对罗汉果中多糖活性成分的分离提取及纯化研究

广西轻工业ＧＵＡＮＧＸＩＪＯＵＲＮＡＬＯＦＬＩＧＨＴＩＮＤＵＳＴＲＹ２００７年７月第７期（总第１０４期）食品与生物【作者简介】黄飞（１９７５－），男，应用化学工程师，南宁新技术创业者中心主任科员，从事生物工程及制药行业管理工作。

【摘要】多糖是生物体内重要的大分子物质，是所有有生命的有机体中必不可少的成分，具有特殊活性。

通过对罗汉果中的多糖活性成分进行提取分离，并对其功能特性进行研究。

【关键词】多糖；罗汉果；提取；分离【中图分类号】０６５８【文献标识码】Ａ【文章编号】１００３－２６７３（２００７）０７－００１０－０２中药罗汉果（Ｓｉｒａｉｔｉａｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）是葫芦科罗汉果属植物（Ｓｉｒａｉｔｉａｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ（Ｓｗｉｎｇｌｅ）ＣＪｅｆｆｅｒｙ）的成熟果实，是我区特产，主要产于永福、临桂、龙胜等县。

性凉味甘，原先主要用于“治痨咳”，清热解渴，润肺止咳等用途。

进入２０世纪７０年代以后，人们对它研究后发现它的药用价值更广，并可用于饮料和食品，用于治喉痛、慢性支气管炎、慢性咽喉炎、咽喉失音、哮喘、百日咳、高血压、便秘、口干舌燥等。

日本人还发现它能补血，促进肠胃功能。

由于它的甜味成分（罗汉果甙）有别于蔗糖，故可做糖尿病人、高血压病人、龋齿患者的补助药物，还可作为饮料［１￣４］。

市售入药的罗汉果是经烤制的干果，其中含有的三萜皂甙和蛋白质氨基酸等成分早有报道，但相关的多糖活性成分还未见报道。

本文通过对罗汉果中多糖成分的提取研究，更深入地研究罗汉果的性质，提高其利用价值。

同时也更进一步的熟悉、掌握及研究多糖的相关研究方法。

１罗汉果多糖的提取１．１材料与方法１．１．１材料１．１．１．１仪器真空抽提仪器一套，电子继电器，贝克曼温度计，水银温度计，上海产电热恒温水浴锅，ＳＨＢ－ＩＩＩ型循环水式真空泵，上海ＲＥ－５２旋转蒸发仪，美国ＢＥＣＫＭＥＮＪ２－２１型冷冻超速离心机，国产ＬＸＪ－ＩＩ型离心沉淀机，组织捣碎机，索氏抽提器（又称为脂肪抽提器），重庆ＣＳ１０１型电热鼓风干燥机，１０００ｍＬ容量瓶，摇床，离心机，分液漏斗，７５６ＭＣ紫外分光计，磁力搅拌器，美国ＬＡＢＣＯＮＣＯ冻干机，美国ＲＥＶＣＤＳＣＩＥＮ－ＴＩＦＩＣ．ＩＮＣ超低温冰箱。

１．１．１．２化学试剂所有化学试剂均为分析纯或色谱纯试剂。

１．１．１．３标准液及其配比０．１ｇ蒽酮与５０ｍＬ浓硫酸混合成的蒽酮－硫酸液，０．１ｇ／Ｌ葡萄糖液。

１．１．１．４其它材料范围为３０００￣７０００分子量的透析袋、透析袋夹。

１．１．２实验方法这里，罗汉果粗品多糖的提取由以下流程图来表示：预处理→溶剂提取→初步纯化（去除杂质→初步提纯）→粗品多糖下面就介绍各个步骤的具体内容：１．１．２．１预处理首先，用组织捣碎机将罗汉果原料粉碎，用索氏抽提器、甲醇回流将原料中的脂质抽提出来。

抽提结束后，将纸杯中已脱脂的原料晾干或烘干。

１．１．２．２溶剂提取具体操作如下：将晾干或烘干后的罗汉果原料样放入真空抽提器中，通过控温抽提装置进行水提取，共三次。

然后取上清液，去掉残渣备用。

再将上清液通过减压浓缩至三到四倍，此时，可用三倍量的无水乙醇加入浓缩后的上清液中，沉淀完全，之后，将上清液去掉，此时所得的沉淀再进一步干燥即为粗品罗汉果多糖。

１．１．２．３去除杂质（１）Ｓｅｖｅｇｅ法除蛋白将罗汉果粗品多糖溶于一定体积的水溶液，随后加入相当于该水溶液１／４体积的氯仿，再加入相当于氯仿的１／４体积的正丁醇，将混合物剧烈振荡，离心，通过分液漏斗除去水层和溶剂层之间的变性蛋白质。

（２）透析除去小分子物质将去掉蛋白后的多糖溶液放入透析袋中，置自来水中平衡，再放入大烧杯中，用磁力搅拌器搅拌杯中水，再换入纯净的去离子水继续搅拌８ｈ，之后加入３倍量的无水乙醇沉淀，再依次加入乙醚、甲醇洗涤沉淀，将沉淀冻干则得到粗品多糖样ＫＬ。

１．２结果与分析１．２．１罗汉果粗品多糖（ＫＬ）的得率及性质１．２．１．１得率经称量及计算，罗汉果粗品多糖ＫＬ的得率为：３．０２％。

１．２．１．２性质这里，我们讨论的主要为理化性质：（１）物理性质罗汉果多糖粗品（ＫＬ）：为黄褐色固形物。

在冷水中膨胀，热水中可溶，水溶液有较高的粘性。

（２）化学性质在粗品溶液中加入Ｉ－ＫＩ，反应为阴性；对菲林试剂的反应也为阴性；这表明该多糖不含淀粉和游离的葡萄糖；双缩脲反应呈阴性也表明无蛋白质存在；将少量样液滴于滤纸上，用甲苯胺兰染色，呈兰色色斑，表对罗汉果中多糖活性成分的分离提取及纯化研究黄飞１，梁智群２（１．南宁新技术创业者中心，广西南宁５３０００７；２．广西大学，广西南宁５３００２３）１０（上接第１８页）第六、设备按生产能力配套制造，缓冲能力好，适应生产波动。

第七、减轻沉淀池负担，既能提高糖厂生产能力（约２０％），又可以保障沉淀池的澄清效能。

第八、澄清效果明显，色值、混浊度和残硫量等指标明显降低，简纯度平均可以提高０．５个百分点以上，对提高产糖率和产品质量有良好的促进作用。

第九、除泡沫、浮渣和沉淀物返回吸滤机外，基本没有滤汁回流真空吸滤机，对吸滤质量和负担有促进作用。

第十、劳动强度低。

只需制控滤汁来量均衡，不需高强度的人力劳动，而且有利于糖厂开展自动控制，提高操作稳定性和精确度。

!!!!!!!!!!!!!!!!"!!!!!!!!!!!"!!!!!!!!!!!!!!!!"!!!!!!!!!!!"更正《广西轻工业》２００７年第４期《分销渠道的冲突与管理》一文作者简介应为：吴朝辉（１９７３－），男，湖北广水人，湖北财经高等专科学校经管系讲师，研究方向：企业管理、市场营销。

特此更正《广西轻工业》编辑部明其粘度较高，且属于多糖范畴。

粗品多糖的糖含量：用蒽酮－硫酸法测定得罗汉果多糖粗品ＫＬ的糖含量为：８５％。

蛋白含量：以凯氏定氮法为测定基准，测得我们制得的罗汉果粗品未除蛋白前的蛋白含量为：３．２５４％，除蛋白的次数为７次。

除完蛋白后蛋白含量为０。

２罗汉果多糖的分级纯化２．１材料与方法我们采用过离子交换柱和凝胶柱的方法来纯化多糖ＫＬ。

采用的离子交换柱为ＣＭ－纤维素柱，凝胶柱则为ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱。

先过离子柱洗脱再过凝胶柱洗脱。

２．１．１材料２．１．１．１仪器玻璃柱（规格为Ф２×３０ｃｍ），玻璃柱（规格为Ф２×１００ｃｍ），ＬＣ－１０ＡＴＳＨＩＭＡＤＺＵ液相泵２台（一作主泵Ａ，一作副泵Ｂ），ＢＳＺ－１００自动分布收集仪，收集管，７５６ＭＣ紫外分光计。

２．１．１．２试剂５ｍＭ的ＮａＡｃ溶液（ＰＨ＝４．５，０．４ｇ／Ｌ），１Ｎ的ＮａＣＬ（溶于５ｍＭ的ＮａＡＣ溶液中），０．１ＮＮａＣＬ溶液，水为经过脱气过滤处理的去离子水。

０．１ｇ蒽酮与５０ｍＬ浓硫酸混合成的蒽酮－硫酸液，均为分析纯。

２．１．１．３其它材料ＣＭ－纤维素填料；ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶填料。

两者均为进口。

２．１．２实验方法２．１．２．１过ＣＭ－纤维素离子交换柱先将ＣＭ－纤维素填料装入玻璃柱中，以５ｍＭ的ＮａＡｃ洗脱液将两个液相泵（Ａ泵和Ｂ泵）与柱联接成一真空系统，以０．５ｍＬ／ｍｉｎ的流速平衡一天，之后即可上样，采用梯度洗脱，母液为５ｍＭ的ＮａＡＣ溶液，梯度液为１Ｎ的ＮａＣＬ溶液（从０．２￣０．８Ｎ），ＫＬ上样量为５ｍＬ（浓度０．１ｇ／ｍＬ），流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ，隔１５ｍｉｎ收集一管，从第２０管开始进行梯度洗脱。

用蒽酮－硫酸法监测［以管号为横坐标，６２０ｎｍ处紫外吸收值（ＯＤ值）为纵坐标作图］。

分别按相关峰位收集并冻干。

之后取主要产物ＫＬ２过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱进行进一步的分离。

２．１．２．２过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶柱将ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶填料装柱，再通过０．１ＮＮａＣＬ洗脱液把Ａ泵与柱连接起来，以０．３ｍＬ／ｍｉｎ流速平衡一天，之后即可上样，上样量为５ｍＬ（浓度０．１ｇ／ｍＬ），用０．１ＮＮａＣＬ缓冲溶液以０．３ｍＬ／ｍｉｎ流速洗脱，隔１５ｍｉｎ收集一管。

以蒽酮－硫酸法监测，分别按相关峰位收集并冻干。

２．２结果与分析２．２．１过ＣＭ－纤维素离子交换柱洗脱结果罗汉果粗品ＫＬ经过ＣＭ－纤维素柱梯度洗脱，分别按相关峰位收集并冻干之后，分成四个组分：ＫＬ１、ＫＬ２、ＫＬ３、ＫＬ４（如图１所示）。

其中，ＫＬ１占２６％，ＫＬ２占４５％，ＫＬ３占１８％，ＫＬ４占１１％，均为白色絮状物。

这里，ＫＬ２是主要组分。

２．２．２过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶柱洗脱结果ＫＬ２经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱洗脱，分别按相关峰位收集冻干之后，分成两个组分ＫＬ２′、ＫＬ２″。

ＫＬ２′占６８％，ＫＬ２″占３２％（如图２所示）。

这里，ＫＬ２′是主要产物。

参考文献［１］张松．多糖类医药生物活性研究进展［Ｍ］．中国生化药物杂志，１９９６，１７（６）：２７２～２７４．［２］黄家德．罗汉果的开发应用［Ｊ］．广西植物，１９９６，１６（２）：１９５～１９６．［３］陈迪华．天然甜味剂罗汉果的研究与应用［Ｊ］．天然产物研究与开发，１９９２，４（１）：７２～７６．［４］斯建勇．鲜罗汉果中的黄铜甙的分离及结构测定［Ｊ］．药学学报，１９９４，２９（２）：１５８～１６０．１１。