最新纤维蛋白原的检测方法及进展

❖ Fg同时又是一种急性时相反应蛋白，其增加 往往是机体的一种非特异性反应，血浆Fg升高 （＞4g/L）见于糖尿病、急性传染病、肾病综 合症、妊高症、心脑血管疾病、恶性肿瘤等
❖ 纤维蛋白原减少（＜2g/L）见于弥散性血管内凝血、 原发性纤溶症、重症肝炎等
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纤维蛋白原与心脑血管疾病
❖ 1．重量测定法 将Fg转变成纤维蛋白凝块经反复洗涤脱水 后，用精密天平(精确到0．000 1 g)称重。 该法简单，不需要复杂的操作或精密仪器， 技术误差很小。在80年代有一些大型流行 病学研究将该法作为参考方法
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❖ 2．酚试剂比色法 在世界卫生组织(wH0)推荐的参考方法出 来前曾作为参考方法。该法将过量的凝血 酶加入血浆中，将产生的纤维蛋白凝块洗 涤数次后溶于NaOH溶液中。用Folin— Ciocalteau酚试剂或Biuret反应来测定。
❖ 纤维蛋白单体生成后即开始聚合成纤维蛋白。 在纤维蛋白稳定分子（ⅩⅢa）作用下，经 过共价交联的纤维蛋白网更加牢固。纤维蛋 白与凝血酶有高亲和力，因此纤维蛋白生成 后即能吸附凝血酶，有助于局部血凝块的形 成
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纤维蛋白临床意义
❖ 当Fg值超过正常参考范围(2．0～4．0 g／L) 时，即表示凝血功能异常；若低于1．5 g／L 时，机体出血的概率明显增加
❖ 糖尿病是血栓前状态，其血浆黏度、Fg 浓度均明显高于正常。
❖ 改善体内血浆黏度和Fg含量对控制和治 疗肾病糖尿病有着重要的意义。
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纤维蛋白原与DIC
❖ 纤维蛋白原减低见于DIC：弥漫性血管内凝 血，激活纤维蛋白溶解酶原，使血中纤维蛋 白溶解酶活力增加，溶解纤维蛋白，消耗体 内原有的Fg，使其含量减少
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❖ 3.紫外光度法 该法将纤维蛋白凝块溶解于碱性尿素溶液 中，然后通过在280nm波长紫外光直接比 色计算纤维蛋白原的含量 在此基础上，又发展成为2种参考方法，即 Ancrod法和改良的Jacobsson法
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❖ Ancrod法: Ancrod(凝血酶代替品)对Fg有 高特异性，不象凝血酶会作用于除Fg外的 其他几种血浆蛋白，如因子Ⅷ 。纯化的 Ancrod只作用于a链并释放A纤维蛋白肽， 而不会被血浆中的肝素抑制，并对纤维蛋 白降解产物灵敏度低。在许多方法不能检 测到Fg的低浓度血浆中，该法仍有大量凝 块形成，而且比酚试剂比色法重复性更好。 此法在70年代的一些方法学研究中曾作为 参考方法
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❖ 功能测定法利用Fg特异的2种生化反应，即 凝血酶的蛋白水解作用和随后发生的纤维 蛋白单体聚集为纤维蛋白多聚体。在这些 方法中，通过加入凝血酶形成纤维蛋白凝 块后的检测手段不同，又可分为重量测定 法、酚试剂比色法、紫外光度法、浊度法 和凝血酶凝固时间法等。
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纤维蛋白原及其检测进展
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纤维蛋白原(flbfinogen，Fg)
❖ 即凝血因子I，是血浆中含量最高的一 种凝血蛋白．是凝血系统的核心蛋白 质，它在凝血过程的最后阶段被凝血 酶转化成纤维蛋白单体，最终形成不 溶性纤维蛋白凝块而发挥血液凝固作 用。
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❖ 机制：尿中大量丢失以白蛋白为主的小分子 量蛋白质，出现低蛋白血症，刺激肝脏代偿 性合成蛋白质增多，血浆Fg和凝血因子Ⅷ活 性增高被认为是肝脏合成蛋白质增多的一种 表现，这两种高分子量的凝血前质不能由尿 丢失，它们在血浆中的高浓度、高活性是肾 病综合征血栓形成的部分危险因素。
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❖ 血浆Fg含量测定方法多达数十种，按原理分 为三类，即功能、物理化学和免疫学测定法
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❖ (一)功能测定法 该法又称为可凝固蛋白法，即将Fg作为可凝 固蛋白来测定，因普遍认为Fg的主要特性是 其可凝性，所以血浆可凝固Fg的检测已成为 Fg的主要评判标准
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❖ 改良的Jacobsson法 是WHO推荐的参考方法，为第1个血浆Fg 国际标准品(89／644)制备时所推荐使用的 方法。该法准确并满足2项有效测定Fg的主 要标准：首先通过凝血酶将可凝固的Fg从 血浆中分离出来，其次使用了简便的分光 光度法独立操作的定量步骤.
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纤维蛋白原的检测方法
❖ 近年来对纤维蛋白原的测定日益重视，对其 测定的精度也提出了更高的要求 ：美国规定 检测结果在靶值±20％ 的范围内，目前测定 主要包括Fg血浆水平、亚组分(HF和LF) 、纤 维蛋白单体聚集功能、基因多态性等几个方 面，其中血浆Fg含量测定最为常用
❖ 心脑血管疾病是现代人群中的常见病， 其发生大都存在着Fg的异常增高。 Fg是 血浆黏度增高的主要因子,Fg能增强红细 胞和血小板聚集性，提高全血黏度，使 血液处于高凝和高黏状态，影响组织血 液灌注，促使血栓形成。
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纤维蛋白原与肾病糖尿病
❖ 肾病综合征及慢性肾病患者均存在高凝状态， Fg含量增高为其重要特征。
纤维蛋白原结构
❖ Fg是分子量为340 KDa的血浆糖蛋白，由肝细 胞和巨核细胞合成，约占血浆总蛋白的2 ～3 % 。健康人血浆中浓度为2．0～4．0 g／L， 电泳分离显示在β2区带。
❖ 在结构上Fg是由两条Aα链、两条Bβ链和两条 γ链组成，每三条肽链（Aα、Bβ、γ肽链） 绞合成索状，形成两条索状肽链，两者的N-端 通过二硫键相连，整个分子成纤维状。
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纤维蛋白原功能
❖ 血浆Fg主要的生理功能是作为凝血蛋白(又称 凝血因子)直接参与体内凝血过程，是纤维蛋 白的前体，在凝血机制中参与凝血共同途径， 由可溶性Fg转变为不可溶性纤维蛋白，使血 液凝固。(主要功能是它的可凝固性)
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Hale Waihona Puke Baidu ❖ 机制：在凝血酶作用下，纤维蛋白原分子中 的两条α链的A肽和两条β链的B肽都断裂， 形成纤维蛋白单体 ，凝血酶对纤维蛋白原 的 γ链无裂解作用。