重组植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶活力测定实验
重组植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶活力测定实验
一、实验目的
了解原核表达系统
熟悉并掌握粗酶液的制备方法
熟悉并掌握谷氨酸脱羧酶活力的测定方法
熟悉并掌握超声破碎仪及U-V1100紫外可见分光光度计使用方法
二、实验原理
γ-氨基丁酸（GABA）作为一种非蛋白氨基酸，是目前研究较为深入的哺乳动物脑组织一种重要的抑制性神经递质，具有一系列的生理功能，例如降血压功能、治疗癫痫、抗疲劳、提高免疫力等。
谷氨酸脱羧酶（GAD,EC4.1.1.15）是一种磷酸吡哆醛（PLP）类酶，能专一催化L-谷氨酸脱羧成为γ-氨基丁酸（GABA）和CO2。催化效率——即酶的活力是酶的重要参数，研究酶的活力是研究酶性质及应用的基础。本实验通过测定谷氨酸脱羧酶催化产物γ-氨基丁酸产率来定义谷氨酸催化活力。谷氨酸脱羧酶催化反应式如下：
L-谷氨酸谷氨酸脱羧酶（GAD）γ-氨基丁酸（GABA）GAD现行测定方法及优缺点
测定方法优点缺点
HPLC法准确灵敏度高操作复杂、测定时间较长氨基酸自动分析仪法稳定操作简单仪器使用复杂、昂贵
纸层析和薄层层析法方便简单稳定性差、适合定性测量
Berthelot比色法灵敏度高、方便简单有游离氨干扰
毛细管电泳法耗材少，环境污染小重现性较差
根据样品的特性及实验的需要，本实验采用Berthelot法测定反应液中GABA。
GABA的测定方法
采用Berthelot法，该方法利用苯酚和次氯酸钠与氨基反应生成蓝绿色物质(次氯酸钠氧化苯酚生成醌，醌和氨基反应生成蓝绿色物质)。Berthelot法对GABA（ω-氨基酸）的响应高，而对L-谷氨酸（α-氨基酸）响应低，所以用Berthelot法可以快速、高灵敏度测定出催化反应产物中的GABA。通过测定一定时间反应液中的GABA的吸光度值从而得到GABA的浓度，最终计算出谷氨酸脱羧酶的活力。
三、实验材料和主要仪器
1、仪器
MIKRO 220R 2205型低温冷冻离心机
UV-1100型紫外可见分光光度计
水浴锅ZHWY-110X
AB104-N型电子分析天平
FS-250N型超声破碎仪
2、主要器皿
100mL容量瓶、烧杯、样品瓶、5mL试管、5mL离心管、10mL离心管、50mL离心管
3、试剂和材料
γ-氨基丁酸（GABA）标准品（sigma公司）
L-谷氨酸钠（味精）
磷酸盐缓冲液（PBS）：8g/L NaCl,0.2g/L KCl,1.42g/L Na2HPO4,0.27g/L KH2PO4,加入浓盐酸调节pH至7.4
Na2HPO4-柠檬酸缓冲液（pH4.8，含0.2MNa2HPO4，0.1M柠檬酸，20mL）：0.2M Na2PO4
9.86mL,0.1M柠檬酸10.14mL混合。
6%苯酚溶液（需要现配）
次氯酸钠溶液
0.2mol/L硼酸钠缓冲液（pH9.0）
4、培养基
Luria-Bertani（LB）培养基
含1%胰蛋白胨，1%氯化钠，0.5%YEAST EXTRACT（酵母粉）
5、菌株
已转入植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶的大肠杆菌BL21。
四、实验步骤
1、重组工程菌的活化与转接
将甘油保藏的工程菌接入有AMP（100μg/mL）的10mL LB培养基中过夜活化。将过夜活化的工程菌以5%的接种量转接入20mL LB培养基中待其生长至OD600=0.5时加入诱导剂IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导8h。同时做空载体对照组的活化与转接。
2、粗酶液的制备
取诱导后的菌液于50mL离心管中，以6000 r/min离心10 min，去上清，菌体经PBS 缓冲液洗涤后重悬于5 mL的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液中，并利用超声细胞破碎仪破碎菌
体(200 w，工作2 s间歇1 s，200次)。破碎后的菌液离心后取上清即是粗酶液。同时对空载对照组进行超声波破碎。
3、GABA标准曲线的制作
取1.0mg/mL标准GABA溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于6支试管中，加蒸馏水补足至1.0mL，再依次加入400μL 0.2mol/L硼酸钠缓冲液（pH9.0）, 1.0mL 6%(v/v)苯酚和1.0mL次氯酸钠溶液，充分振荡后，沸水浴中反应10min，迅速在冰浴中冷却显色20min，待出现蓝绿色后加入60%（v/v）乙醇溶液2.0mL，最后在643.5nm处测定吸光度。注意：GABA标准溶液4℃保存。
4、GAD酶活力的测定
采用比色法。首先配制Na2HPO4-柠檬酸缓冲液(pH 4.8，含0.02M底物L-谷氨酸钠, 0.01mM辅酶PLP)，取400μL底物溶液和200μL粗酶液在37℃反应30min，煮沸，加入400μL 0.2mol/L硼酸钠缓冲液（pH9.0）终止反应；再加入1.0mL 6%(v/v)苯酚和1.0mL次氯酸钠溶液，充分振荡后，沸水浴中反应10min，迅速在冰浴中冷却显色20min，待出现蓝绿色后加入60%（v/v）乙醇溶液2.0mL，最后在643.5nm处测定吸光度。以底物溶液中不加酶液加入等量蒸馏水为对照组。
酶反应体系中GABA的量以标准曲线确定，一个酶活力单位（U）定义为在测定条件下每分钟产生1μmol GABA所需的酶量。
五、结果计算及讨论分析
1、GABA标准曲线的制作
表1 GABA标准曲线制作
管号 1 2 3 4 5 6
1.0mg/mL标准GABA（mL）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水（mL） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
OD643
2、GAD酶活力的测定
总酶活A（U/mL）的计算
根据标准曲线计算样品中的GABA含量，再根据反应时间计算出粗酶液酶活A （U/mL）
了解蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA—2A)与谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)在1型糖尿病(DM)中的检出率及
龙源期刊网 了解蛋白酪氨酸磷酸酶抗体（IA—2A）与谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）在1型糖尿病（DM）中的检出率及其诊断价值 作者：薛勇 来源：《饮食与健康·下旬刊》2015年第10期 【摘要】目的：分析探讨蛋白酪氨酸磷酶抗体与谷氨酸脱羧酶抗体在1型糖尿病中的检出率及其诊断价值。方法：选择我院收治的1型糖尿病患者120例作为研究对象，收治时间在2013年3月至2014年3月期间，使用数字抽签法对这120例患者进行分组，分别为A组、B 组和C组，每组各40例，A组采取蛋白酪氨酸磷酸酶抗体检测，B组采取谷氨酸脱羧酶抗体检测，C组采取白酪氨酸磷酶抗体与谷氨酸脱羧酶抗体联合检测，并在检测结束后，对比三组的检出率。结果：A组的检出率为87.50%，B组的检出率为80.00%，C组的检出率为 100.00%，C组患者的检出率明显高于A、B两组，P 【关键词】白酪氨酸磷酸酶抗体;谷氨酸脱羧酶抗体;1型糖尿病 谷氨酸脱羧酶（GAD）是将谷氨酸转化成抑制性神经递质γ氨基丁酸（GABA）的限速酶，在胰岛β细胞中存在GAD，并也合成、分泌GABA。本文就蛋白酪氨酸磷酸酶抗体与谷氨酸脱羧酶抗体在1型糖尿病中的检出率及其诊断价值进行了研究分析，将我院确诊的120例1型糖尿病患者作为研究对象，并分别给予蛋白酪氨酸磷酸酶抗体检测、谷氨酸脱羧酶抗体检测及酸磷酸酶抗体检测联合谷氨酸脱羧酶抗体检测，现报告整理完毕，具体陈述如下。 1 研究资料和方法 1.1 研究资料 选择我院收治的1型糖尿病患者120例作为研究对象，收治时间在2013年3月至2014年3月期间，使用数字抽签法对这120例患者进行分组，分别为A组、B组和C组，每组各40例。
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书 1.实验原理 脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。 脲酶 尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－ 谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O 2 标本： 2.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用
无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。 3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml） 6.1.1 试剂组成 试剂1： Tris缓冲液pH7.8 120mmol/L α-酮戊二酸7mmol/L ADP 0.6mmol/L 谷氨酸脱氢酶≥1000U/L
脲酶≥6000U/L 试剂2： NADH 0.25mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品
糖尿病抗体
糖尿病抗体四项检测的临床意义 1、抗谷氨酸脱羧酶抗体GAD-Ab 谷氨酸脱羧酶是抑制性神经递质γ氨基丁酸的关键限速酶，由GAD65和GAD67两种异构体所组成，其中抗GAD65抗体为1型糖尿病中抗GAD抗体主要的靶抗原。抗GAD抗体是胰岛素依赖型糖尿病（1型糖尿病）的重要免疫标志。抗GAD抗体在糖尿病前驱阶段和1型糖尿病中的阳性率为70-90%，在大龄儿童和迟发的1型糖尿病中的阳性率更高。 对于成人潜伏型自身免疫性糖尿病（LADA），因其起病隐匿，进展缓慢，尚存部分胰岛β细胞功能，口服降糖药有效，易被误诊为2型糖尿病。联合检测抗谷氨酸脱羧酶抗体和抗胰岛细胞抗体，有助于早期识别LADA。 此外抗GAD抗体还与僵人综合征相关，该抗体在此病症中的阳性率为60-100%。 参考值：<10.0IU/ml 2、抗酪氨酸磷酸酶抗体 IA2-Ab 抗酪氨酸磷酸酶抗体（IA2）是与1型糖尿病相关的抗体，在糖尿病前驱阶段和1型糖尿病中的阳性率为50-75%，是胰岛自身免疫活动的早期标志物，其出现通常预示着病情进展迅速。在年轻初发病者中的阳性率更高，与初发病进展速度有关。 参考值：<10.0IU/ml 3、抗胰岛素抗体IAA 1型糖尿病因内源性胰岛素分泌量的绝对不足，故需注射外源性胰岛素治疗。经常会刺激机体产生抗胰岛素抗体。检测抗胰岛素抗体可指导胰岛素的用量，为耐药性糖尿病治疗提供了依据。抗体滴度高时，可适度增加速效胰岛素，抗体滴度低时，则改用长效胰岛素。判断预后，胰岛素释放曲线低下而检测胰岛素抗体滴度偏高，说明患者不是胰岛功能衰竭，提示病情稳定。相反则表明胰岛素功能衰竭，预后较差。 参考值：阴性 4、抗胰岛细胞抗体ICA 抗胰岛细胞抗体属器官特异型抗体，抗原为胰岛细胞浆成分或微粒体组分，主要为lgG类，是胰岛细胞中β细胞损伤的标志物，是诊断胰岛依赖性糖尿病高敏感性和高特异性的指标。早期1型糖尿病患者ICA阳性率可达60%～80%，治疗数周后阳性率迅速下降至50%以下，2～3年后，约20％的患者仍为阳性，提示ICA的出现可能是暂时现象，似与1型糖尿病的起病时间紧密相关，可作为其早期诊断指标；少数患者ICA滴度可持续维持很高，数年不变；有个别患者起病时为阴性，以后转为阳性；糖尿病近亲阳性率可达19%，预示其家族成员患病的危险性较大。高效价ICA与胰岛β细胞功能破坏有关，可作为评价疾病严重程度的标志。 参考值：阴性 联合检测上述四项，有助于鉴别诊断1型糖尿病，判断疾病预后，并评估1型糖尿病的发病风险。
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求jiuqiang1
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒（α-酮戊二酸底物法） 适用范围：用于体外定量测定人血清或血浆中谷氨酸脱氢酶的含量。 1.1 包装规格 包装规格见表1。 表1 包装规格
1.2 主要组成成分
主要组成成分见表2。 表2 主要组成成分 注：不同批号的校准品、质控品赋值有差异，具体赋值详见靶值单。 2. 性能指标
2.1 外观 试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 试剂2为无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 校准品为黄色粉末状物质，复溶后为淡黄色或黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 质控品为黄色粉末状物质，复溶后为淡黄色或黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。 2.2 净含量 试剂的净含量应不少于标称量。 2.3 试剂空白 2.3.1 试剂空白吸光度 A340nm下测定空白吸光度应≥ 0.8000。 2.3.2 试剂空白吸光度变化率 A340nm下测定的空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤ 0.0200。 2.4 准确度 与已上市产品进行比对试验：在[1，120] U/L区间内，相关系数r≥0.975，在[1，20] U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±2U/L，在（20，120] U/L区间内测定的相对偏差应不超过±10%。 2.5 分析灵敏度 样本浓度为30 U/L时，其吸光度变化率在0.0050～0.0300之间。 2.6 线性区间
在[1，120] U/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[1，20]U/L区间内绝对偏差应不超过±2 U/L，在（20，120] U/L区间内相对偏差应不超过±10%。 2.7 测量精密度 2.7.1 重复性 对高、低浓度的血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。 2.7.2 批间差 随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。 2.8 瓶间精密度 校准品、质控品的瓶间精密度应≤10%。 2.9 稳定性 2.9.1 试剂稳定性 试剂盒在2℃～8℃密封避光保存，有效期为18个月。在试剂盒有效期满后一个月以内，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1的要求。 2.9.2 校准品复溶稳定性 复溶后校准品在2℃～8℃保存7天，在生化分析仪上同时测试保存期末的校准品和新鲜的校准品，测试结果间的相对偏差应≤10%。 2.9.3 质控品复溶稳定性 复溶后质控品在2℃～8℃保存7天，在生化分析仪上同时测试保存期末的质控品和新鲜的质控品，测试结果间的相对偏差应≤10%。 2.10校准品溯源性
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法 1.实验原理 脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。 尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。NADH 的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。 脲酶 尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－ 谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD ＋+H 2O 2 标本： 2.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：奥林巴斯尿素测定试剂盒试剂1：＋试剂2：6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存 试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的
植物乳杆菌培养基的优化
植物乳杆菌培养基的优化 李达 发酵剂是影响发酵产品质量的关键因素, 它的制备需要有良好的增菌培养基, 使植物乳杆菌得以大量增殖, 从而使其在经过喷雾干燥、冷冻、冻干等处理后有足够的活菌数存活。因此优化植物乳杆菌增菌培养基是一项十分重要的基础研究工作。 植物乳杆菌是泡菜、发酵谷物、发酵肉制品等重要发酵剂的组成菌之一。植物乳杆菌K25分离于西藏灵菇中, 在对其进行研究时发现, 用MRS培养基培养该菌时, 菌落总数仅能达到6.7×107cfu·mL- 1 左右。菌液中活菌数的增加, 可以通过培养基的优化设计来实现, 因此需要对培养基进行优化, 提高菌液中活菌数的含量。本文旨在通过对植物乳杆菌的培养基进行优化, 从而获得活菌数较高的菌液, 为研制高活力的冷冻干燥发酵剂及其产品的开发奠定基础。 1 材料与方法 1.1 试验菌种 L. plantarum K25, 分离于西藏灵菇。 1.2 材料与设备 胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏为生化试剂; K2HPO4、KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4和各种糖类均为分析纯。 722 型分光光度计、立式压力蒸汽灭菌器、超净工作台、分析天平、DNG- 9240 型恒温鼓风干燥箱。 1.3 培养基及培养条件 活化和计数培养采用MRS 培养基, 蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、酵母膏5 g、KH2PO4 2 g、柠檬酸三钠2 g、乙酸钠2 g、葡萄糖20 g、Tween 80 1 mL、MgSO4·7H2O 0.58 g、MnSO4·4H2O 0.25 g, 用蒸馏水定容至1 L, 调pH 6.2~6.4, 121 ℃灭菌15min。 以MRS 培养基为基础, 按照试验设计添加不同生长因子, 接种量0.5%接入150 mL 液体培养基中, 37 ℃静置培养24 h 1.4 方法 1.4.1 不同碳源、氮源、磷源的选择 在MRS 液体培养基的基础上, 分别添加2%(w/v) 乳糖、蔗糖、葡萄糖、果糖作为不同碳源; 选择胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏, 分别加入2.5%( w/v) 作为的不同氮源; 分别加入0.2%( w/v) K2HPO4、KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4作为不同磷源, 其他组分均相同。在培养基中接入活化后植物乳杆菌, 在37 ℃的条件下培养24
谷氨酸脱氢酶的检测方法
GLDH检测方法 (Glutamate Dehydrogenase) SDZ500140 1. 目的 本程序是为了建立谷氨酸脱氢酶（Glutamate Dehydrogenase）的活性检测方法，适用于GLDH成品的活性检测。 2. 检测 2.1原理 α-Ketoglutarate + NH3 + NADH + H+L-Glutamate+ NAD+ +H2O NADH的消耗可以通过340nm的光吸收进行检测。 2.2试剂： A 0.1 M Tris-HCl 缓冲液, pH 8.3 B 1.5M NH4Cl溶液 C 0.225M α-酮戊二酸溶液(pH 7.0-9.0) D 7.5mM NADH溶液 E 酶稀释液: 0.1 M Tris-HCl 缓冲液, pH 8.3 试剂的配制方法详见各试剂配制记录,配制人员需完整填写配制记录。 3 操作规程： 3.1仪器参数设定 若仪器中无已保存参数，按以下参数设定。若已有相关参数，调取后确认。 检测方法：动力学扫描 测量波长：340nm 测量时间：180s 延迟时间：60s 积分时间：120s 系数/因子：6.776 测量温度：30±1℃ 3.2 样品准备 若待测样品为固体，可以按10mg 样品/1000ul 超纯水比例溶解。溶解后于2-8度放置30min。 3.3 检测方法 3.3.1 在石英比色皿中加入2.5ml 试剂A, 200ul试剂B,100ul 试剂C, 100ul D于30度孵育 2min。 3.3.2 加入50ul 样品后, 温和混匀后开始测定。 3.3.3 测定结束后，记录相应数值：起始读数、△A/min test、活性值（U/ml）。 3.3.4 活性值（U/ml）范围为0.1-0.3U/ml，若超出范围，待测样品需经试剂D稀释后再 次进行检测。 3.3.5测定样品前需检测空白反应值，即其他操作不变，用500ul E代替样品加入比色皿后 进行反应,测定△A/min blank。 3.3.6计算公式活性(U/ml) =(△A/min test-△A/min blank)×6.776×df （稀释倍数）
谷氨酸脱羧酶抗体
谷氨酸脱羧酶抗体 文章目录*一、谷氨酸脱羧酶抗体的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、谷氨酸脱羧酶抗体的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、谷氨酸脱羧酶抗体的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、谷氨酸脱羧酶抗体的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状* 五、谷氨酸脱羧酶抗体的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群 2. 不良反应 谷氨酸脱羧酶抗体的基本信息 1、定义谷氨酸脱羧酶(GAD)是将谷氨酸转化成抑制性神经递质γ氨基丁酸(GABA)的限速酶,在胰岛β细胞中存在GAD,并也合成、分泌GABA。谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)是1型糖尿病发病初期的免疫标志,也作为1型糖尿病患者接受治疗时的疗效监测指标。 谷氨酸脱羧酶(GAD)是将谷氨酸转化成抑制性神经递质γ氨基丁酸(GABA)的限速酶,在胰岛β细胞中存在GAD,并也合成、分泌GABA。谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)是1型糖尿病发病初期的免疫标志,也作为1型糖尿病患者接受治疗时的疗效监测指标;1型糖尿病合并Graves病的患者GADA阳性率明显高于不伴有Graves 病的1型糖尿病患者,Graves病患者GAD水平可明显升高,非糖尿病患者GADA的出现并不总是预测1型糖尿病的发生。
2、专科分类神经 3、检查分类免疫检查 4、适用性别男女均适用 5、是否空腹非空腹 谷氨酸脱羧酶抗体的正常值和临床意义 1、正常值ELISA法:阴性。 2、临床意义异常结果: 阳性:GADA在1型糖尿病发病的早期阳性率为38-76%,I级亲属中的阳性率达78-81%,几乎都是GADA65。而GADA67分布很少,2型糖尿病阳性率仅0-4%。 需要检查的人群:若患突然间患有糖尿病“三多一少”的症状,建议去医院检查谷氨酸脱羧酶抗体。 谷氨酸脱羧酶抗体的检查过程及注意事项 1、检查过程备齐用物,标本容器上贴好标签,核对无误后向患者解释以取得合作。露出患者手臂,选择静脉,于静脉穿刺部位上方约4～6cm处扎紧止血带,并嘱患者握紧拳头,使静脉充盈显
血清谷氨酸脱氢酶的检测及对肝病诊断的临床应用
第26卷第1期2004年3月 大连医科大学学报 Journal of Dalian Medical University Vol.26No.1 Mar.2004 血清谷氨酸脱氢酶的检测及对肝病诊断的临床应用 肖晓光1,孙国华1,王 华2 (1.大连医科大学第一临床学院检验科,辽宁大连 116011;2.大连医科大学检验医学院,辽宁大连 116027) 摘要:[目的]通过观察血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)在肝细胞损害性疾病中酶活性的变化情况,来指导临床治疗,并对预后进行判断。[方法]采用德国临床化学学会推荐的α-酮戊二酸法检测谷氨酸脱氢酶,同时检测AST、ALT、TBA及γ-GT等常规生化项目,并作相关性分析,统计有关指标。[结果]对于肝细胞损伤性疾病患者,血清中谷氨酸脱氢酶的活性明显高于健康者和其他疾病患者(P<0.05)。其中急性坏死性肝病患者GLDH阳性率可达100%,急性病毒性肝炎为75.2%,慢性活动性肝炎为59.4%,酒精性肝硬化为66.2%,肝硬化为66%,原发性肝癌为42.1%。[结论]谷氨酸脱氢酶作为肝细胞病变,特别是急性缺血性肝炎和酒精性肝炎的诊断指标 具有重要临床价值,并对指导临床治疗和预后判定具有重要意义。 关键词:谷氨酸脱氢酶;肝损伤;临床应用 中图分类号:R446.1 文献标识码:B 文章编号:1671-7295(2004)01-0048-03 谷氨酸脱氢酶(GLDH)为一种含锌线粒体酶,主要分布于肝脏、心肌和肾细胞线粒体的基质及内膜中,而以肝组织活性最高[1]。它催化谷氨酸脱氢、脱氨最终生成α-酮戊二酸之间的可逆反应[2]。此反应是体内大多数氨基酸经脱氢联脱氨基的关键步骤,也是体内非必需氨基酸由联合脱氨逆向反应生成的重要反应,还是连接氨基酸代谢,三羧酸循环的中心环节,故主要分布于肝细胞线粒体内的GLDH只有在肝细胞受损害时才明显升高[3]。本文利用生化自动分析仪测定了各种肝病患者,相关心、肾等疾病及健康体检者的G LDH活性,并与常规肝功能指标对比,以分析评价其临床应用意义。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 原理:α-酮戊二酸+NADH+NH4+GLDH 谷氨酸+NAD++H2O。在上述反应中,NADH被氧化生成NAD+的速率与GLDH的活性呈正比。在340nm波长下测定NADH的下降速率,即可计算出GLDH的活性。 1.1.2 研究对象:健康对照组为60例各项理化指标正常的体检者。疾病组218例,系大连医科大学第一临床学院各科确诊的住院病人。其中急性缺血性肝炎20例,急性病毒性肝炎25例,慢性活动性肝炎32例,酒精性肝炎12例,肝硬化48例,原发性肝癌24例,胆系疾病15例,脑出血10例,心肌梗塞20例,肾衰12例。 1.1.3 仪器:日立7170S型生化自动分析仪。 1.1.4 试剂:北京世诊中拓生物技术有限公司生产R1(三乙醇胺缓冲液、醋酸铵、EDTA);R1a (ADP、NADH、LD);R2(α-酮戊二酸)。以R1复溶后的R1a与R26:0.24混合作为工作试剂。 1.2 方法 1.2.1 德国临床化学学会推荐优化标准法:血清样品20μL,混合工作试剂250μL,温度37℃,波长340nm,反应时间4min;同时采用临床常规方法测定血清AST、ALT、TBA、γ-GT。 1.2.2 统计方法:单侧95%水平确定参考值范围,进行t检验及相关性分析。 作者简介:肖晓光(1971-),女,大连人,主管检验师。收稿日期:2002-11-21;修回日期:2002-12-10。
谷氨酸脱氢酶(GLDH)测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求百奥泰康
谷氨酸脱氢酶（GLDH）测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法) 适用范围：该产品用于体外定量测定人血清或血浆中谷氨酸脱氢酶的活性。 1.1 产品规格 试剂1:60mL×2，试剂2:20mL×2 ； 试剂1:60mL×1，试剂2:20mL×1； 试剂1:45mL×2，试剂2:15mL×2； 试剂1:45mL×1，试剂2:15mL×1； 试剂1:30mL×1，试剂2:10mL×3； 试剂1:30mL×2，试剂2:10mL×6； 试剂1:300mL×1，试剂2:100mL×1； 试剂1:15mL×1，试剂2:5mL×1； 试剂1:3000mL×1，试剂2:1000mL×1； 192人份(试剂1:51mL，试剂2:17mL)； 1.2组成成分
2.1 外观 试剂R1为无色澄清液体； 试剂R2为无色或淡黄色澄清液体. 2.2 净含量 液体试剂的净含量应不少于标称量。 2.3 试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度 空白吸光度应≥0.8000。 2.3.2 空白吸光度变化率 试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤0.02。 2.4 分析灵敏度 浓度为30 U/L时，其吸光度变化率应≥0.0050 2.5线性 在[1,120] U/L范围内，线性相关系数r≥0.990，在[1,40] U/L范围内绝对偏差应不超过4 U/L，在(40,120] U/L范围内相对偏差应不超过±10%。 2.6精密度 变异系数（CV％）应≤8％。 2.7 批间差 不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。 2.8准确度
回收试验：回收率90%-110%。 2.9稳定性 原包装试剂，在2℃～8℃下有效期为12个月，取失效期的试剂盒检测其试剂空白、分析灵敏度、线性、精密度、准确度应分别符合2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。
糖尿病抗体三项临床意义
糖尿病抗体三项 糖尿病抗体三项分为：胰岛素自身抗体(IAA)、抗胰岛细胞抗体(ICA)和血清抗谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)三个项目。 1、抗胰岛素自身抗体（IAA）： IAA应为未曾用过外源性胰岛素的病人体内检出可与胰岛素相结合的自身抗体。IAA的产生与I型糖尿病的发生有显著相关性。 2、抗胰岛细胞抗体（ICA）: 在胰岛素依赖型糖尿病患者中，抗胰岛细胞抗体的发生率在90%以上。通常在确诊一年后该抗体水平下降。ICA可更早期发现I型糖尿病。非胰岛素依赖型糖尿病患者出现抗胰岛细胞抗体阳性，可能以后会发生胰岛素依赖型糖尿病（IDDM）。胰岛素依赖型糖尿病（IDDM）或称I～型糖尿病是一种渐进的慢性疾病，IDDM具有一个独特的无症状糖尿病前期，该期甚至可持续多年，在此期间，患者胰岛素的早期释放在静脉注射或口服葡萄糖时表现较弱。对于多数病例来说，这些患者血液中含有胰岛细胞自身抗体（ICA）及/或是胰岛素自身抗体（IAA）。ICA能够在临床表现IDDM症状八年前被检测，所以它可作为IDDM的早期指标及防治手段。ICA阳性的患者表明胰岛功能呈进行性下降，当胰岛素早期释放过程完全终止时，临床出现IDDM病症。在IDDM高发病率的人群中及IDDM患者的亲属中进行ICA的早期检
测是非常重要的。 3、血清抗谷氨酸脱羧酶抗体（GAD）: GAD是使谷氨酸转变为神经质γ-氨基丁酸的生物合成酶，广泛存在于动物及人的脑和胰岛组织中，并认为GAD可能是糖尿病自身免疫反应的始动靶抗原，用于Ⅰ型糖尿病的鉴别诊断和预测。 总之糖尿病为β细胞群高危人群做这三种自身抗体（ICA、IAA和GAD）的筛查，有助于防止或减慢该疾病的发生，血清GADA、ICA和IAA的联合检测对早期、准确诊断1型糖尿病,及时规范治疗、预测B 细胞功能衰竭、预测疗效及在高危人群中筛查1型糖尿病有重要临床意义。
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法)产品技术要求baiding
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒（α-酮戊二酸底物法）适用范围：用于体外定量测定人血清中谷氨酸脱氢酶的含量。1.1 规格 1.2 组成：
2.1 外观 2.1.1试剂1：无色液体，无浑浊，无不溶物。 2.1.2试剂2：无色至淡黄色液体。 2.1.3包装外观应整洁，标签字迹清晰，不易脱落。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不低于标示体积。 2.3 试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度 试剂空白吸光度≥0.8。 2.3.2试剂空白吸光度变化率 试剂空白吸光度变化率（ΔA/分）≤0.02。 2.4 分析灵敏度 样本浓度为30U/L时，吸光度变化率（ΔA/分）≥0.0030。
2.5 线性 在[4，120] U/L的范围内，线性相关系数r≥0.990。测试浓度在[4，40] U/L时，绝对偏差应不超过±4 U/L；测试浓度在（40，120] U/L时，相对偏差应不超过±10%。 2.6 精密度 2.6.1重复性 用高、低2个浓度的样本测试试剂盒，各重复测试10次，其变异系数（CV）应不大于10%。 2.6.2批间差 用样本分别测试3个不同批次的试剂盒，每个批次测试3次，其相对极差（R）应不大于10%。 2.7 准确度 与已上市产品进行对比试验，在[4，120] U/L的范围内，线性相关系数r≥0.975。测试浓度在[4，40] U/L时，绝对偏差应不超过±4 U/L；测试浓度在（40，120] U/L时，相对偏差应不超过±10%。 2.8 效期稳定性 原包装试剂盒在2℃～8℃密封避光保存条件下有效期为12个月。有效期满后3个月内测试，应满足2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
重组植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶活力测定实验
重组植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶活力测定实验 一、实验目的 了解原核表达系统 熟悉并掌握粗酶液的制备方法 熟悉并掌握谷氨酸脱羧酶活力的测定方法 熟悉并掌握超声破碎仪及U-V1100紫外可见分光光度计使用方法 二、实验原理 γ-氨基丁酸（GABA）作为一种非蛋白氨基酸，是目前研究较为深入的哺乳动物脑组织一种重要的抑制性神经递质，具有一系列的生理功能，例如降血压功能、治疗癫痫、抗疲劳、提高免疫力等。 谷氨酸脱羧酶（GAD,EC4.1.1.15）是一种磷酸吡哆醛（PLP）类酶，能专一催化L-谷氨酸脱羧成为γ-氨基丁酸（GABA）和CO2。催化效率——即酶的活力是酶的重要参数，研究酶的活力是研究酶性质及应用的基础。本实验通过测定谷氨酸脱羧酶催化产物γ-氨基丁酸产率来定义谷氨酸催化活力。谷氨酸脱羧酶催化反应式如下： L-谷氨酸谷氨酸脱羧酶（GAD）γ-氨基丁酸（GABA）GAD现行测定方法及优缺点 测定方法优点缺点 HPLC法准确灵敏度高操作复杂、测定时间较长氨基酸自动分析仪法稳定操作简单仪器使用复杂、昂贵 纸层析和薄层层析法方便简单稳定性差、适合定性测量 Berthelot比色法灵敏度高、方便简单有游离氨干扰 毛细管电泳法耗材少，环境污染小重现性较差 根据样品的特性及实验的需要，本实验采用Berthelot法测定反应液中GABA。 GABA的测定方法 采用Berthelot法，该方法利用苯酚和次氯酸钠与氨基反应生成蓝绿色物质(次氯酸钠氧化苯酚生成醌，醌和氨基反应生成蓝绿色物质)。Berthelot法对GABA（ω-氨基酸）的响应高，而对L-谷氨酸（α-氨基酸）响应低，所以用Berthelot法可以快速、高灵敏度测定出催化反应产物中的GABA。通过测定一定时间反应液中的GABA的吸光度值从而得到GABA的浓度，最终计算出谷氨酸脱羧酶的活力。 三、实验材料和主要仪器 1、仪器 MIKRO 220R 2205型低温冷冻离心机
人谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA
人谷氨酸脱羧酶自身抗体（GAD-Ab）ELISA试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中GAD-Ab含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中GAD-Ab水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入GAD-Ab抗原、生物素化的抗人GAD-Ab 抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的GAD-Ab呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板：一块（96孔） 2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20000pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成2000pg/mL，10000pg/mL，5000pg/mL，2500pg/mL，1250pg/mL，625pg/mL，312pg/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/mL，临用前15分钟内配制。 如配制5000pg/mL标准品：取0.5ml10000pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3.样品稀释液：1×20ml/瓶。 4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。 5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。 6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul
抗谷氨酸脱羧酶抗体抗GAD
抗谷氨酸脱羧酶抗体(抗GAD) 货号:QY-JB015 产品名称:抗谷氨酸脱羧酶抗体（抗GAD） 标本:血清 规格:24T/48T 抗谷氨酸脱羧酶抗体（抗GAD）公司服务：试剂盒免费代测 产品范围:人,小大鼠,猪,兔,其它动物细胞因子;细胞凋亡,活性多肽,自身抗体,血栓与止血,骨代谢,肝纤维化,肿瘤,激素内分泌,自身抗体科研ELISA检测试剂盒. 待检样本：体液，血清，血浆，细胞培养上清液，尿液，组织匀浆,心房水标本等等。 抗谷氨酸脱羧酶抗体（抗GAD）【检验结果的解释】 1.测定标本OD值≥临界值时为抗体阳性。测定标本OD值<临界值时为抗体阴性。 2.阳性对照OD值不低于1.0且阴性对照OD值不高于0.1时的实验结果有效。否则需重新试验。 【检验方法的局限性】该试验方法仅适用于定性检测和辅助诊断。 【产品性能指标】应使用企业参考品进行检测，其中阴性参考品血清、阳性参考品血清应符合阴阳性参考品血清要求，最低检出限应符合最低检出限血清的检出要求，精密度CV（%）不高于15%，37℃放置6天产品性能稳定。 抗谷氨酸脱羧酶抗体（抗GAD）【注意事项】 1.检测标本尽量避免反复冻融、溶血或长菌，否则可能影响检测结果。 2.不同批号、不同品种试剂不能混用；封板膜不能重复使用。 3.各种试剂使用前要混匀；部分溶液（如洗液等）如有结晶析出，轻微加热或摇匀溶解后不影响使用。 4.请严格按说明书操作，严格控制反应时间和反应温度，各种反应液均需用加液器加注，并经常校对其准确性。 5.反应板开封后不能一次用完时，将剩余板条和干燥剂同时放入塑料袋内封好，置2－8℃可短期保存。 QY-JB053弓形虫抗体(IgG/IgM)规格:24T/48T QY-JB054风疹病毒抗体(IgG/IgM)规格:24T/48T QY-JB055巨细胞病毒抗体(IgG/IgM)规格:24T/48T QY-JB056单纯疱疹病毒I抗体(IgG/IgM)规格:24T/48T QY-JB057瘦肉精(盐酸克伦特罗)规格:24T/48T QY-JB058单纯疱疹病毒I抗体IgG规格:48T/96T QY-JB059单纯疱疹病毒I抗体IgM规格:48T/96T QY-JB060单纯疱疹病毒II抗体IgG规格:48T/96T QY-JB061单纯疱疹病毒II抗体IgM规格:48T/96T QY-JB062巨细胞病毒IgG规格:48T/96T QY-JB063巨细胞病毒IgM规格:48T/96T
谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase ,GDH )试剂盒使用说明
谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase，GDH）试剂盒使用说明 产品简介： GDH和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。 试验中所需的仪器和试剂： 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 产品内容： 提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体20mL×3瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×3支，4℃保存； 试剂三：粉剂×3支，4℃保存； 试剂四：粉剂×3支，-20℃保存。 工作液的配制：临用前取试剂一、试剂二、试剂三和试剂四各一支，将试剂二、三、四转移到试剂一中混合溶解。分三批配制工作液并且进行测定，以防止工作液失效。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400
μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。 2、称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。 二、测定步骤： 预先用蒸馏水调零，工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中保温。依次在比色皿中加入0.05mL粗酶液和 1.0mL工作液，迅速混匀，在340nm波长下记录吸光度A1；然后迅速将比色皿转移到37℃或25℃水浴中，准确反应5分钟；迅速取出比色皿并擦干，在340nm下比色，记录吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。 注意事项： 1、用蒸馏水调零。 2、测定期间粗酶液在冰上放置，以免变性失活。 3、比色皿中反应液的温度必须保持37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种），取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。 4、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。 GDH活性计算： 1、组织中GDH活力的计算: （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol/L的NADH定义为一个酶活力单位。
2540例糖尿病患者谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、酪氨酸磷酸酶抗体(IA―2A)测定及分析
2540例糖尿病患者谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、酪氨酸磷酸 酶抗体(IA―2A)测定及分析 摘要：目的：研究谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）和酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2A）在糖尿病诊断分型中的意义。方法：采用酶联免疫吸附试验法检测273例1型糖尿病 （T1DM）（DM ）和2267例2型DM（T2DM）患者的血清GADA和IA-2A表达水平。结果：1型DM患者中的GADA 和IA-2A两种抗体阳性率分别为55.3%（151/273）和49.8%（136/273）。至少一种抗体为阳性的比例为79.1%（216/273），其比例明显高于仅单一抗体阳性的比率（P15岁者的39.0%（106/273）（P0.05）。2型DM患者中的GADA和IA-2A两种抗体阳性率分别为11.8%（267/2267）和4.9%（112/2267）。至少一种抗体为阳性的比例为14.1%（320/2267），两种抗体均为阳性的比例为16.3%（369/2267）。T1DM组患者的两种抗体阳性率及联合检测的阳性率均明显高于T2DM组。结论：GADA和IA-2A是筛查及诊断T1DM患者的主要血清学指标。GA DA主要适用于1型DM及成人自身免疫性胰岛炎患者，而IA-2A主要适用于<15岁的年幼T1DM患者的诊断。 关键词：糖尿病；谷氨酸脱羧酶抗体；蛋白酪氨酸磷酸
酶抗体 经研究发现，1型DM患者的血液中可检测出谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2A）等多种自身免疫抗体，而这些自身抗体的异常表达可损伤人体胰岛β细胞，导致其不能正常分泌胰岛素。本研究分析了2540例DM患者GADA和IA-2A的表达水平，旨在探讨不同类型DM患者血清中上述两种抗体的分布特征及其临床意义，现报道如下。 1资料与方法 1.1一般资料选择2010年1月-2014年6月于我院内分泌科诊治的DM患者2540例，其中，男1130例，女1410例，年龄6-82岁。所有患者均根据1996年WHO糖尿病诊断标准确诊。根据类型不同，分为两组：1型DM组273例和2型DM组2267例。排除特异性和继发性的糖尿病患者及相关内分泌疾病。两组患者在性别构成比较无统计学差异。 1.2研究方法抽取受试者空腹肘静脉血，离心获得血清后，-20℃冻存备用。采用酶联免疫吸附法检测GADA和 IA-2A的表达水平，所有操作步骤均严格按照试剂盒说明书进行。 1.3 统计学方法采用SPSS 13.0统计软件包进行数据分析。P<0.05为差异有统计学意义。。
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒使用说明
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒使用说明 分光光度法货号：BC1460 规格：50管/48样 产品内容： 提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1支，4℃保存； 试剂三：粉剂×1支，4℃保存； 试剂四：粉剂×1支，-20℃保存。 产品简介： GDH和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。 试验中所需的仪器和试剂： 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）： 提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超
声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3.血清（浆）样品：直接检测。 二、测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、样本测定 （1）工作液的配制：临用前将试剂二、三、四转移到试剂一中混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用； （2）取0.05mL样本和1mL工作液于1mL比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在340nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。 GDH活性计算： 1、血清（浆）中GDH活力的计算: 单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=675×ΔA 2、组织、细菌或细胞中GDH活力的计算: （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 GDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T=675×ΔA÷Cpr
血清谷氨酸脱氢酶检测的临床应用
血清谷氨酸脱氢酶检测的临床应用 第21卷第1期 Ⅻ1年1H 武汉大学学报(学版: MedicalJournalofWuhanUniversity 血清谷氨酸脱氢酶检测的临床应用 胡汉宁贺小玲李小明!陈藕刘芳 武汉大学中南医院检验科;武汉大学基础医学院生物化学教研室,武汉430071 ,0I22No Jan2001 摘要目的:观察血清谷氨酸脱氢酶在肝损害或导致肝损害相关疾病时的变化情况:方法:岛津CI,70.200全 自动生化分析仪采用双试剂双波长法,分别对0.209倒健康者和187例肝胃,胰,恼等疾病患者血清中谷氨酸脱氢 酶活眭进行r检测.作相关性检验,并统计有关指标一结果:显小健康人血清中谷氨酸脱氢酶含量低.其参考范隔 为0～11U/L:肝脏疾病患者血清中谷氨酸脱氢酶的活眭明显高于健康组结论:检测血清中符氨酸脱氢酶的活性 对肝病早期诊断,掌握病情,判断预后有着独特的临床意义.是诊断肝细胞病变,特别是坏死陲肝病的重要指征 主题词谷氨酸脱氢酶:肝/损害;诊断 中图分类号R446112 血清谷氨酸脱氢酶(G1.1】H)存在于人体细胞内 线粒体中主要分布在肝脏,胃,胰腺,肠,脑等机体 重要的器官中.GLDH活性以肝细胞线粒体内最高, 在肝内氨基酸的分解与合成代谢中起重要的作用. 是检测肝实质性损害的一项敏感指标.本文介绍在 全自动生化分析仪上用双试剂双波长速率法,分别 对209倒健康者和187例肝,胃,胰,脑等疾病患者血 清中GLDH的活性进行了检测与同时进行检测的 丙氨酸氨基转移酶(AllT1,.谷氢酰转肽酶(GGT), 总胆汁酸(_rBA)进行比较,显示肝脏疾病患者GLDH 与上述检测项目同时检测对反映肝脏疾患损害的程 度及治疗疗效具有重要的意义 1材料与方法 1.1仪器日本岛津CL-7200全自动生化分析仪 1.2.1试剂GLDH试剂盒批号:GIA42.为英国 RANDOX公司提供.AI.T试剂盒批号:487/00/7,GGT 试剂盒批号:79/00/17,均为上海申能公司提供,TBA 试剂盒批号:246RLX,为日本第一化学株式会社提