食品中菌落总数的测定方法

食品中菌落总数的测定方法

食品中菌落总数的测定

一、实验目的

( 1) 学习与掌握测定食品中菌落总数的基本方法

( 2) 学会菌落总数的报告方式

二、实验材料

1、仪器与设备: 恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。

2、培养基与试剂：75%乙醇、0、85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5、0g、酵母浸膏2、5g、葡萄糖1、

0g、琼脂15、0g、蒸馏水1000mL、pH 7、0±0、2

3、检样：利乐包装鲜牛奶250ml

三、实验方法与步骤

1 、检验程序

菌落总数检验程序：

检样T做成几个适当倍数的稀释液T选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内T每皿内加入

46C 15-20ml营养琼脂T置36± 1 C恒温箱内培养(48 ± 2)h取出T菌落数T报告2、检样稀释及培养

(1)以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠), 经充分振摇做成1：10 的均匀稀释液。

(2)用1ml 灭菌吸管吸取1：10 稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同)，振摇试管混合均匀，做成1：100 的稀释液。

(3)另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。

(4)根据食品卫生检验标准要求与检样的菌落数量，选择3 个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10 倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。

⑸ 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46 C营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL,并转动平皿使与稀释检样混

合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml 稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。

(6)等琼脂凝固后，翻转平板，置36± 1C恒温箱内培养(48 ± 2)h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。

四、检样中细菌菌落总数的计算与报告

1 、菌落计算方法

(1)菌落计数方法

做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

(2)菌落计数的报告

①平板菌落数的选择

选取菌落数在30〜300 CFU之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，

②稀释度的选择

应选择平均菌落数在30〜300 CFU 之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。

若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30〜300之间，按以下公式计算：

食品中菌落总数的测定方法

N =样品中菌落数

工C =含适宜范围CFU的平板菌落数之与

n i =第一稀释度（低稀释度）平板个数

n2 =第二稀释度（高稀释度）平板个数d =稀释因子（第一稀释度）_

若所有稀释度的平均菌落数均大于300 CFU,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之，

若所有稀释度的平均菌落数均小于30 CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告

若所有稀释度及样品原液均无菌落生长，则以小于I乘以最低稀释倍数报告之，若所有稀释度的平均菌落数均

不在30〜300 CFU之间，其中一部分大于300 CFU或小于30 CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

③菌落数的报告

菌落数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。

菌落数大于或等于100 CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。

若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。

3、实验结果与记录

Phibro is required to respond to the FDA that Jianmin:

Is Prepared to add the following tests; light absorbing impurities, related substances and particle size to their OTC COA;

Will provide a COA as evide nee that these tests have bee n con ducted and added to the COA;

Will update VMF 6023 to in elude the data and report to support validati on or verificati on of the methods used to an alyze the tests cited above; and

Will provide us with a report or a statement to confirm that they have performed appropriate validation or

食品中菌落总数的测定方法verification of the methods 、

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