流式细胞术的临床应用

一、诊断性指标

如图1所示，图（左）白血病细胞成为一个单一的群体，很难区分原始或病态的白血病细胞和成熟的细胞。但是通过CD45和（SSC）设门法之后（图右），看到图（左）无法区分细胞被分成了五群。在这五群中，成熟细胞CD45表达的荧光比较强。A门里是淋巴细胞，B门里是单核细胞，C门里就是粒细胞群，D门里是原始细胞，一般CD45表达较弱。一些细胞碎片、红细胞和转移来的瘤细胞，由于不表达CD45，可能位于D门、D门偏下或者E门的位置。CD45结合侧向散射光之后能把白血病细胞找出来，减少了其它细胞的干扰。对D门里的白血病细胞做进一步的分型，就能准确看到白血病细胞群免疫分型的表达情况。

图1

3.白血病的特异性标志

免疫表型分析主要是根据细胞的特异表面标志，把白细胞分成T细胞、B细胞和原始细胞。

T淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD3、抗TCRαβ、抗TCRγδ、CD2、CD5、CD8

、CD10和CD7；B淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD79a、CD22、CD19 、CD10和CD20；髓系白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cMPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15和CD64；NK淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有CD16、CD56和CD57；红白血病一般表达的分化抗原有GlyA和CD36；巨核细胞白血病一般表达的分化抗原有CD41、CD42和CD61；一系列非特异标志在不同的白血病中可能都有表达，尤其是表达在早期的造血干组细胞上，一般表达的分化抗原有CD34和HLA-DR。

其中，对T淋巴细胞白血病来讲比较特异的是胞浆内的CD3，当胞浆内CD3出现阳性的时候，高度怀疑是T淋巴细胞白血病。对于B淋巴细胞白血病来讲，胞浆内的CD79a和CD19是比较特异的，cCD79a最具特异性。cCD3和cCD79a分别表达于早期T细胞和B细胞。cMPO是髓系特异标志。

如图2所示为B-ALL的表达图。白血病免疫分型采用的是CD45和侧向散射光的设门方案，通过CD35和侧向散射光设门可以准确地找到一群CD45表达较弱的白血病细胞，也就是D门里的细胞。把D门的细胞再做进一步的分型，发现表达CD19、CD10和HLA-DR。这是B淋巴细胞白血病的表型分析。

图2

如图3所示为AML-M3的表达图。AML-M3是早幼粒细胞增生为主的白血病，这群白血病细胞是髓系的，位于A门，这也是髓系白血病在CD45和侧向散射光设门常出现的位置。分析A门里的细胞，发现这群细胞表达CD13，但不表达HLA-DR。

图3

如图4所示：首先通过CD45和侧向散射光设门找到一群CD45弱表达的细胞，位于A门。进一步分析A门细胞，发现即表达B系的CD19和CD10，也表达髓系的CD13，另外还表达系列非特异标志HLA-DR，这是一个即表达髓系又表达B系的白血病。髓系表达的系列标志和B系表达的系列标志分别超过2个或2个以上，在临床上可初步定为急性混合细胞型白血病。

记研究较多，不同免疫表型具有不同临床意义。思考：免疫表型分析有哪些临床意义？

图5

3.CD59表达模式

在临床上CD59的表达模式为：正常人和阵发性睡眠性血红蛋白尿症较轻或经治疗后完全好转的人，只有Ⅰ型细胞CD55或CD59的表达是完全阳性；在CD59部分表达或阴性表达后，就有可能出现了Ⅱ型细胞和Ⅲ型细胞。Ⅰ型细胞就是CD59表达完全阳性、Ⅲ型细胞指CD59表达完全阴性；Ⅱ型细胞指CD59表达部分阳性， 其荧光强度处于Ⅰ型 及Ⅲ型之间；

图6

临床上有Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型细胞。如图6所示病人没有Ⅰ型细胞，只有Ⅱ型和Ⅲ型细胞，可能见于正常人，也可见于PNH完全缓解的病人。尽管临床上有Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型细胞，病人的表达模式也有不同。有的病人Ⅱ型细胞表达较低，而有的病人Ⅱ型细胞表达比较高。

用来诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）及鉴别其他贫血的重要的指标是（ ）

图7

3.方法学评价

现在有一些实验室不通过流式来检测HLA-B27，通过一些传统的微量淋巴细胞毒的方法进行检测。与传统的微量淋巴细胞毒的方法相比，流式细胞术的检测操作简单，无须分离淋巴细胞。流式细胞术的检测用的是全血的标本，通过裂解红细胞的方法来进行检测，而且检测的速度也比较快，结果相对稳定，可重复性高，灵敏度强，特异性也比较高。

（四）肺泡灌洗液（BALF）T细胞亚群的检测

肺泡灌洗液（BALF）T细胞亚群的检测用来诊断和鉴别诊断结节病和特发性肺间质纤维化（IPF）。在结节病的时候，T4细胞计数明显增高，T4/T8比值也明显增高。在IPF的时候，T8细胞明显增多，T4/T8的比值明显降低。对于肺结核和肿瘤来讲，不具有特征性变化，所以可以用来鉴别间质病和结核肿瘤。但是这种明显的特征只局限于这些疾病的灌洗液，外周血变化不如BALF明显，主要是因为这两种疾病在肺局部的表现较突出。

可以用来标记的分化抗原包括T3细胞、T4细胞、T8细胞，一般T3细胞是CD3阳性的细胞，T4细胞是CD3阳性、CD4阳性、CD8阴性的细胞，T8细胞是CD3阳性、CD4阴性、CD8阳性的细胞。其中，T3细胞代表的是T 总细胞，T4细胞代表的是T辅助和诱导细胞，T8细胞代表的是T抑制和杀伤细胞。

用流式细胞术来检测淋巴细胞亚群要比传统的免疫组化的方法准确快速，而且可以同时进行多参数的分析。

（五）网织红细胞计数

通常在临床常规检测中，用血细胞分析仪进行网织红细胞计数，而并不是用流式细胞术，主要是因为流式细胞术进行网织红细胞计数需要频繁的开机，检测稳定性也不如血细胞分析仪好。通常不完全依赖流式来进行网织计数，但是流式用网织红细胞计数可以对血细胞分析仪的结果做进一步的验证和补充。

点是采用流式细胞光度计同时对大量单个细胞进行双色或多色荧光标志分析，

提高临床诊断的准确性和精确性。思考：流式细胞术提供的临床诊断性指标主二、监测性指标