叶绿体膜蛋白提取方法
植物膜蛋白提取方法
植物膜蛋白提取方法说实话植物膜蛋白提取这事，我一开始也是瞎摸索。
我试过超声破碎法来提取。
就像敲鸡蛋，想把里头的东西弄出来那种感觉。
把植物组织放在缓冲液里，然后用超声仪来破碎细胞。
可是我发现这种法子很容易把膜也给弄破喽，得到的膜蛋白纯度不咋高，好多其他乱七八糟的东西都混进去了。
这就好比炒菜的时候把不该放的调料都倒进去了，最后味道全乱套了。
后来呢，我又尝试了差速离心法。
这就像挑豆子，把大的小的分开那样。
先把植物组织破碎后，通过不同的离心速度把细胞器啊什么的和膜蛋白分离开。
开始的时候我老是掌握不好离心速度和时间，要么离心速度不够，那些东西分不开，要么就是离心太久了，把想要的膜蛋白都给弄丢了一部分。
经过好多次的尝试，我才慢慢摸准了一点规律。
比如说，先低速度短时间离心去掉那些大的残渣，然后再逐步提高离心速度和延长时间来纯化膜蛋白。
我有段时间还听别人说密度梯度离心法好使。
这方法有点像从水里分层捞东西。
就是用不同浓度的溶液形成一个密度梯度，然后离心，让膜蛋白在适合它密度的那个层面停下来，这样和其他物质分离开。
但是这个方法操作起来比较麻烦，各种溶液的配制就要很精确，我就老在这上面出错，溶液配不对后续根本得不到像样的结果。
还有就是用化学试剂来提取。
比如说表面活性剂。
这就跟用清洁剂去油污有点像，表面活性剂能把膜蛋白从细胞膜上给“扒拉”下来。
不过这化学试剂的种类和浓度可得选好了，选错了就像洗衣粉放太多把衣服都洗坏了似的，膜蛋白的活性啥的就全没了。
我就在选择表面活性剂的种类和浓度上栽过跟头，试了好多种，结果都不理想，不是蛋白没有提取出来就是提取出来的蛋白变性了失去活性了。
如果是新手上路的话，我觉得差速离心法可以先试试，毕竟相对来说比较直白一点，虽然可能会碰到不少问题，但是在调整离心速度和时间的过程中可以慢慢学习。
可千万别像我刚开始的时候，只知道按照书上的数值来，实际情况和书上可能有差别，要多做尝试才行。
在操作的全过程里，实验设备的清洁也很重要。
提取膜蛋白的方法
提取膜蛋白的方法提取膜蛋白是一项关键的实验步骤，用于研究膜蛋白的结构和功能。
本文将介绍几种常用的膜蛋白提取方法。
1. 浸泡法浸泡法是一种简单的膜蛋白提取方法。
将细胞或组织样品置于适当的缓冲液中，如磷酸盐缓冲液或生理盐水中，并加入一些溶解剂（如阴离子洗涤剂）以破坏膜结构。
浸泡一段时间后，离心以分离出溶液中的膜蛋白。
2. 磷脂双层溶液法磷脂双层溶液法利用磷脂双层膜的特性来提取膜蛋白。
首先，将细胞或组织样品放入含有磷脂双层的液体中。
磷脂双层膜与细胞膜相似，可吸附并保持膜蛋白的结构和功能。
然后，用洗涤液洗涤磷脂双层，使膜蛋白释放到洗涤液中。
3. 超声法超声法是一种物理方法，通过超声波的能量来提取膜蛋白。
将细胞或组织样品置于含有缓冲液的管中，并使用超声波处理。
超声波的能量可以破坏细胞膜结构，使膜蛋白溶解到缓冲液中。
然后，对溶液进行离心，将膜蛋白分离出来。
4. 酸碱提取法酸碱提取法利用pH的变化来提取膜蛋白。
首先，将细胞或组织样品放入酸性或碱性溶液中，并搅拌。
酸性或碱性环境可以破坏细胞膜结构，使膜蛋白溶解到溶液中。
然后，通过调整pH值，使膜蛋白沉淀，进一步提纯。
5. 亲水基质法亲水基质法是一种通过亲水基质与疏水膜蛋白的选择性结合来提取膜蛋白的方法。
细胞或组织样品与亲水基质接触，亲水基质与细胞膜的亲水区域结合，使膜蛋白释放到溶液中。
然后，通过离心和洗涤步骤来分离和纯化膜蛋白。
这些方法在膜蛋白的研究中应用广泛，但根据具体的实验目的和样品特性，可以选择适合的方法进行膜蛋白提取。
实验中还应注意选择合适的缓冲液、溶液浓度和温度，并结合离心、洗涤等步骤进行蛋白的纯化和分离。
此外，需要根据实验目的选择合适的检测方法，如SDS-PAGE、Western blot等来确定提取的膜蛋白的质量和纯度。
总之，膜蛋白提取是膜生物学研究的重要一环，不同方法适用于不同的样品和实验要求。
正确选择和操作提取方法可以高效地提取膜蛋白，并为后续研究提供可靠的样品。
（完整word版）膜蛋白提取
（完整word版）膜蛋白提取1分离组织膜蛋白的方法：1、取组织，加入10ml Buffer A 于冰上充分匀浆。
2、J6-HC离心机800rpm，4℃离心10min后，所得上清液转入超速离心管。
3、100000g，4℃离心1hr。
弃去上清，沉淀用适量的Buffer B 重悬，冰上孵育2hr后分装至EP管，Eppendorf台式离心机10000rpm，4℃离心30min。
4、收集所得上清液即为膜组份。
Buffer A：0.32M 蔗糖，5mM Tris-HCl（PH 7.5），120mM KCl，1mM EDTA,1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。
冰上预冷。
Buffer B：20mM HEPES（PH 7.5），10%甘油，2% Triton X-100, 1mM EDTA, 1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。
冰上预冷。
2取约0.1g肝组织，加入2ml粉碎缓冲液，冰浴中超声粉碎，每次20秒，间隔30秒，共3次，4°c 105xg条件下离心2小时，上清液为胞浆蛋白，沉淀部分加入1ml胞膜蛋白提取液，超声粉碎，4°c 105xg条件下离心2小时，上清液为胞膜蛋白。
样品蛋白含量测定采用酚试剂法。
3我们实验室提取膜蛋白的方法如下：1．将细胞种于T75 或T175的培养瓶中培养数天，细胞铺满瓶底后，吸去培养液。
将PBS/EDTA 溶液(NaCl:0.1M,NaH2PO4:0.01M,EDTA:0.04%)加入量以覆盖细胞为止，置于培养箱或在超净台内消化3～5分钟，如仍未脱落瓶底，用吸管吹打，使细胞完全脱落。
2．收集细胞悬液于10毫升或50毫升的离心管中，1000rpm离心10分钟，去上清液。
叶绿体色素的提取和分离实验步骤
叶绿体色素的提取和分离实验步骤一、实验前的准备首先呢，咱们得把材料都准备好。
新鲜的绿叶是必须的啦，像菠菜叶就很不错哦。
还有要准备好研钵、漏斗、滤纸、层析液、无水乙醇这些东西。
这一步看起来很平常，但可千万别小瞧它，要是少了啥东西，实验过程中再去找就麻烦啦！我就有过一次，忘记准备滤纸了，当时那个手忙脚乱所以大家一定要仔细检查材料是否齐全哦！二、叶绿体色素的提取1. 取几片新鲜的绿叶，把它们剪碎放在研钵里。
这里呢，叶子不用太多，适量就好，大概四五片大菠菜叶就差不多了。
然后加入少许的二氧化硅和碳酸钙。
二氧化硅有助于研磨得更充分，碳酸钙呢，可以防止叶绿素被破坏。
这一步很关键哦！我每次都会多检查一遍有没有加这两样东西，真的很重要呢！2. 接着倒入适量的无水乙醇。
无水乙醇的量啊，大概能把叶子都浸湿就可以了。
然后就开始研磨啦。
研磨的时候要用力均匀，慢慢磨，别太着急。
这一步虽然不难，但也需要点耐心。
我通常会在这个环节花多一些时间，确保研磨得足够细。
你看，如果研磨不充分，可能就会影响后面色素的提取量呢，是不是？3. 研磨好之后，咱们就用漏斗和滤纸进行过滤，把研磨液过滤到一个小试管里。
这时候要注意，滤纸要折叠好放在漏斗里，不要有缝隙，不然过滤的时候就会漏得到处都是，那就糟糕了！三、叶绿体色素的分离1. 准备好一个滤纸，把它剪成一个长条形，并且一端要剪去两角。
为啥要剪去两角呢？嘿嘿，这是个小技巧，可以让色素在滤纸上跑得更整齐哦。
然后用铅笔在距离剪去两角那端大概一厘米的地方画一条细线，这条细线就是用来蘸取我们前面提取出来的色素滤液的。
这一步可不能画得太粗啦，不然色素带就会重叠在一起，那就分不清啦。
2. 用毛细吸管吸取少量的色素滤液，轻轻地沿着铅笔线涂抹。
注意哦，不要涂太多，一点点就好。
如果涂多了，色素就会扩散得乱七八糟的。
这一点真的很重要，我通常会再检查一次，真的，确认无误是关键。
3. 把这个滤纸条放进装有层析液的层析装置里。
叶绿体蛋白提取流程
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叶绿体提取方法
产品 磷酸化蛋白富集试剂盒 膜蛋白提取试剂盒 活性蛋白提取试剂盒 BCA 蛋白定量试剂盒 植物核蛋白提取试剂盒 细菌膜蛋白提取试剂盒 植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3106 BB-3401 BB-3154 BB-3151 BB-3124 BB-3152
i. 用匀浆机低速匀浆 3 分钟/Dounce 匀浆器匀浆。 ii.置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入 3ml 冷的提取液研磨 。 iii.加入 3ml 提取液后直接置冰上用研钵快速研磨 30-60 秒。 4. 将匀浆用 250 目细胞筛或 3 层纱布或脱脂棉过滤。或者在 4℃，100×g 力条件 下离心 1 分钟，收集上清，弃沉淀。 5. 将滤液 200×g 力离心 2 分钟。弃沉淀，取上清 6. 将滤液 500×g 力离心 2 分钟。弃沉淀，取上清。 7. 将上清 2000×g 力离心 10 分钟。 8. 弃上清，沉淀即为叶绿体。 9. 用 400ul 叶绿体悬浮液悬浮叶绿体，置冰箱备用或直接用于下游实验。
叶绿体提取试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
试剂 A：叶绿体提取液 A 试剂 B：叶绿体提取液 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 试剂 C：叶绿体悬浮液
BB-3622-1 50T 100ml 50ml 20ml
BB-3622-2 100T
100ml*2 100ml 40ml
组份编号
36220A 36220B 36220C
产品简介： 叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的, 由于具
-1-
酵母蛋白提取试剂盒 昆虫蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒 总蛋白提取试剂盒（2D 电泳用） 植物蛋白提取盒（2D 电泳用） 细菌膜蛋白提取盒（2D 电泳用）
玉米叶绿体蛋白质提取及其双向电泳体系建立
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｏ ｂ ｔ ａ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐ ｕ ｒ ｅ ａ ｎ ｄ ｉ ｎ ｔ ａ ｃ ｔ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｔ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ， ｔ ｈｅ ｍａ ｉ ｚ ｅ ｖ ａ ｒ ｉ ｅ ｔ ｙ Ｚｈ ｅ ｎｇ ｄ ａ ｎ ９ ５ ８ ｗａ ｓ
ＹＡＮＧ Ｙａ ｎ ｆ ａ ｎ ｇ， ＬＩ Ｎａ ｎａ， ＺＨ ＡＯ Ｆｅ ｉ ｙ ｕ ｎ， ＨＵ Ｘｉ ｕ ｌ ｉ
（ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｈｅ ｎ ａ ｎ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｚ ｈ ｅ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ａ ４ ５ ０ ０ ０ ２， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
到 了较理 想 的玉米 叶绿 体双 向 电泳 图。
关 键 词 ：玉 米 ；叶 绿 体 ；蛋 白 质 ；提 取 ；双 向 电 泳
中 图 分 类 号 ：Ｑ ９ ４ ２ ． ５ ； Ｓ ５ １ ３
文 献标 志码 ： Ａ
文章编 号 ： １ ０ ０ ４—３ ２ ６ ８ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ６— ０ ０ ２ ４— ０ ５
河 南农 业科 学 ， ２ ０ １ ５ ， ４ ４ （ ６ ） ： ２ ４ — ２ ８
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｈｅ ｎ ａ ｎ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｈ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． １ ５ ９ ３ ３ ／ ｊ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． １ ０ ０ ４ — ３ ２ ６ ８ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ６ ． ０ ０ ５
ｆ ｏ ｒ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ． Ｔｈ ｅ Ｓ ＤＳ— ＰＡＧＥ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈａ ｔ ｔ ｈｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｍａ ｉ ｚ ｅ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｔ ｐ ｒ ｏ —
菠菜叶绿体蛋白质的提取与分离
生物学 方面蛋 白质组学没有得到广泛的应用。在后基因组时代 ， 随着 Ａａｉ ｐｉ，ｉ ｒ ｄ ｓ Ｒｃ ｂ ｏ ｓ ｅ和其它植物 基因组全序列 被测定 ， 蛋 白质组学这一工具必将在植物学研究方面得到广泛的应用。但是要将蛋 白质组学应用 到植 物方面尤其 是细胞器 如叶绿体
和线粒体等的研究 ， 首先得 到完 整且 有功能的细胞 器非 常重 要。因为细胞器的破坏必然会造成蛋 白质的丢 失 ， 利于后续 不
收 稿 日期 ：０ ８ ９ ２ ２０ —０ —０
基金项 目： 湖南省教育厅一般项 目（６ ２９ ０ Ｃ ８） 作者简介 ： 唐新科 （９ １ ， ， １７ 一）男 湖南安仁人 ， 讲师 ， 硕士 ， 研究方 向： 白质化学与蛋 白质组学。 蛋
法 的有效性和 叶绿体各部分 蛋 白存在 的差异性。此外除得到 叶绿体 成分 外， 发现 一些高 密度 成分（ 还 尚未 鉴定） 。对如 何 分离完整 叶绿体进行 了较为详细 的讨论。 关键词 ： 菠菜 ； 叶绿体 ； 白质；Ｄ —Ｐ Ｇ 蛋 ＳＳ Ａ Ｅ 中图分类号 ： ７Ｑ ４ Ｑ ； ９ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：６ １ ２ １２０ ）４ ０３ ３ １７ —０３ （０８ ０ —０３ 一ｏ
Ｖｏ ．３ Ｉ Ｏ ＮＯ． ４ Ｄｅ ｃ．２ ｏ Ｏ８
菠 菜 叶 绿 体 蛋 白质 的提 取 与 分 离
唐新科 ， 平兰 ， 爱武 周 谭
（ 湖南科技大学 生命科学学院 ， 湖南 湘潭 ４ １０ ） １２ １
摘
要： 以菠菜 叶片为材料运用 亚细胞分 离技术——蔗 糖密度梯度离心分级分 离得到 完整叶绿体 ， 再利用 多种不 同裂
叶绿体是高等植物重要的细胞器 ， 研究叶绿体蛋 白质学对 于深入 了解叶绿 体在光 合作用 过程 中所 执行 的功能有 重要 意义［ ２。目前蛋 白质组学对 于药 物开发和 ｙａｔ Ｅｃｅｉｔ ｏ 蛋 白表达系统 的分析是一种重要 的工 具＿ ， 而在 植物 １ ｌ ＿ ｅｓ及 ｓｈｒ ｜ ｃｌ ｃｉ ｉ ａ ３然 Ｊ
植物中叶片蛋白的提取（共5篇）
植物中叶片蛋白的提取（共5篇）第一篇：植物中叶片蛋白的提取植物中叶片蛋白质的提取一、实验目的熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法，了解其意义及其应用价值。
二、实验原理植物叶蛋白或称绿色蛋白浓缩物(leaf protein concentration，简称LPC)，是从新鲜植物叶片中提取的高质量浓缩蛋白质，不仅是畜禽生长发育和生产畜产品的主要营养物质，而且目前也正成为人类的保健营养理想食品之一。
天然蛋白存在于为数甚多的植物体内，对其分离应依据人们的利用目的及提取蛋白含量和品质加以考虑。
天然蛋白质一般在溶液中呈稳定的亲水胶体状态，故LPC 亦称叶蛋白胶。
其特点是：(1)水化作用即蛋白质分子表面附有能有效防止蛋白质分子沉淀析出的水化膜；(2)电荷排斥作用水化膜外还有电荷层(具阴、阳离子)能有效地防止蛋白质分子的凝集。
故溶液蛋白质颗粒(溶质)呈溶解状态；(3)欲提取植物组织中的蛋白质必须利用溶解度的差异进行分离纯化(如盐析、有机溶剂分级沉淀法、疏水层析、结晶、加热、离心分离等法)，利用分子大小和形状差异进行分离纯化(分子筛层析法)；还可利用电荷性质的差异分离纯化(离子交换法)。
只要创造上述影响因素，即可使蛋白质从植物叶片中分离并沉淀出来。
植物叶蛋白提取一般遵循如下基本原则：尽可能提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失；减少对蛋白质的人为修饰；破坏蛋白与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于完全变性状态。
根据该原则，植物叶蛋白制备过程中一般需要有四种试剂①离液剂：尿素和硫脲等；②表面活性剂：又称去垢剂，早期常用NP-40、Tritonx-100等非离子型去垢剂，离子型去垢剂有SDS、胆酸钠、LiDS 等，还有象CHAPS(含它的蛋白溶液可以冻存)与Zwittergent 等双性离子去垢剂；③还原剂：DTT、DTE、TBP、Tris-base 等；④蛋白酶抑制剂及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制剂混合物(Protease inhibitor cocktails)等，如为了去除缓冲液中存在的痕量重金属离子，可在其中加入0.1～5mmol/LEDTA，同时使金属蛋白酶失活。
膜蛋白的提取方法
膜蛋白的提取方法
膜蛋白的提取方法通常包括以下几个步骤：
1. 细胞裂解：将包含膜蛋白的细胞或组织用不同的方式进行裂解，例如超声波处理、酸碱处理、高压处理等。
2. 膜蛋白分离：通过离心、过滤等方法将膜蛋白分离出来。
3. 纯化：采用膜层联萃取、柱层析、电泳等方法对膜蛋白进行纯化。
4. 确认：通过蛋白质定量、SDS-PAGE、Western blot等方法验证膜蛋白的存在和纯度。
常见的膜蛋白提取方法有：
1. 酸性洗涤法：利用低pH值时，膜蛋白和膜脂亲性增强的特性，将细胞裂解物在酸性条件下洗涤获得膜蛋白。
2. 有机溶剂提取法：利用膜蛋白亲性较强的有机溶剂，如丙酮、甲醇等，将膜蛋白从细胞裂解物中提取出来。
3. 离心法：通过离心分离膜细胞，从而获得膜蛋白。
4. 免疫亲和层析法：利用特异性抗体将目标膜蛋白从混合蛋白中分离纯化。
以上方法的选择需根据具体情况来定，不同的细胞类型或膜蛋白性质有着不同的最佳提取方法。
完整叶绿体提取方法的优化探讨
完整叶绿体提取方法的优化探讨叶绿体提取是一个关键的实验步骤，它决定着后续实验的准确性。
常规的叶绿体提取方法包括离心法和渗透法，但这些方法存在着很多不足和限制，如回收率低、纯度差和操作繁琐等。
为了解决这些问题，需要进行优化探讨，提高提取效率和纯度。
一、优化叶绿体提取液的配方1.选择沉淀剂和渗透剂在离心法中，沉淀剂和渗透剂的选择非常重要。
PEG和硫酸铵是常用的沉淀剂，Sorbitol和葡萄糖是常用的渗透剂。
在选择沉淀剂和渗透剂时，应注意它们的溶解度和浓度。
2.优化含有蛋白质的提取液蛋白质是提取叶绿体过程中出现的问题之一，因为它们可以污染叶绿体悬液，影响后续实验的准确性。
因此，在制备含有蛋白质的提取液时，应注意选择不含蛋白质的化学品，并保持实验室清洁。
3.优化pH值和温度pH值和温度是提取叶绿体的两个重要因素，因为它们可以影响叶绿体的完整性和纯度。
在提取叶绿体时，应注意调整pH值和温度，以保证叶绿体的最高纯度。
二、优化叶绿体提取方法1.选择最佳提取时间叶绿体提取时间应根据材料的特性和实验条件来选择。
通常情况下，提取时间应为20-30分钟。
2.优化离心条件离心条件是叶绿体集中和纯度的决定因素之一，因此应优化离心条件以提高叶绿体的回收率和纯度。
离心转速和时间应根据实验方案进行选择，以确保最大化叶绿体的收集。
3.对叶绿体进行了充分的清洗清洗叶绿体是非常重要的一步。
它可以去除污染物和不希望的物质，并增加叶绿体的纯度。
叶绿体应在冷室里进行温和的离心处理。
三、结论叶绿体提取是一个关键的实验步骤。
采用上述优化策略可以提高叶绿体回收率和纯度，并推动叶绿体在细胞生物学和植物科学方面的应用。
(完整word版)膜蛋白提取
1分离组织膜蛋白的方法：1、取组织，加入10ml Buffer A 于冰上充分匀浆。
2、J6-HC离心机800rpm，4℃离心10min后，所得上清液转入超速离心管。
3、100000g，4℃离心1hr。
弃去上清，沉淀用适量的Buffer B重悬，冰上孵育2hr后分装至EP管，Eppendorf台式离心机10000rpm，4℃离心30min。
4、收集所得上清液即为膜组份。
Buffer A：0.32M 蔗糖，5mM Tris-HCl（PH 7.5），120mM KCl，1mM EDTA,1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。
冰上预冷。
Buffer B：20mM HEPES（PH 7.5），10%甘油，2% Triton X-100, 1mM EDTA, 1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。
冰上预冷。
2取约0.1g肝组织，加入2ml粉碎缓冲液，冰浴中超声粉碎，每次20秒，间隔30秒，共3次，4°c 105xg条件下离心2小时，上清液为胞浆蛋白，沉淀部分加入1ml胞膜蛋白提取液，超声粉碎，4°c 105xg条件下离心2小时，上清液为胞膜蛋白。
样品蛋白含量测定采用酚试剂法。
3我们实验室提取膜蛋白的方法如下：1．将细胞种于T75 或T175的培养瓶中培养数天，细胞铺满瓶底后，吸去培养液。
将PBS/EDTA 溶液(NaCl:0.1M,NaH2PO4:0.01M,EDTA:0.04%)加入量以覆盖细胞为止，置于培养箱或在超净台内消化3～5分钟，如仍未脱落瓶底，用吸管吹打，使细胞完全脱落。
2．收集细胞悬液于10毫升或50毫升的离心管中，1000rpm离心10分钟，去上清液。
膜蛋白的分离方法
膜蛋白的分离方法
膜蛋白是一类位于细胞膜上的蛋白质，它们在细胞的代谢、信号传递、物质运输等方面起着重要作用。
以下是一些常见的膜蛋白分离方法：
1.超速离心法：利用超速离心机产生的强大离心力，将细胞膜和膜蛋白分离开来。
这种方法常用于制备纯净的细胞膜和膜蛋白。
2.电泳法：通过电泳技术，可以根据膜蛋白的电荷性质和分子量大小，将其分离开来。
电泳法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）等。
3.层析法：层析法是一种基于膜蛋白物理化学性质差异的分离方法。
常用的层析技术包括凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
4.浮选分离法：利用浮力密度的差异，通过离心使不同密度的膜蛋白在溶液中分层，从而实现分离。
5.免疫沉淀法：基于抗体与抗原的特异性结合，使用特异性抗体将目标膜蛋白从混合物中沉淀出来。
6.密度梯度离心法：根据膜蛋白的密度差异，将其在密
度梯度介质中进行离心分离。
7.膜蛋白提取试剂盒：市面上有一些商业化的膜蛋白提取试剂盒，它们通常结合了多种分离技术，简化了膜蛋白的提取过程。
需要根据具体的实验需求和膜蛋白的特性选择合适的分离方法。
在膜蛋白分离过程中，需要注意保持膜蛋白的活性和稳定性，避免蛋白质的变性和降解。
叶绿体蛋白的提取
一．样品的制备1. 样品的处理（包括CK和TRE）用20% 的PEG-6000（渗透势大约为-1.88MPa)诱导干旱胁迫（D），直到它们的相对含水量达到83％-86％(一般3天)。
然后高温胁迫(H)处理在光照培养箱中进行，温度40℃，处理时间为24个小时（恢复0h:R0）。
然后R12，R24，R36，R48。
DH处理前，R0，R12，R24，R36，R48：CK,CK+TRE,CK+DH,CK+TRE+DH; DH处理后，取第3 片全展叶为试材，进行叶绿体蛋白组的分析。
每个处理重复3 次。
（CK,CK+TRE,CK+DH,CK+TRE+DH）2.叶绿体的分离(1)剪取10g小麦叶片，将叶片剪碎，液氮研磨；(2)加入5倍体积4℃预冰冷的buffer A(buffer A：50mM Tris-HCl，20mM EDTA 0.5M蔗糖，0．25M Vc，pH3.5)，匀浆用8层医用纱布过滤滤液至预冷的50mL离心管中，弃残渣。
(3)滤液1500g／min，15min离心，弃上清，留沉淀。
(4)向沉淀中加入3mL bufferA，充分悬浮，转入10mL离心管中。
(5)2000g／min，15min离心，弃上清，收集沉淀。
(6)加入2mLbufferB，充分悬浮。
(buffer B：50mM Tris-HCl，20mM EDTA，0．5M蔗糖，1％BSA，7mM β-巯基乙醇现用现加)(7)1500g／min，离心10min，弃上清，收集沉淀，再用bufferB 洗一次。
(8)同上离心，弃上清，再加bufferC洗一次，离心，沉淀大部分为叶绿体。
(buffer C：50mM Tris-HCl pH8.0，20mM EDTA，0．5M蔗糖)3.叶绿体的纯化（1）制作不连续的percoll密度梯度，先在超速离心管中加入3mL 的60％的percoll，然后沿管壁缓缓加入4mL的40％percoll，最后加入5ml 20％的percoll。
叶绿体的提取与分离实验步骤
叶绿体的提取与分离实验步骤提取和分离叶绿体的实验，就像在厨房里做一道新菜，听起来有点复杂，但其实只要动动手，乐趣无穷。
你得准备好一些新鲜的绿色植物，像菠菜或者小白菜，这些可是叶绿体的宝藏。
选一把新鲜的叶子，最好是那种绿得发亮的，切的时候别太心疼，随便剪一剪就行，毕竟咱们要的是里面的东西。
剪下来的叶子，就像是那块美味的肉，得好好处理。
准备一个干净的搅拌机，像是准备让一切变得更加美味的厨具。
把剪好的叶子放进去，加入一点冰冷的水，搅拌的时候，就像是在舞池里跳舞，尽情地让它们打个旋，直到叶子变成了绿色的浆糊。
然后，准备一个滤网或纱布，像给你的混合物穿上一件清爽的衣服，把搅拌好的叶子浆过滤出来。
这个过程就像是在筛选出好东西，过滤掉那些不必要的部分。
你看，绿油油的液体流出来，简直像是刚从大自然的宝藏里取出来的宝贝。
这个液体就是叶绿体的提取液，简直让人期待。
咱们得进行分离，找个离心机，这个机器可厉害了，就像是个超级英雄，把不同的成分分开。
把提取液倒进去，启动机器，让它高速旋转，就像在过山车，别害怕，等着看奇迹发生。
等个几分钟，打开机器，嘿，里面的液体分成了好几层，像分层的果汁，最底下是重的沉淀，颜色深深的，正是叶绿体。
把它小心地取出来，轻轻放在另一边，这可是你今天的收获，简直像捡到了意外的宝藏。
洗洗这些叶绿体，冲洗干净，放在干净的试管里，像个珍贵的宝石，闪闪发光。
你可以把它们放到显微镜下看看，简直是宇宙的奇迹，叶绿体在阳光下吸收光能，真是大自然的神奇创造。
整个实验就像是一次奇妙的探险，让人惊喜不已。
看着那一小管绿色液体，心里别提有多满足。
提取叶绿体的过程充满了乐趣，既能学到知识，又能动手实践，真是一举两得。
尝试一下吧，或许你会发现自己也是个小科学家呢！。
叶绿体色素提取的方法
叶绿体色素提取的方法
叶绿体色素提取属于植物生理学研究课题中的重要内容，主要用于研
究植物光合作用机制和生理活动等。
叶绿体色素提取的方法有：
1. 普通法：普通法，也称为离心法，是从叶绿体提取色素的常的方法，主要包括叶绿体分离、碱提取和色素沉淀等步骤。
2. 高效液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱法能够高效提取出叶绿体
色素，且对不同类型的叶绿素色素都具有很好的效果。
3. 原子吸收法：此方法利用叶绿体色素在原子吸收分析中的特殊的亮
度特性，可以同时测量特定波长的吸收谱，从中可以提取出大量不同
类型的叶绿体色素。
4. 光子聚焦荧光技术：光子聚焦荧光技术的原理是采用具有抑制作用
的特定波长发射出自身特定荧光，从而进行叶绿体色素的提取。
5. 光波谱法：光波谱法是利用光信号的强度大小，通过特定波长的发
送和接收来测定叶绿体色素浓度大小及组成成分，从而获得精确的叶
绿体色素提取结果。
通过以上五种方法可以进行叶绿体色素的提取。
但是在实际的应用中，
根据检测工具的不同，也要注意一些特殊的技术要求，例如提取样品的选择、采集参数的调节等，以保证实验的准确性和可靠性。
叶绿体的提取
叶绿体的分离原理：研磨叶片得到的匀浆，经过滤、离心可制备叶绿体。
叶绿体的被膜比较脆弱，分离叶绿体应在等渗的缓冲液溶液中，0~4度温度下进行。
叶绿体活力会随着离体时间延长而不断下降，因此，分离工作尽可能在短时间内完成。
仪器与用具：冰箱；离心机；扭力天平；显微镜；pH计；研钵；量筒；移液管；离心管；脱脂纱布等。
分离器皿都须在0度下预冷。
试剂：1. 分离介质：含0.33 mol/L山梨醇，50 mmol/L Tris-HCl（或Tricine）pH7.6，5 mmol/L MgCl2，10 mmol/L NaCl，2 mmol/L EDTA，2 mmol/L 异抗坏血酸纳。
配法：称60 g山梨醇、6.06 g Tris、1 g MgCl2·6H2O、0.6 g NaCl、0.77 g EDTA-Na2、0.4g 异抗血酸钠，溶解后用1 mol/L HCl调pH至7.6，定容至1000 ml。
2. 悬浮和测定介质Ⅰ：0.66 mol/L 山梨醇，2 mmol/L MgCl2，2 mmol/L MnCl2，4mmol/L EDTA，10 mmol/L 焦磷酸钠，100mmol/L Tris-HCl pH7.6。
配法：称60g山梨醇、0.2g MgCl2·6H2O、0.2g MnCl2·4H2O、0.75g EDTA-Na2、2.23g Na4P2O7·10H2O、6.06g Tris，溶解后用1 mol/L HCl调pH至7.6，定容至500ml。
3. 悬浮和测定介质Ⅱ：测定介质Ⅰ稀释1倍。
方法：1. 选用生长健壮，最好是连续几个晴天下生长的菠菜叶片，洗净后去除中脉，放入0~4度冰箱或冰瓶中预冷。
2. 分离介质30~50ml，置于研钵中，并在冰箱中预冷至现薄冰。
3. 取冷却的菠菜叶片10~20g，撕碎后放入研钵，用手工快速研磨0.30~1min，注意不要用力过猛，也不必研磨过细，以叶片磨成小块时即可，研磨后将匀浆用两层新纱布过滤。
杜氏盐藻完整叶绿体的分离及其蛋白提取
杜氏盐藻完整叶绿体的分离及其蛋白提取
应用高压破碎及蔗糖密度梯度离心的方法,分离出杜氏盐藻的完整叶绿体,随后用冻融法和研磨法分别提取叶绿体蛋白,并通过蛋白定量和SDS-PAGE凝胶电泳对两种蛋白提取方法进行比较,确立了一套适用于杜氏盐藻叶绿体分离和蛋白提取、定量以及电泳的方法.结果表明:用高压破碎结合蔗糖密度梯度离心的方法能够获得完整且较纯的盐藻细胞叶绿体;SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,冻融法提取叶绿体蛋白效率高,电泳条带清晰,蛋白数量较多,蛋白齐全.为下一步在亚细胞水平进行杜氏盐藻耐盐机制的蛋白组学研究奠定了基础.
柴玉荣,ChaiYurong(郑州大学细胞生物研究室,郑州大学第一附属医院,郑州,450052;郑州大学基础医学院组胚教研室,郑州,450052)。
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叶绿体膜蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 BB-3175-1 BB-3175-2
规格 50 assays 100 assays
提取液A 200ml 400ml
提取液B 25ml 50ml
提取液C 250ul 500ul
膜蛋白稀释液 10ml 20ml
蛋白酶抑制剂混合物 100ul 200ul
储存条件：
蛋白酶抑制剂-20℃保存；
蛋白提取液2-8℃保存；
膜蛋白稀释液室温保存。
有效期：
一年。
产品简介：
叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的, 由于具有这一重要功能，所以叶绿体一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器。
跨膜蛋白承担各种生物功能，在生物的各种发展过程中扮演重要角色。
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。
贝博叶绿体膜蛋白提取试剂盒用简便快速的方法可以从各种植物样本中提取叶绿体膜蛋白，提取过程简单方便，可在一小时内提取得到高质量的叶绿体膜蛋白。
该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。
该试剂盒提取的膜蛋白具有天然活性，提取的蛋白可用于Western Blotting、免疫共沉淀、酶活性测定等各种下游蛋白研究实验。
使用方法：
1.取新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。
2.每2g样本加入4ml提取液A。
3.用研钵快速研磨30-60秒，或者用组织搅碎机高速匀浆1分钟。
4.将匀浆用3层纱布或者400目滤网过滤。
5.将滤液200g力（约1000RPM，不同离心机不一样，以实际为准）离心1分
钟。
将上清移入另一干净离心管。
6.将上清1000g力（约3000RPM）离心5分钟。
7.弃上清，收集沉淀。
8.在沉淀中加入500ul抽提液B和2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后在冰上
静置1-2小时，中间每隔15-20分钟高速涡旋振荡15秒。
9.将提取液在4℃，12000×g条件下离心5分钟，取上清。
10.在上清中加入5ul抽提液C，充分混匀。
11.在37℃水浴10分钟。
12.在37℃ 1000g离心3分钟。
13.此时溶液分为两层，移除上层以及界面层，保留下层溶液，大约30-50ul。
14.用50-150μl冰冷的膜蛋白稀释液稀释下层溶液，即得叶绿体膜蛋白。
15.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接
用于下游实验。
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