same range of0.50-20mg·L^-1. Detection limit （3S/ N）of 0. 030 mg·L^-1. was foundf or Vitamin D2 and 0. 026 mg·L^-1. for Vitamin D3. This method was usedin analysis of substancial samples and using these samples as matrixes, tests for recovery were made by standard addition method, values of recovery were found in the range of 95.0%～99.4%, with values of RSD＇s （n=6） in the range of 1.2 %- 2.6 %.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2011(047)010【总页数】3页(P1168-1169,1172)【关键词】反相高效液相色谱法;维生素D2;维生素D3【作者】许强;刘金生;王轶鹏;张志涛;孙晓萌【作者单位】山东省医学科学院基础医学研究所,济南250062;山东省医学科学院基础医学研究所,济南250062;山东省医学科学院基础医学研究所,济南250062;山东省医学科学院基础医学研究所,济南250062;山东省医学科学院基础医学研究所,济南250062【正文语种】中文【中图分类】O652.63维生素D是一种脂溶性维生素，主要作用是调节人体内钙和磷的代谢，促进其吸收利用，促进骨骼成长，目前已知的维生素D至少有10种，但最重要的是维生素D2和维生素D3［1］。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高效液相色谱法测定多种维生素多种矿物质片中的维生素D3含量韦月早1杨世联2黄艳芳2韦艳妮2（1.广西壮族自治区产品质量检验研究院，广西南宁530007；2.南宁富莱欣生物科技有限公司，广西南宁530007）【摘要】建立高效液相色谱法快速测定多种维生素多种矿物质片中维生素D3的含量，并采用加标回收率试验进行方法确认。
样品在0.2%的氨水中用碱性蛋白酶破坏维生素D3的包埋物质，用乙醇浸提，正己烷萃取游离出维生素D3。
供试品溶液用正相液相色谱法净化，反相液相色谱法分离。
维生素D3在0.0498μg/mL～0.9963μg/mL浓度范围内线性关系良好（r＝0.9999），平均加标回收率为97.78％，RSD为3.26％，精密度和稳定性良好，RSD分别为2.69％和1.58％。
该方法准确、快速，可作为多种维生素多种矿物质片中维生素D3含量的测定方法。
【关键词】高效液相色谱法；多种维生素多种矿物质片；维生素D3【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】1008-1151(2019)06-0040-03 Determination of Vitamin D3 in Multiple Vitamins and Minerals Tabletby High Performance Liquid ChromatographyAbstract: A rapid method for the determination of vitamin D3 in multiple vitamins and minerals tablet by high performance liquid chromatography was established. The method was confirmed by standard-added recovery test. In 0.2% ammonia water, the encapsulated substance of vitamin D3 was destroyed by alkaline protease. Vitamin D3 was extracted by ethanol and n-hexane. The sample solution was purified by normal phase liquid chromatography and separated by reversed phase liquid chromatography. The linear relationship of vitamin D3 was good in the concentration range of 0.0498μg/mL to 0.9963μg/mL (r＝0.9999). The average recovery of standard addition was 97.78%, RSD was 3.26%. The precision and stability of vitamin D3 were good, RSD were 2.69% and 1.58%, respectively. The method is accurate and rapid, and can be used for the determination of vitamin D3 in multiple vitamins and minerals tablet.Key words: high performance liquid chromatography; multiple vitamins and minerals tablet; vitamin D31 引言维生素D是一种脂溶性维生素和激素前体，具抗佝偻病和软骨病作用。
阳光照射皮肤和膳食是人体维生素D的主要来源，又以前者为主。
它有五种化合物，其中维生素D2（麦角钙化醇）和维生素D3（胆钙化醇）对健康有着密切的关系。
然而，现代生活方式使人们接触阳光的机会越来越少，一般膳食中维生素D含量又不高，人们需要依靠含有维生素D的营养补充剂来满足对维生素D的需要[1,2]。
含有维生素D3的保健食品越来越多，有粉剂、片剂、胶囊剂。
目前，维生素D3含量测定方法最常用的是高效液相色谱法，样品的前处理制备是测定维生素D3的关键步骤。
有的需要先水浴回流皂化，再用分液漏斗多次洗涤萃取分离[3-5]，操作繁琐，容易损失，重现性差，分析成本高；有的需要二甲基亚砜-水溶液提取，正己烷多次萃取[6-8]，试剂毒性大，危害人体健康，操作复杂、又耗时；针对组分单一的软胶囊，可以用单纯的甲醇溶剂超声溶解提取[9]。
因此建立一种简单快捷、针对性的前处理方法对维生素D3含量测定是很有必要的。
多种维生素多种矿物质片是以维生素和矿物质等为主要原料制成的保健食品，本文在碱性条件下，采用碱性蛋白酶酶解样品20min，无水乙醇浸提5min，再用正己烷等比例萃取5min，即可将维生素D3与其中的矿物质和维生素等干扰组分分离。
该方法样品制备前处理简单，成本低，易于操作，适合大批量样品的测定。
2 实验仪器与材料2.1实验仪器Waters e2695型高效液相色谱仪，配有UV检测器（美国waters公司）；KQ5200DV型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HMS-350型漩涡混合器（天津市恒奥科技发展有限公司），80-4型电动离心机（金坛市医疗仪器厂）；梅特勒-托利多AUY220电子天平（瑞士梅特勒—托利多公司）；总第21卷238期大众科技Vol.21 No.6 2019年6月Popular Science & Technology June 2019【收稿日期】2019-04-09【作者简介】韦月早（1984－），供职于广西壮族自治区产品质量检验研究院，从事环境检测工作。
- 40 -Evolution 201紫外可见分光光度计（美国Thermo公司）。
2.2实验试剂与样品甲醇、无水乙醇（德国merck公司，色谱纯），正己烷、环己烷（天津科密欧化学试剂有限公司，色谱纯），氨水，无水乙醇（广东光华科技股份有限公司，分析纯），水解蛋白酶Alcalase （诺维信（中国）生物技术有限公司），维生素D3标准品（德国DR公司，批号：100656 CAS：67-97-0），氮气（99.999%），氮吹仪（天津市恒奥科技发展有限公司，HSC-17-12B），多种维生素多种矿物质片（批次：0301、0302、0303、0304、0305、0306，标示量为1.5μg/片，1000mg/片，美国HPSON公司）。
3 实验部分3.1色谱条件3.1.1半制备正相液相色谱条件色谱柱为Si60Inertsil SIL-100A（5μm 4.6×250mm）；流动相为正己烷＋环己烷＝1＋1，再按体积比加0.8%异丙醇；检测波长为264nm；流速为1.0mL/min；柱温35℃±1℃；进样量为200μL，理论板数按VD3计不低于5000，此条件下VD3与其他成分分离度不低于1.5。
3.1.2反相液相色谱条件色谱柱为C18wondasil TM C18（4.6×250mm，5μm）；流动相为甲醇；检测波长为264nm；流速为1.0mL/min；柱温35℃±1℃；进样量为100μL。
3.2维生素D3标准溶液的配制3.2.1维生素D3标准储备溶液准确称量维生素D3标准品10.0mg，用色谱纯无水乙醇溶解并转移定容至100mL棕色容量瓶，其浓度约为100μg/mL。
3.2.2维生素D3标准中间液精密量取10mL，置于100mL棕色容量瓶中，加色谱纯无水乙醇稀释至刻度，混匀，浓度约为10μg/mL。
临用前，用紫外分光光度法校正其浓度[4]，以无水乙醇为空白参比，用1cm石英比色皿，在264nm处测定吸光度A（A平均值为0.4603），按公式（1）计算其中）。
（1）3.2.3维生素D3标准使用液分别准确吸取维生素D3标准中间使用液0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、10.00mL于100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀。
此标准系列工作液浓度分别约为0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.60μg/mL、1.00μg/mL，准确浓度按校正后的浓度折算。
3.3分析测定步骤3.3.1浓缩与净化分别取每批本品20粒，研磨均匀后，取2.0g（精确至0.0001g）置于25mL容量瓶中，加300mg碱性蛋白酶，5mL0.02%氨水，于65℃水浴超声提取20min，取出冷却后再加15mL无水乙醇室温超声5min，冷却后，加无水乙醇定容至25mL，精密吸取10mL上清液于预先加有10.00mL正己烷、5mL水的50mL棕色容量瓶中，震荡，充分混匀后取部分溶液离心5min，取上层5.00mL，于40℃±2℃水浴氮气吹干，用正己烷定容至1mL（浓缩了5倍），经0.45μm微孔滤膜过滤供半制备正相高效色谱系统半制备，净化待测液。
3.3.2半制备正相高效液相色谱系统适用性试验取约1.00mL维生素D3标准中间使用液于10mL具塞试管中,在40℃±2℃的氮吹仪上吹干。
残渣用10mL正己烷振荡溶解。
取该溶液100μL注入液相色谱仪中测定，确定维生素D3保留时间。
然后将200μL待测液注入液相色谱仪中，根据维生素D3标准溶液保留时间收集维生素D3馏分于试管中。
将试管置于40℃±2℃水浴氮气吹干，取出，准确加入1.0mL 甲醇（稀释了5倍），残渣振荡溶解，即为维生素D3测定液。
3.4上机测定分别将维生素D3标准系列工作液和样品测定液100μL注入反相液相色谱仪中，得到维生素D3的峰面积。
以峰面积为纵坐标，维生素D3工作液浓度为横坐标绘制标准曲线，以外标法计算供试品的维生素D3含量。
对照液和供试液的色谱图如图1和图2所示。
图1对照液色谱图图2供试液色谱图4 实验结果4.1线性关系考察、检出限及定量线分别将各标准系列浓度100μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积，以维生素D3的质量浓度（μg/mL）- 41 -- 42 -对峰面积进行线性回归，得线性方程为：y ＝313143x-2002.8，线性相关系数R 为0.9999，结果表明，在0.0498μg/mL ～0.9963μg/mL 浓度范围内具有良好的线性关系。
将标准溶液逐级稀释后，以约3倍信噪比对应的浓度为检测限，10倍信噪比对应的浓度为定量限，维生素D 3的检测限和定量限分别为0.0199μg/L 和0.0996μg/L 。