利用DAISYII体外模拟培养法测定真消化率
体外法优化玉米——杂粕型饲粮的非淀粉多糖酶谱及其对育肥猪肠道微生物的影响
体外法优化玉米——杂粕型饲粮的非淀粉多糖酶谱及其对育肥猪肠道微生物的影响邓富丽;申丹;钟儒清;张顺芬;李滔;孙曙东;陈亮;张宏福【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2022(55)16【摘要】【目的】利用体外模拟法优化玉米—杂粕型饲粮的非淀粉多糖(NSP)酶谱,并分析优化的非淀粉多糖酶谱对饲粮养分消化率和育肥猪肠道微生物组成和结构的影响,为饲粮高效利用和精准饲养提供数据支撑和理论参考。
【方法】试验一在育肥猪玉米—杂粕型饲粮中分别添加不同水平的木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、α-半乳糖苷酶、β-甘露聚糖酶和果胶酶6种NSP酶,采用胃—小肠体外模拟法测定体外回肠干物质消化率(IVIDMD);取IVIDMD达到最大值时各NSP酶的添加水平为该NSP酶0编码水平,按照六元二次回归正交旋转组合设计,进行体外消化试验,建立IVIDMD与NSP酶添加量的六元二次回归方程,筛选出玉米—杂粕型饲粮最优NSP酶谱(OEC);利用胃—小肠—大肠体外模拟消化法分析测定添加OEC前后饲粮的体外干物质消化率(IVDMD)、体外能量消化率(IVGED)和体外消化能(IVDE),以验证OEC的效果。
试验二按照单因素完全随机设计,选用16头健康、体重相近去势公猪(117.8±1.66 kg),随机分为2个处理组,每个处理8头猪,对照组饲喂玉米—杂粕型基础饲粮,加酶组在基础饲粮中添加OEC;在试验开展第18天采用直肠擦拭法采集猪新鲜粪便,利用16S rRNA基因高通量测序对粪便微生物菌群的多样性及相对丰度进行分析,并进行功能预测。
【结果】(1)在本试验条件下,玉米—杂粕型饲粮OEC为:纤维素酶1003 U·kg^(-1)、木聚糖酶18076 U·kg^(-1)、β-葡聚糖酶1377 U·kg^(-1)、β-甘露聚糖酶14765 U·kg^(-1)、α-半乳糖苷酶337 U·kg^(-1)和果胶酶138 U·kg^(-1);(2)在玉米—杂粕型饲粮中添加OEC使IVDMD由73.44%显著提高到76.26%(P<0.01),IVGED由74.03%显著提高到76.45%(P=0.01),IVDE由14.97 MJ·kg^(-1)显著提高到15.58 MJ·kg^(-1)(P<0.01);(3)在门水平上,共筛选出了12个相对丰度大于0.1%的菌门,其中Bacteroidota(拟杆菌门)、Firmicutes(厚壁菌门)和Spirochaetota(螺旋体门)为优势菌门,三者之和在组内占比达96%以上;(4)在属水平上,饲粮中添加OEC显著增加norank_f_F082,norank_f_Bacteroidales_RF16_group,Bacteroides(拟杆菌属)和Roseburia(氏菌属)的相对丰度(P<0.05),Eubacterium_ruminantium_group(P=0.083)有增加的趋势,而Oscillibacter(颤杆菌克)的相对丰度显著降低(P<0.05),Clostridium_sensu_stricto_1和norank_f__norank_o__WCHB1-41(P=0.083)有降低的趋势(P=0.052)。
体外模拟法测定婴儿奶粉中蛋白质的消化率
跖
与人 体 消化 吸 收养 分 间存 在 很 大差 异 ， 不 足 以 准 确 地
％ 驺 ∞
３ 结 果
３． １ 各 种 粉 中 蛋 白 质 的 含 量
反 映 出 蛋 白 的 实 际 营 养 价 值 。人 体 及 动 物 实 验 法 是 测
Ⅵｎ Ⅳ ｗ． ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ｄ ａ ｉ ｒ ｙ． ｎｅ ｔ
中 国 乳 品 工 业
ｄ ａ／ ｒ ｙＩ ＮＤＵ Ｓ Ｔ Ｒ Ｙ
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体 外模 拟法测 定婴儿奶粉 中蛋 白质 的消化率
任大毫 ， 郭钨 ， ■贵成
量 进 行 测 定 是 很 有 必 要 的 。本 文 选 用 体 外 模 拟 法 测 定
（ ２ ）体 外 模 拟 消 化
① 体外 胃 的消化 。配 置 １ ０ ０ ｍＬ 奶样 （ 含２ ｇ 蛋 白
质） ， 于３ ７℃ 水 浴 锅 中 预 热 １ ０ ｍｉ ｎ。 加入 浓度 为１ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 的 ＨＣ１ 调ｐ Ｈ 值 至 ３， 加 入 ０ ． ０ ４ ｇ胃 蛋 白 酶 和 ０ ． ０ ６ ｇ 凝 乳
Ａｎａ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｍ ｅ ｔ ｈｏｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈｅ ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎａ ｔ ｉ ｏｎ ｏｆ ｉ ｎｆ ａ ｎｔ ｆ ｏ ｍ ｕ ｒ ｌ ａ ｐｒ ｏｔ ｅ ｉ ｎ ｄｉ ｇｅ ｓ ｔ ｉ ｂｉ ｌ ｉ ｔ ｙ
ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ
大 的产业 嘲 。一 些 不 法 分 子 为 了 牟 取 暴 利 ， 用 不 易 消 化
模拟肠道消化实验报告
一、实验目的为了探究食物在人体肠道中的消化过程，本实验采用模拟肠道消化方法，对某种食物进行体外消化实验，观察食物在模拟肠道环境中的消化情况，并分析消化产物。
二、实验材料1. 实验试剂：模拟消化液、酶制剂、pH缓冲液、指示剂等；2. 实验器材：离心机、恒温箱、分光光度计、消化装置、烧杯、试管等；3. 实验样品：某种食物（如面粉、米饭等）。
三、实验方法1. 模拟消化液的制备：根据模拟肠道消化液成分，配制pH值为6.8的缓冲液，加入适量的消化酶，使酶浓度与人体肠道消化酶浓度相当。
2. 样品处理：将实验样品粉碎，过筛，称取适量样品置于烧杯中，加入适量的模拟消化液，搅拌均匀。
3. 模拟消化过程：将烧杯置于恒温箱中，模拟人体肠道温度（37℃），消化时间为2小时。
4. 消化产物检测：消化结束后，将消化液离心，取上清液进行以下检测：（1）蛋白质含量测定：采用双缩脲法检测消化液中的蛋白质含量；（2）淀粉含量测定：采用碘液法检测消化液中的淀粉含量；（3）脂肪含量测定：采用索氏抽提法检测消化液中的脂肪含量；（4）氨基酸含量测定：采用高效液相色谱法检测消化液中的氨基酸含量。
5. 数据分析：将实验数据与对照样品进行对比分析，评估实验样品在模拟肠道环境中的消化情况。
四、实验结果1. 蛋白质含量：实验样品在模拟肠道环境中的蛋白质含量较对照样品降低，说明蛋白质在模拟消化过程中得到了部分分解。
2. 淀粉含量：实验样品在模拟肠道环境中的淀粉含量较对照样品降低，说明淀粉在模拟消化过程中得到了部分分解。
3. 脂肪含量：实验样品在模拟肠道环境中的脂肪含量较对照样品降低，说明脂肪在模拟消化过程中得到了部分分解。
4. 氨基酸含量：实验样品在模拟肠道环境中的氨基酸含量较对照样品增加，说明蛋白质在模拟消化过程中被分解为氨基酸。
五、实验结论本实验采用模拟肠道消化方法，对某种食物进行了体外消化实验，结果表明：1. 实验样品在模拟肠道环境中的蛋白质、淀粉和脂肪含量均有所降低，说明这些营养成分在模拟消化过程中得到了部分分解；2. 实验样品在模拟肠道环境中的氨基酸含量增加，说明蛋白质在模拟消化过程中被分解为氨基酸。
n07第七章 消化率的测定
饲料指示剂添加量:3%
粪中CF含量: 40%
粪中指示剂含量:6%
CF消化率= 100 － 3 × 40 ×100 6 40 = 50
消化能值的计算
直接测定
根据消化试验结果和结合能值测定进行 DE = （GE - FE）/采食量（kg） 例如
体重50Kg的猪，每日食入日粮2Kg，含总能33.47MJ，每日排粪中的总能为 8.34MJ，计算其采食饲料的的消化能。 饲料消化能 = （33.47-8.34）/2 =12.57（MJ/Kg）
第二组
基础日粮 + 被测饲料
试验期
基础日粮
消化率的计算
D(％) ＝ (B-A) X100 ＋ A F
式中：D为被测饲料养分消化率 A为基础饲粮养分消化率 B为混合饲粮养分消化率
F为被测饲料养分占混合饲粮该养分的比例。
假定
基础饲粮养分消化率不变 养分间无互作效应
四、消化试验的基本步骤与要求
1、动物选择 2、日粮配制 3、试验步骤 4、食糜的收集和处理
全收粪法养分消化率计算
例 1：测定仔猪饲粮CP消化率
日采食量：1000g， 饲粮CP含量：16% 日排粪量：250g， 粪中CP含量：12% CP消化率=
( 1000×16%-250×12%）
（1000×16%）
×100
= 81.2%
指示剂法养分消化率计算
例 2: 某饲粮消化实验结果如下,计算CF消化率
消化率计算公式
（食入养分 - 粪中养分） X 100% 表观消化率= 食入养分 食糜养分组成
饲料中未消化的养分; 消化道分泌物; 消化道脱落细胞; 消化道微生物及其代谢产物。
利用DAISYII体外模拟培养法测定真消化率
利用DAISY II 体外模拟培养法测定真消化率A. 试剂a) 缓冲溶液A：g/LKH2PO4 10.0MgSO4•7H2O 0.5NaCl 0.5CaCl2•2H2O 0.1尿素(试剂级) 0.5b) 缓冲溶液B：g/LNa2CO3 15.0Na2S•9H2O 1.0c) 瘤胃液接种物。
d) 30 g/L十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液。
称取18.61 g乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA,化学纯)和6.81g四硼酸钠(Na2B4O7·10H2O)同放入1 000 mL烧杯中,加少量水加热溶解后,再加入30 g十二烷基硫酸钠和10 mL乙二醇乙醚。
称取4.65 g无水磷酸氢二钠，置于另一烧杯中， 加少量水，微微加热溶解后倾于第一个烧杯中，稀释至1 000 mL。
此溶液pＨ在6.9~7.0左右（一般不需调整）。
(c) 无水亚硫酸钠（Na2SO3）。
(d) 丙酮：无色，并且蒸发后无残渣。
B.设备a) DAISYII 体外模拟培养箱b) 过滤装置- ANKOM F57滤袋c) 封口机d) 量筒– 1 L & 500 mLe) 热水瓶–2个f) 过滤用奶酪布g) ANKOM 220 纤维素分析仪C. 步骤a) 滤袋和样品准备1)将F57 滤袋在丙酮中浸泡3-5 min，然后放在通风橱中自然干燥。
用丙酮浸泡的目的是除掉表面剂，否则会影响微生物消化。
对每个F57 滤袋称重，记录质量(m1)。
将天平归零，并向滤袋中直接称取0.25 g 样品 (m)注：进行48 h消化研究时，样品量也可以为0.5 g。
然而，最近研究表明样品量为0.25 g 时测定结果更准确。
2) 将每个滤袋封口，并防入Daisy II体外模拟培养箱消化罐中(每个罐中最多可以放25 样品)。
样品应平衡分布在消化罐分隔的两边。
同时至少包括一个空白滤袋，用于确定测定结果校正因子(C1)。
b) 混合缓冲溶液准备(每个消化罐)1) 将缓冲溶液A和B进行预热(39°C)。
消化率测定方法
消化率测定方法
消化率的测定呀，可是个挺有趣的事儿呢。
一种常见的方法就是体外法。
这就像是在实验室里给食物和消化液来一场模拟的消化之旅。
把食物和模拟的消化液放在一起，就像给它们创造了一个小小的消化战场。
比如说，我们可以模拟胃里的酸性环境，还有小肠里的各种消化酶的作用。
然后观察食物在这个模拟环境里被分解的程度，通过一些仪器来检测剩下的物质，就能大概算出消化率啦。
这种方法的好处呢，就是不需要用到小动物或者人来做实验，比较方便快捷，就像走了个捷径似的。
还有体内法呢。
体内法就比较直接啦，是在动物或者人身上直接进行测定的。
如果是用动物做实验的话，会给动物喂特定的食物，然后收集它们的粪便。
你想啊，动物吃进去的东西，没有被消化的就会拉出来，通过比较吃进去的和拉出来的食物的营养成分，就能算出消化率了。
不过这个过程可需要特别细心哦，要准确地记录动物吃的量，还要保证收集粪便的完整性，可不能有遗漏呢。
要是在人身上测定，也是类似的道理，不过操作起来会更复杂一些，毕竟人可不像小动物那么听话呀。
另外，还有一种叫指示剂法的。
这个方法就像是给食物加了个小标签。
在食物里加入一种特殊的指示剂，这种指示剂不会被消化吸收，但是会跟着食物一起在消化道里旅行。
然后通过检测粪便或者其他排泄物里指示剂的含量，再结合食物中营养成分的变化，就能算出消化率了。
这就好比我们跟着这个小标签，看看食物在身体里到底经历了什么，哪些被消化了，哪些被剩下了。
消化率的测定方法各有各的妙处，它们就像不同的小侦探，从不同的角度去探索食物在我们身体里的消化秘密呢。
_菊苣体外干物质消化率近红外分析模型的建立
法，酶溶液选择与 配 制 参 照 ＪＬ Ｄｅ Ｂｏｅｖｅｒ［６］的 方 法，即 采 用 ０．２％的胃蛋白酶（Ｓｉｇｍａ，１∶１００ ００）溶 液 和 １０ｇ·Ｌ－１的 纤 维素酶（Ｏｎｏｚｕｋａ Ｒ－１０）溶 液，消 化 设 备 为 ＡＮＫＯＭ ＤａｉｓｙⅡ 型体外模拟培养箱，滤袋结构为２５μｍ 孔 隙 三 维 结 构，每 袋 采样量０．２５～１０ｇ，测 定 范 围 ０％ ～１００％，控 温 范 围 为 （４５ ±０．１）℃，结果标准 差 ≤０．１％，重 复 性 精 度 ≤０．２％。消 化 步骤按 ＡＮＫＯＭ ＤａｉｓｙⅡ 型 体 外 模 拟 培 养 法，称 取 一 定 量 的 样品装 入 Ｆ５７ 滤 袋 中，封 口，放 入 消 化 罐 中 恒 温 ４０ ℃ 各 消 化２４ｈ。每份样品平行测定三 次 取 均 值，结 果 以 干 物 质 （％） 表示。 １．４ 建立 ＮＩＲＳ定量分析模型
Ｔａｂｌｅ ２ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ ＮＩＲＳ ｍｏｄｅｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｉｇｈｔ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＩＶＤＭＤ
编号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８
光谱预处理 ｄｂ１ ｄｓ２
ｎｃｌ＋ｄｂ１ ｄｓ２
ｄｇ１＋ｎｌｅ ｍｆ＋ｄｂ１＋ｎｌｅ
２ 结 果 与 讨 论
２．１ ＩＶＤＭＤ 测定结果 样品ＩＶＤＭＤ 测定结果如表 １ 所 示，校 正 集 和 验 证 集 的
最小值、最大值、平均值和标准差都比较接 近，样 品 间ＩＶＤ－ ＭＤ 变幅很大，基 本 上 可 以 覆 盖 当 前 品 种 可 能 出 现 的 ＩＶＤ－ ＭＤ 变化范围，样品具有较强的代表性，可以很好地用于建
验证体外消化的方法与评价_概述及解释说明
验证体外消化的方法与评价概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在探讨体外消化的方法与评价，针对这一主题进行综述和解释。
随着生物科技的发展，体外消化作为一种重要的研究手段被广泛应用于生命科学领域，尤其在食品营养学和消化疾病研究中具有重要意义。
1.2 文章结构本文将按以下顺序组织：首先介绍整篇文章的大纲结构，并详述各个部分的内容安排。
然后进入正文部分，逐步展开对方法与评价的概述、验证重要性的解释以及最后得出的结论。
1.3 目的本文旨在向读者介绍体外消化方法与评价方面的知识，并深入探讨其在实验设计和结果可信度方面的重要性。
通过详细描述相关概念、技术和原理，希望能够给读者提供一个全面而清晰的认识，从而增强他们对于该领域的理解和应用能力。
以上是文章“1. 引言”部分所包含内容，请您根据需要进一步完善和调整。
2. 正文体外消化是一种常见的实验方法，用于模拟人体内消化过程，以便研究食物的消化和吸收情况。
该方法广泛应用于食品科学、药物开发和营养学等领域中。
在体外消化实验中，通常需要模拟口腔、胃和小肠三个部位的消化过程。
首先是口腔阶段，通过加入唾液来模拟咀嚼和混合食物的过程；接着是胃阶段，将酸性胃液加入样品中，模拟胃酸对食物的分解作用；最后是小肠阶段，添加碱性液体以调节pH值，并加入胰液来模拟小肠酶对食物的进一步分解。
对于每个阶段的体外消化实验，需要合理选择试剂配比和温度条件，并进行适当的时间控制。
为了评估消化效果，可以测量营养物质（如蛋白质、脂肪等）的降解率或者采用特定指标（如酶活性）来评估关键成分的变化。
此外，在进行实验前还需考虑是否需要添加辅酶、金属离子或其他辅助物质以提高消化效果。
同时，需要注意防止可能的实验干扰因素，如光照、氧化等。
体外消化实验的结果可用于研究食物的生物利用率、营养价值和口感特性。
通过模拟人体内消化过程，我们可以了解不同食物在机体中的代谢情况，并为开发更好的食品添加剂、制药工艺和营养配方提供参考依据。
体外模拟胃肠消化法在食物消化行为中的研究进展
体外模拟胃肠消化法在食物消化行为中的研究进展作者：那吉杨婷赵檑来源：《食品界》2021年第11期摘要：人体胃肠道在食物消化以及营养物质吸收过程中具有极其重要的地位与作用。
但由于在研究人体胃肠功能过程中存在一定的伦理性问题，若使用体外人工模拟胃肠消化系统则能够有效解决此类问题，这将有助于促进胃肠道功能及食物消化行为方面的研究。
基于此，本文以体外胃肠模拟消化概述为切入点，研究并分析体外模拟胃肠消化法在食物消化行为方面的研究现状，展望未来体外模拟胃肠系统的研究与应用进程，以期能为体外模拟消化的研究工作者提供一定的参考。
关键词：体外模拟胃肠系统;人工模拟;食物消化行为引言食物进入人体经咀嚼后，会在胃部中停留约8min-3h，之后才会被运输到小肠或十二指肠，其在胃、肠道的消化情况受pH值、消化酶、无机盐等多种生理因素的影响。
BOUAYED J等人发现胃消化作用能对植物中的多酚和黄酮等抗氧化活性成分的释放和吸收产生较大影响。
不可否认的是，直接使用人体进行消化实验所得数据更为精确，但由于在研究人体胃肠功能过程中存在一定的伦理性问题，研究结果还可能存在个体差异，故难以在实验过程中得到普及。
而人体外模拟消化模型因具有方便易于控制、成本低、可以一次检测多个样品等优点而受到广大科学研究工作者的青睐。
体外模拟胃肠系统（ivHGSS）是基于人类胃肠中各种生理机制在实现对食物消化作用的模拟科学研究体系，是根据人体胃肠消化液的成分及消化环境建立起来的体外消化环境，其能在一定程度上真实模仿人体内环境，主要可适用于替代生物活体的动物实验和科学研究。
该方法于1999年由Garrett等人最早提出，并成功将其应用于测定婴儿食品中β-胡萝卜素的生物利用度。
现阶段，体外胃肠模拟系统主要可分成三类：单相静态、半连续稳态与连续动态，被广泛应用在食物胃肠代谢动力学、食物营养物质生物利用评估及其重金属残留评估及等方面。
本文首先分析了体外模拟胃肠模型的分类，在此基础上针对体外模拟胃肠系统在食物消化行为中的研究进展做出了综述，以期进一步扩大体外模拟胃肠消化系统的应用范围，为体外模拟胃肠系统在食物消化行为方面的研究提供更多的思路与参考。
两级离体消化率法测定的原理与主要步骤
两级离体消化率法测定的原理与主要步骤1. 了解两级离体消化率法说到两级离体消化率法，首先得问一句：你知道我们吃的东西是怎么消化的吗？别急，今天咱们就来聊聊这个“消化之旅”。
简单来说，这个方法是用来评估食物在肚子里能被分解成多少营养成分的。
就像是把美味的饭菜送到一个“测试舱”，看它能不能被“消化系统”友好地处理掉。
1.1 原理揭秘这方法的原理其实很简单，基本上就是模仿我们身体里的消化过程。
你想想，咱们吃的东西在肚子里经历了多少“折腾”：先是咀嚼，再是胃酸的“洗礼”，最后肠道里的细菌和酶来帮忙。
两级离体消化率法就是把这些步骤简化到实验室里，让食物在“模拟”的环境中接受测试。
1.2 重要性那么，这个法子到底有什么用呢？说白了，研究人员可以通过这种方法来了解不同食物的营养价值和消化能力。
比如，有些食物虽然看起来很健康，但经过测试后发现其实消化率不高，最后营养吸收的效果可能就大打折扣了。
就像是你买了个苹果，结果咬了一口发现里面全是坏的，真是让人心塞。
2. 主要步骤说到操作流程，那就得细细说道了。
要进行这个测试，步骤虽然多，但不难，跟做一道简单的家常菜差不多。
2.1 准备样品首先，你得准备好样品。
这就像备菜一样，选择你要测试的食物，可能是米饭、面条，甚至是蔬菜。
然后，把这些食物切成小块，越小越好，便于后面的处理。
对了，这里可别马虎，卫生问题可是第一位的！2.2 体外消化过程接下来就是正式的“消化”过程了。
首先把样品放进一个特制的容器，添加一定比例的消化酶和胃液，模拟咱们的胃。
这一步得讲究，温度、时间都要控制得当。
你可以想象一下，就像你把一锅水放在火上，等它煮沸。
然后，经过一段时间的“炖煮”，样品就会被分解得七七八八。
2.3 收集数据最后一步就是收集数据了。
通过过滤、离心等方式，把消化后的样品和未消化的部分分开。
然后，分析这些样品，看看有多少营养成分被释放出来，消化率到底是多少。
简而言之，就是看看你的食物在“胃里”表现得如何。
回肠消化率研究方法
回肠消化率研究方法引言：回肠是消化系统中的重要部分，起着吸收和消化食物的作用。
了解回肠消化率对于研究食物消化过程和人体健康具有重要意义。
本文将介绍回肠消化率的研究方法。
一、动物实验研究方法1.1 动物模型选择在回肠消化率研究中，常使用小鼠、大鼠、豚鼠等动物作为实验模型。
选择适合的动物模型是保证研究结果准确性的基础。
1.2 实验前准备在进行实验之前，需要对实验动物进行适当的饲养和管理，确保实验动物的健康状况和饮食习惯，以减小实验误差。
1.3 实验操作实验操作包括给予实验动物特定食物或药物，并观察其在回肠中的消化过程。
可以通过活体解剖、组织切片、染色等方法来观察和分析回肠消化率。
1.4 数据分析通过对实验结果的定量分析和统计处理，可以得出回肠消化率的相关数据和结论。
常用的数据分析方法包括t检验、方差分析等。
二、体外研究方法2.1 制备回肠组织样本通过解剖实验动物，取得回肠组织样本，并进行适当的处理和保存，以保证实验的准确性和可靠性。
2.2 体外模拟消化利用体外模拟消化装置，模拟人体消化道中的酸碱环境和酶的作用，将待研究的食物样品与模拟消化液混合，进行一定时间的消化反应。
2.3 消化产物分析通过对消化反应产物的分析，包括pH值的测定、酶活性的检测等，可以获得回肠消化率的相关数据。
2.4 数据处理与分析通过对实验数据的处理和分析，可以得出回肠消化率的定量结果，并进行统计学分析，以验证实验结果的可靠性。
三、人体研究方法3.1 临床观察研究通过对一定数量的人群进行观察和调查，收集回肠消化率相关的信息，包括饮食习惯、消化道疾病等，从而了解回肠消化率的变化规律。
3.2 粪便分析通过对人体粪便样本的收集和分析，可以评估回肠消化率的高低。
常用的分析指标包括粪便中未消化食物残留的比例、粪便中特定酶活性的检测等。
3.3 呼气气体分析通过检测人体呼气气体中特定物质的含量，如氢气、二氧化碳等，可以间接评估回肠消化率的情况。
几种蛋白原料的体外消化率的测定方法的比较
几种蛋白原料的体外消化率的测定方法的比较摘要：试验分别采用胃蛋白酶-胰蛋白酶两步法、肉食性鱼类（如鲈鱼）消化道粗酶提取液消化法和草食性鱼类（如草鱼）消化道粗酶提取液消化法测定了酪蛋白、鱼粉、豆粕、菜籽粕、棉籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉等7种蛋白质原料的体外消化率。
3种测定方法中，鱼粉的消化率差异不显著（P>0.05）；豆粕、菜籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉用两步法和草鱼消化酶法测定的消化率无显著差异（P>0.05）；棉籽粕消化率用两步法测定值高于用消化酶法的测定值，差异极显著（P<0.01）；豆粕、菜籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉的消化率用两步法比用鲈鱼消化酶测定的值高，差异极显著（P<0.01）；草鱼消化酶法和鲈鱼消化酶法对酪蛋白的消化率无显著差异（P>0.05），而对于豆粕、菜籽粕、棉籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉草鱼消化酶法测定值高于鲈鱼消化酶法的测定值，差异极显著（P<0.01）。
结果表明，胃蛋白酶-胰蛋白酶两步体外消化法在测定鱼粉蛋白质消化率时可替代鱼类消化液粗酶消化法，对其它蛋白质原料使用该方法应慎重。
关键词：蛋白质饲料；体外消化率；测定方法消化率是动物从食物中所消化吸收的部分占总摄入量的百分比，是评价饲料营养价值的重要指标之一。
测定饲料消化率主要有两种方法：体外法和体内法。
体内法测定的消化率能够比较真实的反映鱼类对饲料的消化情况。
但体内法测定方法复杂、时间长、费用高，而且对外界环境的要求较高，季节、温度、光照等都会影响消化率测定值。
体外消化法是利用精制的消化酶或研究对象的消化道酶提取液在试管内进行的消化试验，其测定值可近似反映鱼对饲料的消化率。
此法能快速测定原料的相对利用率，为营养师制作配方提供参考[1]。
然而，体外消化法无法反映体内消化的真实情况。
Boisen和Eggum（1991）在胃蛋白酶-胰蛋白酶两步法中利用标准过滤装置测得饲料蛋白质消化率与鼠和猪的真消化率十分接近，他们认为这种方法测得的蛋白质体外消化率经内源氮校正与回肠末端蛋白质表观消化率高度相关。
n07第七章 消化率的测定
回肠—直肠吻合术
优点
手术过程相对简单，猪恢复快，易于收集到代表 性的样本， 日粮类型不受限制
缺点
由于游离大肠，使得受术猪的正常生理状况受到 影响，能量、氮、水、电解质均有不同程度的改 变
回 直 肠 吻 合 术
—
家 禽 盲 肠 切 除 法
4、活动尼龙袋技术(MBNT)
采用体外胃蛋白酶预消化，然后用作了回直肠吻合术的猪，经十二
第二组
基础日粮 + 被测饲料
试验期
基础日粮
消化率的计算
D(％) ＝ (B-A) X100 ＋ A F
式中：D为被测饲料养分消化率 A为基础饲粮养分消化率 B为混合饲粮养分消化率
F为被测饲料养分占混合饲粮该养分的比例。
假定
基础饲粮养分消化率不变 养分间无互作效应
四、消化试验的基本步骤与要求
1、动物选择 2、日粮配制 3、试验步骤 4、食糜的收集和处理
优缺点
属于全取样法，样本代表性好，可不用指示剂 操作复杂
H
绵羊内脏肠管结构模型图（引自Huntington等，1989） a、隔膜；b、肝脏；c、胆囊；d、门静脉；e、胃脾静脉；f、空肠；g、前肠系膜静脉；h、肠系膜 静脉侧枝；i、肠系膜静脉远端分枝；j、盲肠；k、回盲静脉；l、大肠； I、灌注对氨基马尿酸（PAH）需做插管处；M、采集肠系膜血液需做插管处；P、采集门静脉血液需 做插管处；H、采集肝静脉需做插管处
培养不同的时间，最长培养时间：
精料：12—36h 优质饲草：24—60h 劣质饲草：48—72h
在一定的时间里4、8、16、24、48h（精料）， 8、16、24、 48、72h（粗饲料） 取出，冲洗，干燥，恒重
过瘤胃体外模型的测定方法
过瘤胃体外模型的测定方法一、体外-人工模拟消化液法1，人工唾液配方(MeDougall，1948)-用来模拟动物口腔，测定过瘤胃前的释放率注：MgSO4（MgC12）准确称取一定质量1.0g(精确至0.0001g)样品放入250ml碘量瓶内，每个样做三个重复，加入200ml 人工唾液，溶于少量蒸馏水中定容至1000ml)，盖紧胶塞，在39℃的恒温水浴锅内分别消化0、6和12小时(消化过程中每隔1小时振动1次)，测定溶液中产品的含量，从而求得过瘤胃产品的释放率。
（先将除CaCl2以外的物质充分溶解，再将CaCl2溶解后倒入前者溶液中。
使用前向其中通入二氧化碳，使其pH在8.2左右。
并在39℃的水中温浴30分钟。
）➢McDougall E I. Studies on ruminant saliva, 1. The composition and output of sheep’s saliva.Bilchemical Journal, 1948, 43: 99- 109.2，人工模拟瘤胃液、真胃和十二指肠消化液准确称取一定质量(精确至0.0001g)过瘤胃产品，放入50mL具塞试管底部，加入20mL人工模拟消化液(pH为6.6、5.4和2.4的缓冲溶液，分别模拟动物瘤胃、真胃和十二指肠消化道近端的消化液)，盖紧试管塞，在39℃的恒温水浴摇床内消化0、12、24、48小时，取出后冲洗、过滤，滤液定容，测定滤液中产品的含量。
计算公式:产品瘤胃释放率(W1)=A2/A l x 100%式中:A l-产品中有效成分的含量；A2-产品在pH 6.6缓冲溶液滤液中有效成分的含量。
产品小肠释放率(W2)=A3/A1 x 100%式中:A3-产品在pH 2.4缓冲溶液滤液中有效成分的含量。
产品有效释放率（%）=(l-W1) x W2x100%。
➢Papas A M,Sniffen C J,Muscato T V. Effectiveness of rumen protected methionine for delivering methionine postruminally in dairy cows [J]. J Dairy Sci, 1984a, 67: 545~552.附：人工肠液的制备磷酸氢二钾胰蛋白酶胰脂肪酶胰淀粉酶氢氧化钠6.8g 0.25g 9.375g 83.3mg 调pH注：先将磷酸氢二钾加500ml水溶解，加入胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶等，再定容至1000ml，用0.1M氢氧化钠调至适宜pH（6.0-8.0）；二、体外-瘤胃液培养法1，瘤胃液的采集晨饲（6：00）后2小时，由瘤胃内采集足量瘤胃液灌入经预热达到39℃并通有CO2的保温瓶中灌满后，立即盖严瓶口迅速返回实验室，经4层纱布过滤后，持续充入CO2气体5分钟。
转基因植物材料消化率的体外测定方法[发明专利]
![转基因植物材料消化率的体外测定方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/b84d5fe4844769eae109ed82.png)
专利名称：转基因植物材料消化率的体外测定方法专利类型：发明专利
发明人：孙哲,张宏福
申请号：CN201210449015.7
申请日：20121112
公开号：CN102928581A
公开日：
20130213
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种转基因植物材料消化率的体外测定方法。
该方法通过转基因植物材料的处理、转基因材料检测试剂的制备、转基因生物材料的检测和转基因生物材料的电泳测定技术处理后，解决了该技术领域中转基因植物材料体外消化率测定精确度和稳定性较低的技术问题；该方法具有操作简易方便，节能环保，安全高效等优点，为转基因生物的安全性评价奠定了重要基础；同时，该方法可实现提高其测定结果的高稳定性；可有效实现改善转基因植物材料体外消化率无法准确测定的难题，为开发我国传统的转基因植物材料资源潜力具有重要意义。
申请人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
地址：100193 北京市海淀区圆明园西路2号
国籍：CN
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利用DAISY II 体外模拟培养法测定真消化率
A. 试剂
a) 缓冲溶液A：g/L
KH2PO4 10.0
MgSO4•7H2O 0.5
NaCl 0.5
CaCl2•2H2O 0.1
尿素(试剂级) 0.5
b) 缓冲溶液B：g/L
Na2CO3 15.0
Na2S•9H2O 1.0
c) 瘤胃液接种物。
d) 30 g/L十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液。
称取18.61 g乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA,化学纯)和6.81g四硼酸钠(Na2B4O7·10H2O)同放入1 000 mL烧杯中,加少量水加热溶解后,再加入30 g十二烷基硫酸钠和10 mL乙二醇乙醚。
称取4.65 g无水磷酸氢二钠，置于另一烧杯中， 加少量水，微微加热溶解后倾于第一个烧杯中，稀释至1 000 mL。
此溶液pＨ在6.9~7.0左右（一般不需调整）。
(c) 无水亚硫酸钠（Na2SO3）。
(d) 丙酮：无色，并且蒸发后无残渣。
B.设备
a) DAISYII 体外模拟培养箱
b) 过滤装置- ANKOM F57滤袋
c) 封口机
d) 量筒– 1 L & 500 mL
e) 热水瓶–2个
f) 过滤用奶酪布
g) ANKOM 220 纤维素分析仪
C. 步骤
a) 滤袋和样品准备
1)将F57 滤袋在丙酮中浸泡3-5 min，然后放在通风橱中自然干燥。
用丙酮浸泡的目的是除掉表面剂，否则会影响微生物消化。
对每个F57 滤袋称重，记录质量(m1)。
将天平归零，并向滤袋中直接称取0.25 g 样品 (m)
注：进行48 h消化研究时，样品量也可以为0.5 g。
然而，最近研究表明样品量为0.25 g 时测定结果更准确。
2) 将每个滤袋封口，并防入Daisy II体外模拟培养箱消化罐中(每个罐中最多可以放25 样品)。
样品应平衡分布在消化罐分隔的两边。
同时至少包括一个空白滤袋，用于确定测定结果校正因子(C1)。
b) 混合缓冲溶液准备(每个消化罐)
1) 将缓冲溶液A和B进行预热(39°C)。
在容器中先加缓冲溶液A1330 ml，然后向其中加266 ml缓冲溶液B（比例为1:5)。
缓冲溶液A和B的用量要准确，以确保39°C混合溶液的pH 为6.8。
向每个装有样品滤袋的消化罐中加1600 ml 混合缓冲溶液。
2) 将装有样品和缓冲溶液的消化罐放入Daisy II 体外模拟培养箱，打开加热和搅拌(红色开关为电源)。
让消化罐温度平衡至少20-30 min。
同时收集准备瘤胃接种物。
c) 接种物准备与培养
所有的玻璃器皿要保持在 39°C。
1) 向2个热水瓶中加入39° C 水对其进行预热。
在收集瘤胃液前将热水倒掉。
采用适宜的
采集步骤，取至少2000 ml 瘤胃液，放入热水瓶中。
2) 将瘤胃液从热水瓶中倒出，放到混合器中。
向混合器的容器中冲入CO2 气体并快速混合30。
混合的目的是防止微生物黏附，确保用于体外消化微生物代表性。
将混合好的瘤胃液用4层奶酪布过滤到5升容量瓶中(预热39° C)。
用四层新的奶酪布过滤将其他热水瓶中的瘤胃液过滤到同一个5升容量瓶中。
容量瓶要持续充CO2。
3) 用量筒量取400 ml 瘤胃培养物。
从Daisy II 体外模拟培养箱中取出一个消化罐，向缓冲溶液和样品中加入量取好的400ml 培养物。
然后向消化罐中充CO2 气体30秒，然后盖好盖子。
4) 所有用到的消化罐都按照上述步骤重复操作。
注意：不要让CO2气体通过缓冲后的
培养物鼓泡，而是利用CO2 在消化罐上方形成气体层。
5) 培养（确保加热和搅拌开关已经打开）48小时后测定体外真消化率结果。
Incubate。
DAISY II体外模拟培养箱将始终保持温度39.5°C ± 0.5。
6) 培养结束，取出消化罐，排干液体。
用冷自来水冲洗至水澄清。
7) 将冲洗干净的滤袋放入ANKOM220 纤维分析仪器中，按照中性洗涤纤维（NDF）的测定步骤进行测定。
记录体外消化和NDF测定后滤袋+残渣质量（m2）。
注：滤袋也在做NDF测定之前放在冰箱或冰冻贮存。
D. 计算
体外真消化率（ IVTD，% ）= 100 – ((m2 - (m1 x C1)) x 100 / m)
其中：
m1 = 滤袋质量，g；
m= 样品质量，g；
m2= 体外消化和NDF测定后滤袋+残渣质量，g；
C1 = 空白袋校正系数(烘箱干燥后质量/开始空白滤袋质量)。
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