细菌一般染色方法

常用的细菌染色方法
革兰染色 抗酸染色 细菌基本形态结构观察
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细菌染色意义
由于细菌个体微小，基本上无色透明， 故将其用适当染料染色观察，方能显示 它的形态、大小、构造及染色特性等， 在细菌鉴别上有重要意义。 革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种 染色方法，籍此染色法，可将所有细菌 区分为两大类。
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固定的目的和方法
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得 更牢固 可改变菌体对染料的通透性 加热固定可杀死细菌，比较安全 固定的方法将制成的标本匀速通过火焰 三次
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革兰染色
染色：
初染（结晶紫） 媒染 （碘液） 脱色（酒精）
复染（复红）
滤纸吸干 油镜镜检
Crystal violet safranin
细菌基本形态结构观察
基本形态
球菌 杆菌 弧菌
葡萄球菌
链球菌
革兰阳性
肺炎球菌
脑膜炎球菌 革兰阴性
特殊结构
芽孢 枯草杆菌，破伤风梭菌
荚膜 肺炎球菌
鞭毛 变形杆菌
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肺炎（双）球菌
荚膜
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用3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟，
脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为 止
水洗后，用碱性美蓝复染1分钟→水洗，
印干 → 镜检
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结核分枝杆菌(M.tuberculosis)
形态：
细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。
染色性：
不易着色，抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质 蓝色。
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染色步骤
（１）
（２）
结晶紫初染
（３）
１分钟水洗
卢戈碘液媒染
１分钟水洗
９５％乙醇脱色
３０秒水洗
（４）
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复红复染
３０秒水洗吸干
结晶紫初染１分钟 水洗
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碘液媒染 １分钟
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水洗
酒精脱色 ３０秒
水洗
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复红复染 ３０秒
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水洗
滤纸吸干 油镜镜检
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抗酸染色法(acid-fast stain)
分枝杆菌属的细菌（包括结核分枝杆菌、 麻风分枝杆菌等）为抗酸性细菌，一般染 色法不易着色，须用抗酸染色法。 注意事项
涂片要略厚 加温染色或延长染色时间，加温时随时补加 染色液 分枝杆菌呈红色(+) 其他细菌和背景为蓝色(-)。
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操作过程
取痰液→ 涂片（略厚）→干燥→固定 →
石炭酸复红加温染色8~10分钟后→
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革兰染色原理
细菌的等电点较低，约在pH 2～5之间， 故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体 蛋白质电离后带负电荷，易与带正电荷 的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合， 使细菌被染成紫色或红色。
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一、细菌染色标本片的制备
细菌染色检查，首先要进行细菌标本制 备。制备细菌标本一般包括涂片、干燥、 固定三步。
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细菌染色方法及原理
常采用美蓝，结晶紫等碱性染料进行染色。 多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同 可分为以下类型：
碱性染料（basic dye）—带正电染料。其阳离子 部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。 酸性染料（Acid dye）—带负电染料。其阴离子 部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。