透射电镜常规制样简易流程

透射电镜常规制样简易流程

1.取样

因戊二醛和锇酸的固定深度有限，样品越小越好，尽量取1mm*1mm*1mm。

2.先固定

戊二醛在3%-6%。

参考：25% 戊二醛（必须买Sigma公司的G5885或者更高浓度的戊二醛）和0.2M PBS 配置为戊二醛5%和0.1M PBS缓冲液的混合工作液；时间：常温4小时后，4度冰箱过夜。

3.清洗

PBS缓冲液冲洗。一定要洗干净，否则戊二醛和锇酸会产生沉淀。参考：每15-30分钟更换一次，共4次。

4.后固定

参考:锇酸2%，固定4小时。剧毒，在通风橱操作。

5.清洗

PBS缓冲液冲洗。

6.梯度脱水

参考：乙醇梯度脱水:30-50-70-90-95-100-100%，每次10-15分钟，无水乙醇中加分子筛或者无水硫酸铜，提前一周配置好备用。

7. 渗透

参考：spurr树脂。包埋板即可。

8. 包埋聚合

参考：70度，24小时。

10.超薄切片

11.染色

（1）醋酸双氧铀封口膜上染色，染色时间参考：10分钟（铀染）

（2）水清洗

（3）柠檬酸铅因其极易和空气产生铅沉淀，染色时旁边放NaOH颗粒，注意避光。染色时间参考附件。