骨髓细胞形态学检查操作流程

骨髓细胞检验

一、骨髓的取材

骨髓取材方式主要有两种，即骨髓穿刺术及环钻术，后者又称骨髓活检。特别适合用于“干抽”情况下且可看到造血组织的天然结构，能判断造血组织与脂肪组织的比例，有助于对再生障碍时病情严重程度的估计，也有助于骨髓纤维化、骨髓转移癌及MDS 的诊断。

（一）骨髓穿刺部位

1. 胸骨穿刺在第二与第三肋骨之间的胸骨正中线上穿刺，穿刺针长度固定在1cm 以下。

2. 脊突穿刺第三、四腰椎脊突为穿刺点，在此处进行穿刺。

3. 髂前上棘穿刺髂骨前上棘后约3cm 处。

4. 髂后上棘穿刺此处骨质较薄，容易穿刺，骨髓液较丰富，若作骨髓培养，须取

5ml~10ml 骨髓液。

（二）骨髓穿刺时应注意的问题骨髓穿刺一般由临床医生自行操作，检验人员也应了解以下有关问题：

1. 穿刺前必须向患者作耐心的解释，以尽量减少患者的恐惧心理。

2. 穿刺术必须严格无菌操作，盛骨髓的玻片不能接触穿刺针头。

3. 骨髓抽取量不宜过多，一般以少于0.2ml 为最好。抽量过多可导致外周血液稀释，失去

诊断意义。穿刺困难时，只要针芯有一小滴骨髓即可涂片，若需要作细菌培养或其他检

查，也应先抽少量涂片，然后再抽所需量。

4. 干抽的意义干抽是指多部位多次穿刺均抽不出骨髓。可见于骨髓造血细胞异常增生，如

白血病、真性红细胞增多症等，更易见骨髓纤维化症。肯定干抽时可用环钻术取活检标

本，同时将环钻针内沾有的骨髓液涂片。

5. 骨髓液稀释此情况由于吸取骨髓液用力过大或穿刺针头刺入骨髓血窦所致，可见涂片上

骨髓小粒及脂肪滴减少，各阶段细胞比例失调，中性粒细胞分叶核＞杆状核，无巨核细

胞、组织嗜碱细胞、网状细胞等。

6. 穿刺部位的差异骨髓造血组织分布不均，且某些病变也可限于局部，因此穿刺部位的不

同，其结果可有显著差异。如再生障碍性贫血，特别是慢性再障，往往远心部位的髂骨

最易首先受损，棘突次之，而胸骨则可再生良好。即或是同一部位的髂骨也有灶性增生

现象，可致两次穿刺结果不相同。某些疾病诊断阳性率也因穿刺部位而异。多发性骨髓

瘤、转移癌时，均以病变部位穿刺阳性率最高。因此对一些疑难病例最好是多部位穿

刺。

7. 死亡病例若需作骨髓穿刺明确诊断时，应在死亡后半小时内进行。

（三）骨髓穿刺成功的指标

1. 在抽搐骨髓的瞬间，病人有特殊的疼痛感。

2. 在黄白色的骨髓小粒，多集中于片尾部。

3. 镜下有骨髓内特有的细胞，如巨核细胞、幼红细胞、浆细胞及网状细胞等。

4. 粒细胞的杆状核与分叶核的比值大于外周血，网织红细胞、有核细胞值均应高于外周

血。

二、骨髓涂片

骨髓涂片的制备是一项重要的工作，绝对不可忽视。有时骨髓取材良好，但由于玻片的不清洁或推片技术不佳，而不能得到满意的涂片。如涂片太厚细胞重叠则无法辨认细胞的结构；涂片太薄，细胞过于分散，则影响检查速度和准确性，甚至漏诊或误诊。因此必须制备薄厚适宜、分布均匀的涂片。

（一）涂片制备取髓液一滴置于载玻片的一端，以边缘平齐的推片（最好比载片稍窄或磨去两角）的一端放在骨髓液的前方，逐渐后移接触骨髓液，使骨髓沿推片散开，将推片与载片保持约30°角，平稳地向前推进至玻片的另一端，载片上便留下一薄层骨髓液膜。图片制成后，在空气中挥动，使其迅速干燥，以免细胞皱缩。

（二）涂片的要求及注意事项

1. 玻片要干净，不能用手指触摸玻片表面。一张良好的骨髓涂片，要求厚薄适宜，

头、体、尾明显，细胞分布均匀。

2. 骨髓内纤维蛋白原含量高，易凝固，穿刺后应立即涂片。应选择有骨髓粒部分涂

片。

3. 图片干燥后用铅笔在髓膜头部写上姓名、编号、日期。

4. 骨髓液一般不用抗凝剂，必要时可用肝素抗凝，但用量不宜过多，否则影响细胞

形态。

三、骨髓涂片的染色

骨髓中有核细胞量多，又有许多幼稚细胞，因此染色时应注意以下问题：

1. 涂片要新鲜，涂片后立即进行染色，如不能立即染色，应先固定后保存，但也不宜

保存过久，否则血浆蛋白质分解，使染色背景变蓝，效果不佳。

2. 固定时间比血片稍长或另用无染料的甲醇或乙醇固定5min~10min。

3. 染液的用量应多于染血片，但不宜过浓，染色时间要长些，使幼稚细胞受色均

匀，结构清楚。

4. 最好用瑞特和吉氏混合染液染色。

5. 细胞染色时间长短除与气温有关外，也与细胞增生情况，各批染液的性能有关，

故要将染色中的涂片，在显微镜下观察，待颗粒清楚，胞核与胞质分明，着色满意后再终止染色，然后再冲洗、待干、镜检。

6. 染色过深的涂片，可用瑞特染液滴加于涂片上马上冲洗。过浅可复染，此时先加

缓冲液后加染液，混合后复染到需要的深度为止。

四、骨髓细胞分类和骨髓现象观察

（一）骨髓片的低倍镜观察

1. 观察涂片情况了解骨髓涂片厚薄是否适度，有核细胞是否较丰富，细胞分布是否

均匀，细胞受色是否满意，若涂片情况较差，应另选良好涂片，并将情况填写记录。

2. 判断骨髓增生程度除个别情况通过骨髓有核细胞直接计数判断增生程度外，一般均

借助骨髓涂片中有核细胞与成熟红细胞的比例进行判断，据此可将增生程度分为5 级（见表20-6 ）。由于穿刺吸取骨髓时，只有西式的可能而无浓缩的机会，因此检查结果介于两级增生程度之间时，可将其增生程度上提一级。例如在增生活跃与增生明显活跃之间，应判断为增生明显活跃。对增生减低的标本，应观察全部送检的骨髓片，以免遗漏有代表性标本，而误将外周血稀释的不分涂片认为增生减低。