过氧化氢酶活性的测定

KI反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，反应式为：
H2O2（余）+2KI+H2SO4----→I2+K2SO4+2H2O I2 +2Na2S2O3 --→2NaI+Na2S4O6（连二硫酸钠）
用硫代硫酸钠分别滴定空白液 (可求出总的H 2O 2 量) 和反应液( 可求出未
分解的H2O2量)，再根据二者滴定值之差求出分解的H2O2量。
H2O2可进一步生成氢氧自由基（OH˙）。 氢氧自由基（OH˙）是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或间接地氧
化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并且有非常高的速度常数，破坏
性极强，可使细胞膜遭受损害，加速细胞的衰老和解体。 过氧化氢酶(catalase；CAT)可以清除H2O2、分解氢氧自由基，保护机体
四、实验步骤：
1、酶液提取： 称取0.5g梭梭，加少量石英砂，CaCO3，2ml水，研成匀浆，移入50ml容量瓶，冲洗 研钵数次，定容，静置，过滤。 2、酶促反应： （ 1 ）取锥形瓶 2 个，编号 A ， B ，各加入 10ml 酶液，之后立即向 A 瓶中加入 1.8mol/L H2SO45ml，终止酶活性，作空白滴定。 （2）向A，B两瓶各加H2O2 5ml，摇匀，在加入B瓶那一刻起，记录 时间，5分钟后迅速向B瓶中加入1.8mol/LH2SO45ml，终止酶活性。 3、滴定：
天数 7 14 21 27 35 42 49
空白滴 定值
4 6 8 9 11 13 14
样品滴 Na2S2O3 被分解 摩尔浓度 定值 的H2O2
3 4 5 8 9 10 10 142 142 142 142 142 142 142 2414 4828 7242 2414 4828 7242 9656
实 验
三
过氧化氢酶活性的测定 ——碘量法
学时：3
生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是清除体内自由基：
POD：过氧化物酶 SOD：超氧化物歧化酶
CAT：过氧化氢酶
一、实验目的：
1、掌握碘量法测定过氧化氢酶活
性的原理和方法； 2、了解过氧化氢酶的作用。
二、实验原理:


植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使 H 2 O 2发生累积。
保 温
1.8M 20% 钼酸 淀粉 H2SO4 KI溶 铵溶 溶液 (ml) 液(ml) 液(滴) (滴)
0.2M Na2S2O3 溶液的 滴定量
A 空 白
10
5பைடு நூலகம்
5 5 分 钟
-
1
3
5
VA(空白)
=
B 反 应
VB(反应
5 1 3 5
10
-
5
液)
=
五、实验结果与计算：
1、被分解的H2O2量（mg） = （空白滴定值-样品滴定值）×Na2S2O3摩尔浓度×17 2、CAT活性（mg.g-1.min-1）= 被分解的H2O2量（mg）×(总体积÷测定取液量) 样品重（g）×时间（min）
总体 测定取 积 液量
50 50 50 50 50 50 50 10 10 10 10 10 10 10
时间 7 7 8 8 8 8 9
过氧活氢 酶活性
3448 6897 9052 3017 6035 9052 10728
过氧化氢酶活性 12000 10000
过氧化氢酶
8000 6000 4000 2000 0 0 2 4 天数 6 8 系列1
向A，B两瓶各加1ml 20% KI和3滴（NH4）6Mo7O24，摇匀后迅速加入5滴1.5%淀粉溶 液，用Na2S2O3进行滴定至蓝色恰好消失，记录两次消耗Na2S2O3的体积VA(空白)，VB(反应液)。
酶活性测定
管 号
1.8M 酶液 0.05M H SO (ml) 2 4 H2O2 (ml)
细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是植物体内重要的酶促防
御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。
二、实验原理:
CAT活性大小以一定时间内分解的H2O2量来表示：
在一定条件下，CAT能把H2O2分解为H2O和O2。当CAT与H2O2反应一定 时间(t) 后，再用碘量法测定未分解的 H 2O 2，以钼酸铵作催化剂，H2 O2 与
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：梭梭 2、仪器： (1) 滴定管 (2)研钵 (3) 容量瓶 (4)移液管 (5)三角瓶(100ml) 3、试剂：
（1）0.05M H2O2 （3）1.8M H 2SO4 液 （5）10%（NH4)6Mo7O24 （7）CaCO3­，石英砂
（2）0.2M Na2S2O3 （4 ）1.5%淀粉溶 （6）20% KI