TopoⅡα在乳腺癌中的表达与蒽环类药物敏感性的分析

TopoⅡα在乳腺癌中的表达与蒽环类药物敏感性的分析

目的探讨乳腺癌组织中TopoⅡα的表达及其与一线应用蒽环类药物化疗疗效的关系。方法应用免疫组化法检测TopoⅡα在63例乳腺癌组织中的表达并分析其意义。结果TopoⅡα在乳腺癌组织中的阳性表达率为73.0%。TopoⅡα的阳性表达与年龄、肿瘤大小、位置、有无腋窝淋巴结转移及ER、PR的表达无明显相关性（P>0.05），而与Her-2的表达有关（P=0.026），且呈正相关性。应用蒽环类药物化疗的患者中，TopoⅡα阳性表达者有效率是TopoⅡα阴性表达者的3.077倍（P=0.032）。TopoⅡα阳性表达组的无病进展期较TopoⅡα阴性表达组明显延长。结论TopoⅡα的表达对乳腺癌患者化疗药物的选择及预后的判断具有重要的指导价值。

标签：乳腺癌；DNA拓扑异构酶Ⅱα；免疫组织化学

近年来，乳腺癌已成为全世界威胁女性健康的首位恶性肿瘤，其中浸润性导管癌是乳腺癌中最常见的病理类型之一。我国乳腺癌的发病率正以每年3%～4%的增长速度上升，且呈年轻化、低龄化趋势。在乳腺癌综合治疗中，化疗占据着重要地位，而肿瘤细胞多药耐药的存在往往是导致临床化疗失败的主要原因之一。DNA拓扑异构酶Ⅱα（DNA topoisomeraseⅡ，TopoⅡα）是介导DNA解旋的重要核酶，在DNA代谢的生命过程中起着重要作用。因为其重要的生理功能，TopoⅡα已成为抗癌药物的重要作用靶点。本实验旨在通过采用SP法检测乳腺癌组织中TopoⅡα的表达，分析其与各临床病理指标的相关性及临床意义，为临床乳腺癌患者的个体化治疗和预后判断提供一定的依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取潍坊市人民医院肿瘤内科2008年1月～2011年

12月间经病理证实的晚期乳腺癌患者63例，病理类型均为浸润性导管癌。术后应用蒽环类药物辅助化疗后复发转移的57例，首诊为晚期的6例，其中一线应用蒽环类药物化疗的21例。所有患者均为女性，年龄30～73岁，中位年龄为48岁。

1.2 主要试剂及实验方法

即用型鼠抗人TopoⅡα单克隆抗体及SP试剂盒均为北京中杉生物技术公司产品。采用免疫织化SP法，所有标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片4μm厚，切片常规用3%H2O2溶液作用20min，高压修复抗原，依次加入Ⅰ抗、Ⅱ抗，DAB显色，苏木素复染后封片观察。用TBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性的乳腺癌组织作阳性对照。

1.3 结果判定

TopoⅡα阳性物质呈清晰棕黄色或黄色，分布于胞核内。每张切片中选择5个高倍视野，阳性细胞数≥20%为（+），30%；PD：基线病灶长径总和增加>20%或出现新病灶。SD：基线病灶长径总和有缩小但未达PR或有增加但未达PD。所有病例均有可测量的目标病灶，每2个化疗周期后进行疗效评价。CR+PR为有效，PD+SD为无效。

1.5 统计学方法

采用SPASS19.0软件，TopoⅡα的表达与临床病理指标的关系采用x2检验和Fisher确切概率法。无病生存期（TTP）是指从手术之日起到疾病复发或转移的时间。应用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析和log-rank test进行差异显著性检验。α=0.05。

2 结果

2.1 乳腺癌组织中TopoⅡα的表达状况

2.2 57例术后应用蒽环类药物辅助化疗后复发转移的乳腺癌组织中TopoⅡα的表达及其与各临床病理指标的关系

在57例术后应用蒽环类药物辅助化疗后复发转移的乳腺癌组织中，TopoⅡα的阳性表达率为73.7%（42/57）。

通过对TopoⅡα的表达及其与各临床病理指标的关系的分析中可以看出：TopoⅡα的表达与患者发病年龄、肿瘤大小、位置、有无腋窝淋巴结转移及ER、PR的表达差异均无统计学意义2.3 乳腺癌患者TopoⅡα表达与蒽环类化疗效果之间的关系

在21例一线应用蒽环类药物化疗的乳腺癌患者中，对于应用含有蒽环方案有效的患者，其肿瘤组织TopoⅡα阳性表达明显高于无效者；TopoⅡα阳性表达者应用含蒽环药物化疗有效率是

2.4 57例术后应用蒽环类药物辅助化疗后复发转移的乳腺癌患者无病生存期（TTP）与TopoⅡα表达情况的分析

对57例术后应用蒽环类药物辅助化疗后复发转移的乳腺癌应用Kaplan-Meimer单因素生存分析后发现，TopoⅡα表达阳性组的中位TTP为32.5个月，而TopoⅡα表达阴性组的中位TTP为3 讨论

TopoⅡα是一种调节核酸空间结构动态变化的、控制核酸生理功能的关键酶，普遍存在于多种细胞的酶类[1]。TopoⅡα基因位于人染色体17q21.3，存在于增殖细胞中，其表达具有周期特异性。Sasano等[2]研究报道TopoⅡα在肿瘤

增殖的细胞周期中的各期表达不同，在DNA复制后期和有丝分裂期为表达高峰期，而在有丝分裂期结束后表达下降，因而推测TopoⅡα的表达可能与肿瘤增殖相关。也有研究[3]表明，TopoⅡα在乳腺癌组织中的表达与其预后存在一定的关系，TopoⅡα的阳性表达与腋窝淋巴结转移和远处转移关系密切，而与其他临床病理因素的关系结果不一致，由此推断TopoⅡα阳性表达可能提示预后不良。因实验样本的数量及研究方法不同，所得的结论可能不尽一致。本实验发现在63例乳腺癌组织中，有46例TopoⅡα表达阳性，其阳性表达率为73.0%。本研究还通过对TopoⅡα的表达与临床诸病理因素进行分层分析发现，TopoⅡα表达与患者的年龄、肿瘤大小、位置、有无腋窝淋巴结转移和ER、PR的表达均无明显相关性，与刘芳等[4]的研究结果不同。而TopoⅡα在Her-2阳性的乳腺癌中的阳性表达率（87.50%）明显高于其在Her-2阴性的乳腺癌中的阳性表达率（60.61%，P＜0.05），两者且成正相关性，这可能与两者的位置非常接近有关。Her-2基因的突变了引起基因扩增和过度表达，从而导致TopoⅡα基因出现异常。因此，这两种基因的改变有一定的关联性[5]。有研究者[6]报道，Her-2阳性表达的乳腺癌患者中，存在38%的患者同时伴有TopoⅡα过表达，且这一部分患者对蒽环类药物治疗的敏感性高[7]。据报道，在Her-2和TopoⅡα均阳性表达的转移性乳腺癌中，联合应用赫赛汀与TopoⅡα抑制剂可以明显提高化疗的疗效[8]。因此联合检测TopoⅡα和Her-2等相关指标在指导临床用药上具有重要意义。目前以TopoⅡα为靶点的化疗药物已普遍应用于乳腺癌临床治疗工作中，其主要作用机制是药物与TopoⅡα结合后，通过抑制肿瘤细胞DNA的复制，从而阻碍了肿瘤细胞的增殖。而TopoⅡα作为蒽环类药物的潜在作用靶点，肿瘤对蒽环类药物的敏感性很大程度上取决于TopoⅡα酶活性或者其在肿瘤细胞内表达水平的高低，酶活性升高或者其表达水平增高，可使肿瘤对化疗药物的敏感性增加，从而使得肿瘤细胞的耐药性降低[9]。很多研究发现TopoⅡα蛋白表达或者基因异常与蒽环类药物在各种治疗方法的疗效预测有关，本研究对21例一线应用蒽环类药物化疗的乳腺癌患者进行分析发现，对于应用含有蒽环方案有效患者，的TopoⅡα阳性表达率（76.92%）明显高于无效者（25.00%）；TopoⅡα阳性表达者应用含蒽环药物化疗有效率是TopoⅡα阴性表达者的3.077倍（P=0.032<0.05），这一结果和国内外多项研究相似[10]。因此，在化疗前通过对该基因进行检测，有助于判断蒽环类药物疗效，从而更好的为患者选择合适的化疗方案。

化学治疗在乳腺癌的综合治疗中起着重要作用，其中蒽环类药物一直是乳腺癌化疗药物中的基石。而TopoⅡα抑制剂（如蒽环类药物）的应用大大提高了乳腺癌患者的生存率。有研究[11]表明，在接受含蒽环类化疗药物乳腺癌患者中，TopoⅡα基因扩增与正常的相比可使复发率和死亡率显著降低，而且该基因缺失预后较差，因而TopoⅡα可作为预测无病生存期和总生存期的生物学标志。但是也有学者认为，接受蒽环类药物的早期乳腺癌的无病生存期和总生存期与HER2高表达有关，却与TopoⅡα改变没有相关性[12]。还有多项研究[13-14]报道，Topo Ⅱα表达阳性的患者术后应用蒽环类药物辅助化疗的无病生存率和总生存率显著高于阴性表达者。本研究采用Kaplan-meimer单因素生存分析法对57例术后应用蒽环类药物辅助化疗后复发转移的乳腺癌患者进行分析发现，TopoⅡα阳性表达组的无病生存期明显长于TopoⅡα阴性表达组（P=0.010）。因此，通过对乳腺癌患者中TopoⅡα表达的检测，正确的选用化疗敏感性的药物，可以明显的延长患者的无疾病生存期。