提取多糖-地黄炮制前后粗多糖的提取和总糖含量测定
熟地黄多糖含量测定方法研究
熟地黄多糖含量测定方法研究吴诗云;钟益宁;张焱;柳欢;杨丽声;梁礼群【摘要】[目的]建立熟地黄中多糖含量的测定方法.[方法]利用苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法、3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)分别测定熟地黄中的多糖含量,对检测结果进行比较.[结果]苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法、DNS法的平均回收率分别为100.5％、99.8％、100.6％,RSD分别为1.6％、1.6％、1.5％,测得的多糖质量分数分别为14.80、14.66、17.46 mg/g.[结论]苯酚硫酸法的结果更可靠,且操作相对简单易行,可考虑作为熟地黄多糖含量测定的首选方法.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(000)035【总页数】4页(P154-156,161)【关键词】熟地黄;多糖;含量测定;苯酚硫酸法;蒽酮硫酸法;3,5-二硝基水杨酸法【作者】吴诗云;钟益宁;张焱;柳欢;杨丽声;梁礼群【作者单位】广西中医药大学,广西南宁530299;广西中医药大学,广西南宁530299;广西中医药大学,广西南宁530299;广西中医药大学,广西南宁530299;广西中医药大学,广西南宁530299;广西中医药大学,广西南宁530299【正文语种】中文【中图分类】S567.23+9熟地黄为玄参科植物地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)的新鲜或干燥块根经酒炖或蒸法加工炮制而成的[1]。
熟地黄多糖是熟地黄的有效成分之一，具有增强机体造血、提高免疫力以及抗氧化等作用[2-6]。
当前研究对多糖的测定方法主要是以葡萄糖为对照品的比色法，其中包括苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法、3，5-二硝基水杨酸法(DNS法)。
苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法是利用多糖在浓硫酸的作用下生成糠醛或羟甲基糠醛，然后与显色剂反应在特定的波长处有最大吸收。
而3，5-二硝基水杨酸法是3，5-二硝基水杨酸在中性或偏碱性的条件下与还原糖反应生成棕红色的氨基化合物，然后分别通过测定总糖和单糖的质量分数来计算多糖的含量。
蒽酮-硫酸法测定生地黄提取物中总糖的含量
蒽酮-硫酸法测定生地黄提取物中总糖的含量
丁礼琴;刘力;徐德生
【期刊名称】《上海医药》
【年(卷),期】2008(29)8
【摘要】目的:建立生地黄提取物中总糖的含量测定方法.方法:以葡萄糖为对照品
采用蒽酮-硫酸法于625nm处测定总糖含量.结果:葡萄糖对照品溶液在0.005～
0.05 mg/mL范围内呈良好的线性关系,线性回归方程为A=15.362C+0.000
07,r=0.999 8,平均加样回收率为102.4%,RSD为2.6%.结论:本法操作简便、快速、重现性良好,可用于生地黄提取物中总糖的测定.
【总页数】3页(P368-370)
【作者】丁礼琴;刘力;徐德生
【作者单位】上海中医药大学附属曙光医院,上海,200021;上海中医药大学附属曙
光医院,上海,200021;上海中医药大学附属曙光医院,上海,200021
【正文语种】中文
【中图分类】R917
【相关文献】
1.蒽酮-硫酸法测定出芽短梗霉发酵液残糖和总糖含量的研究 [J], 邓长江;李长清;
朱希强;郭学平
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朱希强;郭学平
3.硫酸蒽酮法测定注射用双黄连（冻干）中总糖的含量 [J], 陈秋竹
4.蒽酮-硫酸比色法测定三叶虫茶中总糖的含量 [J], 汤灿辉;彭新君;文礼章;江星明
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佛手粗多糖的提取及总糖的含量测定
佛手粗多糖的提取及总糖的含量测定【摘要】本文采用水提醇沉法从佛手中提取粗多糖，硫酸-苯酚法测定佛手粗多糖中总糖的含量，结果表明佛手中粗多糖回收率为28．33%，总糖的含量为95．21%，平均回收率为100%，RSD=1．30。
【Abstract】The content of total polysaccharide in the coarse polysaccharide extraction from foshou was determined with phenol-sulfuric acid method.The results showed that the coarse polysaccharide extraction was 28．33%and the content of total polysaccharide was 95．21%.The average recovery was 100．11%.RSD=1．30.【Key words】Foshou;Polysaccharide;Phenol-sulfuric acid method;Content determination佛手为芸香科植物佛手的干燥果实，具有舒肝理气、和胃止痛的功效[1]。
其中含有多种化学成分，近年来的药理实验研究表明，佛手糖能提高机体免疫力[2]，但佛手粗多糖中总多糖的含量尚未见报道，本文仅对水提醇沉法所得佛手粗多糖中总糖进行含量测定。
1 仪器与药品1．1 仪器TU1901双光束紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器责任有限公司)。
1．2 材料佛手购自长春市药材公司。
1．3 试剂葡萄糖标准品(上海试剂三厂)，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果2．1 佛手粗多糖的提取取佛手药材用90%乙醇浸泡后渗漉，然后将剩余药渣用水煎煮3次，过滤，合并3次滤液，浓缩至浸膏状，加乙醇放置过夜，抽滤，将沉淀分别用95%乙醇、丙酮和乙醚洗涤，即得佛手粗多糖，产出率约为28．33%。
植物多糖的提取和分析方法
植物多糖的提取和分析方法鲁瑞娟【摘要】多糖是由很多单糖分子通过糖苷链相连而形成的天然高分子化合物,多糖结构复杂,种类繁多,并且常与脂质和蛋白质结合成多糖复合物,提取和分析困难.植物多糖常用的提取方法有溶剂提取法、超滤法、酶解法、超声辅助提取法、超临界流体萃取法、微波辅助提取法、闪式提取法和高压蒸煮法等.多糖的检测方法可分为两大类,直接测定多糖包括高效毛细管电泳法、气相色谱法、高效液相色谱法和酶法等,利用单糖的性质进行测定,其中利用单糖缩合反应而建立的方法最多,如滴定法,比色法.本文重点介绍植物多糖的提取方法和分析方法,旨在促进植物多糖的开发利用.【期刊名称】《天津药学》【年(卷),期】2015(027)002【总页数】3页(P67-69)【关键词】植物多糖;提取方法;分析方法【作者】鲁瑞娟【作者单位】天津市药品检验所,天津300070【正文语种】中文【中图分类】R284.2多糖是由单糖聚合成的天然生物大分子，结构复杂，分子量大，极性大。
随着人们对多糖研究的深入，越来越多的多糖被分离出来，并且发现这些多糖具有很多的生物学活性和潜在的应用价值[1，2]。
但多糖结构复杂，种类繁多，并且常与脂质和蛋白质结合成多糖复合物，这给植物多糖的提取和分析带来不少困难。
本文对植物多糖的提取方法和分析方法进行简要综述。
植物多糖常用的提取方法有溶剂提取法、超滤法、酶解法、超声辅助提取法、超临界流体萃取法、微波辅助提取法、闪式提取法和高压蒸煮法等[3-10]。
1.1 溶剂提取法溶剂提取法是提取多糖的最常用的方法。
常用的粗多糖的提取方法有水提取、碱提取和酸提取。
水提法是多糖传统的提取方法，因为酸法和碱法提取中，易破坏多糖的结构，增加多糖损失。
李艳红[11]提取山楂多糖采用传统热水法的最佳条件为：提取时间6 h，温度80 ℃，液固比15∶1，山楂多糖的提取率为1.67%。
Ai等[12]用水在70 ℃提取3 h得到水溶性苹婆籽多糖，残渣再使用0.05 mol/L NaOH溶液采用40 ℃提取2 h，得到碱溶性多糖，碱提取的浓度不应太高，太高会破坏多糖的结构增加多糖的损失。
多糖提取实验报告
一、实验目的1. 了解多糖的基本概念、性质和分类；2. 掌握多糖提取的基本原理和实验方法；3. 学习利用水提法、醇沉法等方法提取多糖；4. 掌握多糖的纯化、鉴定和含量测定方法。
二、实验原理多糖是一类由单糖分子通过糖苷键连接而成的天然高分子化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗病毒等。
本实验主要采用水提法、醇沉法等方法提取多糖，并对其纯化、鉴定和含量进行测定。
三、实验材料1. 实验材料：植物样品（如玉米、小麦、胡萝卜等）；2. 实验试剂：蒸馏水、乙醇、丙酮、苯酚、硫酸、蒽酮、葡萄糖标准品等；3. 实验仪器：组织捣碎机、离心机、分光光度计、磁力搅拌器、容量瓶、移液管、试管等。
四、实验方法1. 植物样品预处理：将植物样品洗净、晾干、磨碎，过筛，得到植物粉末。
2. 水提法提取多糖：（1）称取一定量的植物粉末，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（2）在80℃条件下加热提取2小时；（3）冷却后，用离心机分离溶液和沉淀；（4）取上清液，加入乙醇，使多糖沉淀；（5）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到粗多糖。
3. 醇沉法提取多糖：（1）称取一定量的植物粉末，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（2）在80℃条件下加热提取2小时；（3）冷却后，用离心机分离溶液和沉淀；（4）取上清液，加入丙酮，使多糖沉淀；（5）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到粗多糖。
4. 纯化多糖：（1）将粗多糖溶解于适量的蒸馏水中；（2）加入适量的苯酚，使多糖与苯酚形成复合物；（3）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到纯多糖。
5. 多糖鉴定：（1）采用苯酚-硫酸法鉴定多糖：取一定量的多糖样品，加入苯酚和硫酸，观察溶液颜色的变化；（2）采用蒽酮法鉴定多糖：取一定量的多糖样品，加入蒽酮，观察溶液颜色的变化。
6. 多糖含量测定：（1）采用硫酸蒽酮法测定多糖含量：取一定量的多糖样品，加入蒽酮，在特定波长下测定吸光度；（2）以葡萄糖标准品为对照，绘制标准曲线，根据样品吸光度计算多糖含量。
方法一 多糖提取与测定
】稳定性的影响 80℃ 90℃ 1 2 3 1 2 3
】稳定性的影响 7.5 8.0 8.5
9.0
6.6 7.6 8.6
6.7 7.7 8.7
6.8 7.8 8.8
6.9 7.9 8.9
（5） 温度与时间对 PH 值（澄明度、相对密度、ph 值）的影响
原药材质量−残渣质量−乙醇提取液挥干质量−石油醚提取液挥干质量 原药材质量
× 100%
三、多糖提取流程
方法一： 植物组织切成小块→匀浆→热水浸提→过滤→上清液蒸发浓缩→加无水乙 醇沉淀， 静置 48h→抽滤→沉淀物用 95%乙醇、 无水乙醇、 丙酮各淋洗 2 次→60℃ 真空干燥→得粗多糖 方法二： 称 取干燥至恒重的葛 根 85.0g 先经 80%乙醇回流 提取 2 次，第一次提取 2h， 第二次提取 3h， 除去单糖和 低聚糖；抽滤，药渣经真空 干燥后用石油醚（60-90℃） 回流脱脂提取 2 次，第一次 提取 2h，第二次提取 3h， 抽滤，药渣经真空干燥后， 加蒸馏水回流，微博处理， 抽滤，去上清液，浓缩记得 葛根多糖。 方法三： 称取干燥葛根 4.0g，加 400ml 去离子水，85℃水浴回流提取 2h，抽滤，将 滤液定溶于 500ml。测定总多糖含量。
单因素考察实验
分别考察料液比、提取温度、提取时间、乙醇沉淀浓度和提取次数对植物多 糖总糖含量的影响。多糖的含量=植物多糖的含量/植物原料的重量 x100%。 (1)料液比对多糖总糖含量的影响 称取干燥恒重药材 10.00g， 以不同料液比 1:10、 1:15、 1:20、 1:25、 1:30(8-12 倍)，在 90℃的水浴下提取 2h，用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率 (2)提取时间对多糖总糖含量的影响 称取干燥恒重药材 10.00g，采用较适合的料液比、在 90℃的水浴下，分别 用 0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h 进行提取，用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率 (3)提取温度对多糖总糖含量的影响 用较适合的料液比、提取时间，分别在 50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、 100℃水浴下提取，用 80%乙醇进行沉淀。 名称 试验一 试验二 试验三 1 2 3 1 2 3 1 2 3 平行试验 药材质量 提取温度 提取时间 提取次数 料液比 总糖含量 提取率
地黄多糖的提取纯化及其对糖尿病小鼠血糖的影响研究
地黄多糖的提取纯化及其对糖尿病小鼠血糖的影响研究地黄多糖是一种从中草药地黄中提取的生物活性成分，具有多种药理活性，如抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用。
糖尿病是一种常见的慢性代谢性疾病，全球范围内患者数量不断增加。
本文旨在探讨地黄多糖的提取纯化方法以及其对糖尿病小鼠血糖的影响。
首先，地黄多糖的提取纯化方法可以采用水浸提和醇沉法。
水浸提可以先将地黄粉末与适量的水混合，加热至80℃，浸泡4小时，随后离心。
醇沉法则是在水浸提的基础上，将提取液与等体积的醇（如乙醇或异丙醇）混合，冷藏沉淀过夜，然后离心。
提取得到的地黄多糖液体可以经过进一步的过滤、浓缩和冷冻干燥等方法进行纯化。
为了评估地黄多糖对糖尿病小鼠血糖的影响，可以选择糖尿病模型动物（如小鼠）建立实验。
首先，可以使用链脲佐菌素（STZ）诱导小鼠糖尿病。
具体操作是将STZ溶解在适量的缓冲液中，通过腹腔注射给予小鼠一定剂量。
接下来，可以将小鼠随机分成多个实验组，每组给予不同剂量的地黄多糖。
同时，可以设置阴性对照组和阳性对照组，分别给予生理盐水和降糖药物进行对比。
每隔一段时间测量小鼠的空腹血糖值，并通过组织学检查和生化指标检测等方法评估地黄多糖的治疗效果。
研究结果显示，经过提取纯化的地黄多糖可以有效地降低糖尿病小鼠的血糖水平。
与阴性对照组相比，给予地黄多糖的小鼠在一定时间内呈现出更低的空腹血糖值，这表明地黄多糖具有降糖作用。
另外，地黄多糖还可以改善糖尿病小鼠的胰岛素抵抗情况，促进胰岛素的分泌和利用。
通过组织学检查发现，给予地黄多糖的小鼠胰岛组织结构完整，胰岛细胞数量较多，并且胰岛细胞的细胞膜完整。
此外，给予地黄多糖的小鼠血清中的血脂水平也有所下降，这可能与地黄多糖的抗氧化作用有关。
综上所述，地黄多糖的提取纯化方法可以采用水浸提和醇沉法。
地黄多糖对糖尿病小鼠血糖的影响研究结果显示，它可以有效降低糖尿病小鼠的血糖水平，并且改善胰岛组织和血脂水平。
这些结果表明地黄多糖可能具有应用于糖尿病治疗的潜力，但还需要进一步的临床研究来验证其安全性和有效性。
地黄炮制前后粗多糖的提取和总糖含量测定
[3] 梅全喜,孙一帆,田素英,等.复方土牛膝制剂治疗咽喉 疾病 的药 理研究 与 临 床 观 察[J]. 亚 太 传 统 医 药 ,2007,3(1):92-95.
精密称取上述提取得到的生地黄 0.5 g，共 5 份。 按“2.3”
项下 方 法 分 别 制 备 5 份 样 品 溶 液 ，各 精 密 吸 取 0.3 ml，分 别 定容到 100 ml 量瓶中，摇匀。 分别精RSD=0.86%，结 果 表 明 该 方 法 重复性良好。 2.8 回收率试验
[6] 梅全喜,曾聪 彦,高 玉 桥,等.复 方 土 牛 膝 糖 浆 的 薄 层 鉴 别[J].中 国 药 业, 2007,16(3):8-9.
[7] 曾 聪 彦,梅 全 喜,孙 一 帆,等.复 方 土 牛 膝 糖 浆 中 水 杨 梅 的 薄 层 鉴 别[J]. 中 华 中 医 药 学 刊,2007,25(3):508-509. （收 稿 日 期 ：2009-05-07 ）
LIU Xiaoyin1, JI Yaohua1, ZHANG Chunyu1, TIAN Ziqiang2 (1.Changchun Medical College, Changchun 130031, China; 2.Yushu Traditional Chinese Medical Hospital of Jilin, Yushu 130400, China) [Abstract] Objective: To exploite and make use of the polysaccharide in Rehmanniae effectively and compare the polysaccharide content in Rehmanniae and its processed products. Methods: We extracted the polysaccharide in Rehmanniae by the water extraction and alcohol precipitation method and determinated the content of total sugar in the crude polysaccharide by colorimetry method. Results: The extraction ratio of crude polysaccharide were 17.14% in the Radix Rehmaniae and 26.72% in the Prepared Pehmanniae. The content of total sugar were 44.93% and 16.29% respectively. Conclusion: The contents of the polysaccharide in Rehmanniae and its processed products are different. [Key words] Radix Rehmanniae; Prepared Rehmanniae; Extraction; Polysaccharide; Extracte; Content determination
多糖分离纯化及含量测定
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸 提固液比、提取时间以及提取次数等。
• 该种方法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低， 安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
• 但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的 成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后 续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也 不高。
溶剂法：酸提法
• 为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展 了酸提取法。
• 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下 难以溶解；
• 含有胺基的多糖可使用乙酸或盐酸调节提取液成酸性 进行提取，然后再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入 铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、pH值、提取温 度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
• 微 波 是 指 波 长 在 1mm 到 1m 范 围 （ 相 对 频 率 为 300~ 300000MHz）的电磁波，介于红外与无线电波之间。
• 微波协助萃取植物药材时，一方面是利用微波透过萃 取剂到达物料内部，由于物料腺细胞系统含水量高， 水分子吸收微波能，产生大量的热量，所以能快速被 加热，使胞内温度迅速升高，液态水汽化产生的压力 将细胞膜和细胞壁冲破，形成微小的孔洞。
2. 酶解法：单一酶解法
• 单一酶解法是指使用一种酶来提取多糖，从而提高提 取率的生物技术。其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维 素酶等。
• 蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用，使 其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中 游离的蛋白质水解，降低它们对原料的结合力，有利 于多糖的浸出。
• 纤维素酶则能特异性地降解纤维素，使植物细胞的细 胞壁破裂，有利于多糖易从胞内释放。
实验七___植物多糖的制备及含量的测定2
实验七植物多糖的提取及含量的测定一实验目的及要求1 了解植物多糖的化学性质及用途2 学习制备植物多糖的原理和方法3 学习和掌握苯酚--硫酸测定多糖的原理和方法二原理多糖是一类天然高分子化合物，是由上千个单糖以糖甙相连形成的高聚物，一般有1.4及1.6甙键两种。
按其功能分：结构多糖构成植物的骨架的原料（不溶于水，如植物的纤维素和动物的甲壳多糖）；贮存多糖（淀粉和糖原）；功能多糖（如粘多糖）。
大多数多糖在水溶液只能形成胶体，无甜味，一般不能形成结晶，无还原性。
不溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，具有吸湿性。
所以大多数多糖的提取多数采用热水或稀碱浸提，乙醇沉淀多糖的方法来提取多糖。
多糖的测定采用苯酚--硫酸法，其原理多糖在硫酸作用下脱水生成糠醛及其衍生物，苯酚与其显色反应呈现棕黄色，己糖在490nm(戊糖和糠醛酸在480nm)有最大吸收峰，吸收值的大小与糖含量成线性关系，测定范围在10-100ug。
该方法的特点是简单、快速、灵敏、颜色稳定目前许多研究报道多糖具有许多生理功能，如香菇降低胆固醇、抑制转氨酶活性、抗辐射等作用。
因此测定和提取植物多糖在医药方面具有重要的现实意义。
三试剂和器材1 6%的苯酚溶液2 标准葡萄糖溶液精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖100mg，溶解定容于100ml的容量瓶中，摇匀。
用前稀释10倍，此溶液含葡萄糖0.1mg/ml。
3 浓硫酸、正丁醇、氯仿、乙醚、乙醇四操作方法1 粗多糖的提取材料处理（0.5g）→热水提取→离心分离→上清液→sevag法脱蛋白两次→离心分离→上清液→加入3倍体积的95%乙醇(过夜使多糖沉淀完全)→用80%乙醇、95%、沉淀→干燥→粗多糖→加入蒸馏水溶解→定容到50ml。
1) 称取黄芪根1 kg（0.5g），去掉杂质和泥土，粉碎成粉末2) 黄芪根粉末中加以6-7倍的蒸馏水(或CaO溶液)，煮沸1.5 h（1h），用4层纱布过滤，CaO溶液提取法：CaO+H20=Ca（OH）2一摩尔氧化钙吸收一摩尔水生成一摩尔氢氧化钙。
地黄炮制前后粗多糖的提取和总糖含量测定
地黄炮制前后粗多糖的提取和总糖含量测定
刘晓茵;纪耀华;章春宇;田子强
【期刊名称】《中国医药导报》
【年(卷),期】2009(006)029
【摘要】目的:为有效开发和利用地黄中多糖类成分,比较地黄炮制前后其含量的变化.方法:采用水提醇沉法提取地黄多糖,用比色法对粗多糖中总精进行含量测定.结果:生地黄和熟地黄中粗多精的提取率分别为17.14%和26.72%,总糖含量分别为44.93%和16.29%.结论:地黄炮制前后多糖含量存在差异.
【总页数】2页(P57-58)
【作者】刘晓茵;纪耀华;章春宇;田子强
【作者单位】长春医学高等专科学校,吉林,长春,130031;长春医学高等专科学校,吉林,长春,130031;长春医学高等专科学校,吉林,长春,130031;吉林省榆树市中医院,吉林,榆树,130400
【正文语种】中文
【中图分类】R28
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1.半枝莲粗多糖的提取及总糖的含量测定 [J], 邢文善;纪耀华;张彦彤;王秋香
2.茜草粗多糖的提取及总糖的含量测定 [J], 赵珉;纪耀华;王秋香;王晓娟
3.中华芦荟多糖提取和粗多糖中总糖的含量测定 [J], 毕肖林;郭胜伟;狄留庆
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5.黄精炮制前后粗多糖的提取收率与总糖含量的比较分析 [J], 徐世忱;纪耀华;李淑惠;张凌瀛;王彩霞;牛艳秋;徐险峰;关琦
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多糖含量测定方法
多糖含量测定方法(总2页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--多糖含量的测定粗多糖中的总糖含量使用苯酚-硫酸法进行测定，还原糖用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定，多糖含量 = 总糖 - 还原糖。
1、总糖含量测定实验原理：多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚生成橙黄色溶液，在490nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
试剂：浓硫酸（分析纯）、5%苯酚溶液（分析纯）、标准葡萄糖。
操作步骤：①制作标准曲线：准确称取105 ℃烘干至恒重的葡萄糖50mg于500ml容量瓶中配成 mg/ml 的标准溶液，用蒸馏水分别配成0、、、、、 mg/ml。
1 ml 标准液分别加入 5% 苯酚溶液 1 ml，并迅速加入浓硫酸 5 ml，静置10 min。
摇匀，30℃放置30 min后于490nm测定OD值，以葡萄糖含量为横坐标，OD值为纵坐标，制作得到标准曲线。
②样品含量测定：吸取样品液，按照上述步骤操作测定OD490，并代入标准曲线计算样品的总糖含量。
2、还原糖含量实验原理碱性条件下，DNS可与还原糖反应生成3-氨基-5-硝基水杨酸。
此物质在煮沸条件下成棕红色，且颜色深浅在一定范围内与还原糖含量成线性关系。
据此可通过测定OD值确定还原糖含量。
试剂及配制：浓度为1mg/ml的葡萄糖标准溶液。
DNS显色液：称取 DNS溶于少量蒸馏水中并转移至500ml容量瓶中，加入2mol/L的NaOH溶液，再加入的丙三醇，摇匀，加蒸馏水定容至500ml，摇匀。
操作步骤①标准曲线制作：在6支试管中分别加入1mg/ml葡萄糖标准溶液，，，，，，补蒸馏水至，然后加入DNS试剂，充分混匀。
置于沸水浴中煮沸5min，然后迅速流水冷却，并分别向试管中加入4ml蒸馏水，混匀。
在540nm处读OD值。
以葡萄糖浓度（μg/ml）为横坐标，以OD值为纵坐标制作标准曲线，得到其线性回归方程。
粗多糖提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解粗多糖的基本性质和提取方法。
2. 掌握水提醇沉法提取粗多糖的原理和操作流程。
3. 通过实验验证粗多糖提取效果，并对其含量进行测定。
二、实验原理粗多糖是一类高分子碳水化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
水提醇沉法是一种常用的粗多糖提取方法，其原理是利用多糖在水中的溶解度较高，而在乙醇中的溶解度较低的特点，通过加水提取多糖，然后用乙醇沉淀多糖，从而实现多糖的分离纯化。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：植物材料（如大麦、玉米等），乙醇，蒸馏水，硫酸铵，苯酚，浓硫酸等。
2. 实验试剂：95%乙醇，NaOH，FeCl3，浓盐酸，氯仿，乙酸乙酯等。
四、实验仪器1. 实验室常用仪器：电子天平，恒温加热器，水浴锅，旋转蒸发仪，离心机，移液器等。
2. 特殊仪器：分光光度计，真空干燥箱等。
五、实验步骤1. 植物材料预处理：将植物材料洗净、晾干，然后研磨成粉末。
2. 水提：将研磨好的植物粉末加入适量蒸馏水，加热煮沸，提取多糖。
3. 醇沉：将提取液冷却至室温，加入95%乙醇，使多糖沉淀。
4. 沉淀分离：将沉淀物用离心分离，弃去上清液。
5. 沉淀干燥：将沉淀物用无水乙醇洗涤，然后在真空干燥箱中干燥至恒重。
6. 粗多糖含量测定：采用苯酚-硫酸法测定粗多糖含量。
六、实验结果与分析1. 粗多糖提取率：根据实验数据计算粗多糖提取率，并与文献报道进行比较。
2. 粗多糖含量测定：根据苯酚-硫酸法测定粗多糖含量，并与理论值进行比较。
3. 结果分析：分析实验结果，探讨影响粗多糖提取率的因素，如提取时间、提取温度、乙醇浓度等。
七、实验讨论1. 粗多糖提取率的影响因素：实验结果表明，提取时间、提取温度、乙醇浓度等因素对粗多糖提取率有显著影响。
在实验条件下，最佳提取时间为2小时，提取温度为80℃，乙醇浓度为95%。
2. 粗多糖提取方法的优化：通过实验，对水提醇沉法进行了优化，提高了粗多糖提取率。
3. 粗多糖的应用前景：粗多糖具有多种生物活性，如抗炎、抗氧化、降血糖等，具有广泛的应用前景。
地黄及其炮制品中总糖及几种主要糖的含量测定
地黄及其炮制品中总糖及几种主要糖的含量测定
边宝林;王宏洁;倪慕云
【期刊名称】《中国中药杂志》
【年(卷),期】1995(20)8
【摘要】通过分光光度比色法、薄层扫描法，分别对地黄炮制前后的总糖及４种主要糖的含量进行了比较。
【总页数】3页(P469-471)
【关键词】地黄;炮制品;糖;含量;测定
【作者】边宝林;王宏洁;倪慕云
【作者单位】中国中医研究院中药研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R283.1;R282.710.2
【相关文献】
1.蒽酮-硫酸法测定生地黄提取物中总糖的含量 [J], 丁礼琴;刘力;徐德生
2.白芍生品及其炮制品中多糖及总糖的含量测定 [J], 秦亚东;周娟娟;李飞;周宙
3.地黄不同炮制品中水苏糖含量比较及其水苏糖抗肿瘤活性的研究 [J], 贾绍华;张道勇;刘冰洁
4.分光光度法测定肉制品中总糖含量的测量不确定度评定 [J], 游青
5.肉制品中总糖含量测定方法的探讨 [J], 陈娜;尚宇;邱杨;余以刚;肖性龙
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生地黄与熟地黄中5个苷类成分和总多糖的含量比较
生地黄与熟地黄中5个苷类成分和总多糖的含量比较张留记;王建霞;屠万倩;李向阳;张军霞;王晓燕;周志敏【摘要】建立测定地黄中梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷及总多糖含量的方法,比较生地黄与熟地黄中成分含量的差异.采用HPLC法同时测定了生地黄和熟地黄中梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量.采用UV法测定了生地黄和熟地黄中总多糖的含量.结果表明,生地黄炮制成熟地黄后,梓醇、地黄苷D、益母草苷和毛蕊花糖苷的含量均出现不同程度的降低,而异毛蕊花糖苷和总多糖的含量增加.本文所建立的同时测定梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷含量的方法及总多糖的含量测定方法,可用于控制生地黄和熟地黄的质量.不同炮制方法对熟地黄中上述成分的含量产生一定影响.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2019(031)004【总页数】6页(P566-571)【关键词】地黄;熟地黄;苷类成分;总多糖;含量测定【作者】张留记;王建霞;屠万倩;李向阳;张军霞;王晓燕;周志敏【作者单位】河南省中医药研究院,郑州450004;河南中医药大学,郑州450008;河南省中医药研究院,郑州450004;河南省食品药品检验所,郑州450018;河南省食品药品检验所,郑州450018;河南省食品药品检验所,郑州450018;河南省中医药研究院,郑州450004【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R283.1地黄主产于河南、陕西、山东、山西等地，其中河南焦作地区武陟、温县、孟县等地所种植的地黄被称为“怀地黄”，是道地药材品种“四大怀药”之一。
生地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块根，性甘、寒，归心、肝、肾经，清热凉血，养阴生津，用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血等。
熟地黄为生地黄的炮制加工品，性甘，微温。
归肝、肾经，补血滋明、益精填髓，用于血虚萎黄，心悸怔忡，肝肾阴虛等症[1]。
植物提取物中总糖测定方法
植物提取物中总糖测定方法
1．仪器：UV-Agilent8453紫外-可见分光光度计
2．试剂：5%苯酚水溶液浓硫酸
二、测定步骤
1．对照品溶液制备：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖约50mg，置50ml 容量瓶中，加水溶解定容，
2．标准曲线制备：分别精密量取对照品溶液0、0.5、1、2、5、10ml于50ml 容量瓶中加水定容至刻度，各取2ml上述溶液于25ml，具塞试管中，分别加入5%苯酚溶液1.0ml摇匀，加入浓硫酸10ml摇匀。
于沸水浴中煮沸3-5min，取出后放置至室温，在485nm和以试剂空白作参比测吸收度。
以吸收度为纵坐标，浓度C（mg/ml）为横坐标，绘声绘制标准曲线，求回归方程，
3．样品溶液制备：精密称取待测样品约150mg置50ml容量瓶中，加入80～90℃热水适量超声溶解后，放冷定容。
取上述溶液2mL稀释至50ml即为供试品溶液。
再取供试品液2ml于25ml具塞试管中，加入5%苯酚溶液1.0ml摇匀，加入浓硫酸10ml摇匀。
于沸水浴中煮沸3-5min，取出后放至室温，即为待测样品溶液。
三、样品测定
打开仪器电源，预热20min，待仪器自检通过后，在485nm处以试剂空白作能比测待测样品溶液吸收度，求得样品溶度。
四、结果计算
50×25×Ci
总糖含量（%）=––––––×100
Wi
Ci：由标准曲线求得样品浓度（mg/ml）
Wi：样品称取量（Mg）。
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[参考文献]
[1] 梅 全 喜.现 代 中 药 药 理 与 临 床 应 用 手 册[M].北 京:中 国 中 医 药 出 版 社, 2008:245-246.
称取生地黄和熟地黄各 0.5 kg，分别用 90％乙醇渗漉，醇 提后的地黄用蒸馏水煮 3 次，合并提取液，浓缩至 100 ml，加 95％乙 醇 至 含 醇 量 为 80％，放置 过 夜 ，抽 滤 ，依 次 用 乙 醇 、丙 酮、乙醚洗涤，挥散试剂至干，即得地黄粗多糖无定型粉末。 2.2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖对照品，用蒸馏水溶 解后定容，配成浓度为 116 μg/ml 的对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备
精密称取上述提取得到的生地黄和熟地黄粗多糖各 0.5 g， 用蒸馏水溶解，稀释至刻度，制成浓度为 100 μg/ml 的供试品溶液。 2.4 标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml， 分别 置 10 ml 具塞试管中，分别加蒸馏水至 2.0 ml，再各加苯酚试 液 1.0 ml，摇匀，迅速 滴 加 浓 硫 酸 5.0 ml，摇 匀 后 放 置 5 min， 置沸水浴中加热 15 min，取出冷却至室温；另取蒸馏水 2 ml， 加苯酚和硫酸，同上操作为空白对照。 用 722 型可见分光光 度计于 490 nm 处测定吸光度，以对照品浓度（μg/ml）为横坐 标， 吸光度为纵坐标， 计算回归方程， 结果表明葡萄糖在 11.6～116 μg/ml 范围内，呈良好的线性关系。 回归方程为 A＝ 0.007 083C＋0.009 2（r＝0.998 7）。 2.5 精密度试验
[2] 梅全喜,吴惠 妃.广 东土牛 膝的 药用 历史 及现代 研究 概况[J].中 医 药 学 刊,2005,23(11):1995-1998.
[3] 梅全喜,孙一帆,田素英,等.复方土牛膝制剂治疗咽喉 疾病 的药 理研究 与 临 床 观 察[J]. 亚 太 传 统 医 药 ,2007,3(1):92-95.
CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报 57
· 制剂与技术 ·
2009 年 10 月第 6 卷第 29 期
干。 前者习称“鲜地黄”，后者习称“生地黄”。 鲜地黄清热生 津，凉血，止血；生地黄清热凉血，养阴，生津[1]。 熟地黄为生地 黄的炮制加工品，熟地黄能滋阴补血，益精填髓。 近年来，药 理实验表明，地黄多糖具有提高机体免疫力和抑肿瘤活性的 作 用[2]，并 对 心 血 管 系 统 有 强 心 、降 压 、保 护 心 肌 ，抑 制 血 栓 形 成和除血脂等作用[3]。 中剂量地黄多糖可 诱 导 MSC 分 化，为 神 经 损 伤 性 疾 病 或 退 行 性 病 变 类 疾 病 的 根 治 提 供 了 可 能[4]。 地黄 多 糖 对 ADMSCs 具 有 保 护 作 用 ， 使 其 能 够 起到 修 复 组 织、改善机体功能的作用[5]。 可见，地黄多糖对人类的健康很 有帮助，具有开发潜力。 因此，本文对炮制前后地黄中粗多糖 进行了提取并对粗多糖中总糖含量进行了测定。 1 材料与仪器 1.1 仪器
LIU Xiaoyin1, JI Yaohua1, ZHANG Chunyu1, TIAN Ziqiang2 (1.Changchun Medical College, Changchun 130031, China; 2.Yushu Traditional Chinese Medical Hospital of Jilin, Yushu 130400, China) [Abstract] Objective: To exploite and make use of the polysaccharide in Rehmanniae effectively and compare the polysaccharide content in Rehmanniae and its processed products. Methods: We extracted the polysaccharide in Rehmanniae by the water extraction and alcohol precipitation method and determinated the content of total sugar in the crude polysaccharide by colorimetry method. Results: The extraction ratio of crude polysaccharide were 17.14% in the Radix Rehmaniae and 26.72% in the Prepared Pehmanniae. The content of total sugar were 44.93% and 16.29% respectively. Conclusion: The contents of the polysaccharide in Rehmanniae and its processed products are different. [Key words] Radix Rehmanniae; Prepared Rehmanniae; Extraction; Polysaccharide; Extracte; Content determination
图 4 岗梅的 TLC （1.岗梅对照药材；2.供试品溶液 1；3.供试品溶液 2；4.缺岗梅阴性对照）
Fig.4 TLC of ilex asprella (1.Reference substance of ilex asprella; 2.Sample -1; 3.Sample -2; 4.Negative sample without ilex asprella)
[中图分类号] R28
[文献标识码] A
[文章编号] 1673-7210（2009）10（b）-057-02
Extraction of Crude Polysaccharide and determination of Total Sugar in Rehmanniae and its processed products
精密吸取“2.2”项下溶液 0.3 ml，定容到 100 ml 量瓶中， 摇匀。 分别精密吸取 2 ml 于 5 个试管中，按“2.4”项下方法测 定 吸 光 度 ，RSD=0.65% ，结 果 表 明 该 法 精 密 度 良 好 。 2.6 稳定性试验
精 密 吸 取 “2.3”项 下 生 地 黄 供 试 品 溶 液 0.6 ml，按 “2.4” 项下的方法测定吸光度 ，每隔 30 min 测定 1 次，至 150 min， RSD=1.32%，结果表明该样品在 150 min 内基本稳定。 2.7 重复性试验
2009 年 10 月第 6 卷第 29 期
· 制剂与技术 ·
地黄炮制前后粗多糖的提取和总糖含量测定
刘晓茵 1，纪耀华 1，章春宇 1，田子强 2 (1.长春医学高等专科学校，吉林长春 130031；2. 吉林省榆树市中医院，吉林榆树 130400）
[摘要] 目的：为有效开发和利用地黄中多糖类成分，比较地黄炮制前后其含量的变化。 方法：采用水提醇沉法提取地
地黄为玄参科植物地黄的新鲜或干燥块根， 秋季采挖， 除去芦头、须根及泥沙，鲜用;或将地黄缓缓烘焙至约八成
2.3.4 岗梅 取本品 14 片，研磨粉碎，加 入 三 氯 甲 烷 30 ml 溶 解 ，超 声 提 取 10 min，滤 过 ， 滤 液 蒸 干 ， 残 渣 加 入 三 氯 甲 烷 1 ml 溶解作为供试品。 另取岗梅药材 3 g， 用万能粉碎机粉 碎 ，加 入 三 氯甲 烷 30 ml 超 声 提 取 20 min，滤 过 ，滤 液 蒸 干 ， 残渣加入三氯甲烷 1 ml 溶解，作为对照药材溶液。 再取不含 岗梅的阴性样品，按照处方制备工艺制备，按供试品溶液制 备方法制备，得阴性对照品溶液。 吸取以上 3 种溶液各 5 μl， 分别点于同一硅胶 G 板上，以苯-丙酮（9∶1）为展开剂，展开， 晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，用 105℃热风吹至有斑点显色 清晰，在紫外灯 365 nm 下 检 识 ，供 试 品 色 谱 中 ，在与 对 照 药 材色谱相对应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照 色谱无此荧光斑点。 结果见图 4。
3 讨论 复方广东土牛膝含片的生产受主要原料提取工艺、甜味
剂、清凉剂的用量及润湿剂的浓度、干燥温度等多种因素的 影响。 经过上述研究得出了复方土牛膝含片的最佳配方：对 原料采用水提醇沉提取工艺，以淀粉、糊精和蔗糖 1∶1∶2 比例 配比混匀，喷入适量冰片和 0.5%薄荷脑的乙醇溶液，按 0.3% 比例加入硬脂酸镁做崩解剂，可制得入口微甜，清爽，表面光 滑美观，色泽一致，硬度好，崩析性良好的复方土牛膝含片。 制备工艺简单，适合工业化大生产，具有良好的开发应用前 景。
精密称取上述提取得到的生地黄 0.5 g，共 5 份。 按“2.3”
项下 方 法 分 别 制 备 5 份 样 品 溶 液 ，各 精 密 吸 取 0.3 ml，分 别 定容到 100 ml 量瓶中，摇匀。 分别精密吸取 2 ml 于试管中， 按“2.4”项下方法测定吸光 度 ，RSD=0.86%，结 果 表 明 该 方 法 重复性良好。 2.8 回收率试验
取已知含量的同一批号生地黄样品， 精密称取 6 份，每 份约 0.5 g，分别精密加入葡萄糖对照品溶液 0.5 ml，按“2.4” 项下方法测定吸光度，计算回收率，结果见表 1。
表 1 回收率试验（n=6）
Tab.1 Results of recovery test (n=6)
[4] 孙一帆,徐庆 文,梅 全喜,等.复 方 土 牛 膝 糖 浆 治 疗 急 慢 性 咽 炎 、扁 桃 体 炎 的 临 床 观 察[J]. 中 华 中 医 药 学 刊,2007,25(3):503-504.