不同来源黄芪药材中黄芪甲苷的定量分析
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图 1 黄芪甲苷及黄芪药材高效液相色谱图 A1 对照品 ; B1 黄芪药材 ; 11 黄芪甲苷
214 线性关系考察 精密吸取对照品溶液 (0106 mg ·mL - 1) 4 ,16 ,32 ,64 ,100μL ,分别注入液相色谱 仪 ,以进样量的对数为横坐标 ,以黄芪甲苷峰面积的 对数为纵坐标 ,得线性回归方程为 lg Y = 11451 1 lg X + 21854 2 , r = 01999 2 ,结果表明黄芪甲苷在 0124～ 6100μg ,其对数值与峰面积的对数值呈良好的线性 关系 。 215 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液连续 进样 5 次 ,测定黄芪甲苷峰面积 ,测定结果的 RSD 为 0156 % ,说明仪器精密度良好 。 216 稳定性试验 取同一供试品溶液 ,分别在 0 , 2 ,4 ,8 ,16 ,24 h 检测 。结果黄芪甲苷峰面积 RSD 为 219 % ,说明样品稳定性良好 。 217 重复性试验 取同一产地药材 ,精密称取平行 样品 5 份 ,按供试品溶液制备方法操作 。结果黄芪 甲苷含量 RSD 为 219 % ,说明方法重复性良好 。
[ 收稿日期 ] 2005211214 [ 通讯作者 ] 3 屠鹏飞 ,Tel : (010) 82802750
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至干 ,残渣用甲醇 10 mL 溶解 ,加入氨试液 10 mL ,静 置 30 min ,减压浓缩至干。残渣用 20 %乙腈溶解并定 容至 10 mL ,得 012 g ·mL - 1的供试品溶液 。 213 色谱条件及系统适用性考察 Waters symmetry 色谱柱 C18 (416 mm × 250 mm ,5μm) ,流动相乙腈2 水 (33∶77) ,流速 110 mL·min - 1 ,柱温 30 ℃。蒸发光 散射检测器 :漂移管温度为 40 ℃,灵敏度为 8 ,载气 为氮气 。理论塔板数按黄芪甲苷计不低于 3 000 。 分离度 > 115 。色谱图见图 1 。
和 38 号样品由于黄芪甲苷的含量接近 ,被聚为一 类 ;另外一组黄芪甲苷含量稍低一些的内蒙古巴盟
min 时 ,药材中黄芪甲苷的含量最高 ,故最终确定了 样品的制备方法 。
产地或来源 山西浑源官儿乡官儿村 山西浑源官儿乡官儿村 山西浑源官儿乡官儿村 山西浑源官儿乡官儿村 山西浑源官儿乡厂沟村 山西浑源官儿乡厂沟村 山西浑源官儿乡厂沟村 山西浑源官儿乡穆庄村
等级 、品种 直播四年生 直播五年生 人工栽培二年生 人工栽培三年生 直播二年生 直播三年生 直播四年生 人工栽培二年生
第 31 卷第 11 期 中 国 中 药 杂 志
Vol131 ,Issue 11
2006 年 6 月
China Journal of Chinese Materia Medica
June ,2006
不同来源黄芪药材中黄芪甲苷的定量分析
姜 勇1 , 金 芳2 , 鲍 忠1 , 石子仪1 , 屠鹏飞1 3
等级 、品种
二等品 三等品 四等品 五等品 小节子 中节子 饮片 - 1) 栽培 栽培 栽培 三九万荣提供 栽培 无锡山禾提供 晋新双鹤提供 一年生 二年生 野生膜荚黄芪 ,饮片 栽培 ,饮片 野生 栽培 栽培 ,饮片 野生 ,饮片 膜荚黄芪 ,栽培 ,饮片 野生 ,饮片 栽培 ,饮片 膜荚黄芪 ,野生 栽培 栽培 栽培 野生 野生 野生 成都地奥提供 吉林修正提供 三九邦而康提供 正大青春宝提供 、饮片 - 1) - 1) - 1) - 1) 直播二年生 直播四年生 直播五年生 人工栽培四年生 直播三年生 人工栽培三年生 直播四年生 直播二年生 直播二年生 直播三年生
量 > 1 mg·g - 1 ,另一类黄芪甲苷的含量 < 1 mg·g - 1 。 为了考察转化的完全与否 ,通过加入不同量的氨试
其中黄芪甲苷含量较高的内蒙古固阳的 16 号 ,17 号样品 ,甘肃陇西的 11 号 ,34 号样品 ,陕西的 29 号
液 (测定溶液的 pH ,8～13) 和不同的静置时间 (0～ 45 min) 进行考察 ,结果当 pH ≥11 ,静置时间为 30
Agilent 1100 HPLC 色谱仪 ,二极管阵列检测器 (DAD) ,四元低压梯度泵 ,真空脱气机 ,柱温箱 ,自动 进样器 ,法国 SEDEX 75 蒸发光散射检测器 。乙腈为 色谱纯 ,水为二次重蒸水 。
黄芪甲苷对照品购于中国药品生物制品检定所 (批号 07812200311) ,药材采集或采购于我国 8 个省 共 59 批样品 ,其中包括野生样品 、栽培样品及半野 生样品 (直播品种) 。这些样品均由本院屠鹏飞教授 鉴定为蒙古黄芪 A1 membranaceus var1 mongholicus 或膜荚黄芪 A1 membranaceu 的干燥根 。 2 方法和结果 211 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照 品 4 mg ,加 50 %乙腈溶解并定容至 10 mL 量瓶中 ,摇 匀 ,即得 。 212 供试品溶液的制备 取黄芪药材粉末 210 g (过 60 目筛) ,精密称定 ,用石油醚 60 mL 于索氏提取器中 脱脂 30 min 。取出药材于通风处挥干溶剂 ,置索氏提 取器中 ,加甲醇 60 mL ,提取 215 h 。提取液减压浓缩
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第 31 卷第 11 期 中 国 中 药 杂 志
Vol131 ,Issue 11
2006 年 6 月
China Journal of Chinese Materia Medica
June ,2006
续表 1
药材号 52 53 54 55 56 57 58 59
均回收率为 9916 % ,RSD 为 219 %。
2110 不同产地黄芪样品黄芪甲苷的聚类分析
表 1 黄芪药材样品及黄 芪 甲苷含量测定
药材号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51
产地或来源
内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古包头固阳下湿壕乡 山西浑源 甘肃陇西 甘肃陇西 甘肃陇西 内蒙古 内蒙古 内蒙古 内蒙古包头固阳 内蒙古包头固阳 内蒙古包头固阳 辽宁省抚顺清源乡 河北 (辽宁沈阳通顺药材批发站) 2) 内蒙古 (黑龙江哈尔滨三棵树药材市场) 2) 黑龙江伊春市上甘岭林区 辽宁省朝阳市 内蒙古 (辽宁省营口药材公司) 2) 不详 (辽宁抚顺中药材市场) 2) 辽宁 (辽宁抚顺中药材市场) 2) 辽宁 (辽宁抚顺中药材市场) 2) 辽宁抚顺市小东乡康西村 甘肃省 (陕西省西安市东郊药市) 2) 陕西彬县永络镇秋沟村 甘肃陇西 (陕西省宝鸡市药材公司) 2) 山西省应县 山西大同浑源县 山西绛县古绛镇二里半 甘肃陇西 吉林 山西浑源县 山西浑源 陕西宝鸡 山西浑源恒山 1 # 山西浑源恒山 2 # 内蒙巴盟前旗朝阳榆树 山西浑源青磁窑乡西泥沟刘地 山西浑源青磁窑乡西泥沟北沟 山西浑源青磁窑乡西泥沟北沟 山西浑源青磁窑乡英沟前地 山西浑源青磁窑乡英沟南坡 山西浑源青磁窑乡破兑白白草沟 山西浑源青磁窑乡破兑白上麻地 山西浑源青磁窑乡桥乔沟余地 山西浑源官儿乡官儿村 山西浑源官儿乡官儿村
- 1) - 1) - 1) - 1) 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210
含量/ mg·g - 1
0. 25 0. 67 1. 11 1. 34 0. 91 0. 57 1. 40 0. 97 1. 46 1. 43 1. 70 0. 55 0. 79 0. 67 1. 33 1. 66 1. 65 0. 67 1. 02 0. 72 0. 92 0. 31 0. 69 1. 31 0. 50 1. 01 0. 67 0. 77 1. 80 0. 35 1. 40 0. 12 0. 45 1. 71 0. 82 0. 98 1. 44 1. 78 1. 04 0. 72 0. 53 0. 93 1. 16 0. 63 1. 10 0. 95 1. 26 0. 80 1. 14 1. 13 0. 81
第 31 卷第 11 期 中 国 中 药 杂 志
Vol131 ,Issue 11
2006 年 6 月
China Journal of Chinese Materia Medica
June ,2006
218 回收率试验 采取加样回收法 ,精密称取已知 219 样品测定 精密吸取对照品溶液 1 ,20 μL ,供
含量的同一批样品 5 份 ,每份样品 1 g ,精密加入黄 试品溶液 20μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,以外标两点
芪甲苷对照品溶液 10 mL (0106 g·L - 1) ,按供试品溶 法对数方程计算黄芪甲苷的含量 ,即得 。59 个黄芪
液制备方法制备 ,按上述方法测定 。结果样品的平 样品的测定结果见表 1 。
(11 北京大学 药学院 天然药物化学系 ,北京 100083 ; 21 国家食品药品监督管理局 药品审评中心 ,北京 100038 )
黄 芪 为 豆 科 植 物 蒙 古 黄 芪 Astragalus mem2 branaceus ( Fisch1) Bge1 var1 mongholicus (Bge1) Hsiao 或膜 荚 黄 芪 A1 membranaceus ( Fisch1) Bge1 的 干 燥 根[1] 。黄芪中的主要化学成分包括皂苷类 、黄酮类 及多糖类等[2] 。黄芪中黄芪甲苷的含量测定已有较 多的 文 献 报 道 , 包 括 薄 层 扫 描 、比 色 法 和 HPLC 法[325] ,但以往文献测定的样品数量和考察范围有 限 。本研究采用 HPLC2ELSD 方法 ,对不同来源的 59 批黄芪药材进行了黄芪甲苷的含量测定 ,并比较了 不同产地 、不同来源 (栽培或野生) 、不同生长年限和 不同等级的黄芪药材的质量 ,为今后黄芪药材的栽 培和合理标准的制定提供科学 、可靠的依据 。 1 仪器与试药
收集日期
2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210
含量/ mg·g - 1 0. 64 0. 50 0. 90 0. 84 2. 25 1. 20 0. 82 1. 48
注 :1) 情况不祥 ;2) 括号外注明的是药材的产地 ,括号内是药材的购买地
收集日期
1999207 1999207 1999207 1999207 1999207 1999207 1999207 1999207 2002205 2002205 2002205 2002209 2003211 2002210 2002207 2001212 2001212 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002210 2002210 2002210 2002210 2002210 2002210 2002211 2002210 2003201 2003204
不同产地黄芪样品的黄芪甲苷含量聚类分析结果见 比较繁琐 ,本研究简化了药材的前处理过程 ,使得药
图 2 。从图中可以看出 ,不同产地黄芪药材根据黄 材的分析速度大大加快 。另外 ,考虑到氨试液的加
芪甲苷含量的不同 ,分为两大类 ,一类黄芪甲苷的含 入 ,是为了ห้องสมุดไป่ตู้黄芪中的其他皂苷转化为黄芪甲苷[6] ,
214 线性关系考察 精密吸取对照品溶液 (0106 mg ·mL - 1) 4 ,16 ,32 ,64 ,100μL ,分别注入液相色谱 仪 ,以进样量的对数为横坐标 ,以黄芪甲苷峰面积的 对数为纵坐标 ,得线性回归方程为 lg Y = 11451 1 lg X + 21854 2 , r = 01999 2 ,结果表明黄芪甲苷在 0124～ 6100μg ,其对数值与峰面积的对数值呈良好的线性 关系 。 215 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液连续 进样 5 次 ,测定黄芪甲苷峰面积 ,测定结果的 RSD 为 0156 % ,说明仪器精密度良好 。 216 稳定性试验 取同一供试品溶液 ,分别在 0 , 2 ,4 ,8 ,16 ,24 h 检测 。结果黄芪甲苷峰面积 RSD 为 219 % ,说明样品稳定性良好 。 217 重复性试验 取同一产地药材 ,精密称取平行 样品 5 份 ,按供试品溶液制备方法操作 。结果黄芪 甲苷含量 RSD 为 219 % ,说明方法重复性良好 。
[ 收稿日期 ] 2005211214 [ 通讯作者 ] 3 屠鹏飞 ,Tel : (010) 82802750
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至干 ,残渣用甲醇 10 mL 溶解 ,加入氨试液 10 mL ,静 置 30 min ,减压浓缩至干。残渣用 20 %乙腈溶解并定 容至 10 mL ,得 012 g ·mL - 1的供试品溶液 。 213 色谱条件及系统适用性考察 Waters symmetry 色谱柱 C18 (416 mm × 250 mm ,5μm) ,流动相乙腈2 水 (33∶77) ,流速 110 mL·min - 1 ,柱温 30 ℃。蒸发光 散射检测器 :漂移管温度为 40 ℃,灵敏度为 8 ,载气 为氮气 。理论塔板数按黄芪甲苷计不低于 3 000 。 分离度 > 115 。色谱图见图 1 。
和 38 号样品由于黄芪甲苷的含量接近 ,被聚为一 类 ;另外一组黄芪甲苷含量稍低一些的内蒙古巴盟
min 时 ,药材中黄芪甲苷的含量最高 ,故最终确定了 样品的制备方法 。
产地或来源 山西浑源官儿乡官儿村 山西浑源官儿乡官儿村 山西浑源官儿乡官儿村 山西浑源官儿乡官儿村 山西浑源官儿乡厂沟村 山西浑源官儿乡厂沟村 山西浑源官儿乡厂沟村 山西浑源官儿乡穆庄村
等级 、品种 直播四年生 直播五年生 人工栽培二年生 人工栽培三年生 直播二年生 直播三年生 直播四年生 人工栽培二年生
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June ,2006
不同来源黄芪药材中黄芪甲苷的定量分析
姜 勇1 , 金 芳2 , 鲍 忠1 , 石子仪1 , 屠鹏飞1 3
等级 、品种
二等品 三等品 四等品 五等品 小节子 中节子 饮片 - 1) 栽培 栽培 栽培 三九万荣提供 栽培 无锡山禾提供 晋新双鹤提供 一年生 二年生 野生膜荚黄芪 ,饮片 栽培 ,饮片 野生 栽培 栽培 ,饮片 野生 ,饮片 膜荚黄芪 ,栽培 ,饮片 野生 ,饮片 栽培 ,饮片 膜荚黄芪 ,野生 栽培 栽培 栽培 野生 野生 野生 成都地奥提供 吉林修正提供 三九邦而康提供 正大青春宝提供 、饮片 - 1) - 1) - 1) - 1) 直播二年生 直播四年生 直播五年生 人工栽培四年生 直播三年生 人工栽培三年生 直播四年生 直播二年生 直播二年生 直播三年生
量 > 1 mg·g - 1 ,另一类黄芪甲苷的含量 < 1 mg·g - 1 。 为了考察转化的完全与否 ,通过加入不同量的氨试
其中黄芪甲苷含量较高的内蒙古固阳的 16 号 ,17 号样品 ,甘肃陇西的 11 号 ,34 号样品 ,陕西的 29 号
液 (测定溶液的 pH ,8～13) 和不同的静置时间 (0～ 45 min) 进行考察 ,结果当 pH ≥11 ,静置时间为 30
Agilent 1100 HPLC 色谱仪 ,二极管阵列检测器 (DAD) ,四元低压梯度泵 ,真空脱气机 ,柱温箱 ,自动 进样器 ,法国 SEDEX 75 蒸发光散射检测器 。乙腈为 色谱纯 ,水为二次重蒸水 。
黄芪甲苷对照品购于中国药品生物制品检定所 (批号 07812200311) ,药材采集或采购于我国 8 个省 共 59 批样品 ,其中包括野生样品 、栽培样品及半野 生样品 (直播品种) 。这些样品均由本院屠鹏飞教授 鉴定为蒙古黄芪 A1 membranaceus var1 mongholicus 或膜荚黄芪 A1 membranaceu 的干燥根 。 2 方法和结果 211 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照 品 4 mg ,加 50 %乙腈溶解并定容至 10 mL 量瓶中 ,摇 匀 ,即得 。 212 供试品溶液的制备 取黄芪药材粉末 210 g (过 60 目筛) ,精密称定 ,用石油醚 60 mL 于索氏提取器中 脱脂 30 min 。取出药材于通风处挥干溶剂 ,置索氏提 取器中 ,加甲醇 60 mL ,提取 215 h 。提取液减压浓缩
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2006 年 6 月
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June ,2006
续表 1
药材号 52 53 54 55 56 57 58 59
均回收率为 9916 % ,RSD 为 219 %。
2110 不同产地黄芪样品黄芪甲苷的聚类分析
表 1 黄芪药材样品及黄 芪 甲苷含量测定
药材号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51
产地或来源
内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古巴盟朝阳乡 内蒙古包头固阳下湿壕乡 山西浑源 甘肃陇西 甘肃陇西 甘肃陇西 内蒙古 内蒙古 内蒙古 内蒙古包头固阳 内蒙古包头固阳 内蒙古包头固阳 辽宁省抚顺清源乡 河北 (辽宁沈阳通顺药材批发站) 2) 内蒙古 (黑龙江哈尔滨三棵树药材市场) 2) 黑龙江伊春市上甘岭林区 辽宁省朝阳市 内蒙古 (辽宁省营口药材公司) 2) 不详 (辽宁抚顺中药材市场) 2) 辽宁 (辽宁抚顺中药材市场) 2) 辽宁 (辽宁抚顺中药材市场) 2) 辽宁抚顺市小东乡康西村 甘肃省 (陕西省西安市东郊药市) 2) 陕西彬县永络镇秋沟村 甘肃陇西 (陕西省宝鸡市药材公司) 2) 山西省应县 山西大同浑源县 山西绛县古绛镇二里半 甘肃陇西 吉林 山西浑源县 山西浑源 陕西宝鸡 山西浑源恒山 1 # 山西浑源恒山 2 # 内蒙巴盟前旗朝阳榆树 山西浑源青磁窑乡西泥沟刘地 山西浑源青磁窑乡西泥沟北沟 山西浑源青磁窑乡西泥沟北沟 山西浑源青磁窑乡英沟前地 山西浑源青磁窑乡英沟南坡 山西浑源青磁窑乡破兑白白草沟 山西浑源青磁窑乡破兑白上麻地 山西浑源青磁窑乡桥乔沟余地 山西浑源官儿乡官儿村 山西浑源官儿乡官儿村
- 1) - 1) - 1) - 1) 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210 2003210
含量/ mg·g - 1
0. 25 0. 67 1. 11 1. 34 0. 91 0. 57 1. 40 0. 97 1. 46 1. 43 1. 70 0. 55 0. 79 0. 67 1. 33 1. 66 1. 65 0. 67 1. 02 0. 72 0. 92 0. 31 0. 69 1. 31 0. 50 1. 01 0. 67 0. 77 1. 80 0. 35 1. 40 0. 12 0. 45 1. 71 0. 82 0. 98 1. 44 1. 78 1. 04 0. 72 0. 53 0. 93 1. 16 0. 63 1. 10 0. 95 1. 26 0. 80 1. 14 1. 13 0. 81
第 31 卷第 11 期 中 国 中 药 杂 志
Vol131 ,Issue 11
2006 年 6 月
China Journal of Chinese Materia Medica
June ,2006
218 回收率试验 采取加样回收法 ,精密称取已知 219 样品测定 精密吸取对照品溶液 1 ,20 μL ,供
含量的同一批样品 5 份 ,每份样品 1 g ,精密加入黄 试品溶液 20μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,以外标两点
芪甲苷对照品溶液 10 mL (0106 g·L - 1) ,按供试品溶 法对数方程计算黄芪甲苷的含量 ,即得 。59 个黄芪
液制备方法制备 ,按上述方法测定 。结果样品的平 样品的测定结果见表 1 。
(11 北京大学 药学院 天然药物化学系 ,北京 100083 ; 21 国家食品药品监督管理局 药品审评中心 ,北京 100038 )
黄 芪 为 豆 科 植 物 蒙 古 黄 芪 Astragalus mem2 branaceus ( Fisch1) Bge1 var1 mongholicus (Bge1) Hsiao 或膜 荚 黄 芪 A1 membranaceus ( Fisch1) Bge1 的 干 燥 根[1] 。黄芪中的主要化学成分包括皂苷类 、黄酮类 及多糖类等[2] 。黄芪中黄芪甲苷的含量测定已有较 多的 文 献 报 道 , 包 括 薄 层 扫 描 、比 色 法 和 HPLC 法[325] ,但以往文献测定的样品数量和考察范围有 限 。本研究采用 HPLC2ELSD 方法 ,对不同来源的 59 批黄芪药材进行了黄芪甲苷的含量测定 ,并比较了 不同产地 、不同来源 (栽培或野生) 、不同生长年限和 不同等级的黄芪药材的质量 ,为今后黄芪药材的栽 培和合理标准的制定提供科学 、可靠的依据 。 1 仪器与试药
收集日期
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含量/ mg·g - 1 0. 64 0. 50 0. 90 0. 84 2. 25 1. 20 0. 82 1. 48
注 :1) 情况不祥 ;2) 括号外注明的是药材的产地 ,括号内是药材的购买地
收集日期
1999207 1999207 1999207 1999207 1999207 1999207 1999207 1999207 2002205 2002205 2002205 2002209 2003211 2002210 2002207 2001212 2001212 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002209 2002210 2002210 2002210 2002210 2002210 2002210 2002211 2002210 2003201 2003204
不同产地黄芪样品的黄芪甲苷含量聚类分析结果见 比较繁琐 ,本研究简化了药材的前处理过程 ,使得药
图 2 。从图中可以看出 ,不同产地黄芪药材根据黄 材的分析速度大大加快 。另外 ,考虑到氨试液的加
芪甲苷含量的不同 ,分为两大类 ,一类黄芪甲苷的含 入 ,是为了ห้องสมุดไป่ตู้黄芪中的其他皂苷转化为黄芪甲苷[6] ,