辣椒各组分含量测定

辣椒各组分含量测定

一、辣椒中可溶性糖的测定----蒽铜比色法

1.原理：糖与硫酸反应脱水生成羟甲基呋喃甲醛，生产物再与蒽铜缩合成兰色化合物，其颜色深浅与溶液中糖的浓度成正比，可比色定量。

2.试剂

（1）硫酸锌溶液：溶解500g化学纯硫酸锌于500ml水中

（2）亚铁氰化钾溶液：溶解10.6g化学纯亚铁氰化钾于100ml水中（3） 0.2％蒽铜试剂：溶解蒽铜0.2g于100ml95％硫酸中，置棕色瓶中冷暗处保存

（4） 0.1％葡萄糖液：准确称干燥葡萄糖0.1000g 定容100ml

3.操作方法

（1）标准曲线绘制

（2） 100ml容量瓶编号

沸水浴加热6分钟，取出冷却→用1cm比色杯→610nm测定吸光度→作出以吸光度为横坐标，糖液浓度为纵坐标的准曲线

（3）样品测定

称10g样品→于100ml热水加入500ml容量瓶中－加硫酸锌5ml→沸水浴5分钟→取出再摇动下加亚铁氰化钾5ml，→冷却→定容500ml→过滤→吸滤液25ml→于250ml容量瓶→定容250ml→取稀释液1ml，于比色管中→加10ml蒽铜试剂→摇匀→水浴加热6分钟→冷却→比色

试验注意

1，样液必须清澈透明，加热后不应有蛋白质沉淀

2，样品颜色较深时，可用活性炭脱色后再进行测定

3，此法与所用的硫酸浓度和加热时间有关

4，所取糖液浓度在1-2.5mg/100ml之间

（一）菲林试剂

1、试剂

费林试剂：甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000mL。

乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000mL，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。

0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入 1000mL容量瓶中，加入5mL浓HC l（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000mL。

6mol/L HCl：取250mL浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500mL。碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100mL蒸馏水中。

6mol/L NaOH：称取120gNaOH溶于500mL蒸馏水中。

0.1%酚酞指示剂。

2、材料

辣椒，淀粉。

3、器材

试管3.0×20cm（×1）；移液管5mL（×2）；烧杯100mL(×1); 250mL 锥形瓶; 调温电炉; 滴

定管25mL(×1)。

（二)样品中还原糖的提取

准确称取1g辣椒粉，放在100mL烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入约40mL蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。

(三)样品中总糖的水解及提取

准确称取1g淀粉，放在大试管中，加入6mol/L HCl 10mL，蒸馏水15 mL，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕。冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6mol/L NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100mL，过滤取滤液10mL于100mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。(四)空白滴定

准确吸取费林试剂甲液和乙液各5.00mL，置于250mL锥形瓶中，加蒸馏水10mL。从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s 1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶

液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值，按下式计算：

式中：F──10mL费林试剂（甲液和乙液各5.00mL）相当于葡萄糖的量，mg；

C──葡萄糖标准溶液的浓度，mg/mL；

V──标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mL。

（五）样品糖的定量测定

(1) 样品溶液预测定：吸取费林试剂甲液及乙液各5.00mL，置于250 mL锥形瓶中，加蒸馏水10mL，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30 s，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要保持溶液呈沸腾状态。待溶液由蓝色变浅时，以每2s 1滴的速度滴定，直至溶液的蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。

(2) 样品溶液测定：吸取费林试剂甲液及乙液各5.00mL，置于锥形瓶中，加蒸馏水10mL，加玻璃珠3粒，从滴定管中加入比与测试样品溶液消耗的总体积少 1mL的样品溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s 1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值。（六）结果处理

其中：m──样品重量，g；

式中：F──10mL费林试剂（甲液和乙液各5.00mL）相当于葡萄糖的量，mg；

V──标定时平均消耗还原糖或总糖样品溶液的总体积，mL；

V1──还原糖或总糖样品溶液的总体积，mL；

1000──mg换算成g的系数。

注意事项

（1）费林试剂甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。

（2）滴定必须是在沸腾条件下进行，其原因一是加快还原糖与Cu2＋的反应速度；二是亚甲基蓝的变色反应是可逆的，还原型的亚甲基蓝遇空气中的氧时会再被氧化为氧化型。此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中的氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免亚甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加消耗量。

（3）滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。