反义核苷酸技术
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Add siRNA-reagent complex to cells
反义核酸技术
一、RNAi基本概念及相关作用机制 二、siRNA序列设计及制备；脱靶效应 三、siRNA转染过程相关问题
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是双链RNA特异性地结合到 与之序列互补的mRNA上，导致mRNA降解，从而介导转录水平基因表
达抑制。
一、RNAi基本概念及相关作用机制 二、siRNA序列设计及制备；脱靶效应 三、siRNA转染过程相关问题
方法： 化学方法，电转化
脂质体类 lipofectamineTM 2000和RNAiMAX
siRNA转染
转染试剂
非脂质体聚合物类 EntransterTM 系列(EntransterTM-R)
Βιβλιοθήκη Baidu
1、细胞数量
转染过程相关问题
2、siRNA浓度 3、血清 4、抗生素
5、转染后换液 6、转染条件优化
7、RNAi检测方法
Lipofectamine®
cells
RNAiMAX Reagent
siRNA
Dilute Lipofectamine® RNAiMAX Reagent in Opti-MEM® medium
Dilute siRNA in Opti-MEM® medium
Add Diluted siRNA to Diluted Lipofectamine® RNAiMAX Reagent (1:1 ratio)
siRNA序列设计注意事项
1、多设计几条siRNA 序列，以筛选最特 异、 最有效的siRNA序列 2、阴性对照
3、阳性对照
4、siRNA荧光标记
siRNA制备方法
1、化学合成法
2、体外转录法
3、Dicer/RNaseⅢ酶 解
定义：
指siRNA转染中的非特异反应，这不仅包 括siRNA序列，还包括转染试剂本身或其他相 关因素对转染细胞的其他相关基因发生非特异 性的表达变化，从而导致假阳性和假阴性。
检测方法： 基因表达谱芯片
脱靶效应
影响因素
siRNA浓度 转染试剂
1、针对同一靶基因设计2条以上抑制效率
如何尽量避免？
在70％以上的不同siRNA序列，分别进行 实验
2、采用不同转染试剂进行实验
一、RNAi基本概念及相关作用机制 二、siRNA序列设计及制备；脱靶效应 三、siRNA转染过程相关问题
反义核酸技术
一、RNAi基本概念及相关作用机制 二、siRNA序列设计及制备；脱靶效应 三、siRNA转染过程相关问题
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是双链RNA特异性地结合到 与之序列互补的mRNA上，导致mRNA降解，从而介导转录水平基因表
达抑制。
一、RNAi基本概念及相关作用机制 二、siRNA序列设计及制备；脱靶效应 三、siRNA转染过程相关问题
方法： 化学方法，电转化
脂质体类 lipofectamineTM 2000和RNAiMAX
siRNA转染
转染试剂
非脂质体聚合物类 EntransterTM 系列(EntransterTM-R)
Βιβλιοθήκη Baidu
1、细胞数量
转染过程相关问题
2、siRNA浓度 3、血清 4、抗生素
5、转染后换液 6、转染条件优化
7、RNAi检测方法
Lipofectamine®
cells
RNAiMAX Reagent
siRNA
Dilute Lipofectamine® RNAiMAX Reagent in Opti-MEM® medium
Dilute siRNA in Opti-MEM® medium
Add Diluted siRNA to Diluted Lipofectamine® RNAiMAX Reagent (1:1 ratio)
siRNA序列设计注意事项
1、多设计几条siRNA 序列，以筛选最特 异、 最有效的siRNA序列 2、阴性对照
3、阳性对照
4、siRNA荧光标记
siRNA制备方法
1、化学合成法
2、体外转录法
3、Dicer/RNaseⅢ酶 解
定义：
指siRNA转染中的非特异反应，这不仅包 括siRNA序列，还包括转染试剂本身或其他相 关因素对转染细胞的其他相关基因发生非特异 性的表达变化，从而导致假阳性和假阴性。
检测方法： 基因表达谱芯片
脱靶效应
影响因素
siRNA浓度 转染试剂
1、针对同一靶基因设计2条以上抑制效率
如何尽量避免？
在70％以上的不同siRNA序列，分别进行 实验
2、采用不同转染试剂进行实验
一、RNAi基本概念及相关作用机制 二、siRNA序列设计及制备；脱靶效应 三、siRNA转染过程相关问题