交叉配血试验操作规程

交叉配血试验操作规程
1目的：保证临床用血安全，为患者提供配血相合的血液制品。

2范围：患者的血液标本与供血者标本。

3职责：
3.1临床科室采集正确的血样，并提交输血申请单。

3.2血库进行交叉配血试验。

4所用设备与试剂
4.1BY-320A离心机
4.2聚凝胺介质试剂
5原理：红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。

凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。

其后，加入凝聚胺（Polybrene）溶液，它是一种高价阳离子多聚物，肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚，最后，加入悬浮液（Resuspending）,Resuspending具有中和凝聚胺阳例子的作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，实验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阴性。

6操作
将受血者、供血者的标本选择工况3分离血清及血浆待用。

用生理盐水姜受血者、供血者红细胞制备5%盐水悬液代用（选用工况2洗涤红细胞三次）
6.1盐水介质交叉配血试验：
6.1.1取小试管2支标记主、次侧。

主侧管：受血者血清（PS）100ul+ 供血者红细胞悬液（DS）50ul；次侧管：供血者血浆（DS）100ul+受血者红细胞悬液（PC）
6.1.2将上述试管混匀后，放入离心机，选工况1
6.1.3取出试管，观察上清液是否溶血，如果没有溶血，然后轻轻晃动试管，肉眼观察结果。

6.1.4结果判定：
6.1.4.1肉眼观察，如果试管中出现任何红细胞凝集或溶血，则判读为阳性、配血结果不相合，无凝集为阴性、配血结果相合。

6.1.4.2对于不能明显判定为阴性而未达到任何阳性凝集的反应，可通过显微镜进一步判断。

镜下有红细胞凝集的反应为阳性，配血结果不能相合。

无凝集为阴性，配血结果相合。

6.1.4.3如果试验在室温进行，若有凝集产生，可置37℃放置2分钟后观察凝块是否散开，以排除冷凝激素造成的凝集影响测定结果。

6.1.5注意事项：如果盐水介质配血结果阴性，可将原标本接着做凝聚胺法配血。

6.2凝聚胺介质交叉配血试验：
6.2.1取小试管2支标记主、次侧。

主侧管：受血者血清（PS）100ul+ 供血者红细胞悬液（DS）50ul；次侧管：供血者血浆（DS）100ul+受血者红细胞悬液（PC）
6.2.2各加LIM650ul，混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。

6.2.3放入离心机，选工况1，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约100ul液体。

6.2.4轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。

6.2.5最后加入Resuspending 2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。

如果在60秒内凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合，入凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结核的特异性反应，配血结果不相合。

如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。

6.2.6注意事项：
6.2.6.1可以用含EDTA之血浆代替血清使用。

6.2.6.2若试剂使用前为低温贮存，请回复温室再行操作。

6.2.6.3在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有冷凝集等因素，而导致假阳性的结果出现，若有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending时，将试管立即置入37℃水浴中，轻轻摇动试管混合，并在60秒内观察结果。

7参考文献
7.1全国临床检验操作规程第四版
7.2珠海贝索凝聚胺介质实际说明书
7.3BY-320A离心机操作规程。

8变更程序
如果本操作程序使用者在实际工作中发现其存在问题，则应向科负责人提出，科室负责人则召集所有与本程序有关人员讨论，以决定是否需要变更本程序。