一测多评法同时测定补骨脂主要化学成分

一测多评法同时测定补骨脂主要化学成分

中药补骨脂，为豆科植物补骨脂（Psoralea corylifolia L.）干燥成熟果实。其性温、味辛，具有补肾助阳，温中止泻，纳气平喘之功。其中主要活性成分补骨脂素（psoralen）和异补骨脂素（isopsoralen）等香豆素类成分，具有较强的光敏化作用和镇静、解痉、止血等作用[1-2]，是治疗白癜风、斑秃、牛皮癣以及瘤样皮肤病的有效药物。近来研究表明，补骨脂素对多种动物及人的肿瘤生长有明显抑制作用[3-4]。

1实验方法

1.1色谱条件色谱柱：Puros pher○RSTAR LP RP-18 endcapped（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水，梯度洗脱程序；流速1.0 mL/min；检测波长250 nm；进样量10 μL；柱温30℃。

1.2对照品溶液的制备分别精密称取补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、Broussochalcone B、補骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮和Corylifol A适量，置同一棕色10 mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，制成浓度分别为0.3000 mg/mL、0.3500 mg/mL、0.3000 mg/mL、0.2700 mg/mL、0.3000 mg/mL、0.1200 mg/mL、0.2000 mg/mL、0.2500 mg/mL、0.4500 mg/mL、0.3600 mg/mL和0.2000 mg/mL的混合对照品溶液。于4℃保存备用。

1.3供试品溶液的制备取补骨脂生品粗粉（过60目筛）各约0.1 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加甲醇50 mL，加热回流2 h，放冷，滤过，滤液置100 mL 蒸发皿中，在水浴锅上蒸至有少量滤液残留即可，用甲醇将蒸发皿中残留的滤液和残渣完全转移至10 mL容量瓶中，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜作为供试品溶液。于4℃保存备用。

2方法学考察

2.1线性关系考察取2.2项下的混合对照品溶液，精确稀释2倍、4倍、8倍、16倍和32倍。精密吸取以上6份混合对照品溶液各10 μL注入高效液相色谱仪，测定。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果R>0.999，线性良好。

2.2精密度试验精密吸取2.2项下的混合对照品溶液5 μL连续进样6次，记录补骨脂各主要成分的峰面积积分值，计算RSD，结果精密度各成分峰面积的RSD≤2.92%，表明仪器精密度良好。

2.3稳定性及重复性试验取生品供试品溶液分别在0，2，4，6，8，10，12 h进样，测定补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、Broussochalcone B、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮、

Corylifol A、补骨脂查尔酮和补骨脂酚的峰面积。RSD≤3.43%，表明样品在12 h 内较为稳定。测得的平均峰面积的RSD≤2.93%，表明该方法的重现性较好。

2.4回收率试验取已测含量的生品粗粉约0.1 g，6份，精密称定补骨脂各对照品，加入，按”2.3”项制得供试品溶液，按”2.1”项中色谱条件考察结果测定补骨脂中各化学成分的含量，计算加样回收率。回收率95.52%～104.85%，RSD≤2.61%。

3含量测定结果

补骨脂生品和盐炙品，按2.3项下制备，2.1项下色谱条件进行分析，标准曲线法计算补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、Broussochalone B、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮、Corylifol A的含量。

4一测多评法

校正因子的计算，见表1。

5讨论

采用一测多评法测定补骨脂中2种常见香豆素成分补骨脂素和异补骨脂素，补骨脂中8中黄酮成分，新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、Broussoclalone B、异补骨脂查尔酮、补骨脂二氢黄酮甲醚以及Coryifol A，一测多评法可在缺少对照品的情况下，依然能够对其它成分进行定量。本文采用一测多评法所得补骨脂药材中8种黄酮类成分含量与常规的外标法所测得的含量间没有显著差异，说明在对照品缺乏的情况下，通过一测多评法实现补骨脂药材同类成分的含量测定是准确的、可行的。

参考文献：

[1]朱兆荣，李玉强，刘娟，等.补骨脂总黄酮抗氧化作用研究[J].中国兽药杂志，2005，39（2）：18-20.

[2]Herrmann G，Brenneisen P，Wlaschek M，et a1.Psoralen photoactivation promotes morphological and functional changes in fibroblasts in vitro reminiscent of cellular senescence[J].Journal of Cell Science，1998，111（6）：759-767.

[3]李冬云，陈信义，刘瑞娟.单味中药成分逆转白血病多药耐药基础研究评述[J].中国中医药信息杂志，2004，11（11）：951-954.

[4]赵丕文，牛建昭，王继峰，等.异补骨脂素和蜕皮甾酮对人乳腺癌T47D 细胞增殖及ER亚型表达的影响[J].北京中医药大学学报，2007，30（4）：242-245.