菌落总数的检测方法模板

ISO与美国FDA的不同处

食品微生物检验方法( FDA与ISO对比)

内容提要:

l菌落总数检测

l大肠菌群及大肠杆菌检测

l金黄色葡萄球菌检测

l沙门氏菌检测

l单核细胞增生李斯特氏菌检测

菌落总数测定——菌落总数的概念

l菌落总数是指在被检样品的单位重量( g) 、容积( ml) 或表面积( cm2) 内, 所含能于某种固体培养基上, 在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。

菌落总数测定——卫生学意义

l判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。

l及时反映食品加工过程是否符合卫生要求, 为被检食品卫生学评价提供依据。

l一般认为, 食品中细菌数量越多, 则可考虑致病菌污染的可能性越大, 菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。FDABAM菌落总数测定流程

检样xg/mL+9xml稀释液( 磷酸盐缓冲液)

适当十倍稀释样品

选择2~3个连续适宜稀释度

各取1mL分别加入灭菌平皿内

( 每个稀释度做两个平行)

每皿内加入适量平板计数琼脂( PCA)

35℃48±2h

菌落计数

FDABAM菌落计数方法

l选择25~250CFU之间的菌落进行计数, 计算公式如下:

N=∑C/( 1*n1+0.1*n2) *d

l所有平板的菌落数都不足25CFU, 报告EAPC/ml( g) 为＜25*1/d。EAPC: estimatedaerobicplatecount

l所有平板的菌落数都超过250CFU, 但不足100/cm2, 报告

EAPC/ml( g) 为最接近250CFU的平板菌落数的估计值, 乘以相应的稀释度。

l所有平板的菌落数都超过100/cm2, 计算平板的面积( 直径为

90mm的平板面积为65cm2) , 估计最高稀释度每cm2的菌落数, 乘

以相应平板面积作为该稀释度的菌落计数结果, 报告EAPC/ml( g) 为＞65*100*1/d。

l无法计数的平板报告LA( LaboratoryAccident) 。

l最终结果保留前两位有效数字。按照4舍6入, 5是奇进偶不进。

菌落总数测定流程

检样xg/mL+9xml稀释液( 磷酸盐缓冲液)

适当十倍稀释样品

选择2~3个连续适宜稀释度

各取1mL分别加入灭菌平皿内

( 每个稀释度做两个平行)

每皿内加入适量( 12~15mL)

平板计数琼脂( PCA) ,

30±1℃, 72±3h

菌落计数

菌落计数方法

l选择连续2个稀释度不超过300CFU的平板, 且一个平板至少含15CFU进行计数, 计算公式如下: N=∑C/( n1+0.1*n2) *d

l所有平板的菌落数都不足15CFU, 计算2平板菌落的算术平均值m, 液体样品: NE=m固体样品: NE=m×d-1

l无菌生长: 液体样品: lessthan1;固体样品: lessthan1×d-1

l最终结果保留前两位有效数字。

菌落总数测定几点说明

l由于检样中采用30/35℃有氧条件下培养, 因而并不是样品中实际的总活菌数, 一些特殊营养要求的细菌、厌氧菌、微需氧菌、以及非嗜中温细菌, 均难以反映出来。

l鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在, 因而在平板上出现的菌落能够来源于细胞块, 也能够来源于单个细胞, 因而平板上所得菌落的数字不应报告活菌数, 而应以单位重量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位( colonyformingunits, CFU) 报告。

菌落总数测定几点要求

l每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过15min, 主要为防止细菌增殖和产生片状菌落。样液与琼脂应充分混合, 避免将混合物溅到平皿壁和皿盖上。皿内琼脂凝固后, 不要长时间放置, 然后倒置培养, 可避免菌落蔓延生长。

l检样过程中应用稀释剂做空白对照, 用以判定稀释液、培养基、平皿或吸管可能存在的污染。同时, 检样过程中应在工作台上打开一块空白平板计数琼脂, 其暴露时间应与检样时间相当, 以了解检样在检验操作过程中有无受到来自空气的污染。

l检样稀释液有时带有食品颗粒, 为避免与细菌菌落发生混淆, 可

作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿, 不经培养, 于4℃放置, 以便在计数检样时用作对照。

大肠菌群的定义

l大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

l大肠菌群不是细菌学上的分类命名, 而是根据卫生学方面的要求, 提出的与粪便污染有关的细菌, 即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌, 这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化试验, 可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌( 俗称大肠杆菌) 、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠杆菌的定义

l大肠杆菌( 也称大肠埃希氏菌) , 分类于肠杆菌科, 归属于埃希氏菌属。

l大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC 试验( 靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验) 为++--或-+--的细菌。l与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌, 包括五种: 肠毒

素性大肠杆菌( ETEC) 、致病性大肠杆菌( EPEC) 、出血性大肠